Name: Léchantillonnage de sang de la veine caudale latérale de la Rat (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 11 s
Description: Apprenez le prélèvement sanguin par la veine caudale latérale chez le rat pour minimiser le stress et permettre des échantillonnages répétés en physiologie et bien-être animal.

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Nous remercions Virginia Doherty et Junmei Yao pour l&#39;assistance technique. Cette recherche a été financée par NIMH (R01 MH084966), et le Bureau de recherche de l&#39;armée américaine et l&#39;Agence Defense Advanced Research Projects (accorder W911NF-10-1-0059) à KAG.

Toutes les expériences ont été effectuées en utilisant des rats mâles adultes Long-Evans. Toutes les procédures étaient en conformité avec les US National Institutes of Health (NIH) Guide pour le soin et l&#39;utilisation des animaux de laboratoire et ont été approuvés par le soin et l&#39;utilisation des animaux Commission institutionnelle de l&#39;Institut de Technologie du Massachusetts et de la protection des animaux et l&#39;utilisation Bureau d&#39;examen des l&#39;USAMRMC. 1. Préparation <ol><li> Heparinise le cathéter et la seringue de l&#39;aiguille en plaçant un blindage contenant de l&#39;héparine dans 500 ul de tube (USP 1000 unités / ml) et ensuite aspirer et expulser la solution d&#39;héparine à travers l&#39;aiguille. <ol><li> Fixez un cathéter papillon à la seringue. Gardez le bouclier sur l&#39;aiguille du cathéter pour protéger la pointe acérée de dommages. </li><li> Prélever un volume de l&#39;héparine qui est légèrement supérieur au volume de sang qui seront recueillies. Détachez la seringue et remplissez-le avec de l&#39;air. </li><li> Re-fixer la seringue au cathéter et utiliser leair pour expulser l&#39;excès de solution d&#39;héparine; assurer que des traces restent dans le tube, aiguille et la seringue. </li><li> Placez le cathéter stérile, avec la seringue encore attachée, sur une surface stérile. </li></ol></li><li> Sécuriser rapidement le rat dans un chiffon propre veiller à ce que antérieurs et pattes arrière sont dans une position confortable et la respiration est sans restriction. <ol><li> Fixez l&#39;enveloppe avec crochet et la bande de boucle; veiller à ce que les organes génitaux externes ne sont pas étranglés. </li><li> Avoir un assistant doucement et retenir fermement le rat (abdomen et la base de la queue) sur une surface de travail solide avec la queue pendait au bord du comptoir. </li></ol></li></ol> 2. L&#39;échantillonnage de sang <ol><li> Plonger la queue dans l&#39;eau C 42 ° pour 40-50 sec à dilater les vaisseaux sanguins et sécher la queue avec une serviette en papier. Localisez la veine de la queue d&#39;être saigné (tourner tout le corps avec la queue pour empêcher la torsion de la queue). Remarque: le réchauffement suffisant de la queue est critique pour la collectio rapiden d&#39;un échantillon de sang. Si le système vasculaire est resserré, le positionnement correct du cathéter est difficile, et la circulation sanguine est nettement réduite. Un coussin chauffant peut être utilisé comme une alternative à l&#39;immersion dans l&#39;eau. </li><li> Identifier le point d&#39;échantillonnage. Remarque: L&#39;artère se trouve le long de l&#39;aspect mi-dorsale de la queue; ne pas utiliser ce pour l&#39;échantillonnage. <ol><li> Cible soit les veines de la queue de gauche et de droite qui se trouvent latéralement à l&#39;artère. La pigmentation de la queue, qui varie selon la souche et augmente avec l&#39;âge, peut occulter une partie de la vascularisation. Cible une partie de la veine dans la partie inférieure de la queue. </li><li> Essuyez la zone cible avec une solution antiseptique de chlorhexidine 2%. </li></ol></li><li> Créer une pression négative dans la seringue et le cathéter en retirant le piston de zéro à environ 50 ul. </li><li> Tenez la queue avec douceur et fermeté près de la pointe de garder la queue droite long de la collecte de l&#39;échantillon. Assurez-vous que le flux sanguin est pas fermé par une poignée trop serré.