Name: Modèle murin de rejet vasculaire allo-induite et Transplant artériosclérose (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 5 s
Description: Apprenez la greffe aortique interpositionnelle chez la souris pour étudier le rejet vasculaire et l'artériosclérose de greffe. Cette méthode permet d'analyser l'épaississement intimal et le rétrécissement luminal par immunohistochimie.

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Ce travail a été soutenu par des subventions des Instituts de recherche en santé et Heart and Stroke Foundation of BC &amp; Yukon (JCC) canadiennes.

<ol><li>Billingham, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graft+coronary+disease%3A+the+lesions+and+the+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Graft coronary disease: the lesions and the patients.</a> Transplant Proc. 21, 3665-3666 (1989).</li>
<li>Foegh, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+rejection--graft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Chronic rejection--graft arteriosclerosis.</a> Transplant Proc. 22, 119-122 (1990).</li>
<li>Libby, P., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Chronic rejection.</a> Immunity. 14, 387-397 (2001).</li>
<li>Tellides, G., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+axis+in+graft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+research%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma axis in graft arteriosclerosis.</a> Circulation research. 100, 622-632 (2007).</li>
<li>Johnson, D. E., Gao, S. Z., Schroeder, J. S., DeCampli, W. M., Billingham, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+spectrum+of+coronary+artery+pathologic+findings+in+human+cardiac+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+heart+transplantation%22%5BJournal%5D)">The spectrum of coronary artery pathologic findings in human cardiac allografts.</a> The Journal of heart transplantation. 8, 349-359 (1989).</li>
<li>Gao, S. Z., Alderman, E. L., Schroeder, J. S., Silverman, J. F., Hunt, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+coronary+vascular+disease+in+the+heart+transplant+patient%3A+coronary+arteriographic+findings%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Accelerated coronary vascular disease in the heart transplant patient: coronary arteriographic findings.</a> Journal of the American College of Cardiology. 12, 334-340 (1988).</li>
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<li>Choy, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granzymes+and+perforin+in+solid+organ+transplant+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Granzymes and perforin in solid organ transplant rejection.</a> Cell Death Differ. 17, 567-576 (2010).</li>
<li>Johnson, P., Carpenter, M., Hirsch, G., Lee, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recipient+cells+form+the+intimal+proliferative+lesion+in+the+rat+aortic+model+of+allograft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Recipient cells form the intimal proliferative lesion in the rat aortic model of allograft arteriosclerosis.</a> Am J Transplant. 2, 207-214 (2002).</li>
<li>Minami, E., Laflamme, M. A., Saffitz, J. E., Murry, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracardiac+progenitor+cells+repopulate+most+major+cell+types+in+the+transplanted+human+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Extracardiac progenitor cells repopulate most major cell types in the transplanted human heart.</a> Circulation. 112, 2951-2958 (2005).</li>
<li>Yu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AIP1+prevents+graft+arteriosclerosis+by+inhibiting+interferon-gamma-dependent+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">AIP1 prevents graft arteriosclerosis by inhibiting interferon-gamma-dependent smooth muscle cell proliferation and intimal expansion.</a> Circ Res. 109, 418-427 (2011).</li>
<li>Miller, C., DeWitt, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+humoral+responses+to+major+and+minor+histocompatibility+antigens%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Cellular and humoral responses to major and minor histocompatibility antigens.</a> Transplant Proc. 5, 303-305 (1973).</li>
<li>Tsutsui, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lumen+loss+in+transplant+coronary+artery+disease+is+a+biphasic+process+involving+early+intimal+thickening+and+late+constrictive+remodeling%3A+results+from+a+5-year+serial+intravascular+ultrasound+study%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Lumen loss in transplant coronary artery disease is a biphasic process involving early intimal thickening and late constrictive remodeling: results from a 5-year serial intravascular ultrasound study.</a> Circulation. 104, 653-657 (2001).</li>
