Ex Situ Normothermique machine perfusion de foies de donneurs

L’objectif global de cette procédure est de perfuser des greffons de foie de donneur humain à la température du corps à l’aide de la perfusion à la machine. Ceci est accompli en préparant d’abord le liquide de perfusion nécessaire. La deuxième étape consiste à amorcer le dispositif de perfusion en ajoutant les différents composants du liquide de perfusion dans la machine.

Simultanément, le greffon hépatique obtenu est préparé sur la table arrière pour être connecté au dispositif de perfusion. La dernière étape consiste à connecter le foie au dispositif de perfusion et à commencer la perfusion thématique normale. En fin de compte, les modifications des flux artériels et portals affichées sur les écrans sont utilisées pour évaluer l’hémodynamique du foie et l’analyse des gaz sanguins des échantillons prélevés dans le liquide de perfusion artérielle est utilisée pour surveiller le pH et l’oxygénation du liquide de perfusion.

Le principal avantage de cette technique par rapport à la méthode traditionnelle de stockage statique est que vous maintenez un foie en vie à une température normale à l’extérieur du corps humain. Vous fournissez de l’oxygène et des nutriments au greffon, le maintenant métaboliquement actif. Il aide à réduire l’ischémie et la reperfusion et les blessures induites par le froid.

Et comme le foie est métaboliquement actif à 37 degrés, vous pouvez évaluer la viabilité du greffon avant la transplantation. La procédure de perfusion d’une machine d’excision tur standard d’une greffe de foie humain sera démontrée étape par étape par Alex Mehan, qui est un étudiant au doctorat travaillant dans mon laboratoire. Pour commencer cette procédure, ajoutez les composants du liquide de perfusion dans l’appareil via le connecteur situé sur le dessus de l’oxygénateur.

Le liquide de perfusion est composé de globules rouges humains, de plasma frais congelé, d’albumine humaine et d’autres composants. Allumez la Vénus et les pompes artérielles. Suivez les instructions du fabricant à l’écran pour augmenter le débit de la pompe des deux côtés.

Éliminez systématiquement toutes les bulles d’air du système fermé. Annulez le manomètre contre la pression atmosphérique en suivant les instructions à l’écran. Cela garantit que la mesure de pression pendant la perfusion est la pression réelle au niveau de la veine porte.

Réglez la température de consigne de l’appareil à 37 degrés du côté du portail. Réglez la pression veineuse portale moyenne à 11 millimètres de mercure. Répétez la procédure de knulling sous pression sur le côté artériel de l’appareil.

Réglez la température à 37 degrés et la pression artérielle moyenne à 70 millimètres de mercure. Démarrer l’oxygénation à l’aide de carbogène à un débit de quatre litres par minute. Le flux d’air sera réparti entre les deux oxygénateurs, ce qui devrait entraîner une pression d’oxygène d’environ 60 kilopascals dans le liquide de perfusion.

Pour des perfusions plus longues. Il est conseillé d’utiliser des sources distinctes d’oxygène et de dioxyde de carbone. Cela permet de petits ajustements dans le rapport oxygène-dioxyde de carbone, qui peuvent être utilisés pour ajuster le pH et la pression du dioxyde de carbone du liquide de perfusion.

Vérifiez le pH du liquide de perfusion en effectuant une analyse des gaz du sang. Assurez-vous de jeter environ trois millilitres de liquide de perfusion avant de prélever un échantillon. Comme ce liquide se trouve dans la tubulure périphérique et ne représente pas le liquide de perfusion dans le système, retirez toutes les bulles d’air de l’échantillon de gaz du sang.

Ajouter une solution de bicarbonate de sodium à 8,4 % pour la capacité tampon, en visant un pH physiologique. Généralement, 15 à 30 millilitres de solution de bicarbonate de sodium à 8,4 % sont ajoutés. À ce stade, le foie du donneur est prélevé dans l’hôpital du donneur à l’aide de la technique standard de refroidissement in situ et rincé avec un liquide de conservation froid pour faciliter la canulation de l’artère.

Un segment de l’aorte supra-tronculaire doit être laissé attaché à l’artère hépatique immédiatement après l’arrivée du foie du donneur dans la salle d’opération du centre de perfusion de la machine, commencer la procédure de la table arrière. Prélever un échantillon d’au moins 10 millilitres de liquide de conservation pour les tests microbiologiques. Le canal cystique du foie a été ligaturé lors de son approvisionnement dans l’hôpital donneur avec des ciseaux chirurgicaux, retirez les attaches diaphragmatiques de la zone nue du foie ainsi que tout muscle cardiaque restant de la coiffe supérieure de la veine cva.

À l’aide de ciseaux de dissection, disséquez l’artère et la veine porte. Utilisez des sutures chirurgicales ou une pince à talons pour ligaturer les branches latérales. Fermez l’extrémité distale du segment de l’aorte supra-tronculaire à l’aide d’une suture monofilament non résorbable, telle que 3.0 proline.

