Name: Modéré exposition prénatale à lalcool et la quantification du comportement social chez les rats adultes (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 1 s
Description: Découvrez une méthode d'exposition prénatale modérée à l'alcool chez les rats et la quantification des comportements sociaux à l'âge adulte. Ce protocole aide les chercheurs à étudier les effets du développement cérébral prénatal.

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Toutes les procédures décrites ici et dans la vidéo qui l&#39;accompagne ont été approuvés par les soins et l&#39;utilisation des comités institutionnels animaux de la Health Sciences Center et le campus principal de l&#39;Université du Nouveau-Mexique. 1. prénatale éthanol exposition <ol><li> Obtenir tous les matériaux et produits chimiques nécessaires: saccharine hydrate de sel de sodium, éthanol 190 proof (95% d&#39;alcool par volume), tubes de boire de verre perles, caoutchouc naturel blanc # 4 bouchon à un trou, une «point de pliage tubes-ball, les dirigeants de papier imprimées à partir de www .vendian.org / mncharity / rep3 / paper_rulers /. </li><li> Obtenir éprouvées rats surgénérateurs adulte auprès d&#39;un fournisseur ou d&#39;une source alternative. Utilisez éleveurs Long-Evans pour les méthodes et les données représentatives présentées dans ce protocole. Les femelles pèsent de 125 à 150 g et 6-7 semaines d&#39;âge à l&#39;arrivée de telle sorte qu&#39;ils sont environ 9-10 semaines au moment de la reproduction (étape 1.5). Veiller à ce que tous les barrages potentiels sont mères pour la première fois. Assurez-vous que les hommes sont 12semaines d&#39;âge à l&#39;arrivée et 15 semaines vieux au début du protocole d&#39;élevage. </li><li> Maison les animaux individuellement dans des cages en plastique à 22 ° C sur 12 heures de lumière / obscurité horaire inverse (allume 21h00-9h00 h). Fournir un accès à la nourriture et l&#39;eau du robinet ad libitum pendant toute l&#39;étude, y compris pendant toutes les sessions de consommation. Prévoyez au moins 1 semaine pour l&#39;acclimatation à l&#39;installation avant de procéder à l&#39;étape 1.4. </li><li> Obtenir le poids corporel de référence pour chaque rat femelle. </li><li> Évaluer les niveaux de consommation d&#39;alcool avant la grossesse chez les rats femelles pendant 2 semaines. Suivez les étapes 1.5.1-1.5.6 dans l&#39;ordre. <ol><li> Les jours 1 et 2 Remplir un tube potable contenant 0,066% de la saccharine solution (pas d&#39;éthanol) dans l&#39;eau du robinet. Pour quantifier la consommation apposer une règle de papier avec précision mm au tube potable avant de le remplir. Utilisez cette méthode car elle réduit erreur de mesure associée à la pesée des tubes de quantifier la consommation d&#39;éthanol. Remplissez le tube jusqu&#39;à la marque de 20 mm sur la règle. Commencez drinki-quatre heuressessions ng (étapes 1.5.1-1.5.6 et 1,7) 1 h après le début de la phase d&#39;obscurité (10:00 h) lorsque les niveaux d&#39;activité et de consommation sont les plus élevés. </li><li> A la fin de chaque session de boisson quantifier le volume de la solution de saccharine qui a été consommé. Pour faciliter la mesure, de déterminer le volume de solution par mm sur la règle à l&#39;avance et à convertir mm volumes. Pour les tubes recommandés ici chaque mm correspond à 0,366 ml. </li><li> Les jours 3 et 4 remplir un tube avec 2,5% d&#39;éthanol (v / v) et une solution de saccharine 0,066% dans l&#39;eau du robinet. A la fin de chaque session de quantifier la quantité de solution d&#39;éthanol (poids par kg de poids corporel) qui a été consommé. </li><li> Au jour 5 et ensuite remplir un tube avec 5% d&#39;éthanol (v / v) et une solution de saccharine 0,066% dans l&#39;eau du robinet. A la fin de chaque session de quantifier la quantité de solution d&#39;éthanol (poids par kg de poids corporel) qui a été consommé. </li><li> À la fin de la phase de pré-grossesse potable peser les rats et calculer la consom éthanol moyenneption et l&#39;écart type pour le groupe entier. Retirer les rats dont la consommation moyenne est supérieure à 1 écart-type au-dessus ou en dessous de la moyenne du groupe de l&#39;étude pour réduire la variabilité dans l&#39;eau potable volontaire pendant la grossesse. </li><li> Affectez les rats restants soit le contrôle de la saccharine ou PAE conditions telles que les niveaux de consommation d&#39;alcool avant la grossesse sont appariés aussi étroitement que possible pour les deux groupes. </li></ol></li><li> Dans 1-14 jours paire chaque rat femelle avec un mâle reproducteur prouvé. Des rats femelles ne consomment pas d&#39;éthanol pendant la phase de reproduction. Confirmer la