Name: Isolement de cellules mononucléées du système nerveux central de rats avec EAE (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-04T04:23:00.000+00:00
Duration: 20 min 51 s
Description: Apprenez à isoler des cellules mononucléées du système nerveux central de rats atteints d'EAE. Cette méthode utilise une perfusion cardiaque et un gradient Percoll pour obtenir des cellules viables sans contamination sanguine.

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<ol><li> Profondément anesthésier les rats. Vaporiser avec de l&#39;éthanol 70% et faire un perfusion cardiaque avec du PBS pendant 10 min pour éliminer les cellules des vaisseaux sanguins (couper les oreillettes droite et perfuser à travers le ventricule gauche). </li><li> Enlever le cerveau et la moelle épinière et les placer dans un tube de 50 ml contenant PBS glacé. Couper le cerveau et la moelle épinière dans une passoire cellule 70 mm placé dans une boîte de Pétri de 10 cm contenant 10 ml de PBS glacé. Appuyez sur chaque morceau de l&#39;organe à travers le tamis de cellules en utilisant le dos d&#39;un piston de la seringue stérile de 1 ml. Recueillir la suspension seule cellule dans un tube de 50 ml sur la glace. Laver les cellules avec du PBS-crépine et ajouter au tube jusqu&#39;à ce que la solution est claire. </li><li> Centrifuger pendant 8-10 min à 390 g. </li><li> Resuspendre les cellules dans 20 ml de PBS Percoll + 30% et superposer 10 ml de Percoll PBS + 70%. </li><li> Centrifuger à 390 g pendant 20 min à température ambiante. </li><li> Retirer le gras sur le dessus du tube. Recueillir les cellules de l&#39;interface et laver deux fois avec du PBS. Comte. </li></ol>

<ol><li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+and+clinical+scoring+of+chronic-relapsing+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Induction and clinical scoring of chronic-relapsing experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Journal of Visualized Experiments. 5, Forthcoming.</li>
</ol>

Cette procédure, comme toutes les procédures impliquant des animaux vivants, doivent être approuvés par l&#39;utilisation des animaux de votre institution et le comité de soins. Nous recommandons qu&#39;un vétérinaire ou un technicien vétérinaire être présents lors de l&#39;exécution du premier perfusions cardiaques afin d&#39;assurer un niveau suffisant de l&#39;anesthésie est donné à l&#39;animal avant et pendant la procédure, et que les animaux ne subissent pas de souffrances inutiles ou de détresse.

<table><tbody><tr><td>PBS, 1x, stérile</td><td>Réactif</td><td>GIBCO, par Life Technologies</td><td>14190-250</td><td></td></tr><tr><td>Filtre cellulaire, 70 µm</td><td>Outil</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-771-2</td><td></td></tr><tr><td>Percoll</td><td>Réactif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1644</td><td></td></tr></tbody></table>

isolement de cellules mononucléées du système nerveux central de rats avec eae

Isolation of Mononuclear Cells from the Central Nervous System of Rats with EAE

Qu&#39;il s&#39;agisse d&#39;étudier une maladie auto-immune dirigés vers le système nerveux central (SNC), tels que encéphalomyélite allergique expérimentale (EAE, 1), ou la réponse immunitaire à une infection du système nerveux central, telles que la poliomyélite, maladie de Lyme neuroborréliose ou neurosyphilis, il est souvent nécessaire d&#39;isoler les cellules du SNC infiltrant immunitaire. Dans cette vidéo-protocole que nous montrent comment isoler les cellules mononucléées (CMN) du SNC de rat avec une EAE. La première étape de cette procédure nécessite une perfusion cardiaque du rongeur avec une solution saline pour s&#39;assurer que le sang ne reste dans les vaisseaux sanguins irriguant le SNC. Toute contamination du sang sera d&#39;augmenter artificiellement le nombre de SNC-apparente infiltrer les multinationales et peut modifier la composition apparente du système immunitaire infiltrer. Nous avons ensuite montrer comment retirer le cerveau et la moelle épinière du rat pour dilacération ultérieure pour préparer une suspension à cellule unique. Cette suspension est séparé sur un dégradé de deux couches de Percoll à isoler les multinationales. Après lavage, ces cellules sont alors prêtes à subir une procédure requise. Des cellules mononucléées isolées en utilisant cette procédure sont viables et peuvent être utilisés pour l&#39;électrophysiologie, la cytométrie en flux (FACS), ou en biochimie. Si la technique est réalisée dans des conditions stériles (à l&#39;aide d&#39;instruments stériles sous une hotte de culture de tissus), les cellules peuvent également être cultivées dans un milieu de culture de tissus. Une population de cellules donné peut encore être purifié en utilisant soit des procédures de séparation magnétique ou un FACS.

Dans cette vidéo, nous démontrons comment isoler les cellules mononucléées du système nerveux central de rats avec encéphalomyélite allergique expérimentale.

Isolement de cellules mononucléées du système nerveux central de rats avec EAE

Qu'il s'agisse d'étudier une maladie auto-immune ciblant le système nerveux central (SNC), telle que l'encéphalomyélite autoimmune expérimentale (EAE, 1), ou la ...