<li>Rossum, A., Enns, W., Shi, P., MacEwan, G. E., Choy, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bim+regulates+allogeneic+immune+responses+and+transplant+arteriosclerosis+through+effects+on+T+cell+activation+and+death%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Bim regulates allogeneic immune responses and transplant arteriosclerosis through effects on T cell activation and death.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 34, 1290-1297 (2014).</li>
<li>Ho, M. K., Springer, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+distribution%2C+structural+characterization%2C+and+biosynthesis+of+Mac-3%2C+a+macrophage+surface+glycoprotein+exhibiting+molecular+weight+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Tissue distribution, structural characterization, and biosynthesis of Mac-3, a macrophage surface glycoprotein exhibiting molecular weight heterogeneity.</a> J Biol Chem. 258, 636-642 (1983).</li>
<li>Inoue, T., Plieth, D., Venkov, C. D., Xu, C., Neilson, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibodies+against+macrophages+that+overlap+in+specificity+with+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+international%22%5BJournal%5D)">Antibodies against macrophages that overlap in specificity with fibroblasts.</a> Kidney international. 67, 2488-2493 (2005).</li>
<li>Shi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunologic+basis+of+transplant-associated+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Immunologic basis of transplant-associated arteriosclerosis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 4051-4056 (1996).</li>
<li>Skaro, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD8%2B+T+cells+mediate+aortic+allograft+vasculopathy+by+direct+killing+and+an+interferon-gamma-dependent+indirect+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">CD8+ T cells mediate aortic allograft vasculopathy by direct killing and an interferon-gamma-dependent indirect pathway.</a> Cardiovasc Res. 65, 283-291 (2005).</li>
<li>Tellides, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+elicits+arteriosclerosis+in+the+absence+of+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma elicits arteriosclerosis in the absence of leukocytes.</a> Nature. 403, 207-211 (2000).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+induces+human+vascular+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion+by+phosphatidylinositol+3-kinase+dependent+mammalian+target+of+rapamycin+raptor+complex+1+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma induces human vascular smooth muscle cell proliferation and intimal expansion by phosphatidylinositol 3-kinase dependent mammalian target of rapamycin raptor complex 1 activation.</a> Circ Res. 101, 560-569 (2007).</li>
<li>Soulez, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+perlecan+fragment+LG3+is+a+novel+regulator+of+obliterative+remodeling+associated+with+allograft+vascular+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">The perlecan fragment LG3 is a novel regulator of obliterative remodeling associated with allograft vascular rejection.</a> Circ Res. 110, 94-104 (2012).</li>
<li>Choy, J. C., Kerjner, A., Wong, B. W., McManus, B. M., Granville, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perforin+mediates+endothelial+cell+death+and+resultant+transplant+vascular+disease+in+cardiac+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Perforin mediates endothelial cell death and resultant transplant vascular disease in cardiac allografts.</a> Am J Pathol. 165, 127-133 (2004).</li>
<li>Choy, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granzyme+B+induces+endothelial+cell+apoptosis+and+contributes+to+the+development+of+transplant+vascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Granzyme B induces endothelial cell apoptosis and contributes to the development of transplant vascular disease.</a> Am J Transplant. 5, 494-499 (2005).</li>
<li>Reis, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dramatic+remodeling+of+advanced+atherosclerotic+plaques+of+the+apolipoprotein+E-deficient+mouse+in+a+novel+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+vascular+surgery%22%5BJournal%5D)">Dramatic remodeling of advanced atherosclerotic plaques of the apolipoprotein E-deficient mouse in a novel transplantation model.</a> Journal of vascular surgery. 34, 541-547 (2001).</li>
<li>Potteaux, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppressed+monocyte+recruitment+drives+macrophage+removal+from+atherosclerotic+plaques+of+Apoe-%2F-+mice+during+disease+regression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Suppressed monocyte recruitment drives macrophage removal from atherosclerotic plaques of Apoe-/- mice during disease regression.</a> J Clin Invest. 121, 2025-2036 (2011).</li>
</ol>

