Labyrinthe aquatique de Morris Test: Optimisation pour les souris de souche et environnement de test

L’objectif de cette procédure est d’identifier les déficits cognitifs dans un modèle murin de la maladie d’Alzheimer à l’aide d’un protocole de labyrinthe d’eau de Morris, conçu pour être utilisé avec la souche de fond 1 2 9 6 FBB. Ceci est accompli en acclimatant d’abord les souris à la tâche pour atténuer les déficits de performance induits par le stress. La deuxième étape consiste à utiliser la tâche de plate-forme visuelle dans laquelle une plate-forme est élevée d’un pouce au-dessus de la ligne de flottaison pour évaluer le fonctionnement visuel et moteur.

Ensuite, les essais de plate-forme cachée sont effectués où la plate-forme est immergée à cinq millimètres sous la surface de l’eau. La dernière étape consiste à utiliser des essais de sonde où la plate-forme est retirée pour évaluer la mémoire de référence spatiale et déterminer le type de stratégie de recherche utilisée. En fin de compte, cette procédure d’AMM dans l’eau sur mesure permet d’évaluer l’apprentissage spatial et la mémoire dans un modèle murin couramment utilisé de la maladie d’Alzheimer.

En général, les personnes qui ne connaissent pas cette méthode auront du mal à se rendre compte de la nécessité d’optimiser les procédures de test, comme le nombre d’essais d’entraînement et de sondes utilisées en fonction de la tension de fond de la lignée de souris et de l’environnement dans lequel les souris sont testées. Cette partie de la procédure acclimate les souris pour tirer l’entrée et le retrait. Tout d’abord, placez la boîte de manière à ce qu’elle soit élevée à une hauteur confortable et remplissez-la de deux litres d’eau à une température de 21 degrés Celsius et à un niveau d’environ un centimètre.

Après avoir amené les souris dans la salle d’essai, retirez un sujet de la cage, vérifiez l’identification du sujet, puis marquez la queue avec un marqueur permanent non toxique pour la distinguer des souris qui n’ont pas suivi la procédure. Placez une souris dans le bécher de transfert pendant environ cinq secondes. Ensuite, versez doucement la souris hors du bécher dans la piscine de pré-manipulation, chronométrez la souris dans la piscine pendant 20 secondes.

Une fois le temps écoulé, placez doucement une cuillère devant la souris sans l’incliner. Si nécessaire, encouragez la souris à monter sur la cuillère en glissant doucement la cuillère sous la souris tout en la soulevant lentement. Veillez à ne pas effrayer les souris avec la cuillère.

Répétez ces procédures pour chaque souris dans la cage une fois par jour pendant 10 jours. Après chaque animal, ramassez les boli fécaux et la litière de la piscine, à l’aide d’un filet servant de bécher de transfert entre les cages. Effectuez une formation visible les jours un, deux et trois avec six essais par jour et environ 10 minutes entre chaque essai.

Tout d’abord, configurez le logiciel de suivi des performances de la souris et créez les feuilles de route selon les instructions de la partie texte du protocole. Une fois le logiciel configuré, installez la pièce en accrochant d’abord des rideaux afin que tous les repères spatiaux soient masqués. Ensuite, installez la baignoire en la remplissant d’eau du robinet à 21 degrés Celsius.

Utilisez un thermomètre pour vous assurer que la température de l’eau reste à moins d’un degré de cette température. Tout au long des tests. Placez la plate-forme, qui a un drapeau monté qui atteint la hauteur de 13 centimètres et mesure 4,5 par 4,5 centimètres, avec un caractère en forme de S audacieux en relief dessus, au premier emplacement prédéterminé de la baignoire de sorte qu’il s’élève à environ un pouce au-dessus de la surface de l’eau.

Prenez maintenant la première souris de la cage. Vérifiez l’identification du sujet, marquez la queue à l’aide d’un marqueur permanent de la bonne couleur et placez-la dans un bécher de transfert. Placez délicatement la souris dans la baignoire.

Démarrez le chronomètre et assurez-vous que le logiciel de suivi suit l’animal. Attendez jusqu’à deux minutes pour localiser la plate-forme. Une fois que la souris a localisé la plate-forme, laissez la souris passer 20 secondes sur la plate-forme.

Si l’animal ne trouve pas la plate-forme dans la période de deux minutes, ramassez la souris et placez-la sur la plate-forme pendant 20 secondes. Après 20 secondes sur la plate-forme, retirez la souris de la plate-forme comme cela a été fait lors de l’entraînement d’acclimatation, et placez-la dans une cage chauffée recouverte d’essuie-tout et chauffée à environ 31 degrés Celsius à l’aide d’un coussin chauffant et d’une lampe chauffante pendant 30 secondes. Transférez ensuite la souris dans la cage de maintien avec seulement un coussin chauffant, mais pas de lampe chauffante pour récupérer entre les essais.

