Tumeur primaire et MEF cellule d'isolement pour étudier métastases pulmonaires

L’objectif de ce protocole est d’étudier la tumorigenèse mammaire. Avec cette technique, les tumeurs mammaires de souris sont retirées et des cellules primaires sont préparées à partir des tumeurs. Un protocole d’extraction pulmonaire est inclus pour l’étude des métastases pulmonaires. De plus, un autre protocole d’analyse des fibroblastes embryonnaires de souris à partir de l’embryon de souris est inclus.

L’objectif global de cette procédure est d’étudier l’agénésie tumorale du cancer du sein chez la souris. Tout d’abord, la préparation de cellules primaires à partir de tumeurs mammaires de souris est démontrée. Ensuite, comment extraire le poumon de souris pour visualiser les métastases pulmonaires est présenté.

Enfin, la préparation de fibroblastes embryonnaires de souris à partir d’embryons de souris est finalement démontrée, car ces méthodes démontrent que les souris transgéniques pour le virus de la tumeur mammaire de souris polyoma l’antigène T moyen peut être utilisé pour étudier l’agénésie tumorale du cancer du sein. Bien que cette méthode puisse donner un aperçu du cancer du sein, elle peut également être appliquée à l’investigation d’autres tumeurs solides. La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle, car il est important d’isoler uniquement les tumeurs et les autres tissus pendant les étapes d’illation tumorale Commencez par utiliser des ciseaux pour ouvrir la peau de l’orifice urétral au cou d’une souris virus de la tumeur mammaire polyome antigène T moyen souris transgénique.

Ensuite, épinglez la peau et isolez la tumeur mammaire du sein. Lavez la tumeur in situ avec du PBS froid et placez la tumeur dans une plaque de culture tissulaire stérile de 10 centimètres. Ensuite, transférez la plaque dans une hotte à flux laminaire stérile et utilisez une lame de rasoir stérile et des ciseaux pour couper la tumeur en morceaux d’un millimètre cube.

Incuber les morceaux avec de la collagénase sur une bascule à 37 degrés Celsius. Après deux heures, faites tourner la suspension de tissu tumoral résultante. Lavez le granulé trois fois de plus dans PBS Resus, en suspendant le granulé dans deux millilitres de tripsin EDTA après le dernier lavage pendant cinq minutes à 37 degrés Celsius avec mutation.

Ensuite, lavez les cellules trois fois de plus et mettez-les en suspension dans un milieu de croissance normal. Enfin, incubez les cellules sur une boîte de culture tissulaire de 10 centimètres, en changeant le milieu tous les jours pendant les trois jours suivants jusqu’à ce que le nombre de cellules souhaité soit obtenu. Avant d’extraire le poumon, retirez le foie et le diaphragme et délogez les côtes.

Ouvrez ensuite la partie supérieure de la trachée, près de la veine jugulaire et utilisez un cathéter pour injecter l’agent approprié à travers la trachée pour remplir les poumons, retirer les poumons, puis si vous utilisez Z fix, incorporer le tissu dans la paraffine. Si, à l’aide d’encre de Chine, retenez la solution tissulaire inec pendant cinq minutes, le tissu pulmonaire normal apparaîtra de couleur noire tandis que les nodules tumoraux apparaîtront. Les blancs classifient tous les nodules tumoraux visualisés sur des sites secondaires d’un diamètre supérieur ou égal à 0,5 millimètre comme des métastases pour générer des fibroblastes embryonnaires de souris.

Tout d’abord, ouvrez la peau d’une souris enceinte de l’orifice urétral vers le cou comme nous venons de le démontrer en prenant soin de ne pas déranger les embryons. Ensuite, retirez les cornes utérines et rincez-les dans du PBS stérile. Ensuite, séparez soigneusement les embryons du placenta et un à la fois.

Placez chaque embryon dans une boîte de culture de 10 centimètres contenant du PBS glacé. Après avoir retiré la tête, le foie et l’intestin, rincez la partie restante de l’embryon dans un puits d’une plaque de culture tissulaire à 12 puits contenant du PBS coupé le corps en morceaux d’un millimètre cube. Transférez dans un autre puits contenant cinq millilitres de tripsin EDTA et incubez le tissu à 37 degrés Celsius.

Après cinq minutes, ajoutez un millilitre de FBS pour inactiver la digestion. Ensuite, faites tourner la suspension cellulaire résultante et remettez la pastille en suspension. Dans un millilitre de DMEM chaud, transférez enfin les cellules dans une boîte de culture de 10 centimètres contenant 10 millilitres de DMEM complété par des antibiotiques et cultivez les cellules jusqu’à ce que le nombre de cellules souhaité soit obtenu.

Le stade de progression tumorale auquel sacrifier l’animal dépend de l’étude particulière et des directives I-A-C-U-C. Par exemple, cette souris FVB âgée de 100 jours avec l’antigène T moyen du virus de la tumeur mammaire de souris polyome a été sacrifiée trois mois après l’isolement d’une tumeur, comme cela vient de démontrer le sein de la souris. Des cellules tumorales primaires ont été obtenues.

Étant donné que de nombreux gènes interviennent dans les métastases du cancer du sein au poumon, les poumons ont également été extraits, comme cela vient d’être démontré, pour étudier le processus métastatique. Les poumons ont ensuite été gonflés avec Z fix et colorés à l’encre de Chine pour visualiser les nodules tumoraux. Ici, des fibroblastes embryonnaires de souris, isolés à partir d’embryons de souris de souche FVB, sont présentés.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez savoir comment isoler les cellules tumorales primaires de souris et les fibroblastes embryonnaires de souris, et extraire le poumon de souris. N’oubliez pas que travailler avec du fluor ISO peut être extrêmement dangereux dans le cadre de ces précautions, telles que le travail avec une cagoule chimique F devrait toujours être une attaque pendant que vous effectuez cette procédure.