Virus de la grippe Propagation dans embryonnés de poulet Oeufs

L’objectif global de cette procédure est de produire de grandes quantités d’un virus de la grippe à titre élevé, dans un système rentable. Ceci est accompli en obtenant d’abord des œufs de poule fraîchement fécondés, exempts d’agents pathogènes sériques. Dans un deuxième temps, les œufs sont infectés par le virus de la grippe via la racine d’Alan Toic.

Pendant 48 heures, le liquide Alan Toic, qui contient le virus, est ensuite récolté et le virus est congelé dans de l’azote liquide. En fin de compte, des tests de plaque et d’hémagglutinine peuvent être effectués pour déterminer l’influence du titre viral de l’Alan Toic collecté. La démonstration visuelle fluide de cette méthode est essentielle car les étapes de récolte sont très sensibles et nécessitent une manipulation soigneuse des œufs et une bonne connaissance de leur anatomie.

Avant de commencer la procédure, vous avez obtenu des œufs de davien fraîchement fécondés, exempts d’agents pathogènes sériques, auprès d’un fournisseur approprié. Dès votre arrivée, placez les œufs dans un incubateur d’œufs humidifié avec un retourneur d’œufs automatique pour faire tourner les œufs régulièrement à 37 degrés Celsius et 55 à 60 % d’humidité pendant 10 à 11 jours. Après sept à huit jours d’incubation, avec des gants désinfectés à 70 % d’éthanol.

Essuyez un chandelier à œufs avec l’éthanol et transférez les œufs de l’incubateur dans les cartons d’œufs vides. Ensuite, éteignez les lumières et tenez le gros bout des œufs, un à la fois, contre le Candler. Si un ovule est fertile, les vaisseaux sanguins minces menant à un embryon en forme de haricot doivent être clairement visibles.

Si l’œuf n’est pas fécondé, une petite tache de sang avec un jaune d’œuf visible sera observée. Ensuite, jetez les œufs non fécondés et remettez les œufs viables dans l’incubateur. Si le statut d’un œuf ne peut être confirmé, marquez-le pour une observation ultérieure le 10e ou le 11e jour après la fécondation et immédiatement avant l’utilisation, diluez un stock de virus de la grippe A à une fois 10 à 10 à 10 à 10 à quatre PFU par millilitre dans du PBS stérile complété par des hippies et placez-le sur de la glace.

Ensuite, allumez à nouveau chaque œuf et éliminez tous les embryons immobiles morts. Ensuite, retirez trois œufs de l’incubateur et disposez-les dans un support séparé. Avec les sacs d’air relevés, marquez l’espace aérien des œufs avec un marqueur permanent.

Ensuite, lavez la zone au-dessus de l’espace aérien avec de l’éthanol à 70 % et transférez l’espace aérien des œufs dans une boîte à œufs à l’intérieur d’une hotte de biosécurité BSL deux. Maintenant, utilisez une aiguille stérile de calibre 18 pour percer un petit trou dans la coquille au-dessus du sac d’air de chaque œuf. En prenant soin de ne pas insérer l’aiguille trop profondément pour éviter de poignarder l’embryon ou le jaune.

Ensuite, aspirez le virus de la grippe dilué dans une seringue stérile d’un millilitre. Fixez une aiguille de calibre 22 et avancez soigneusement l’aiguille à un angle de 45 degrés dans la cavité Alan Toic du premier œuf. Injectez 0,2 millilitre du virus dilué dans l’œuf, puis après avoir injecté les deux autres œufs, jetez la seringue et scellez chaque trou à l’aiguille avec une goutte de colle d’un pistolet à colle.

En prenant soin de la colle, il ne fuit pas à l’intérieur de l’œuf, puis remettez les œufs dans l’incubateur. Une fois que tous les œufs ont été inoculés, incubez les œufs infectés à 37 degrés Celsius et à 60 % d’humidité sans les retourner pour un temps d’incubation optimal. Selon le type de virus de la grippe.

À la fin de la période d’incubation, réfrigérez les œufs pendant au moins quatre heures à quatre degrés Celsius pour tuer l’embryon et resserrer les vaisseaux sanguins. Lorsque les œufs ont été suffisamment refroidis. Transférez-les dans une hotte de biosécurité et un support ferme et nettoyez les surfaces des œufs avec de l’éthanol à 70 %.

Ensuite, utilisez des ciseaux stériles pour ouvrir la coquille de l’œuf au-dessus du sac d’air du premier œuf. Retirez l’obus autour du sac d’air. En prenant soin de ne pas endommager la membrane du chorio Alan Toic.

Ensuite, à l’aide d’une pince émoussée stérile, ouvrez la membrane du chorio Alan Toic et écartez doucement l’embryon et le sac de vitellus avec une petite spatule ou une cuillère, en prenant soin de ne pas rompre le jaune. Ensuite, à l’aide d’une pipette einor d’un millilitre, prélevez soigneusement le liquide Alan Toic, en inclinant l’œuf sur le côté pour recueillir autant de liquide que nécessaire. Chaque œuf doit produire entre cinq et 10 millilitres de liquide légèrement jaunâtre au fur et à mesure de la récolte de chaque œuf.

Accumulez le liquide Alan Toic dans des tubes coniques en plastique de 50 millilitres sur de la glace. Lorsque tout le liquide a été recueilli, faites tourner le virus et transférez le liquide clair dans un nouveau tube de 50 millilitres sur de la glace. Enfin, jetez les œufs dans un récipient à deux déchets BSL et immédiatement Eloqua dans le liquide toïc LAN clarifié.

Ensuite, congelez le virus dans de l’azote liquide et placez les tiges congelées dans un congélateur à moins 80 degrés Celsius. Pour un stockage à long terme, l’infection par le virus de la grippe provoque un effet cytopathique qui se traduit par des zones circulaires de cellules entrelacées ou de plaques qui se forment sur une monocouche de cellules. Dans cette expérience, les plaques ont été visualisées en colorant les cellules avec du violet cristallin et 65 plaques ont été comptées dans le puits avec une fois 10 à moins 12 dilution du virus parce que 500 microlitres ont dilué le stock viral a été cultivé sur les cellules.

Dans cette expérience, le titre final était de 1,3 fois 10 puissance 14 PFU par millilitre. Le test de l’hémagglutinine nation est une méthode de titrage du virus de la grippe basée sur la capacité du virus à se fixer à la surface des globules rouges. Comme observé, la suspension virale agglutine les globules rouges, empêchant les globules rouges de se stabiliser hors de la suspension.

Un résultat clairement négatif a été observé avec une dilution de deux à moins 10 du virus dans 50 microlitres. Par conséquent, le titre final est de 2,1 fois 10 puissance quatre HAU par millilitre. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de propager le virus de la grippe en inoculant des œufs de poule et en récoltant le liquide de l’Atlantique contenant le virus.