Name: Un essai biologique de petit volume pour évaluer bactérienne / phytoplancton co-culture avec de leau-Pulse-modulé en amplitude (EAU-PAM) Fluorimétrie (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 54 s
Description: Découvrez un bioessai miniaturisé pour évaluer rapidement les interactions microalgues-bactéries par fluorimétrie WATER-PAM. Cette méthode permet d'identifier les effets pathogènes, symbiotiques ou neutres sur la santé photosynthétique.

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</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

La croissance des algues dans un format miniaturisé. La miniaturisation des cultures d&#39;algues à un volume de culture de 1 ml dans une plaque de microtitration permet la réplication au sein d&#39;une expérience à être augmentée. Il est important de veiller à l&#39;algue est en bonne santé tout au long d&#39;une expérience; effectuer une courbe de croissance (Figure 2), en utilisant le format de microplaques pour évaluer divers médias algues, afin d&#39;assurer les besoins nu...

Phytoplancton physiologie a traditionnellement été étudiée dans des expériences à méso-échelle allant de 20 ml dans des flacons coniques à 5 L dans des bonbonnes 1-7. Cette échelle expérimentale exige le sous-échantillonnage pour la surveillance expérimentale, comme sacrifier échantillons répétés pour chaque point de temps crée un dispositif expérimental ingérable. La capacité d&#39;augmenter le nombre d&#39;expériences indépendantes tout en utilisant le même espace d&#39;incubateur diurne par miniaturiser le volume expérimental pour des expériences de physiologie algues réduiront ou élimineront les limites de sous-échantillonnage et de pseudo-réplication à partir de grands volumes. Un format de plaque de microtitrage a été développé pour des essais biologiques d&#39;algues en utilisant un volume de culture de 1 ml pour manipuler expérimentalement algues dans des conditions variables. Ce faible volume expérimental permet pour le nombre de répétitions d&#39;augmenter, augmente la reproductibilité expérimental en raison d&#39;une diminution de la variabilité entre les échantillons répétés etexpériences, et permet une véritable réplication tout en maintenant les contrôles expérimentaux (ie, les cultures d&#39;algues axéniques) pour 140 jours (Figure 2) 12. Ce format de plaque de microtitrage peut être facilement adapté pour une variété de questions expérimentales, telles que: une bactérie ne ont une interaction symbiotique, neutre ou pathogène avec son hôte algues? Est l&#39;addition d&#39;un composé stimulant ou toxiques pour une algue? Ces questions et d&#39;autres peuvent être traitées de manière à haut débit rapide en utilisant ce nouveau format 9-11. Une plaque de culture de microtitrage 48 puits permet à chaque 1 ml ainsi d&#39;être un montage expérimental indépendant qui est échantillonné à un seul point dans le temps. Différents paramètres peuvent être échantillonnés à partir de ce volume de 1 ml, y compris, mais sans s&#39;y limiter: fluorescence de la chlorophylle et les paramètres photochimiques utilisant-modulé en amplitude EAU-Pulse (EAU-PAM) fluorométrie (voir tableau Matériaux et équipement) 13. EAU-PAM fluorométrie est une technique rapide et non invasive qui peut être utilisé pour surveiller les expériences réalisées avec des algues 13. Il permet de mesurer l&#39;efficacité photosynthétique et PSII santé à partir d&#39;un petit volume de culture (150 à 300 ul de la culture dans un milieu dilué à une 2 - volume de 4 ml d&#39;eau de water-PAM) 14,15. En plus de l&#39;eau-PAM fluorométrie, cette configuration peut être utilisée pour mesurer une variété d&#39;autres paramètres, y compris, mais sans s&#39;y limiter: la microscopie à visualiser les bactéries fixées aux cellules des algues et des changements dans la morphologie des cellules d&#39;algues; formation de colonies bactériennes unitaires (ufc) chefs d&#39;accusation; et cytométrie de flux pour le nombre de cellules d&#39;algues et des sous-populations d&#39;identification.