grossesse par la présence d&#39;un bouchon vaginal, peser le rat femelle, et la loger individuellement. Ceci est défini comme jour de gestation 1. En option, laisser les rats femelles avec un mâle reproducteur pour un maximum de cinq jours, après quoi enlever les femmes de l&#39;étude. NOTE: Parce que la consommation d&#39;éthanol pendant la grossesse commence à 10:00 h sur gestationnel jours une inspection de la présence d&#39;un bouchon vaginal doit être réaliséeavant cette heure. </li><li> Fournir des solutions d&#39;éthanol ou la saccharine pendant 4 heures par jour (1000 à 1400 hr) pendant la durée de la grossesse. <ol><li> À partir du jour de gestation fournir une le rat femelle à 0% ou 5% d&#39;éthanol et une solution de saccharine 0,066% dans l&#39;eau du robinet sur la base de l&#39;attribution de groupe. Assurez-vous que le volume de solution d&#39;éthanol à 0% prévu pour les rats témoins saccharine est adaptée au volume moyen de la solution de 5% d&#39;éthanol consommée par les rats de l&#39;éthanol. A la fin de chaque session quantifier la quantité de solution d&#39;éthanol (poids par kg de poids corporel) ou la saccharine, qui a été consommé. </li><li> Peser barrages de rat par semaine pour évaluer le gain de poids de la mère. </li><li> Fournir de la nourriture et de l&#39;eau du robinet en tout temps, y compris les beuveries. </li><li> Cesser les procédures d&#39;exposition d&#39;éthanol lorsque la progéniture est né. Notez le nombre de chiots vivants et du poids des petits à la naissance. Désigner le jour de naissance jour postnatal 0. </li><li> Cull la litière à 10 chiots autour de jour postnatal 2-3. Tentative to maintenir un ratio égal d&#39;hommes aux animaux femelles dans chaque portée. Si ce ne est pas possible, abattre 10 chiots avec un nombre inégal de mâles et les femelles. </li><li> Enregistrez poids des ratons 2-3 jours après la naissance. </li><li> Sevrer les animaux au jour environ 21-24 postnatale et la maison de paires de même sexe avec un animal de la même condition de traitement prénatal. Ne utilisez pas plus de 1-2 rats de chaque portée par expérience pour limiter les effets de la litière potentiels. </li></ol></li></ol> 2. Comportement social <ol><li> Obtenir et préparer tous les matériaux et l&#39;équipement nécessaires. <ol><li> Obtenir un appareil pour l&#39;interaction sociale. Utilisez une chambre avec un sommet ouvert construit d&#39;un matériau qui est facile à nettoyer et désinfecter. La face avant de l&#39;appareil devrait être recouverte de plastique rigide transparent (~ de 2 mm d&#39;épaisseur) pour le tournage. Ligne les murs intérieurs et le sol avec du plastique transparent (~ de 2 mm d&#39;épaisseur) pour aider dans le nettoyage et le contrôle des odeurs. miroirs de place le long de la wa intérieur retourll pour faciliter l&#39;analyse. NOTE: Pour les données représentatives rapportés ici une chambre de mesure (95 cm de long x 47 cm de large x 43 cm de hauteur) avec un sommet ouvert et plastique transparente rigide (de 2 mm d&#39;épaisseur) couvrant les côtés intérieurs et le plancher de l&#39;appareil a été utilisé. Miroirs ont été placés le long de la paroi arrière. Les dimensions et les matériaux spécifiques ne sont pas critiques pour la mesure du comportement social, cependant, il est recommandé que les dimensions soient suffisamment grands pour se assurer que l&#39;interaction sociale réelle peut être distingué d&#39;autres comportements. Autrement dit, l&#39;appareil doit être suffisamment grand pour que les animaux ne sont pas toujours à proximité immédiate de l&#39;autre. </li><li> Obtenir caméras vidéo capable d&#39;enregistrer en conditions de faible ou de non-légers tout le tournage est réalisé avec un éclairage peu ou pas ambiante dans le spectre visible. Veiller à ce que la caméra a une haute résolution dans le spectre infrarouge, cependant, ne importe quel appareil capable d&#39;enregistrer dans des conditions sombres dans son natifmode nuit ou avec des projecteurs à infrarouge supplémentaires devrait être suffisante. </li><li> Position illuminateurs infrarouges proches de l&#39;appareil en vue d&#39;améliorer l&#39;éclairage de l&#39;appareil dans l&#39;enregistrement vidéo. </li><li> Obtenir des copeaux de bois de qualité de laboratoire (de copeaux de peuplier faux-tremble). </li><li> Obtenir une brosse, pelle, le dioxyde de chlore et d&#39;alcool isopropylique (70%) pour le nettoyage de l&#39;appareil entre les sessions et le contrôle des odeurs. </li></ol></li><li> Appareil acclimatation et le comportement social <ol><li> Pour cette phase de l&#39;expérience, effectuer des mesures chez des rats adultes qui sont au moins 90 jours