Après avoir nettoyé la cuve des débris avec un filet, répétez ces étapes pour chaque souris du groupe. Lorsque chaque souris est terminée, le premier essai, déplace la plate-forme vers le deuxième emplacement prédéterminé. Effectuez une formation sur les plates-formes cachées du quatrième au dixième jour après avoir suspendu les rideaux.

Comme précédemment, placez des queues stratégiquement sur les rideaux. Assurez-vous que les queues sont grandes et contiennent des couleurs contrastées pour une meilleure visibilité, et qu’elles sont réglées à la distance et à la hauteur où elles sont visibles par les souris de l’intérieur de la baignoire. Configurez le logiciel selon les instructions de la partie écrite du protocole.

Ensuite, installez la baignoire en la remplissant d’abord d’eau de sorte que la plate-forme soit à environ cinq millimètres sous la surface de l’eau. Placez la plate-forme à l’endroit prédéterminé. L’emplacement de la plate-forme restera le même pour être testée pendant presque tous les jours et les essais.

It.It est essentiel de varier le lieu de départ afin que les animaux ne développent pas une stratégie motrice non spatiale et non hippocampique. Pour résoudre le labyrinthe, utilisez de la peinture blanche tempérée non toxique pour rendre l’eau opaque. Faites-le pour vous assurer que le haut de la plate-forme est invisible du niveau des yeux de l’animal pendant la nage.

Après avoir identifié et marqué les souris avant, versez doucement la souris dans le labyrinthe, de sorte que l’ORL soit face au mur. Chaque souris sera placée au même endroit de départ pour une version d’essai unique. Lors du relâchement initial de la souris, démarrez la minuterie et placez-vous dans une zone où le testeur n’est pas facilement visible par les souris.

Une fois que l’animal atteint la plate-forme, laissez-le rester sur la plate-forme pendant 15 secondes pour orienter son emplacement spatial dans la pièce. Si la souris ne localise pas la plate-forme dans les 60 secondes, ramassez-la doucement et placez-la sur la plate-forme. Après 15 secondes sur la plate-forme, retirez la souris du labyrinthe et remettez-la dans la cage chauffée.

Après avoir nettoyé le labyrinthe de débris, répétez ces procédures pour les souris restantes du groupe. Ainsi, pour les jours de test quatre à neuf, effectuez quatre essais de formation à la plate-forme cachée par jour, avec environ 20 minutes entre chaque essai. Effectuez des essais de sonde avant la formation de la plate-forme les jours six, sept et huit, et l’essai final de la sonde.

Le jour 10, effectuez les essais de sonde de la même manière que la formation sur les plates-formes cachées, à l’exception qu’aucune plate-forme ne se trouve dans le labyrinthe. Relâchez une souris à partir d’un point de relâchement prédéterminé et laissez-la nager dans le labyrinthe pendant 60 secondes Après l’essai de la sonde le jour 10, aucun essai supplémentaire n’est effectué pendant les essais de la sonde. Utilisez le logiciel de suivi des animaux pour suivre la longueur du chemin de l’animal, le pourcentage de temps que l’animal passe dans chaque quadrant du labyrinthe et le nombre de fois qu’un animal nage au-dessus de la zone précédemment plate-forme.

Ouvrez l’onglet liste expérimentale et obtenez les mesures à partir de l’onglet analyse des données et de l’onglet labyrinthe d’eau. Exportez directement vers une feuille de calcul Excel. Analysez ensuite les données selon les instructions de la partie écrite du protocole.

41 souris TP 3 0 1 L contenant le gène humain P 3 0 1 LTL et 46 témoins ont été testées à l’aide de ce protocole à l’âge d’environ 6,5 mois. Cela représente trois mois d’expression de Tau P 3 0 1 L dans les transgéniques. Chaque groupe contenait un nombre à peu près égal de mâles et de femelles sur la longueur du chemin.

L’entraînement de la plate-forme invisible ne différait pas entre les témoins et les souris TP 3 0 1 L. Cette absence de différence indique que le contrôle et la protéine tau P 3 0 1 LM ne diffèrent pas en termes de capacité visuelle ou locomotrice, et que les déficits de performance lors des essais cachés peuvent donc être attribués à des troubles de la mémoire. Cependant, lors de l’entraînement de la plate-forme cachée, le TP 3 0 1 LM a démontré des longueurs de trajectoire nettement plus longues sur tous les blocs d’entraînement.

Enfin, les contrôles se sont améliorés au cours des quatre essais de sonde. Alors que les souris Tau P 3 0 1 L n’étaient pas témoins, les souris étaient mieux en mesure d’utiliser une stratégie spatiale pour résoudre la tâche et avaient mieux appris à localiser la plate-forme dans la zone cible. Lors de l’adaptation de cette procédure pour une utilisation avec d’autres lignées de souris, il est important d’évaluer le taux d’apprentissage des contrôles, d’identifier le nombre d’essais d’entraînement à la frappe nécessaires et de déterminer quand le premier essai de sonde doit être inséré.