</li><li> Insérez lentement le cathéter dans la veine à un angle faible d&#39;environ 5 cm de la pointe de la queue. Lorsque la veine est pénétré, le sang va couler dans le cathéter. Retirer lentement le piston de la seringue pour recueillir le volume souhaité à un rythme soutenu (~ 20 pi par seconde). <ol><li> Consultez le personnel vétérinaire pour des informations sur le volume maximum de sang qui peuvent être recueillis. La quantité maximale de sang qui doit être recueillie dépend de l&#39;état de santé et du poids du rat. Ne pas retirer plus de 15% du volume sanguin total dans une période de 14 jours. Remarque: Le sang est beaucoup plus difficile de recueillir des animaux qui ont été vivement soulignée dans les minutes avant le prélèvement des échantillons parce que les hormones de stress contractent le système vasculaire. Par exemple, le déménagement de la cage du rat à une nouvelle chambre, en prenant plusieurs minutes pour conclure l&#39;animal, ou l&#39;insertion répétée du cathéter dans une veine sont tous susceptibles de déclencher une réaction de stress aigu. </li><li> Faciliter blood écoulement par «traite» la veine. Exécuter un doigt le long de la longueur de la veine, de la base vers l&#39;extrémité de la queue, mais restent plus de 2 cm de la pointe de l&#39;aiguille insérée ou le cathéter peut se détacher de la veine. </li><li> Si le sang ne peut pas être collecté avec succès à partir du site initial de pénétration du cathéter, ré-insérer l&#39;aiguille plus haut dans la veine. Si le sang a été prélevé sur le site initial, re-pressuriser l&#39;aiguille en débranchant puis en rebranchant le cathéter et la seringue avant la ré-insertion dans la veine. En général, éviter les pénétrations supplémentaires. </li><li> Comme pénétrations multiples peuvent provoquer l&#39;effondrement veine de la queue, dans lequel l&#39;approvisionnement en sang à la queue est coupée et le tissu de queue molle devient nécrosée, euthanasier le rat si il ya veine de la queue effondrement. </li></ol></li><li> Lorsque le volume d&#39;échantillon suffisant est collecté, relâcher la pression dans la seringue en débranchant et en rebranchant le cathéter. Aspirer légèrement à l&#39;aide du piston de la seringue (~ 50 &amp; #181; l), et de retirer l&#39;aiguille de la veine. Remarque: Si l&#39;aiguille est retirée sans relâcher d&#39;abord la pression dans la seringue, le sang va couler de l&#39;aiguille. </li><li> Appliquer brièvement une pression sur le site d&#39;insertion pour arrêter le saignement, et essuyez la zone avec une solution antiseptique. Retour le rat à sa cage. </li></ol> 3. traitement de l&#39;échantillon de sang <ol><li> Aspirer l&#39;air pour assurer le sang ne reste à l&#39;intérieur de l&#39;aiguille du cathéter, et utiliser des ciseaux pour couper le tube du cathéter juste au-dessus de l&#39;aiguille. Expulser le sang dans un tube de 1,5 ml à centrifuger stérile. Remarque: Si le sang est poussé à travers l&#39;aiguille, la force de cisaillement peut entraîner des globules rouges à la rupture qui peut interférer avec de nombreux essais en aval. Retirez l&#39;aiguille pour éviter l&#39;hémolyse. <ol><li> Pour récupérer le plasma sanguin, les tubes contenant de l&#39;EDTA utilisation comme anticoagulant (ici, en utilisant 10 ul d&#39;EDTA 0,1 M de 200 à 400 pi de sang; assurer la concentration de l&#39;EDTA utilisé ne pas interférer avecvec le dosage en aval) et placer sur la glace. <ol><li> Spin échantillons de sang total à 2100 x g dans une centrifugeuse réfrigérée (4 ° C) pendant 10 min à moins de 10 min de la collecte. Éluer le plasma, ce qui évite de perturber les couches de globules rouges et blancs. </li></ol></li><li> Pour collecter le sérum sanguin, placer les échantillons (sans anticoagulant) à la température ambiante pendant 30 min pour permettre la coagulation. Faites tourner les tubes de prélèvement dans une centrifugeuse réfrigérée (4 ° C) à 2000 x g. Le sérum peut ensuite être élue. </li></ol></li><li> Utiliser des échantillons immédiatement ou conserver à -80 ° C pendant jusqu&#39;à un an. </li></ol>