Insérez la canule artérielle dans l’extrémité proximale de l’aorte supra tronculaire et fixez-la avec des sutures. Ensuite, insérez la canule veineuse dans la veine porte et fixez-la avec des sutures. La veine hépatique ne doit pas être canulée.

Rincez le canal biliaire avec la solution de préservation. Insérez un cathéter en silicone dans le canal biliaire et fixez-le avec des sutures. N’insérez pas le cathéter trop profondément dans le canal biliaire car cela pourrait causer des lésions à l’épithélium biliaire.

Enfin, rincez le foie avec une solution saline à 0,9 % via la canule de la veine porte. Si le greffon a été conservé dans la solution de l’Université du Wisconsin, rincez-le avec deux litres de solution saline froide suivie d’un demi-litre de solution saline chaude. Si le greffon a été conservé dans une solution HTK, rincez le foie avec un litre de solution saline froide suivi d’un demi-litre de solution saline chaude pour préparer la perfusion en machine.

Positionnez d’abord le foie dans la chambre de l’organe avec la surface antérieure vers le bas. Connectez immédiatement le foie au dispositif de perfusion amorcé en connectant la canule de la veine porte au tube d’entrée porte du dispositif et la canule artérielle au tube d’entrée artériel du dispositif. L’aspect le plus critique de ce protocole est la connexion de la veine porte dans les canules de l’artère hépatique au dispositif de profusion.

Une profusion adéquate doit commencer immédiatement après. Commencer la perfusion sur les côtés porte et artériel en suivant les instructions du fabricant à l’écran. En cas de pliage de la tubulure et/ou de résistance intrahépatique élevée, une alarme de pression peut se déclencher.

Vérifiez la pression artérielle moyenne et la pression veineuse porte moyenne et réglez-les si nécessaire. Notez la production de bile du greffon métaboliquement actif et de l’artère hépatique pulsée pendant la perfusion normale de la machine thématique. Pendant la perfusion, fermez la chambre de l’organe avec le couvercle stérile fourni à différents points de temps.

Prélevez des échantillons de liquide de perfusion pour une analyse immédiate du sang, des gaz et des paramètres biochimiques à l’aide d’une nouvelle seringue d’un millilitre. Pour chaque échantillon, aspirez le liquide de perfusion à partir des connecteurs d’échantillonnage qui font partie de la tubulure jetable du dispositif de perfusion. Encore une fois, assurez-vous de jeter quelques millilitres de liquide de perfusion avant de prélever les échantillons.

Retirez immédiatement toutes les bulles d’air de la seringue. Insérez la seringue d’un millilitre dans l’analyseur de gaz du sang et suivez les instructions du fabricant pour l’analyse des gaz du sang et des paramètres biochimiques. Prélever des échantillons de liquide de perfusion pour une analyse ultérieure.

Transférez-les dans des tubes de prélèvement sanguin et conservez-les sur de la glace fondante. Centrifugez les échantillons à 1400 fois g et quatre degrés Celsius pendant cinq minutes. Prélever le plasma du liquide de perfusion, puis congeler et stocker le plasma à moins 80 degrés Celsius pour des analyses biochimiques ultérieures afin d’évaluer la quantité de lésions du greffon afin d’évaluer la qualité du foie pendant la perfusion.

Surveiller l’homogénéité macroscopique du foie. On voit ici un foie avant la perfusion et à 30 minutes et six heures après le début de la perfusion normale de la machine à thème. L’hémodynamique des foies a été évaluée en surveillant les changements dans les flux artériels et portals pendant la perfusion normale de la machine.

Une augmentation initiale et une stabilisation ultérieure des flux indiquent une hémodynamique stable des foies pendant la fusion. L’analyse des gaz du sang a été utilisée pour surveiller l’oxygénation du liquide de perfusion et l’extraction du dioxyde de carbone. L’oxygénation avec du carbogène à un débit de quatre litres par minute a entraîné une saturation continue en oxygène de 100 % de la production de bile a été utilisée comme indicateur de la fonction hépatique.

Une augmentation de la concentration de bilirubine et de bicarbonate totaux représentait une amélioration de la qualité de la bile produite. Une nuance graduelle de la couleur de la bile a été observée. Au fil du temps.

Des concentrations stables de marqueurs de lésions hépatiques tels qu’une phosphatase alcaline LT, une gamma gt et du potassium dans le liquide de perfusion reflétaient des lésions minimes des greffons. De plus, les examens histologiques du tissu hépatique et de l’extrémité distale du canal biliaire hépatique supplémentaire n’ont révélé aucune lésion supplémentaire des greffons lors de la perfusion normale de la machine thématique. Les glandes perbiliaires et le système vasculaire sont indiqués.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la perfusion mécanique à terme normal d’une greffe de foie humain. Cette technique offre le potentiel d’améliorer et d’évaluer la viabilité du greffon avant la transplantation.