Utilisation de la Électrorétinogramme pour évaluer la fonction dans le Retina rongeurs et les effets protecteurs de la distance préconditionnement ischémique Limb

L’objectif global de cette procédure est de tester la fonction visuelle chez des rats normaux, blessés à la lumière et ischémiques à distance, préconditionnés et blessés à la lumière à l’aide de l’ERG et de démontrer ainsi les effets protecteurs de l’ischémie à distance des membres sur la rétine. Ceci est accompli en commençant par l’obscurité, en adaptant les rats pendant 12 heures. La deuxième étape consiste à enregistrer l’ERG de base adapté à l’obscurité à l’aide de stimuli lumineux LED et d’un amplificateur numérique.

Ensuite, soumettez les rats à un stress rétinien en l’exposant à une lumière vive et continue. La dernière étape consiste à comparer les enregistrements ERG des rats endommagés par la lumière et ceux préconditionnés avec une ischémie à distance des membres, et à mesurer les réponses des photorécepteurs telles qu’observées dans l’onde A et les réponses rétiniennes internes telles qu’observées dans l’onde B. En fin de compte, l’ERG adapté à l’obscurité est utilisé pour évaluer la fonction visuelle scotopique.

Cette méthode peut donc fournir des informations sur la neuroprotection ischémique à distance. Il peut également être appliqué à d’autres formes de lésions et de maladies rétiniennes, aux tests pharmacologiques et au dépistage des animaux présentant des défauts visuels. Pour commencer cette procédure, adaptez le rat dans l’obscurité pendant 12 heures, puis anesthésiez-le avec l’injection de cocktail de kétamine xylazine.

Une fois que l’animal est inconscient, vérifiez la profondeur de l’anesthésie en pinçant légèrement son pied pour vous assurer que la réponse réflexe est absente. Ensuite, appliquez une goutte d’atropine et une goutte de proxméthane sur sa cornée. Coupé en fil noir de 10 centimètres de long.

Ensuite, faites une boucle avec le fil et glissez la boucle sur l’équateur de l’œil, tricotez légèrement afin de tirer le globe oculaire légèrement vers l’avant et de garder la cornée dégagée de la paupière. Par la suite, appliquez des gouttes ophtalmiques Carmer sur les cornées. Placez le rat sur la litière absorbante au-dessus de la plate-forme chauffée avec sa tête placée dans l’ouverture du ganzfeld.

Ensuite, insérez la sonde de température interne dans le rectum pour vous assurer que la température corporelle est maintenue à 37 degrés Celsius, et fixez la sonde de température en position en collant son cordon à la queue du rat. Ensuite, insérez l’électrode de référence par voie sous-cutanée dans le membre postérieur. Placez l’électrode négative en toute sécurité dans la bouche pour éviter que l’électrode ne glisse hors de la bouche.

Fixez le câble de connexion sur une surface stable. Placez ensuite l’électrode positive au centre de la cornée et assurez-vous que l’électrode touche doucement la cornée à l’aide d’un manipulateur microm. Une fois les électrodes en place, drapez le trou mis en place, y compris le ganzfeld et l’animal, avec un matériau opaque pour préserver l’adaptation à l’obscurité.

Dans le logiciel d’acquisition. Définissez une fréquence d’échantillonnage de deux kilohertz avec cinq millisecondes pour l’échantillonnage avant le prélèvement et un temps de collecte de 100 à 1000 millisecondes. Réglez ensuite les filtres passe-bande sur un à 1000 hertz et assurez-vous que l’échantillonnage est déclenché pendant une période de 100 millisecondes après un flash.

Maintenant, vérifiez la base d’enregistrement. Il doit être exempt de bruit parasite, mais montrer le bruit de l’amplificateur et l’oscillation respiratoire. Exécutez ensuite une mémoire flash de test.

Il s’agit d’une forme d’onde ERG typique en réponse à la mémoire flash de test. Lorsque c’est fait, laissez l’animal se réadapter à l’obscurité pendant 10 minutes. Vérifiez ensuite à nouveau la ligne de base pour un signal stable.

Par la suite, commencez l’enregistrement À la fin de la session d’enregistrement, vérifiez la stabilité de la température corporelle de l’animal. Retirez les électrodes, puis réappliquez le polymère Carmer sur les cornées. Ensuite, laissez l’animal récupérer sur un coussin chauffant jusqu’à ce qu’il soit complètement mobile et actif avant de retourner au logement de l’animal.

Cette figure montre la mesure d’une vague et d’une onde B à partir d’un ERG adapté à l’obscurité. La trace montrée ici est enregistrée à partir de la cornée d’un œil sombre adapté à un éclair de lumière brillant donné à l’instant par T zéro. L’amplitude d’une onde est mesurée de la ligne de base au premier creux.

L’amplitude de l’onde B est mesurée à partir du creux de l’onde A jusqu’au pic positif suivant. La latence est mesurée à partir de l’artefact de stimulus jusqu’au point d’intérêt sur la trace, tel que le creux de l’onde A. Le signal ERG dominé par le brut augmente avec l’augmentation du stimulus lumineux.

Une onde devient apparente à environ 0,4 log candela scotopique secondes par mètre carré, et le paradigme de la double flamme a été utilisé pour séparer le signal ERG mixte en réponses en cône et en bâtonnet. Une fois maîtrisé. Cette technique peut être réalisée en 30 minutes.