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</ol>

Les auteurs ont rien à révéler.

Ici, nous décrivons un procédé simple et rapide pour l&#39;obtention d&#39;un échantillon de sang d&#39;un rat qui offre des avantages significatifs par rapport à d&#39;autres techniques couramment utilisées. En premier lieu, il ne nécessite pas d&#39;anesthésie, en contraste avec l&#39;échantillonnage à partir de la veine jugulaire ou sinus rétro-orbital. Lorsque les échantillons de sang sont collectés entourant les procédures de comportement, l&#39;administration d&#39;anesthésiques est indésirable car il peut interférer avec l&#39;apprentissage et de la mémoire 4,5. Deuxièmement, il offre la possibilité de collecter des volumes de sang plus importantes que d&#39;autres techniques de ponction veineuse, comme la collecte des veines saphènes de pédale ou dorsales. En utilisant la technique décrite ici, jusqu&#39;à 1,5 ml de sang peut être recueilli à partir d&#39;un rat à un seul point du temps, un volume qui permet facilement de multiples dosages pour être exécutés en parallèle. Enfin, cette procédure minimise le risque d&#39;endommagement du tissu par rapport à bout de la queue amputation ou de saignement rétro-orbital. L&#39;utilisation de cette procédure facilite le respect de l&#39;animal WLoi Bien-être social et le Guide pour le soin et l&#39;utilisation des animaux de laboratoire, ce qui nécessite de minimiser la douleur et la détresse qui résultent de procédures de laboratoire effectués sur les animaux. Il est recommandé que les enquêteurs nouvelles à cette méthode en pratique les techniques de contention et la queue saignement afin de minimiser le temps que les animaux expérimentaux sont retenus. Le sang prélevé en moins de 3 min à partir du début de la retenue fournit des résultats optimaux. Le protocole décrit ici peut être utilisé pour l&#39;échantillonnage de 1 à 4 fois par semaine, mais pas plus de deux fois par jour. Si les collections sanguines répétées peuvent être réalisées, différents sites d&#39;échantillonnage en mouvement vers le haut à partir de la base de la queue doivent être utilisés, et les veines de la queue gauche et droite doivent être alternés comme sites d&#39;échantillonnage. Le volume total de sang de rongeurs est 6-7% de leur poids corporel, et pas plus de 15% du volume total de sang doit être collecté sur une période de deux semaines. Sérumou plasma comprend environ 40-60% du volume d&#39;échantillon prélevé. Prise de sang à travers les veines de queue latérales peut également être réalisée chez la souris, comme décrit ici, avec quelques modifications mineures. Tout d&#39;abord, seul petit calibre (27 G) Les cathéters peuvent être utilisés. Deuxièmement, il est recommandé d&#39;utiliser un dispositif de retenue du tube, plutôt que d&#39;une enveloppe, pour immobiliser les souris. Le volume de sang qui peut être obtenu à partir de la souris à l&#39;aide de la ponction veineuse faisceau vasculaire sous-maxillaire (200-500 ul) est plus grande que ce qui peut être collecté en toute sécurité à partir de la veine de la queue (200 ul maximum). Parce que l&#39;échantillonnage du sang du faisceau vasculaire sous-maxillaire nécessite confinement minimal et peut produire plus de sang, ceci est la voie préférée pour le prélèvement chez la souris. La rapidité avec laquelle cette procédure peut être effectuée, avec sa nature peu invasive, minimise également la perturbation potentielle de mesures à base de sang par la réponse de stress aigu 6. Leréponse de stress aigu peut modifier les taux circulants de nombreuses molécules, y compris les interleukines et d&#39;autres facteurs immunitaires actif 7, les hormones de l&#39;axe hypothalamo-hypophyso-surrénalien 8, hormones dans le système nerveux sympathique 9, la ghréline 10, les opioïdes endogènes 11, la dopamine, et sérotonine 12. Si repos circulant mesures de ces molécules ou d&#39;autres réglementés par ces molécules sont souhaitées, il est important de minimiser la réponse au stress, qui est déclenché dans aussi peu que d&#39;une minute du début de l&#39;exposition de stress. réponses de stress non seulement modifient la composition du sang, mais représentent également un obstacle technique pour l&#39;échantillonnage de sang à cause de la constriction des vaisseaux via augmenté dur du système nerveux sympathique. Il devient de plus en plus difficile d&#39;obtenir le flux sanguin régulier d&#39;un rat qui est le montage d&#39;un état de stress aigu. Par conséquent, la détresse de l&#39;animal doit être minimeized afin d&#39;obtenir rapidement des échantillons qui reflètent l&#39;état physiologique d&#39;intérêt.