Nous avons décrit un protocole de greffe aortique interposition chez les souris qui est utile pour étudier le rejet vasculaire à médiation immunitaire et TA. Ce modèle peut être utilisé pour enquêter sur les causes de la TA ainsi que le développement de nouvelles stratégies thérapeutiques. Il a été utilisé dans le passé pour établir un rôle essentiel de l&#39;immunité adaptative, les réponses des lymphocytes T cytotoxiques, les réponses effectrices CD4 des cellules T à médiation par des cytokines, et des lésions de la g...

Au cours des 30+ dernières années, les progrès dans les médicaments immunosuppresseurs ont diminué rejet de greffe en raison de rejet aigu, mais le rejet chronique reste un défi majeur. La principale manifestation de rejet de greffe cardiaque chronique est l&#39;artériosclérose de transplantation (TA) 1,2. Cette condition est caractérisée par une hyperplasie de l&#39;intima et la dysfonction vasomotrice des artères d&#39;allogreffe et se développe en raison de ciblage immunologique des cellules musculaires lisses et endotheliales par le système immunitaire du receveur. Le ciblage spécifique de la vascularisation du greffon due à la reconnaissance du complexe d&#39;histocompatibilité majeur de peptide étranger (MHC) est mise en évidence par le développement de l&#39;AT dans les artères exclusivement greffés tout en épargnant les navires hôtes 3. En accord avec ceci est l&#39;observation que TA ne se produit pas expérimentalement lorsque le destinataire est génétiquement identique au donneur ou lorsque le destinataire n&#39;a pas les cellules B et T 4. Blessures et dysfunctio vasculaire à médiation immunitairen provoque le développement de l&#39;épaississement de l&#39;intima et la fibrose, ainsi que l&#39;accumulation aberrante de lipides et de protéines de la MEC, en 5 TA. Épaississement de l&#39;intima a tendance à être concentrique sur l&#39;ensemble du 6/4 de l&#39;arbre artériel. Une perte du greffon et la mort surviennent habituellement à la suite d&#39;une ischémie progressive résultant d&#39;une occlusion luminale des artères d&#39;allogreffes 4. En 1991, Mennander et al. 7 pionnier d&#39;un modèle d&#39;interposition aortique chez les rats pour modéliser TA. Plusieurs groupes ont ensuite adapté cette procédure pour une utilisation chez les souris. Dans ce modèle, les segments de l&#39;aorte allogreffe développent des lésions qui ont des caractéristiques comparables à TA observés dans les greffes cliniques. Cela comprend l&#39;épaississement de l&#39;intima caractérisée par l&#39;accumulation des cellules des muscles lisses, comme les leucocytes et les bénéficiaires 7. Au cours des deux dernières décennies, ce modèle a été utilisé pour générer des informations importantes sur les mécanismes de la lésion vasculaire, le rejet et la TA. Il peut nous êtreed pour examiner les questions relatives à des réponses immunitaires et vasculaires au cours pathologie artérielle. Le choix des impacts antigène de désadaptation la capacité de répondre de manière appropriée à ces questions. Transplantation à travers les barrières complètes CMH permet une évaluation complète des réponses immunitaires qui sont connus pour être impliqués dans le rejet de greffe d&#39;organe. Cela inclut la reconnaissance directe de cellules T CD4 et CD8 et le ciblage des étranger peptide-CMH présentés par des cellules greffés dérivés, CD4 indirect (et peut-CD8) la reconnaissance des cellules T et le ciblage des alloantigènes greffés dérivés présentés par antigène destinataire présentant des cellules, et anticorps reconnaissance médiée par des allo-antigènes sur la surface des cellules vasculaires 8. Cependant, la réponse vasculaire à des blessures dans des expériences complètes MHC-incompatibles peut être différente de celle observée cliniquement. Johnson et al. 9 a montré que, dans les greffes d&#39;interposition aortiques transplantés à travers une barrière complète CMH de discordance, la plupart desles cellules néointimales sont d&#39;origine bénéficiaire et non de l&#39;origine des bailleurs de fonds. Ceci est différent de celui observé chez les humains, où la plupart des greffes de cellules musculaires lisses de l&#39;intima sont d&#39;origine donneur 9,10. Pour tenir compte de cette limitation, des modèles expérimentaux alternatifs qui impliquent greffage travers mineures inadéquation des antigènes d&#39;histocompatibilité ont été développés qui déclenchent les réponses vasculaires qui ressemblent davantage à ceux observés dans la transplantation clinique 11. Bien que ces modèles alternatifs permettent de tirer des conclusions importantes à faire en ce qui concerne les réponses vasculaires qui poussent le développement de l&#39;assistance technique, les processus immunologiques qui provoquent un rejet vasculaire en antigène mineur d&#39;histocompatibilité greffes incompatibles ne capituler complètement re-pas celles qui se produisent dans le cadre clinique. Par exemple, les antigènes mineurs d&#39;histocompatibilité sont reconnus mal par greffage des anticorps réagissant 12. Compte tenu des considérations qui précèdent, il est important de considérer la questi pathologiquesur cours d&#39;examen au moment de choisir le type d&#39;antigène décalage utilisé dans un modèle d&#39;interposition aortique. Ici, nous décrivons un protocole détaillé pour murin aortique interposition greffage. Nous décrivons interposition greffage entre les souris MHC-incompatibles complets mais le même protocole est utilisé pour le greffage sur d&#39;autres souches de souris ne correspondent pas à l&#39;antigène.

