Visage axotomie des nerfs chez la souris: Un modèle pour étudier motoneurone réponse à une blessure

L'objectif général de cette procédure est d'exposer le nerf facial afin d'étudier les lésions des nerfs périphériques. Le nerf facial prend naissance dans le pont du tronc cérébral et sort du crâne par le foramen stylomastoïdien, puis se divise en ses composantes principales.

Une fois exposé, le nerf est ex-autotomisé à son point de sortie du foramen stylomastoïdien. Deux repères majeurs permettent de localiser le nerf facial. Le premier est le conduit auditif, composé de plaques cartilagineuses blanchâtres reliées par une membrane fine.

L'autre est le ventre antérieur du muscle digastrique, qui se situe au-dessus du nerf et de son point de sortie par le foramen stylomastoïdien. Après une lésion du nerf facial, le scientifique peut étudier de nombreux facteurs tels que la mort des motoneurones ou l'expression génique. Le modèle de lésion du nerf facial est l'un des modèles de lésion des nerfs périphériques les plus largement caractérisés.

Les avantages de cette technique sont sa simplicité, sa forte reproductibilité et l'absence d'effet sur les fonctions vitales en raison de la paralysie faciale ultérieure. De plus, en raison de la nature hautement symétrique du système nerveux, le côté non lésé peut servir de témoin interne apparié pour vos expériences. Pour maintenir l'utilisation de techniques aseptiques tout au long de cette procédure, assurez-vous que tous les outils ont été autoclavés et qu'un stérilisateur à billes de verre est prêt à stériliser les outils entre chaque intervention.

Préparez le plateau chirurgical en plaçant un tampon absorbant sur un coussin chauffant, en installant le microscope et en fixant le cône nasal avec du ruban adhésif afin qu'il soit aligné avec le bord du champ visuel. Après avoir anesthésié la souris, vérifiez qu'elle ne présente aucune réaction physique aux manipulations, y compris à une pincée du orteil. Transférez ensuite le débit de gaz de la chambre d'anesthésie vers le cône nasal et appliquez une pommade ophtalmique.

Placer la souris sur le côté gauche, au-dessus de compresses chirurgicales, avec un tapis chauffant en dessous. Surveiller continuellement la respiration de l'animal et ajuster le débit de fluorure d'ISO selon les besoins afin de maintenir l'anesthésie. Ensuite, pour exposer le site chirurgical, fixer l'oreille droite au cône nasal à l'aide d'un ruban adhésif.

La veine auriculaire postérieure doit être visible en traversant l'oreille. Ensuite, humidifiez le pelage avec de l'éthanol à 70 % et rasez la zone. Après avoir retiré le pelage, nettoyez la peau avec trois frictions alternées d'iode et d'éthanol à 70 %, en veillant à bien nettoyer la zone.

Procédez à la chirurgie. Veillez à positionner la bouche bien de côté, de sorte que la veine auriculaire s'étende horizontalement. Cela facilitera grandement la localisation du nerf facial.

Pour déterminer l'emplacement de la première incision, suivez la veine rétro-auriculaire depuis l'oreille jusqu'à la région située à l'arrière de la saillie auriculaire. Ensuite, à l'aide de ciseaux à ressort, pratiquez une incision de quatre millimètres, à deux ou trois millimètres en arrière de la saillie, à des fins pédagogiques. Cette incision sera élargie afin d'exposer l'anatomie sous-jacente.

Effectuez maintenant une dissection émoussée de la graisse sous-cutanée et de la fascia. Les vaisseaux sanguins et les muscles peuvent être facilement endommagés par les ciseaux. En cas de saignement.

Appliquez une pression avec un coton stérile pendant au moins 30 secondes. Si une perte importante de liquide s'est produite, injectez jusqu'à la moitié d'un millilitre de solution saline par voie intrapéritonéale à l'aide d'une aiguille de 25 ou 27 gauge. Localisez maintenant le nerf facial en utilisant les repères anatomiques clés.

Le nerf spinal accessoire est superficiel par rapport au nerf facial et peut être vu cheminant depuis la portion occipitale du crâne. Pour atteindre le muscle trapèze, repérez le conduit auditif cartilagineux. Il est d'une couleur blanchâtre nacrée et se situe en position rostrale par rapport au nerf facial.

Le nerf facial fait un trajet circulaire autour de la portion coddle du conduit auditif. Ensuite, identifier le ventre musculaire du muscle digastrique antérieur qui se situe au-dessus et en position coddle par rapport au nerf facial. Disséquer sous cette structure afin d'exposer le nerf facial.

Il s'agit d'une structure blanche et solide, adhérente à une couche de fascia sous-jacent. Identifier les branches principales du nerf facial. Les suivre en direction dorsale jusqu'à leur origine au niveau du foramen stylomastoïdien.