Biomarqueurs obtenus à partir de sang fournissent diagnostic utile, prédictive et stratification des mesures dans de nombreux contextes cliniques, y compris les maladies cardiovasculaires 1, les sciences de cancer 2, et la maladie psychiatrique 3. Ils peuvent également être utilisés dans la science fondamentale pour évaluer «l&#39;état» de l&#39;organisme, y compris le degré de la faim, de l&#39;inflammation, ou le stress présent. De telles mesures peuvent être influencées par les variables qui peuvent ou peuvent ne pas être critique pour la question de l&#39;intérêt, y compris le moment de la journée que l&#39;échantillon est obtenu et le sexe des sujets. Il peut également être influencée par la contrainte induite pendant les procédures d&#39;échantillonnage de sang lui-même. Les hormones du stress et de la perception de la douleur peuvent modifier rapidement la composition du sang. Les rongeurs sont des animaux de laboratoire le plus couramment utilisé, et plusieurs méthodes ont été développées pour la collecte de sang. La méthode idéale de prélèvement de sang doit avoir un minimum de Physiological impact sur l&#39;animal, ne nécessitent pas d&#39;anesthésie, permet l&#39;échantillonnage rapide et répétée, et de fournir le volume de sang suffisante pour de nombreuses applications en aval. Techniques populaires pour la collecte de sang tels que le cathétérisme de la veine jugulaire ou bout de la queue amputation ne répondent pas à ces critères. Le but de ce protocole est de décrire une technique de prélèvement de sang destiné à être utilisé chez les rats qui est minimalement stressant, ne nécessite pas d&#39;anesthésie, permet de multiples collectes de sang au sein d&#39;un seul sujet et fournit un volume d&#39;échantillon relativement grand de telle sorte que de multiples dosages peuvent être réalisés sur un seul échantillon. L&#39;objectif de cette méthode est d&#39;obtenir des échantillons de sang qui sont peu influencés par la réponse de stress aigu.