<table><tbody><tr><td>C57BL/6J (H-2b)</td><td>Jackson Laboratories, Bar Harbour ME</td><td>Souche # 000664</td><td></td></tr><tr><td>Balb/cBYJ</td><td>Jackson Laboratories, Bar Harbour ME</td><td>Souche # 001026</td><td></td></tr><tr><td>Chlorhydrate de kétamine injectable USP 100 mg/ml</td><td>Ketalean</td><td>DIN 00612316</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylazine Injection 20 mg/ml</td><td>Rompum</td><td>DIN 02169592</td><td></td></tr><tr><td>Kétoprofène injectable 100 mg/ml</td><td>Anafen</td><td>DIN 01938126</td><td></td></tr><tr><td>Butorphanol Tartrate&nbsp ; injection 10 mg/ml</td><td>Torbugesic</td><td>DIN 008450000</td><td></td></tr><tr><td>Buprénorphine injectable 0,3 mg/ml</td><td>Reckitt Benckiser</td><td>B.N. 5241</td><td></td></tr><tr><td>Chlorhydrate d’atipamézole solution injectable stérile</td><td>Antisedan</td><td>DIN 02237744</td><td></td></tr><tr><td>Héparine sodique injectable, USP, 1 000 unités/ml</td><td>McKesson Distribution</td><td>DIN 02264315</td><td></td></tr><tr><td>Tears pommade ophtalmique naturelle</td>Stéréomicroscope <td>Alcon</td><td>DIN 02082519</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Leica</td><td>M80</td><td></td></tr><tr><td>0,9 % chlorure de sodium, stérile</td><td>Baxter Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lactated Ringer' s, stérile</td><td>Baxter Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>0,9 % Chlorure de sodium injectable, stérile, 10 ml</td><td>Baxter Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tampons de préparation à l’alcool</td><td>Loris</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Povidone Iode</td><td>Bétadine</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chlorohexidine Gluconate 4 % p/v</td><td>Germi-Stat</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Noir Polyamide</td><td>Monofilament AROSurgical Instruments</td><td>T4A10Q07</td><td></td></tr><tr><td>Suture, suture 10-0, 70 microns</td><td>Suture</td> monofilament Corporation <td></td><td></td></tr><tr><td>Blue 5-0, aiguille P3</td><td>Ethicon</td><td>8698G</td><td></td></tr><tr><td>Seringue 1 ml</td><td>BD</td><td>REF 309659</td><td></td></tr><tr><td>Seringue 10 ml</td><td>BD</td><td>REF 309604</td><td></td></tr><tr><td>1cc Seringue à insuline TB avec 28 G 1/2</td><td>BD</td><td>REF 309309</td><td></td></tr><tr><td>25 G 7/8, aiguille hypodermique</td><td>BD</td><td>REF 305124</td><td></td></tr><tr><td>27 G 1/2, aiguille hypodermique</td><td>BD</td><td>REF 305109</td><td></td></tr><tr><td>Colibri Retractor- 1,5 cm écartement 4 cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>17000-04</td><td></td></tr><tr><td>S& T CAF-4 Pince d’application de clip, sans serrure</td><td>Fine Science Tools</td><td>00072-14</td><td></td></tr><tr><td>Pince Supergrip, S& T</td><td>Fine Science Tools</td><td>00632-11</td><td></td></tr><tr><td>Pince médicale n° 5</td><td>Outils de science fine</td><td>11253-20</td><td></td></tr><tr><td>Lexer Ciseaux pour bébé</td><td>Outils de science fine</td><td>14078-10</td><td></td></tr><tr><td>Pince Micro Adson dentelée</td><td>Outils de science fine</td><td>11018-12</td><td></td></tr><tr><td>Microciseaux Vannas-Tübingen</td><td>Outils de science fine</td><td>15003-08</td><td></td></tr><tr><td>Micro-pinces, b-1 ; 3,5 mm x 1 mm ; Longueur 7mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>00396-01</td><td></td></tr><tr><td>Pince Graefe, 10cm 1x2 dents</td><td>Fine Science Tools</td><td>11054-10</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo avec serrure et mâchoires en tungstène</td><td>Fine Science Tools</td><td>12565-14</td><td></td></tr><tr><td>Stérilisateur à billes de verre chaud</td><td>Inotech 250</td><td>IS-250 - Steri-250</td><td></td></tr><tr><td>Gazes non tissées Progene</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cotton Tipped Applicateurs</td><td>Puritan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tondeuse à barbe</td><td>Wahl</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Coussin chauffant</td><td>Sunbeam</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

modèle murin de rejet vasculaire allo-induite et transplant artériosclérose

Mouse Model of Alloimmune-induced Vascular Rejection and Transplant Arteriosclerosis