d&#39;âge. </li><li> Avant chaque session enlever les bois puces, essuyez l&#39;appareil propre avec de l&#39;alcool isopropylique pour contrôler les odeurs entre les sessions et les copeaux de bois frais. Se assurer que les copeaux de bois couvrent entièrement le fond de l&#39;appareil. Nettoyer et désinfecter l&#39;appareil avec un agent approprié, tel que le dioxyde de chlore, le cas échéant. </li><li> Pendant trois jours consécutifs placer un animal et sa cage-mate dans lechambre pendant 30 minutes pour acclimater les animaux dans l&#39;appareil. Pendant les séances d&#39;acclimatation toutes lumières de la salle sont éteintes. </li><li> À la fin de la troisième maison de la session d&#39;acclimatation des animaux individuellement dans de nouvelles cages avec litière fraîche, la nourriture et l&#39;eau pour 24 heures pour motiver l&#39;interaction sociale. </li><li> Interaction sociale inscrits le jour 24 heures après les animaux ont été séparées. <ol><li> Retirer les copeaux de bois de l&#39;appareil, nettoyer et désinfecter avec du dioxyde de chlore, essuyer avec de l&#39;alcool isopropylique pour contrôler les odeurs, et de remplacer les copeaux de bois avant la session. </li><li> Placez une ou plusieurs caméras pour enregistrer l&#39;interaction. Position au moins une caméra en face de l&#39;appareil de sorte que les miroirs sur la paroi arrière de l&#39;appareil peut fournir une perspective supplémentaire pour l&#39;analyse. </li><li> Récupérer animaux un à la fois et de tenir l&#39;animal en face de la caméra de sorte que les caractéristiques uniques de la structure de la fourrure peuvent être notées. Ces caractéristiques d&#39;identification dela fourrure peut être utilisé pour distinguer les rats au cours de l&#39;analyse au lieu de marquage artificiellement les animaux. NOTE: Parce que de nombreux aspects de rongeurs interaction sociale impliquent signaux olfactifs et sentir le partenaire, chaque fois que possible l&#39;introduction d&#39;odeurs étrangères doivent être évités. Rats Long-Evans ont typiquement une caractéristique du motif de fourrure qui peut être utilisé pour distinguer ne importe quelle paire donnée d&#39;animaux. Pour les autres souches (par exemple, des rats Sprague-Dawley) approches alternatives telles que le marquage de la queue avec un colorant non parfumé pourraient être utilisés. Il est important de reconnaître que de nombreux comportements d&#39;intérêt sont dirigés vers des cibles spécifiques (par exemple., Anogénitale sniffing dirigés près de la base de la queue, les attaques ludiques dirigées à la nuque, ou des attaques agressives dirigées vers les flancs ou le ventre). Le marquage des animaux plus près de la pointe de la queue loin de ces objectifs d&#39;intérêt est recommandé. </li><li> Enregistrement vidéo de l&#39;interaction sociale pendant au moins 12 min.</li><li> De surveiller les animaux pour lutter contre toute la session. Si possible, observer les animaux via un moniteur ou une fenêtre de sorte que l&#39;expérimentateur ne est pas dans la salle au cours de la session. REMARQUE: Les combats ont été que rarement observées dans les études avec les rats adultes, cependant, les animaux doivent être surveillés pendant toute la session. La séance devrait être cessé se il ya des combats excessifs ou se il ya des signes de sévices ou de blessure d&#39;un animal. </li></ol></li></ol></li><li> Codage et l&#39;analyse comportementale. <ol><li> Identifier les comportements suivants d&#39;intérêt que par des travaux antérieurs avec PAE 1,18. Quantifier la durée, la fréquence et la latence de la première apparition des comportements suivants; lutte (y compris épinglant), la boxe, rampant (traversée) sur / sous le partenaire, anogénitale reniflant, autre reniflement du corps du partenaire (corps sniffing), allotoilettage (toilettage du partenaire), l&#39;élevage, et reniflage / creuser dans les copeaux de bois . Des exemples de chaque comportement sont illustrentd dans le composant vidéo de cet article. </li><li> Quantifier les comportements sociaux d&#39;intérêt de la vidéo. Obtenir la fréquence, la durée totale et la latence de première instance pour chaque comportement d&#39;intérêt. NOTE: L&#39;obtention de ces mesures peut être réalisé manuellement, cependant, la quantification de ces mesures au moyen d&#39;analyses informatisées de vidéo numérisée est recommandé. A Matlab (www.mathworks.com) script pour la lecture de la vidéo et la quantification des comportements est fourni en complément de cet article. </li><li> Après le codage est terminée pour tous les rats les données durée, la fréquence et latence résultant sont analysés avec un logiciel statistique. </li></ol></li></ol>