<table><tbody><tr><td>Héparine sodique (1 000 unités USP/ml)</td><td>Patternson Veterinary Supply</td><td>25021040010</td><td></td></tr><tr><td>Acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA)</td><td>JT Taylor</td><td>JT2020-01</td><td></td></tr><tr><td>Dermachlor rince-chlorhexadine</td><td>Butler Schein</td><td>6356</td><td>Solution antiseptique topique, gluconate de chlorhexidine à 2 %</td></tr><tr><td>SURFLO Winged Infusion Sets, Terumo, cathéters papillon</td><td>VWR Scientific</td><td></td><td></td>TESV25BLK</tr><tr><td>BD Tuberculin 1 cc seringues</td><td>VWR Scientific</td><td>BD309659</td><td></td></tr><tr><td>1,5 ml microtubes à centrifuger</td><td>VWR Scientific</td><td>89202-682</td><td></td></tr><tr><td>500 &mu ; l Tubes de microcentrifugation</td><td>VWR Scientific</td><td>21150-330</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux, acier inoxydable, 5"</td><td>VWR Scientific</td><td>82027-586</td><td></td></tr><tr><td>500 ml Bécher en plastique</td><td>VWR Scientific</td><td>414004-149</td><td></td></tr><tr><td>Emballage en tissu propre</td><td>Butler Schein</td><td>2993</td><td></td></tr><tr><td>Bande velcro, largeur 0,75</td><td>Monoprice</td><td>B004AF9II6</td><td>Bande auto-agrippante</td></tr><tr><td>Minuterie</td><td>VWR Scientific</td><td>62344-641</td><td></td></tr></tbody></table>

l&#39;échantillonnage de sang de la veine caudale latérale de la rat

Sampling Blood from the Lateral Tail Vein of the Rat

Des échantillons de sang sont couramment obtenus dans de nombreux contextes expérimentaux pour mesurer des cibles d’intérêt, notamment les hormones, les facteurs immunitaires, les facteurs de croissance, les protéines et le glucose, mais la composition du sang est régulée dynamiquement et facilement perturbée. Un facteur qui peut modifier la composition du sang est la réponse au stress déclenchée par la procédure de prélèvement, ce qui peut contribuer à la variabilité des mesures d’intérêt. Nous décrivons ici une procédure de prélèvement sanguin dans la veine latérale de la queue chez le rat. Cette procédure offre des avantages significatifs par rapport à d’autres techniques plus couramment utilisées. Il permet un prélèvement rapide avec un minimum de douleur ou d’invasivité, sans anesthésie ni analgésie. De plus, il peut être utilisé pour obtenir de grands volumes d’échantillons (plus de 1 ml chez certains rats), et il peut être utilisé à plusieurs reprises pendant les jours expérimentaux. En minimisant la réponse de stress et la douleur résultant de l’échantillonnage sanguin, les mesures peuvent refléter plus précisément l’état basal réel de l’animal, avec une influence minimale de la procédure d’échantillonnage elle-même.

Le plasma sanguin ont été recueillies à partir de la veine caudale latérale comme décrit dans le protocole donne un échantillon de plasma qui est translucide de couleur jaune pâle et d&#39;aspect. Comme le montre la Figure 1, l&#39;hémolyse dans un échantillon donne une teinte rouge au plasma. La réponse de stress aigu peut modifier rapidement la composition du sang. Par exemple, circulant concentration de corticostérone peut nettement augmenter à moins de 10 min de l&#39;exposition au facteur de stress, comme représenté sur la Figure 2. Les faibles niveaux de base de la corticostérone obtenus avec ce procédé antérieur de facteur de stress exposition révèlent que la procédure d&#39;échantillonnage lui-même constitue pas une source importante de stress. <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/52766/52766fig1.jpg" /> Figure 1:. Apparence échantillon (A) Un échantillon hémolysé est affiché. Après centrifugation, le plasma ou le sérum couche (indiquée par la surface ar noirrangée) apparaît teintée de rose ou rouge. Teintes sombres indiquent des niveaux plus élevés d&#39;hémolyse. (B) Après centrifugation, un échantillon correctement collecté aura un aspect jaunâtre clair pour la bande supérieure (de surface indiquée par la flèche noire), qui correspond au plasma non-hémolyse ou de sérum. Lors du retrait de cette couche, il est important de ne pas perturber le sang total sous-jacent, soit en poussant la pointe de la pipette dans l&#39;ensemble de la couche de sang ou en aspirant une partie du sang entier dans la pointe. Toute plasma ou le sérum contaminé avec du sang total doivent être jetés. <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/52766/52766fig2.jpg" /> Figure 2: la corticostérone plasmatique est rapidement élevée suite à une expérience stressante Du sang a été obtenu à partir de la veine caudale latérale de rats femelles adultes Long-Evans avant et 10 min après l&#39;exposition à quatre tons (10 sec, 2 kHz, 85 dB) co-terminaison. avec footshocks (1 sec, 350 uA). corticostérone de plasma sanguin au départ (290,4 ± 138,8 pg / ml) était significativement inférieurs aux niveaux observés 10 min après la présentation de la contrainte de choc électrique (2204,8 ± 454,5 pg / ml, p = 0,02, n = 4), tel que déterminé par t apparié -test. *, P &lt;0,05