Le rejet vasculaire qui conduit à l’artériosclérose (AT) de transplantation est la principale représentation de l’échec chronique d’une transplantation cardiaque. Dans l’AT, le système immunitaire du receveur provoque des dommages à la paroi artérielle et un dysfonctionnement des cellules endothéliales et des cellules musculaires lisses. Cela déclenche une réponse de réparation pathologique caractérisée par un épaississement intimal et une occlusion luminale. La compréhension des mécanismes par lesquels le système immunitaire provoque le rejet vasculaire et l’AT peut éclairer le développement de nouvelles façons de gérer l’échec de la greffe. Ici, nous décrivons un modèle d’interposition aortique chez la souris qui peut être utilisé pour étudier les mécanismes pathogènes du rejet vasculaire et de l’AT. Le modèle implique la greffe d’un segment aortique d’un animal donneur dans un receveur allogénique. Le rejet du segment artériel implique des réactions allo-immunes et entraîne des modifications artérielles qui ressemblent à un rejet vasculaire. L’approche technique de base que nous décrivons peut être utilisée avec différentes souches de souris et des interventions ciblées pour répondre à des questions spécifiques liées au rejet vasculaire et à l’AT.

Dans ce modèle, l&#39;aorte abdominale d&#39;une souris Balb / CYJ est interposé dans l&#39;aorte sous-rénale d&#39;une souris C57BL / 6 destinataire. Cela permet une évaluation complète des allo réponses qui ciblent les artères d&#39;allogreffes. Une lésion vasculaire à médiation immunitaire dans ce modèle initie les réponses vasculaires réparatrices qui aboutissent à épaississement de l&#39;intima, le rétrécissement luminal et le recrutement de cellules immunitaires (figures 1 et 2). ...

Nous décrivons un protocole pour la greffe d’interposition aortique chez la souris. L’objectif du protocole est de fournir un modèle permettant d’étudier les processus pathologiques et les stratégies thérapeutiques pertinents aux réactions allo-immunes dans les artères et aux modifications artérielles qui en résultent et qui contribuent à l’échec de la transplantation d’organe.

Modèle murin de rejet vasculaire allo-induite et Transplant artériosclérose

Vascular rejection that leads to transplant arteriosclerosis (TA) is the leading representation of chronic heart transplant failure. In TA, the immune ...