<table><tbody><tr><td>Incubateur diurne de 10 pi³ (6012-1)</td><td>Caron Corporate</td><td>112310-6012-1-11</td><td><a href="http://www.caronproducts.com">www.caronproducts.com</a></td></tr><tr><td>Nunc EasYFlask 25 cm2, Vent/Close Cap, volume de travail de 7 ml, 200/cs</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>N156340</td><td><a href="http://www.fishersci.ca">www.fishersci.ca</a></td></tr><tr><td>Plaques TC multipuits &ndash ; 48 puits</td><td>BD Biosciences Discovery Labware</td><td>353078</td><td><a href="http://www.bdbiosciences.com/">www.bdbiosciences.com</a></td></tr><tr><td>P1000 Gilson L’étalon de pipetage&mdash ; Gilson’s Pipetman</td><td>Mandel Scientific Company Inc.</td><td>GF-F123602</td><td><a href="http://www.mandel.ca">www.mandel.ca</a></td></tr><tr><td>P10mL Gilson L’étalon de pipetage&mdash ; Gilson’s Pipetman</td><td>Mandel Scientific Company Inc.</td><td>GF-F161201</td><td><a href="http://www.mandel.ca">www.mandel.ca</a></td></tr><tr><td>Large Orifice Pointes non stériles [100&ndash ; 1 250 et micro ; l]</td><td>VWR International</td><td>89079-468</td><td><a href="http://www.ca.vwr.com">www.ca.vwr.com</a></td></tr><tr><td>Pointes ultrafines non stériles [100&ndash ; 1 250 et micro ; l]</td><td>VWR International</td><td>89079-470</td><td><a href="http://www.ca.vwr.com">www.ca.vwr.com</a></td></tr><tr><td>Finntip 10 ml [Vol : 1 - 10 ml]</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>9402151</td><td><a href="http://www.fishersci.ca">www.fishersci.ca</a></td></tr><tr><td>WATER-Pulse Modulation d’amplitude (Water-ED)</td><td>Heinz Walz GmbH, Effeltrich, Allemagne</td><td>EDEE0232</td><td><a href="http://www.walz.com">www.walz.com</a></td></tr><tr><td>Cuvette en verre de quartz de 15 mm de diamètre (WATER-K)</td><td>Caron Corporate</td><td></td><td><a href="http://www.caronproducts.com">www.caronproducts.com</a></td></tr><tr><td>Chlorure de sodium (cristallin/certifié ACS), Fisher Chemical</td><td>Thermo Fisher</td><td>Scientific Thermo Fisher Scientific</td><td><a href="http://www.fishersci.ca"> www.fishersci.ca</a></td></tr><tr><td>BD Difco Marine Broth 2216</td><td>BD Biosciences Discovery Labware</td><td>BD Biosciences Discovery Labware</td><td><a href="http://www.bdbiosciences.com">www.bdbiosciences.com</a></td></tr><tr><td>BD Bacto Agar</td><td>BD Biosciences Discovery Labware</td><td>BD Biosciences Discovery Labware</td><td><a href="http://www.bdbiosciences.com">www.bdbiosciences.com</a></td></tr><tr><td>Kit L1 moyen, 50 L</td><td>NCMA [Centre national des algues et du microbiote marins</td><td></td><td><a href="http://www.ncma.bigelow.org">www.ncma.bigelow.org</a></td></tr></tbody></table>

un essai biologique de petit volume pour évaluer bactérienne / phytoplancton co-culture avec de l&#39;eau-pulse-modulé en amplitude (eau-pam) fluorimétrie

A Small Volume Bioassay to Assess Bacterial/Phytoplankton Co-culture Using WATER-Pulse-Amplitude-Modulated (WATER-PAM) Fluorometry

Les procédés classiques pour la manipulation expérimentale de microalgues ont utilisé de grands volumes de culture (20 ml) à 5 L, de sorte que la culture peut être sous-échantillonné pendant toute l&#39;expérience 1-7. Le sous-échantillonnage de grandes quantités peut être problématique pour plusieurs raisons: 1) il provoque la variation du volume total et l&#39;aire de surface: rapport en volume de la culture au cours de l&#39;expérience; 2) pseudo-réplication (c.-à répliquer des échantillons de la même flacon de traitement 8) est souvent employé plutôt que de véritables répétitions (ce est à dire, l&#39;échantillonnage des traitements répétés); 3) la durée de l&#39;expérience est limitée par le volume total; et 4) les cultures axéniques ou le microbiote bactérienne d&#39;habitude sont difficiles à maintenir au cours des expériences à long terme que la contamination se produit souvent au cours de sous-échantillonnage. L&#39;utilisation de plaques de microtitration permet volumes de culture 1 ml d&#39;être utilisés pour chaque répétition, avec un maximum de 48 traitements distincts dansune plaque 12,65 cm x 8,5 x 2,2, diminuant ainsi le volume expérimental et permettant la replication extensive sans aucun traitement de sous-échantillonnage. En outre, cette technique peut être modifiée pour se adapter à une variété de formats, y compris expérimentales: bactérienne-algues co-cultures, tests d&#39;algues de la physiologie et la toxine de dépistage 9-11. Puits individuels avec une algue, une bactérie et / ou co-cultures peuvent être prélevés pour de nombreuses procédures de laboratoire, y compris, mais sans s&#39;y limiter: EAU-Pulse-modulé en amplitude (EAU-PAM) fluorométrie, la microscopie, formation de colonies bactériennes unité (ufc) comtes et cytométrie de flux. La combinaison du format de plaque de microtitration et EAU-PAM fluorométrie permet de multiples mesures rapides de rendement photochimique et d&#39;autres paramètres photochimiques avec une faible variabilité entre les échantillons, une reproductibilité élevée et évite les nombreux pièges de sous-échantillonnage une bonbonne ou fiole conique au cours d&#39;une expérience .