Les échantillons de sang sont utiles pour évaluer les biomarqueurs des états physiologiques ou de la maladie in vivo. Nous décrivons ici la méthodologie d’échantillonnage du sang de la veine latérale de la queue chez le rat. Cette méthode permet d’obtenir des échantillons rapides avec un minimum de douleur et d’invasivité.

L&#39;échantillonnage de sang de la veine caudale latérale de la Rat

Blood samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure targets of interest, including hormones, immune factors, growth factors, ...

L'objectif général de cette procédure est de réduire au minimum le stress lié au prélèvement sanguin chez le rat par échantillonnage de la veine latérale de la queue. Cela est réalisé en premier lieu en immobilisant le rat et en réchauffant la queue. Dans une deuxième étape, un cathéter papillon est inséré dans l'une des veines latérales de la queue dilatées, puis le sang est prélevé lors de la dernière étape.Le cathéter est retiré et l'écoulement sanguin provenant du site de ponction est arrêté. Finalement, le prélèvement sanguin à partir de la veine latérale de la queue provoque un stress minimal chez le rat pendant la collecte du sang, réduisant ainsi l'influence de la réponse au stress aigu sur la composition du sang. Les principaux avantages de cette technique par rapport aux méthodes existantes, comme l'amputation de l'extrémité de la queue, concernant le prélèvement à partir de la veine latérale de la queue, sont qu'elle est beaucoup moins traumatisante pour l'animal et qu'elle permet des prélèvements répétés chez le même sujet.La procédure sera démontrée par deux membres de mon laboratoire, Graham Lee, postdoctorant, et Elia Harmatz, technicien. Pour commencer, fixez un cathéter papillon à la seringue, en gardant le protecteur de seringue sur l'aiguille afin de protéger la pointe. Ensuite, aspirez un volume d'héparine légèrement supérieur au volume de sang qui sera prélevé. Détachez la seringue et remplissez-la d'air.Reconnectez la seringue au cathéter et expulsez tout sauf des traces de solution d'héparine du tube, de l'aiguille et de la seringue. Ensuite, placez le cathéter et la seringue sur une surface stérile. Maintenant, immobilisez rapidement le rat dans un tissu propre, en veillant à ce que les pattes avant et arrière soient dans une position confortable et que la respiration ne soit pas entravée.Fixez l'emballage avec du ruban velcro. Ensuite, sur une surface de travail stable, demandez à un assistant de maintenir doucement mais fermement le rat par l'abdomen et la base de la queue, en laissant la queue pendre au bord du plan de travail pour prélever l'échantillon sanguin. Puis, dilatez les vaisseaux sanguins de la queue en immergeant celle-ci dans de l'eau à 42 degrés Celsius pendant 40 à 50 secondes.Ensuite, séchez la queue avec une serviette en papier et faites pivoter l'ensemble du corps en tenant la queue pour localiser soit la veine caudale droite soit la veine caudale gauche, située latéralement par rapport à l'artère, afin de procéder au prélèvement sanguin. Ciblez un segment de la veine situé dans la partie inférieure de la queue et nettoyez la zone avec une solution antiseptique au chlorhexidine à 2 %. Ensuite, tirez doucement le piston de la seringue de zéro jusqu'à environ 50 microlitres pour créer une pression négative dans la seringue, puis saisissez délicatement mais fermement la queue près de son extrémité afin de la maintenir droite pendant le prélèvement de l'échantillon.Insérez