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</ol>

Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à divulguer.

Le paradigme de l&#39;exposition prénatale à l&#39;alcool décrit ici implique la consommation volontaire d&#39;éthanol (5% v / v) par des barrages de rat au cours de la grossesse. Il ya un certain nombre de protocoles pour exposer les animaux non humains à l&#39;éthanol au cours du développement du cerveau représenté dans la littérature, qui diffèrent par rapport au calendrier, la dose, la durée et la voie d&#39;administration de l&#39;éthanol ainsi que les espèces visées par l&#39;enquête. Bien qu&#39;un traitement app...

On estime que 1-5% des enfants sont diagnostiqués avec des troubles causés par l&#39;alcoolisation fœtale (ETCAF) 2, qui comprennent le syndrome d&#39;alcoolisation fœtale (SAF), le SAF partiel (SAFp), et liés à l&#39;alcool troubles neurodéveloppementaux (ARNDs) 3. Déficits du comportement et de la cognition sociale sont parmi les résultats indésirables les plus fréquemment observés chez les enfants atteints FASDs 4-7. Conséquences négatives ne sont pas limités à lourde exposition prénatale à l&#39;alcool (PAE), modérée PAE qui ne conduit pas à la remarquable déficits morphologiques, comportementales et cognitives caractéristique du SAF peut causer relativement subtile, mais néanmoins persistante, les déficits dans les humains avec FASDs 8-10 et des animaux non humains exposés à l&#39;éthanol pendant 11 le développement du cerveau. L&#39;importance de comprendre les conséquences neurobiologiques et comportementales correspondantes de modérée PAE est soulignée par les estimations actuelles indiquent que la grande majorité des cas de l&#39;ETCAF relèvent les moins de sEvere gamme du spectre 12. Plusieurs laboratoires indépendants ont signalé des modifications dans le comportement social des rongeurs liés à l&#39;éthanol exposition pendant le développement du cerveau, y compris diminution de l&#39;enquête et de l&#39;interaction 1,13-15, jeu 14,16,17 modifié, augmenté interactions agressives 17,18, modifications de la réactivité aux stimuli sociaux 19-21, et les déficits dans les préférences alimentaires socialement acquises et la mémoire de reconnaissance sociale 22. Déficits de comportement social ont été observés après une exposition à lourds (concentrations d&#39;éthanol dans le sang (BEC) ~ 300 mg / dl) 22,23 ou des niveaux plus modérés de l&#39;éthanol (BEC ~ 80mg / dl) 1, et à travers un large éventail de paramètres pour autre significatif facteurs y compris le calendrier d&#39;exposition, durée d&#39;exposition, et l&#39;âge au moment de la mesure comportementale. Des recherches antérieures ont démontré que des altérations dans des aspects spécifiques de int socialeeraction discrimination à l&#39;âge adulte chez les rats exposés à des niveaux modérés d&#39;alcool provenant d&#39;animaux de contrôle exposés à la saccharine 1,18. En particulier, modérée PAE a toujours été associée à des augmentations robustes en lutte, ce qui suggère une augmentation des comportements agressifs, et des niveaux inférieurs de l&#39;enquête sociale (par exemple, en reniflant du partenaire) à l&#39;âge adulte. Parce que des modifications dans le comportement social sont fiables conséquences de PAE, la quantification du comportement social suivante PAE peut tenir importance pour progresser vers une compréhension plus complète des bases neurales de modifications PAE liées dans le comportement social et le développement d&#39;approches d&#39;intervention. Le but de ce papier et la vidéo associée est de donner des instructions sur le protocole et les méthodes de PAE modérée pour la quantification du comportement social chez les descendants adultes qui ont facilement distingué prénatale exposé à l&#39;alcool à partir enfants non exposés rat.

<table><tbody><tr><td>Saccharine sodium sel hydrate</td><td>Sigma</td><td>S1002</td><td></td></tr><tr><td>190 proof éthanol</td><td>Sigma</td><td>493538</td><td></td></tr><tr><td>Tubes à boire en verre perlé</td><td>Fisher</td><td>14-955K</td><td></td></tr><tr><td>Caoutchouc naturel blanc #4 bouchon un trou</td><td>Plasticoid</td><td>LSG4M181</td><td></td></tr><tr><td>1 » bend tubes-ball point</td><td>Ancare</td><td>TD-199-3 »</td><td></td></tr> <tr><td>Papier règles</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td><A HREF="http://www.vendian.org/mncharity/dir3/paper_rulers">www.vendian.org/mncharity/dir3/paper_rulers</a></td></tr><tr><td>Appareil d’interaction sociale Construit</td><td>sur mesure</td><td>N/A</td><td>95 cm X 47 cm X 43 cm Caméras</td></tr><tr><td>vidéo</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Capable d’enregistrer dans des conditions de faible luminosité ou nulles</td></tr><tr><td>Illuminateurs infrarouges</td><td>Vitek</td><td>VT-IR1-12</td><td></td></tr><tr><td>Teklad sani-chips de laboratoire</td><td>Harlan</td><td>7090A</td><td></td></tr><tr><td>Brosse et pelle</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Alcool isopropylique</td><td>Sigma</td><td>W292907</td><td></td></tr><tr><td>Dioxyde de chlore (comprimés de 1,5 mg)</td><td>Quiplabs</td><td>N/A</td><td>Préparer selon la recommandation du fabricant</td></tr></tbody></table>