EAU-PAM lectures de fluoro. EAU-Pulse-modulé en amplitude (PAM) fluorométrie est une méthode rapide et efficace pour déterminer la fluorescence (un indicateur de la teneur en chlorophylle) et le rendement photosynthétique (PSII de santé) des cultures d&#39;algues. Le logiciel PAM WinControl génère une feuille de calcul des valeurs de données brutes pour (voici les paramètres de base pour sombres adaptée échantillons d&#39;algues): F = 0 fluorescence des c...

L’objectif de cette procédure est de démontrer la reproductibilité et l’adaptabilité de l’utilisation d’un format de plaque de microtitration pour le criblage de microalgues. Ce criblage rapide combine la fluorométrie WATER-Pulse-Amplitude-Modulated (WATER-PAM) pour mesurer le rendement photosynthétique en tant qu’indicateur de la santé du photosystème II (PSII) avec des co-cultures bactériennes-algales de petit volume.

Un essai biologique de petit volume pour évaluer bactérienne / phytoplancton co-culture avec de l&#39;eau-Pulse-modulé en amplitude (EAU-PAM) Fluorimétrie

Conventional methods for experimental manipulation of microalgae have employed large volumes of culture (20 ml to 5 L), so that the culture can be ...

L'objectif général de l'expérience suivante est de présenter un bioessai algal miniaturisé destiné à analyser rapidement des cultures algales afin d'identifier les symbioses microbiennes ou les agents pathogènes pouvant influencer la santé ou la physiologie de la culture algale. Cette approche consiste d'abord à préparer des mélanges témoins d'algues et de bactéries dans un milieu, puis à établir des co-cultures expérimentales d'algues et de bactéries à différentes concentrations. L'étape suivante consiste à préparer des plaques de 48 puits contenant des aliquotes de ces mélanges, afin d'obtenir un criblage robuste, reproductible et rapide.Ensuite, les plaques sont incubées et surveillées à l'aide de la fluorométrie à modulation d'amplitude d'impulsion, qui effectue des mesures permettant d'évaluer l'état photosynthétique du système. Les résultats de cette expérience cinétique révèlent un effet pathogène, symbiotique ou neutre des bactéries sur les algues. Des criblages supplémentaires à faible volume peuvent également être réalisés au cours de l'expérience cinétique.Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes classiques utilisant de grands volumes pour les bi

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Cette publication décrit la conception de photobioréacteurs de laboratoire (PBR) avec des régimes lumineux personnalisables. La croissance des cyanobactéries ou des microalgues, utilisant le bicarbonate comme source de carbone, est surveillée en permanence en mesurant la production volumétrique d’oxygène. Ces PBR facilitent des comparaisons rapides et répliquées de la croissance en laboratoire avec peu d’intervention de l’utilisateur pendant les expériences.

Fonctionnement de photobioréacteurs de laboratoire avec mesures de croissance en ligne et régimes de lumière personnalisables

Le fluoromètre à taux de répétition rapide (FRRf) est une méthode bénéfique pour mesurer la photophysiologie du photosystème II et la productivité primaire. Nous décrivons ici un protocole pour mesurer la photophysiologie PSII de l’algue épizoïque, Colacium sp. sur substrat zooplancton en utilisant FRRf de type cuvette.

Mesure de la photophysiologie du stade attaché de Colacium sp. par un fluoromètre à taux de répétition rapide de type cuvette

Le protocole introduit une méthode à haut débit pour mesurer la relaxation de la trempe non photochimique par fluorométrie de chlorophylle modulée en amplitude d’impulsion. La méthode est appliquée à Glycine max cultivée en plein champ et peut être adaptée à d’autres espèces pour dépister la diversité génétique ou les populations reproductrices.

Analyse à haut débit de la trempe non photochimique dans les cultures à l’aide de la fluorométrie de chlorophylle modulée en amplitude d’impulsion

Découvrez un bioessai miniaturisé pour évaluer rapidement les interactions microalgues-bactéries par fluorimétrie WATER-PAM. Cette méthode permet d'identifier les effets pathogènes, symbiotiques ou neutres sur la santé photosynthétique.

Un essai biologique de petit volume pour évaluer bactérienne / phytoplancton co-culture avec de leau-Pulse-modulé en amplitude (EAU-PAM) Fluorimétrie (Vidéo) | JoVE Journal

Un essai biologique de petit volume pour évaluer bactérienne / phytoplancton co-culture avec de l'eau-Pulse-modulé en amplitude (EAU-PAM) Fluorimétrie

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