maintenant lentement le cathéter dans la veine selon un angle faible, à environ cinq centimètres de l'extrémité de la queue. Lorsque la veine est pénétrée, le sang s'écoule dans le cathéter ; retirez doucement le piston de la seringue pour recueillir le volume souhaité à un débit constant d'environ 20 microlitres par seconde. Pour faciliter l'écoulement du sang, passez un doigt le long de la veine, depuis la base vers l'extrémité de la queue, tout en restant à plus de deux centimètres de l'extrémité de l'aiguille insérée, afin de favoriser l'écoulement du sang.Si le sang ne peut pas être correctement prélevé au niveau du site initial de pénétration du cathéter, réinsérez l'aiguille plus en amont dans la veine. Une fois le volume d'échantillon adéquat recueilli, déconnectez puis reconnectez le cathéter afin de relâcher la pression dans la seringue. Retirez ensuite l'aiguille de la veine et appliquez brièvement une pression sur le site d'insertion pour arrêter l'hémorragie, une fois que l'hémorragie a cessé.Essuyez la zone avec une solution antiseptique et remettez l'animal dans sa cage d'origine. Pour traiter l'échantillon de sang, aspirez l'air afin de s'assurer qu'aucun sang ne reste à l'intérieur de l'aiguille du cathéter, puis utilisez des ciseaux pour couper le tube du cathéter juste au-dessus de l'aiguille. Retirez l'aiguille, puis recueillez le plasma sanguin et expulsez le sang dans des tubes de microcentrifugation contenant de l'EDTA.En tant qu'anticoagulant. Secouer doucement le tube pour mélanger l'anticoagulant avec le sang, puis placer les échantillons sur de la glace. Dans les 10 minutes suivant le prélèvement, centrifuger le sang total et élué le plasma, en prenant soin de ne pas perturber les couches de globules rouges et de globules blancs afin de recueillir le sérum sanguin.Placer le sang dans des tubes de microcentrifugeuse sans anticoagulant à température ambiante pendant un maximum de 30 minutes. Ensuite, une fois que le sang a coagulé, centrifuger les tubes de prélèvement dans une centrifugeuse réfrigérée et éluer le sérum. Les deux types d'échantillons peuvent alors être utilisés immédiatement ou stockés à moins 80 degrés Celsius pendant un an maximum.Le plasma sanguin prélevé de la veine latérale de la queue, comme illustré, donne un échantillon de plasma translucide et de couleur jaune pâle. Si une hémolyse s'est produite, le plasma présentera une teinte rougeâtre. Une réponse aiguë au stress peut modifier rapidement la composition d'un échantillon sanguin.Par exemple, la concentration circulante de corticostérone augmente nettement dans les 10 minutes suivant l'exposition à un facteur de stress, comme dans cette expérience représentative. Cependant, un élément important est que le faible niveau basal de corticostérone obtenu par cette méthode avant l'exposition au facteur de stress révèle que la procédure d'échantillonnage elle-même n'est pas une source importante de stress. Nous vous suggérons de vous entraîner à cette procédure sur des animaux anesthésiés jusqu'à ce que vous maîtrisiez l'insertion de l'aiguille et la collecte de sang.Une fois maîtrisée, la technique peut ensuite être réalisée en cinq minutes si elle est effectuée correctement. Lors de l'exécution de cette procédure, il est important de se rappeler de minimiser toutes les sources de stress potentielles, telles que le bruit ambiant, et de mener la procédure aussi rapidement que possible.

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