modéré exposition prénatale à l&#39;alcool et la quantification du comportement social chez les rats adultes

Moderate Prenatal Alcohol Exposure and Quantification of Social Behavior in Adult Rats

Les altérations du comportement social font partie des principales conséquences négatives observées chez les enfants atteints de troubles du spectre de l’alcoolisation fœtale (TSAF). Plusieurs laboratoires indépendants ont démontré des altérations robustes du comportement social des rongeurs exposés à l’alcool pendant le développement du cerveau à travers un large éventail de durées d’exposition, de moments, de doses et d’âges au moment de la quantification comportementale. Des travaux antérieurs de ce laboratoire ont permis d’identifier des altérations fiables dans des formes spécifiques d’interaction sociale après une exposition prénatale modérée à l’alcool (EAP) chez le rat qui persistent jusqu’à l’âge adulte, y compris une augmentation de la lutte et une diminution des investigations. Ces altérations comportementales ont été utiles pour identifier les circuits neuronaux modifiés par un PAE1 modéré, et peuvent avoir une importance pour progresser vers une compréhension plus complète des bases neuronales des altérations liées aux PAE dans le comportement social. Cet article décrit les procédures d’exécution d’une EAP modérée dans laquelle les mères de rats consomment volontairement de l’éthanol ou de la saccharine (contrôle) tout au long de la gestation, et la mesure des comportements sociaux chez la progéniture adulte.

Au cours de nombreux cycles de reproduction des rats femelles à la condition de l&#39;éthanol boivent régulièrement une moyenne d&#39;environ 2,1 g / kg d&#39;éthanol par session potable de 4 heures. barrages de rats consomment environ la moitié du total de quatre heures au cours de la 15 à 30 premières minutes après l&#39;introduction des tubes de boisson, d&#39;où une concentration maximale de la mère de l&#39;éthanol dans le sérum d&#39;environ 60 mg / dl, mesurée au point de temps 45 min. Au cours de la 3,5 h restan...

L’objectif du protocole présenté ici est de décrire les procédures d’exposition des rats à des niveaux modérés d’alcool pendant le développement cérébral prénatal et de quantifier les altérations du comportement social qui en résultent à l’âge adulte.

Modéré exposition prénatale à l&#39;alcool et la quantification du comportement social chez les rats adultes

Alterations in social behavior are among the major negative consequences observed in children with Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASDs). Several ...