Utilisez une pince fine pour maintenir l'ouverture du site tout en utilisant la pointe des ciseaux à ressort pour disséquer le trajet des nerfs faciaux. Le promontoire osseux du mastoïde de Raymond peut être perçu par la pince. Identifiez maintenant le tronc du nerf facial afin de broyer le nerf.

Comprimez-le avec la pince fine pendant 30 secondes avec une pression constante. Cela sectionnera tous les axones. Répétez ensuite la compression selon un angle perpendiculaire pendant encore 30 secondes.

Conservez une pression constante entre les expériences. Maintenant que les repères anatomiques pertinents ont été identifiés, je vais démontrer une technique chirurgicale plus précise. À l’aide d’une incision plus petite, suivez la veine auriculaire postérieure depuis l’oreille jusqu’à la région située à l’arrière de la saillie auriculaire, puis pratiquez une incision de quatre millimètres, située à deux ou trois millimètres en arrière de la saillie.

À présent, disséquez franchement à travers la graisse sous-cutanée et la fascia en utilisant les trois repères anatomiques suivants : le nerf spinal, le conduit auditif externe et le ventre antérieur du muscle digastrique. Exposez le nerf facial. Remontez le long du nerf facial en direction du foramen stylomastoïdien afin d'atteindre le tronc du nerf facial, puis tranchez le nerf après l'avoir stabilisé délicatement à l’aide de fines pinces, et sectionnez-le avec des ciseaux.

Évitez d'appliquer une traction excessive sur le nerf, au risque qu'il se détache du tronc cérébral. Écartez ensuite les moignons ou retirez un segment du nerf en veillant à ce qu'aucune reconnexion ne puisse se produire. Enfin, examinez soigneusement le nerf et confirmez qu'il est complètement sectionné.

Après l'exsoudure, remettre toutes les graisses et les muscles à leurs positions approximatives. Fermer ensuite la plaie à l’aide de sutures clips de 7,5 millimètres ou de colle de cyanoacrylate. Si nécessaire, administrer des analgésiques à ce moment-là, arrêter l’anesthésie et replacer la souris dans une cage vide sans litière.

Pendant que l'animal se remet, examinez-le à la recherche de signes de paralysie faciale, les moustaches étant paralysées. Si elles sont orientées vers l'arrière, en direction de la joue, le nez semblera dévié et l'œil ne clignera pas en réponse à un souffle d'air. Ensuite, si l'animal est une femelle, logez-la avec une autre femelle.

Mais si le mâle est maintenu seul jusqu'à la récupération de la fonction clignotante de l'œil, appliquez quotidiennement une pommade thalamique pour prévenir les complications cornéennes. Pendant ce temps, surveillez la souris à la recherche de signes d'infection ou d'autres complications jusqu'à ce que le site chirurgical soit cicatrisé. Il existe une variation importante de la perte de motoneurones après une ex-sodomie selon l'âge et le fond génétique des souris chez les animaux de type sauvage qui subissent une section du nerf facial à l'âge de huit semaines.

Environ 86 % des neurones moteurs survivent à 28 jours. Postexotomie. Une perte cellulaire significativement plus importante a été observée dans le modèle murin SOD1 de la sclérose latérale amyotrophique, ainsi que dans le laser capture du gène activateur de recombinaison deux, souris knock-out immunodéficientes.

La microdissection a été utilisée pour isoler du matériel à partir du noyau moteur facial. L'ensemble du noyau moteur facial pouvait être capturé. Alternativement, les sous-noyaux pouvaient être collectés séparément.

La technique offre une grande précision. Les neurones moteurs peuvent être capturés individuellement, et le reste du pilulier neuronal peut également être récupéré pour analyse par la suite. La PCR quantitative a été utilisée pour examiner l'expression génique dans les échantillons sous-nucléaires du sous-noyau médio-ventral, indiqué par la ligne pointillée, et du sous-noyau latéro-ventral, indiqué par la ligne continue ; l'expression de quatre gènes associés à la réponse de régénération nerveuse a été mesurée.

Des différences ont été observées entre les sous-noyaux de ceux-ci. L'expression de Gap 43 a montré la plus grande différence entre les sous-noyaux. Une fois cette technique maîtrisée, la chirurgie peut être réalisée en quelques minutes seulement.

Il est important de se souvenir de positionner correctement l'animal, de pratiquer l'incision à l'endroit approprié et d'utiliser les repères anatomiques pour localiser le nerf facial. Il est facile de s'orienter dans la région de la tête et du cou ; ainsi, si vous êtes désorienté, localisez simplement le conduit auditif cartilagineux et suivez-le en direction postérieure pour trouver le nerf facial.