Test pour Odeur discrimination et l'accoutumance chez la souris

L'objectif général de cette procédure est de fournir une méthode permettant d'évaluer la capacité des souris à détecter, s'habituer et se déshabituer à des odeurs tant nouvelles que sociales. Cela est réalisé en préparant d'abord une série d'odeurs nouvelles non sociales, telles que des extraits à base de fruits et de noix, ainsi que des odeurs sociales, comme la litière de cage. La deuxième étape consiste à présenter les odeurs aux souris, en commençant par trois odeurs nouvelles, suivies de deux odeurs sociales différentes.

Pendant chaque essai, le comportement olfactif des souris est évalué et enregistré. En fin de compte, le test d’odorat, de discrimination et d’habitation pour l’olfaction ma est utilisé pour démontrer que l’animal peut répondre à une odeur nouvelle, s’habituer à cette odeur, puis faire preuve de désaccoutumance lorsqu’une autre odeur nouvelle ou une odeur sociale lui est présentée. Cette méthode peut être utilisée pour répondre à des questions clés dans le domaine des neurosciences, par exemple pour déterminer si l’animal ne réagit pas à un animal nouveau ou à un stimulus nouveau parce qu’il est incapable de détecter l’odeur.

Commencez par préparer les odeurs non sociales en mettant des gants et en remplissant trois tubes coniques de 15 millilitres avec 10 millilitres d'eau. Ajoutez à l'aide d'une pipette 100 microlitres d'extrait d'amande dans le premier tube, 100 microlitres d'extrait de banane dans le second tube, et laissez le troisième tube contenant uniquement de l'eau pour l'utiliser comme témoin. Ensuite, procurez-vous deux cages différentes de souris qui n'ont pas été nettoyées depuis au moins trois jours et qui contiennent un nombre égal de souris du même sexe que les sujets testés.

Utilisez un coton-tige pour essuyer le fond de la cage sale en effectuant des mouvements en zigzag. Secouez tout matériau d'habitat éventuellement accroché au coton-tige, puis placez-le, côté prélevé vers le bas, dans un grand bocal en verre muni d'un couvercle hermétique. Répétez ce processus jusqu'à l'obtention de trois coton-tiges provenant des deux cages pour chaque souris devant être testée.

Conserver les pots à température ambiante et utiliser les écouvillons dans les quatre à six heures suivant leur prélèvement. Afin de maintenir une odeur forte et constante, déplacer les cages contenant les échantillons odorants dans une pièce située à l'extérieur de la zone de test le jour de l'expérience. Ne pas porter de parfums ou de lotions parfumés et éviter de consommer des aliments à odeur forte.

Placer les odeurs sociales et non sociales préparées dans la salle de test, ainsi qu’un ruban de laboratoire, de nouveaux écouvillons en coton, un flacon de déchets muni d’un couvercle et deux minuteurs, juste avant la procédure de test. Mettre des gants propres et peser la première souris. Ensuite, transférer la souris dans une cage propre munie d’un couvercle en grillage et sans bouteille d’eau.

Placer la cage dans un endroit sans odeurs ni bruits inhabituels et laisser la souris s'acclimater à la nouvelle cage pendant 45 minutes. À la fin de la période d'acclimatation, déplacer la souris dans sa cage vers la zone de test et commencer à acclimater une autre souris. Placer la souris acclimatée dans sa cage sur le plan de travail à une hauteur confortable pour l'observation en position assise.

Ensuite, préparez l'une des odeurs dans l'ordre décrit dans le protocole écrit pour les odeurs non sociales, en déposant 100 microlitres de l'arôme sur l'extrémité d'un écouvillon neuf. À utiliser immédiatement avant emploi. Pour les odeurs sociales, retirez et utilisez l'un des écouvillons préparés auparavant provenant de leurs pots respectifs.

Soulevez le couvercle métallique de la cage et insérez l'extrémité non parfumée du coton-tige dans l'ouverture de la bouteille d'eau par le dessous du couvercle grillagé. Évitez de toucher l'extrémité cotonneuse à quoi que ce soit, y compris vos doigts, afin d'éviter toute contamination par des odeurs. Lorsqu'il reste environ un pouce du coton-tige parfumé à l'intérieur de la cage, fixez l'extrémité en bois du coton-tige au dessous du couvercle de la cage à l'aide de ruban adhésif de laboratoire.

Abaissez ensuite délicatement le couvercle sur la cage. Pour éviter de perturber la souris test, commencez immédiatement à chronométrer pendant deux minutes. À l’aide du premier chronomètre et d’une seconde montre-chronomètre, enregistrez le temps cumulé que la souris test passe à renifler l’odeur.

On définit la respiration active comme l'orientation du nez de la souris vers le coton-tige lorsqu'elle se trouve à moins de deux centimètres du coton-tige. À la fin de l'essai, soulevez le couvercle métallique et retirez soigneusement le coton-tige en le tirant vers le bas à travers la face inférieure du couvercle. Pour éviter tout contact entre le couvercle et l'extrémité du coton-tige contenant l'odeur, scellez le coton-tige utilisé dans la bouteille de déchets tout en laissant la souris se reposer pendant une minute, puis préparez le prochain coton-tige donneur.

Présentez chaque odeur trois fois de suite pendant deux minutes. Une fois toutes les essais terminés, videz le flacon de déchets contenant les cotons-tiges usagés dans une poubelle située à l'extérieur de la salle de test et remettez la souris dans sa cage d'origine. Chacun des odorants a d'abord été présenté à des souris de souche C 57 black six J, avec des présentations successives de chaque odeur.

Les souris ont passé moins de temps à examiner l'odeur suggérant une présence. Le même schéma de détection et de discrimination peut être observé avec les odeurs sociales, tout comme avec les odeurs non sociales. Toutefois, les souris ont passé plus de temps à examiner les odeurs sociales.

Lorsque les mêmes odeurs non sociales ont été présentées à un mâle de souche FVB à fond génétique mixte, un schéma similaire d'habitation a été observé. Chaque nouvelle odeur introduite provoquait une augmentation de la fréquence des reniflements actifs, qui diminuait à chaque présentation de la même odeur. Toutefois, les souris FVB présentaient un schéma différent avec les odeurs sociales, car il n'y avait pas de diminution significative du temps passé à renifler lors des expositions répétées.

Les données suggèrent que les souris ne s'habituent pas à des présentations répétées des deux odeurs sociales. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez bien comprendre comment évaluer la capacité d'une souris à détecter une odeur nouvelle ou sociale, à s'habituer à cette odeur, puis à se désaccoutumer de cette odeur lorsqu'une nouvelle odeur est présentée.