Exposition prénatale modérée à l'alcool et quantification du comportement social chez des rats adultes. Cette vidéo décrit un paradigme d'exposition prénatale à l'alcool suivi de la quantification du comportement social à l'âge adulte. Toutes les procédures décrites dans cette vidéo ont été approuvées par le Comité institutionnel de soins aux animaux et d'utilisation des animaux du Centre des sciences de la santé et du campus principal de l'Université du Nouveau-Mexique. Commencez par obtenir des rats femelles adultes âgés de six à sept semaines, pesant en moyenne entre 125 et 150 grammes, ainsi que des mâles reproducteurs confirmés.Typiquement, un âge de 12 semaines permet d'accorder au moins une semaine aux animaux pour qu'ils s'acclimatent à leur nouvel environnement d'hébergement. Dans l'ensemble, la chronologie de l'exposition prénatale à l'alcool comprend une période de deux semaines de pré-exposition, une période d'accouplement durant laquelle les animaux n'ont pas accès à l'alcool, et la période d'exposition prénatale, qui se déroule tout au long de la gestation. Les détails de chaque étape sont les suivants.Afin d'évaluer les niveaux de consommation d'alcool avant la grossesse, les rates consomment volontairement de l'eau sucrée contenant des concentrations croissantes d'alcool pendant une période de deux semaines. L'objectif de cette évaluation est d'identifier les rates qui consomment aux niveaux souhaités pour les phases ultérieures du protocole de consommation. Cet aspect du paradigme d'exposition à l'alcool garantit également que toutes les rates ont déjà expérimenté la consommation d'alcool avant la grossesse.Préparez des tubes à boire en rassemblant le matériel suivant. Sel sodique d'acide saccharinique, hydrate, éthanol à 190 degrés, tubes à boire en verre perlé, caoutchouc naturel blanc, bouchons à un trou de taille quatre, tubes incurvés de un pouce munis d'une bille et règles en papier. Préparez une solution de saccharine à 0,066 % dissoute dans de l'eau du robinet. Utilisez une partie de cette solution aqueuse de saccharine à 0,066 % pour préparer une solution mère contenant 2,5 % d'éthanol, et une autre partie pour préparer une solution mère contenant 5 % d'éthanol.Préparez des tubes de boisson en fixant une règle en papier sur un tube. Remplissez le tube jusqu'au repère de 20 millimètres avec la solution appropriée pour la journée. Veillez à obtenir les poids corporels de base pour chaque rate avant que les séances de boisson ne commencent, qui durent quatre heures par jour, une heure après le début du cycle d'obscurité.Les jours un et deux, les femelles auront accès à une solution d'eau saccharine à 0,066 %. Les jours trois et quatre, les femelles auront accès à la solution SAC contenant 2,5 % d'éthanol. À partir du jour cinq, les femelles auront accès à la solution SAC contenant 5 % d'éthanol lors des séances de consommation de la solution à 5 % d'éthanol.Poursuivez jusqu'à la fin de la phase de consommation d'alcool précédant la grossesse. De la nourriture et de l'eau du robinet sont disponibles pendant toutes les séances de consommation. À la fin de la séance de quatre heures, quantifiez le poids de la solution d'éthanol consommée par kilogramme de poids corporel.Une fois la phase de consommation d'alcool avant la grossesse terminée, calculez la consommation moyenne d'éthanol et l'écart type pour l'ensemble du groupe, puis éliminez les rats dont la consommation moyenne s'écarte d'un écart type ou plus par rapport à la moyenne du groupe, que ce soit au-dessus ou en dessous.Attribuez les rats restants soit au groupe témoin saccharine, soit au groupe exposé prénatalement à l'éthanol. Appariez les niveaux de consommation d'alcool avant la grossesse aussi précisément que possible. Pour les deux groupes, associez chaque rate à un mâle reproducteur éprouvé.Les rates ne consomment pas d'alcool pendant la phase de reproduction. Lorsque la grossesse est confirmée par la présence d'un bouchon vaginal, peser la rate et le Hauser individuellement à partir du premier jour de gestation. Fournir des solutions d'alcool ou de saccharine selon l'affectation au groupe.Pendant quatre heures par jour, autorisez l'accès à la nourriture et à l'eau du robinet durant les séances de boisson. Poursuivez les séances quotidiennes de boisson tout au long de la grossesse. Quantifiez la consommation de boisson quotidiennement et pesez les rates gestantes hebdomadairement.Interrompre les procédures d'exposition à l'alcool lorsque les descendants naissent. Désigner le jour de la naissance comme jour postnatal zéro.Appeler la portée à 10 poussins vers le deuxième ou troisième jour après la naissance et enregistrer les poids des poussins. Sevrer les animaux vers le 21e à 24e jour après la naissance et les loger par paires du même sexe avec un animal ayant subi la même condition de traitement prénatal. Ne pas utiliser plus d'un à deux rats par portée dans chaque expérience afin de limiter les effets potentiels liés à la portée.Quantification du comportement social à l'âge adulte. Se procurer tous les matériaux et équipements nécessaires. Nous utilisons une chambre sur mesure, de 95 centimètres de long, 47 centimètres de large et 43 centimètres de haut.La chambre est constituée d'un matériau plastique composite facile à nettoyer et à désinfecter, et possède une façade en plastique transparent et un dessus ouvert. Le sol et les parois latérales sont revêtus de plastique afin de faciliter le nettoyage. La paroi intérieure arrière est recouverte de carreaux réfléchissants pour faciliter l'analyse.Les matériaux supplémentaires nécessaires comprennent les caméras vidéo suivantes, capables d'enregistrer dans des conditions de faible luminosité ou d'absence totale de lumière. Idéalement, la caméra doit posséder une résolution élevée dans le spectre infrarouge, ainsi que des éclairages infrarouges positionnés autour du dispositif afin d'améliorer l'éclairage de celui-ci. Dans le laboratoire d'enregistrement, des copeaux de sable de qualité laboratoire, une brosse et une pelle à poussière