Un, test de comportement évolutives et économiques pour mesurer l'éthanol sédation sensibilité et la tolérance rapide dans

L'objectif général de l'expérience suivante est d'évaluer la sensibilité à la sédation par l'éthanol chez les mouches à fruits. Cela est réalisé en plaçant les mouches dans des tubes et en les exposant à de la vapeur d'éthanol. La deuxième étape consiste à déterminer le nombre de mouches sédentées dans chaque tube à des intervalles réguliers, jusqu'à ce que toutes les mouches soient sédentées.

Ensuite, le point temporel est interpolé. Lorsque 50 % des mouches sont sédatées pour chaque flacon, les résultats indiquent l'indice du temps nécessaire pour séder les drosophiles à l'éthanol. Cette procédure sera réalisée aujourd'hui par Simran Sindu, une étudiante de mon laboratoire. Pour commencer l'expérience, collectez les mouches dans des flacons contenant un milieu frais, par groupes de 11 individus du même sexe, en utilisant un maximum de cinq minutes de CO2, puis laissez les mouches se rétablir toute la nuit dans des flacons contenant du milieu, placés dans un espace aux conditions environnementales contrôlées.

Préparer une solution d'éthanol en diluant de l'éthanol pur à 100 % dans de l'eau purifiée jusqu'à une concentration finale de 85 %. Laisser la solution revenir à la température ambiante toute la nuit avant le test. Préparer un flacon alimentaire propre et vide, qui servira de flacon de test. Prévoir un nouveau bouchon en acétate de cellulose, un bouchon en silicone et un millilitre de solution d'éthanol pour chaque flacon de mouches à tester. Régler la température ambiante entre 20 et 25 degrés Celsius et l'humidité relative entre 55 et 65 %. Désigner un autre opérateur pour attribuer un code unique à chaque groupe de flacons et enregistrer ce code pour une utilisation ultérieure. Placer les flacons codés contenant les mouches dans la salle de test afin qu'ils s'acclimatent pendant quelques minutes. Ensuite, étiqueter les flacons de test vides de manière à ce que leurs codes correspondent à ceux des flacons de mouches.

Construire un journal d'essai papier en entrant les codes dans des colonnes, une colonne par flacon, dans un tableur. En utilisant le journal d'essai comme guide, disposer les flacons alimentaires codés contenant des mouches et les flacons d'essai vides en séries correspondantes dans la salle de test, puis transférer les mouches des flacons alimentaires vers les flacons d'essai appariés et étiquetés, une par une.

Insérez ensuite immédiatement des bouchons en acétate de cellulose dans les tubes d'essai jusqu'à ce que les bouchons en acétate de cellulose se situent à deux centimètres en dessous des extrémités des tubes. Pour l'évaluation au temps zéro. Saisissez chaque tube individuellement entre le pouce et l'index.

Tapotez doucement la table trois fois pour faire tomber les mouches au fond du flacon. Attendez 30 secondes et comptez le nombre de mouches immobiles ou mortes. Notez le nombre de mouches immobiles ou mortes pour chaque flacon à chaque instant.

Zéro minute dans le journal d'essai sur support papier. Démarrer le chronomètre à l'instant zéro et ajouter immédiatement un millilitre d'éthanol à l'acétate de cellulose. Agiter en mouvement circulaire à des intervalles de cinq secondes pour le premier ensemble de quatre fioles, dans l'ordre.

Ils seront testés une fois que l'éthanol aura été ajouté aux quatre flacons d'essai du jeu. Insérez un bouchon en silicone dans chaque flacon pour le sceller à 1, 2, 3, 4 et cinq minutes. Ajoutez un millilitre d'éthanol respectivement au deuxième, troisième, quatrième, cinquième et sixième jeu de quatre flacons.

Continuer à insérer des bouchons en silicone après avoir ajouté de l'éthanol à chaque série de quatre flacons LS toutes les six minutes. Tester la première série de quatre flacons en tenant chaque flacon entre le pouce et l'index et en tapotant doucement trois fois sur la table afin de faire tomber les mouches au fond du flacon. Attendre 30 secondes, puis compter et noter le nombre total de mouches sédatées.

Considérez les mouches comme sédentaires si elles, premièrement, se tiennent au fond du flacon mais ne marchent pas, ou deuxièmement, sont couchées sur le dos, avec ou sans battement d'ailes. Manipulez chaque flacon du lot à des intervalles de cinq secondes selon ce programme aux temps 7, 8, 9, 10 et 11 minutes.

Tester respectivement la deuxième, troisième, quatrième, cinquième et sixième série de tubes comme effectué pour la première série à 12 minutes. Retester la première série de quatre tubes et continuer à tester la deuxième, troisième, quatrième, cinquième et sixième série de tubes à 13, 14, 15, 16 et 17 minutes respectivement. Continuer à tester les mouches jusqu'à ce qu'elles soient toutes sédatées.

Saisissez le nombre total de mouches dans chaque flacon lors du test sur support papier. Enregistrez les mouches immobiles ou mortes détectées par le capteur au temps zéro à partir du nombre total de mouches. Les données brutes de l'essai de sédation à l'éthanol ont été converties en pourcentage de mouches actives en fonction du temps.

La sensibilité à la sédation par l'éthanol à partir des données primaires a été quantifiée comme le temps de sédation 50 ou ST 50. Le temps nécessaire pour que 50 % des mouches deviennent sédentées ou la surface sous la courbe ou une UC. Ce test détecte les effets de l'ARNi dirigé contre la calnexine 14 D dans le système nerveux, qui atténue la sensibilité à l'éthanol par rapport aux témoins, la mutation de scab et de rouser, une sensibilité accrue à la sédation par l'éthanol et la mutation de happy hour. Une sensibilité atténuée à la sédation par l'éthanol comparée aux témoins, une fois maîtrisée.

Cette technique peut être réalisée en une heure et demie si elle est effectuée correctement.