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DOI: 10.3791/52722-v
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Ce protocole décrit en détail une méthode pour isoler des vésicules extracellulaires (VE), de petites particules libérées par des cellules membranaires, d'aussi peu que 10 échantillons de sérum ul. Cette approche évite la nécessité d'ultracentrifugation, ne nécessite que quelques minutes de temps de dosage, et permet l'isolement des véhicules électriques à partir d'échantillons de volumes limités.
L’objectif global de cette procédure est d’isoler les vésicules extracellulaires à l’aide d’une plateforme sur papier. Pour ce faire, il suffit d’abord de plastifier avec deux feuilles de polystyrène avec de la cellulose circulaire, les découpes de papier alignées sur un ensemble de trous traversants enregistrés. La deuxième étape consiste à conjuguer chimiquement des molécules qui lieraient les vésicules extracellulaires à la zone de test en papier.
Ensuite, l’échantillon biologique peut être pipeté directement sur la zone de test du papier, et les vésicules extracellulaires sont isolées après l’étape de rinçage. La dernière étape consiste à caractériser les vésicules extracellulaires capturées à l’aide de la microscopie électronique, de l’analyse Eliza ou de l’analyse transcriptomique. En fin de compte, des sous-ensembles de vésicules extracellulaires provenant d’échantillons de sérum aussi petits que 10 microlitres peuvent être purifiés et concentrés.
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