pour nettoyer le dispositif entre les séances, ainsi que de l'alcool isopropylique à 70 % pour éliminer les odeurs de rat entre les séances.Pour les mesures à l'âge adulte, les rats ont au moins 90 jours au début de cette phase de l'expérience ; pendant trois jours consécutifs, un animal et son compagnon de cage sont placés dans l'appareil pendant 30 minutes afin de s'habituer à celui-ci. Avant chaque séance, tous les copeaux de bois sont retirés. L'appareil est nettoyé avec de l'alcool isopropylique et de nouveaux copeaux de bois propres sont fournis ; l'appareil est désinfecté avec un agent de nettoyage approprié.Si nécessaire, les copeaux de bois doivent recouvrir entièrement le fond de l'appareil. Pendant la séance d'acclimatation, toutes les lumières de la pièce sont éteintes à la fin de la troisième séance d'acclimatation. Loger les animaux individuellement dans de nouvelles cages avec des copeaux de bois frais, de la nourriture et de l'eau.L'interaction sociale est enregistrée le jour suivant, 24 heures après la séparation des animaux afin d'évaluer le comportement social. Commencez par nettoyer l'appareil et remplacer les copeaux de bois. Placez un ou plusieurs caméras pour enregistrer l'interaction. Dans notre laboratoire, nous utilisons les caractéristiques uniques des motifs du pelage comme moyen d'identifier les animaux individuels ; des alternatives pour marquer les animaux sont décrites dans le texte. Une fois l'enregistrement de l'interaction sociale terminé, identifiez les comportements d'intérêt dans notre laboratoire.Nous avons quantifié les comportements dirigés vers le partenaire ainsi que d'autres comportements dirigés vers l'environnement. Dans nos études antérieures, le combat et d'autres mesures d'investigation sociale, telles que l'exploration olfactive anale ou génitale ou le toilettage allé, ont régulièrement permis de distinguer les animaux exposés à l'éthanol de ceux exposés au saccharose. Dans les extraits vidéo suivants, des exemples de chacun des comportements d'intérêt sont présentés.Le combat se produit lorsque l'un ou les deux animaux tentent de bondir sur le partenaire et aboutit souvent à ce que l'un des deux membres du couple immobilise l'autre sur le côté ou sur le dos. Le combat est souvent précédé par une poursuite et peut également être précédé par d'autres comportements tels que le boxe, le passage sous l'autre ou encore l'olfaction génitale. L'observation des comportements prend fin lorsque les animaux se séparent.Parfois, les animaux entament rapidement un autre round de lutte si les animaux se sont clairement séparés l'un de l'autre. Le deuxième round serait annoté comme une instance distincte. Étant donné que la lutte nécessite la participation des deux animaux du couple, les mesures doivent être équivalentes pour le couple lors de l'annotation.Vous pouvez également noter quels animaux ont immobilisé les autres plutôt que d'être immobilisés, ainsi que lequel des animaux a initié la poursuite et les bonds. Il peut aussi être utile de coder séparément les comportements qui composent les phases de lutte. Si une analyse plus fine est nécessaire pour le boxe, les deux animaux se dressent sur leurs membres postérieurs et se poussent mutuellement avec leurs quatre pattes.Lors d'épisodes de monte ou de passage sous, un animal grimpe délibérément sur le dos ou plonge sous son partenaire. Au cours de ce comportement, un animal explore la région anogénitale de son partenaire à l’aide de l’odorat. L'une des fonctions de l'exploration olfactive anogénitale est l'identification.Le reniflement du corps désigne le reniflement du corps du partenaire et est souvent dirigé vers le flanc ou le côté du partenaire. Le toilettage allogène correspond au toilettage du partenaire allogène. Le toilettage est généralement dirigé vers la nuque et la région de la tête.Lorsque l'animal se dresse sur ses membres postérieurs, un comportement similaire à la montée, au creusage et à l'exploration olfactive dans la litière, il s'agit d'un comportement courant orienté vers l'environnement, qui fournit une mesure des activités dirigées vers le substrat utilisé dans l'appareil. Pour le codage et la quantification des comportements, nous utilisons un programme MATLAB personnalisé développé dans notre laboratoire. Les fonctionnalités principales de ce programme sont la lecture de la vidéo à vitesse variable, des boutons bascule associés à chaque comportement d'intérêt, dont l'état activé ou désactivé indique la présence ou l'absence du comportement, le codage temporel automatique du début et de la fin de chaque comportement, ainsi que la sortie des données, incluant la durée totale, la fréquence et la latence jusqu'à la première occurrence de chaque comportement. Une fois le codage terminé pour tous les animaux, les données de durée, de fréquence et de latence sont analysées à l'aide d'un logiciel statistique. Dans l'exemple présenté ici, on observe que la fréquence, la durée et la latence jusqu'à la première occurrence des comportements de lutte, ainsi que la durée de l'exploration olfactive anogénitale, différaient significativement entre les animaux exposés à la saccharine et ceux exposés à l'éthanol.Les autres mesures comportementales n'ont pas permis de distinguer les groupes. Les méthodes présentées dans cette vidéo ont simplifié le processus d'analyse du comportement social après une exposition prénatale à l'éthanol, en le transformant en un protocole simple et efficace. En plus de l'utilité de cette approche pour différencier les rats exposés à des niveaux modérés d'éthanol pendant le développement prénatal de ceux non exposés, ces méthodes pourraient facilement être adaptées à l'évaluation d'autres protocoles d'exposition à l'éthanol, notamment en ce qui concerne les variations du moment, de la dose, de la durée et de l'âge au moment de l'analyse comportementale.En outre, les comportements spécifiques quantifiés lors de l'analyse peuvent être adaptés pour capturer les effets majeurs de l'exposition à l'éthanol à divers stades du développement.