Très bien. Bonjour, je suis Christine Beaton. Je suis chercheuse assistante dans le laboratoire de George Chen au Département de physiologie et de biophysique de l'Université de Californie à Irvine. Aujourd'hui, je vais vous montrer comment isoler des cellules mononucléées du système nerveux central de rats.Donc, cette procédure consiste à anesthésier profondément un rat afin d'effectuer une perfusion cardiaque, de manière à ne pas avoir de sang contaminant dans le système nerveux central. Une fois l'animal sacrifié, nous extrairons le cerveau et la moelle épinière, puis préparerons une suspension monocellulaire à l'aide d'un tamis cellulaire. Ensuite, à l'aide d'un gradient double couche de Percoll, nous isolerons les cellules mononucléées. Commençons.Je suis maintenant prêt à effectuer la perfusion cardiaque, je vais donc montrer tous les matériaux dont j'ai besoin pour cela. La première chose dont nous avons besoin est un bocal de Bell, et ici nous avons placé des essuie-tout imprégnés d'anesthésique volatil. Vous pouvez utiliser du halane ou de l'iso-flurane.La prochaine chose dont nous avons besoin est un dispositif pour maintenir le rat et un autre pour recueillir le sang. No

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Le présent article décrit un protocole rapide pour isoler efficacement les cellules mononucléées du tissus de la moelle épinière du cerveau et qui peuvent être utilisés efficacement pour des analyses de cytométrie en flux.

Isolement du cerveau et les cellules mononucléées de la moelle épinière utilisant gradients de Percoll

Dans cette vidéo, nous effectuons l’isolement de cellules mononucléées du cerveau d’une souris à l’aide de la centrifugation par gradient de densité. La suspension isolée de cellules mononucléées peut être utilisée pour une analyse plus poussée en aval.

Isolement de cellules mononucléées à partir du cerveau de souris : une technique de centrifugation à gradient de densité pour isoler les cellules mononucléées résidentes du cerveau

Cette vidéo montre le processus d’isolement des microvaisseaux cérébraux des rats euthanasiés. Il comprend la dissection du cerveau, le nettoyage des tissus et la digestion mécanique, suivie d’une centrifugation répétée pour isoler la fraction pure des microvaisseaux.

Procédé d’isolement d’unités neurovasculaires à partir du cerveau de rat

Ce manuscrit décrit les méthodes d’induction et de notation du modèle expérimental d’encéphalomyélite auto-immune (EAE), ainsi que l’évaluation de la distribution des cellules immunitaires et des niveaux de cytokines à ARNm dans les ganglions lymphatiques, la rate, le sang et la moelle épinière à l’aide de la cytométrie en flux et de la PCR quantitative, respectivement, à diverses phases de la maladie.

Induction of Experimental encéphalomyélite allergique chez la souris et l&#39;évaluation de la distribution des maladies dépendant des cellules immunitaires dans divers tissus

Efforts pour comprendre en détail le fonctionnement du microgliales ont été entravées par le manque de modèles de culture microgliales qui récapitule les propriétés des matures in vivo de cellules microgliales. Ce protocole décrit une démarche d’isolement et de la culture visant à maintenir la survie robuste des microglies rat mature très ramifié dans des conditions définies et moyen.

Isolement et Culture des microglies rongeurs pour promouvoir une dynamique ramifié morphologie dans un milieu sans sérum

Le but de ce protocole est d'isoler les micronavires de plusieurs régions du système nerveux central des vertébrés lissencephalic et gyrencephalic.

Isolement fiable des micronavires du système nerveux central dans cinq groupes de vertébrés

Nous fournissons un protocole pour l'isolement des microglies de différentes régions disséquées d'un hémisphère de cerveau de souris adulte, suivi de la préparation semi-automatisée de bibliothèque pour le séquençage profond d'ARN unicellulaire des transcriptomes pleine longueur. Cette méthode aidera à élucider l'hétérogénéité fonctionnelle des microglies dans la santé et la maladie.

Isolement des microglies spécifiques à la région de l'hémisphère cérébral d'une souris adulte pour le séquençage profond de l'ARN à une seule cellule

Ce manuscrit présente un protocole pour induire l’encéphalomyélite autoimmune expérimentale active (EAE) chez les souris. Une méthode pour l’isolement et la caractérisation des lymphocytes infiltrés dans le système nerveux central (SNC) est également présentée pour montrer comment les lymphocytes sont impliqués dans le développement de la maladie auto-immune de CNS.

Analyse cytométrique du flux de l’infiltration de lymphocytes dans le système nerveux central pendant l’encéphalomyélite autoimmune expérimentale

Une méthode d’isolement de cellules souches neurales et de cellules progénitrices d’oligodendrocytes à partir du cerveau de rats vivants est présentée ici en détail expérimental. Il permet de multiples prélèvements de ces cellules chez les mêmes animaux sans compromettre leur bien-être.

La méthode de « traite cérébrale » pour l’isolement de cellules souches neurales et de cellules progénitrices d’oligodendrocytes provenant de rats vivants

Cette recherche décrit deux techniques pour isoler les pièges extracellulaires neutrophiles abondants (TNE) de la moelle osseuse du rat. Une méthode combine un kit d’isolement des neutrophiles commercial avec une centrifugation à gradient de densité, tandis que l’autre utilise uniquement la centrifugation à gradient de densité. Les deux approches produisent des TNE fonctionnelles surpassant celles des neutrophiles du sang périphérique.

Approche unique pour isoler les neutrophiles de la moelle osseuse du rat avec une capacité comparable

À ce jour, les protocoles d’isolement simultané de tous les principaux types de cellules résidentes du système nerveux central à partir d’une même souris sont une demande non satisfaite. Le protocole montre une procédure applicable chez les souris naïves et expérimentales atteintes d’encéphalomyélite auto-immune pour étudier les réseaux cellulaires complexes au cours de la neuroinflammation et réduire simultanément le nombre de souris requis.

Isolement simultané de types de cellules résidentes du système nerveux central chez des souris adultes atteintes d’encéphalomyélite auto-immune

Apprenez à isoler des cellules mononucléées du système nerveux central de rats atteints d'EAE. Cette méthode utilise une perfusion cardiaque et un gradient Percoll pour obtenir des cellules viables sans contamination sanguine.

Isolement de cellules mononucléées du système nerveux central de rats avec EAE

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