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Afin de comprendre les mécanismes moléculaires des dommages induite par l'éthanol de développement, nous avons développé un modèle de poisson zèbre de l'exposition et l'éthanol sont à explorer les caractéristiques physiques, des altérations cellulaires et génétiques qui se produisent après exposition à...

Évaluer les changements tératogènes dans un modèle de poisson zèbre de l&#39;exposition d&#39;alcoolisation fœtale

Les modèles expérimentaux proposés ici se concentrer sur l'étude des effets de l'exposition à l'alcool dans l'apoptose et l'application de peptide neurotrophique pendant la grossesse dans le cerveau du fœtus. Une description détaillée de l'élevage à la collecte de cerveau du fœtus est décrite. Techniques pour la détermination de l'apoptose sont également décrites en détail.

Méthodes expérimentales pour tester les effets du peptide neurotrophique, ADNF-9, contre l&#39;apoptose induite par l&#39;alcool pendant la grossesse dans C57BL / 6

Nous démontrons la construction des chambres à vapeur de l'alcool à l'aide de matériaux facilement disponibles qui abritent simultanément 6 cages de souris. Nous décrivons en outre leur utilisation dans un modèle de souris de l'exposition d'alcoolisation fœtale équivalent à tous les trois trimestres de la grossesse humaine. Ce paradigme expose des animaux pendant la gestation et après la naissance 1-12 jours.

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L'exercice cardiovasculaire et des expériences stimulantes dans un environnement complexe ont des effets bénéfiques sur plusieurs mesures de neuroplasticité dans le cerveau des rongeurs. Cet article va discuter de la mise en œuvre de ces interventions comme un "superintervention" qui combine la course roue et la complexité de l'environnement et se penchera sur les limites de ces interventions.

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Conditionnement classique de trace eyeblink (ECC) a servi à évaluer apprentissage associatif hippocampe-dépendante chez des rats adultes qui ont administré une forte concentration (11,9 % v/v) d’alcool pendant le développement précoce du cerveau néonatal. En général, les procédures ECC sont sons outils de diagnostic pour la détection de dysfonctionnement cérébral à travers de nombreux paramètres psychologiques et biomédicales.

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Ce travail décrit un protocole pour quantifier les niveaux d’éthanol dans un embryon de poisson zèbre à l’aide de la chromatographie de gaz de l’espace de la tête à partir de méthodes d’exposition appropriées au traitement des embryons et à l’analyse de l’éthanol.

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Voici un protocole pour le modèle 2BC/CIE de dépendance à l’alcool chez la souris afin d’étudier les troubles liés à la consommation d’alcool.

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L’objectif du protocole actuel est de décrire les étapes nécessaires à l’établissement et à l’utilisation d’un test de préférence sociale pour le poisson-zèbre adulte et de démontrer qu’il peut être utilisé pour caractériser les défauts sociaux induits par l’éthanol.

Modélisation des troubles du spectre de l’alcoolisation fœtale chez le poisson-zèbre pour caractériser l’impact d’un environnement embryonnaire défavorable sur le comportement social adulte

Ce protocole décrit un paradigme standard de consommation en cage domestique à accès intermittent à deux bouteilles pour modéliser la consommation d’alcool chez les rats. De plus, il fournit des instructions étape par étape pour compléter le protocole standard avec un système de détection de léchage DIY qui permet une analyse microstructurelle du comportement de consommation.

Modélisation de la consommation d’alcool chez les rongeurs à l’aide de la consommation en cage à domicile et de l’analyse microstructurelle

À mesure que les restrictions législatives changent, entraînant une accessibilité accrue des produits cannabinoïdes, il est extrêmement important de développer des modèles pour étudier l’impact de ces expositions, en particulier pendant la grossesse. Un modèle préclinique d’exposition prénatale modérée aux cannabinoïdes par ingestion volontaire a été développé, permettant des investigations plus approfondies.

Modèle préclinique d’exposition prénatale au delta-9-tétrahydrocannabinol pour évaluer son impact sur les résultats neurodéveloppementaux

Découvrez une méthode d'exposition prénatale modérée à l'alcool chez les rats et la quantification des comportements sociaux à l'âge adulte. Ce protocole aide les chercheurs à étudier les effets du développement cérébral prénatal.

Modéré exposition prénatale à l'alcool et la quantification du comportement social chez les rats adultes

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