L'objectif général de cette procédure est de réaliser une greffe interposée aortique complète chez la souris afin d'étudier le rejet vasculaire et l'artériosclérose du greffon. Cette opération consiste d'abord à prélever un segment de l'aorte abdominale de la souris donneuse. Ce segment est ensuite greffé de manière orthotopique dans l'aorte intrarénale d'un receveur allogénique génétiquement différent du donneur.Dans la dernière étape, le segment vasculaire transplanté est excisé et analysé pour évaluer le développement de l'artériosclérose du greffon. En fin de compte, l'importance de l'artériosclérose du greffon et du rejet vasculaire médié par le système immunitaire peut être évaluée par la mesure de l'épaississement intimal et du rétrécissement luminal, ainsi que par l'analyse immunohistochimique du tissu afin de détecter l'accumulation de cellules immunitaires.En général, les personnes novices dans cette procédure ont besoin de temps pour se familiariser avec la technique microchirurgicale, car elle exige un haut niveau de dextérité et une pratique assidue pour être maîtrisée. Toutefois, cette méthode devrait être accessible à la plupart des chercheurs avec une pratique rigoureuse chez les patients. Ainsi, la démonstration de la procédure avec Mme Winnie, une neurochirurgienne talentueuse, et Adam Roso, un étudiant en doctorat talentueux de mon laboratoire, commence par placer la souris donneur en position décubitus dorsal sur une fine planche en plexiglas propre, enveloppée dans un champ stérile, sous le microscope opératoire à un grossissement de 30 x.Après avoir confirmé une anesthésie chirurgicale adéquate par une pincée du orteil, utilisez des ciseaux stériles pour pratiquer une incision médiane unique allant du pubis au processus xiphoïde. Ensuite, utilisez un petit rétracteur pour écarter les parois abdominales et exposer la cavité abdominale. Puis, utilisez des applicateurs stériles munis de cotons-tiges pour rétracter doucement les intestins vers la partie supérieure, à gauche de l'animal.Couvrez le tissu avec un pansement imbibé de sérum physiologique, puis déplacez les organes reproducteurs vers le bas afin de localiser l'aorte infrarénale et la veine cave inférieure ou VCI. Utilisez ensuite une pince chirurgicale n°5 pour séparer l'aorte de la VCI au niveau de l'artère rénale gauche, près de la bifurcation. Puis, utilisez des sutures en polyamide monofilament 10-0 pour ligaturer les petites branches situées près de l'aorte.Lorsque l'aorte du donneur et la VCI ont été séparées, saturez le vaisseau avec du sérum physiologique, recouvrez la cavité exposée avec un pansement humide et mettez le donneur de côté dans un endroit stérile. Placez maintenant la souris receveuse sous le microscope et séparez l'aorte receveuse de la VCI comme vient de l'être démontré. Placez ensuite deux pinces microvasculaires de quatre millimètres, proximale et distale par rapport au segment d'intérêt, espacées d'environ cinq millimètres.Ensuite, à l’aide de ciseaux micro-chirurgicaux pour tube vasculaire, pratiquer une seule incision horizontale de l’aorte et résecter au maximum 0,5 millimètre de l’aorte abdominale afin de loger la greffe aortique du donneur. Revenir au microscope avec le donneur et sectionner un segment greffon de trois à quatre millimètres comme vient d’être démontré. Puis utiliser une aiguille 25 gauge cinq huitièmes pour rincer l’aorte excisée avec une solution saline héparinée.Veiller à ce que la pointe de l'aiguille ne touche pas le vaisseau et placer le vaisseau dans un récipient contenant une solution saline héparinée sur de la glace. Dans les 30 minutes suivant l'excision, placer la greffe aortique du donneur en position orthotopique chez le receveur, en alignant l'orientation anatomique respective de la greffe avec celle du receveur. Ensuite, saisir délicatement la tunique externe du vaisseau et utiliser la pince n°5 pour la dévier légèrement.Utilisez maintenant la pince pour introduire une aiguille fixée à un fil de suture monofilament en polyamide de calibre 10-0 à travers toute l'épaisseur de la paroi vasculaire afin de fixer la greffe aortique du donneur au vaisseau récipient en prévision de la pose de points continus. Positionnez les fils de fixation à neuf heures aux deux extrémités, supérieure et inférieure, de la greffe. Puis, à partir de l'extrémité supérieure de la greffe, commencez l'anastomose à trois heures.Relevez les extrémités résectionnées avec deux points continus et fixez le fil au point de fixation. Ensuite, retournez la greffe et poursuivez le point continu vers la partie dorsale du vaisseau, en rejoignant l'origine.Point de suture d'attache. Fixer la suture sans appliquer une pression excessive sur le vaisseau, puis répéter la suture pour l'anastomose inférieure. Une fois l'anastomose terminée.Relâchez la pince microvasculaire distale pour permettre un flux sanguin rétrograde à travers le vaisseau. Si aucun saignement n'est observé, relâchez la pince proximale. Si aucune obstruction sanguine n'est observée, utilisez une paire de forceps pour saisir délicatement une extrémité des fils de fixation et dévier légèrement le vaisseau afin d'inspecter sa paroi postérieure.Aucun plissement ne doit être observé si un motif de pouls vigoureux est visible dans les vaisseaux donneur et receveur ; utilisez des applicateurs à extrémité de coton pour replacer les intestins dans la cavité abdominale. Enfin, utilisez un porte-aiguille et des pinces grof pour fermer la paroi abdominale avec des sutures continues en polypropylène 5-0. Fermez la couche cutanée à l’aide d’une suture sous-cuticulaire en utilisant les mêmes fils de suture.La fonction motrice des membres postérieurs peut être observée afin d'évaluer la réussite de la chirurgie. La quantité de lésions vasculaires allogreffe induites par le système immunitaire est examinée, en quantifiant l'épaississement intimal et le rétrécissement luminal dans les segments aortiques greffés au jour 30 suivant la transplantation.En effet, comme observé, les segments artériels allogreffés développent un épaississement intimal important et une occlusion luminaire, tandis qu'aucun changement n'est observé dans les segments artériels témoins de la greffe ISO. De plus, le recrutement des leucocytes dans l'artère allogreffée peut être évalué en examinant l'accumulation de cellules T positives pour CD four et CD huit ainsi que des macrophages par immunohistochimie. Comme prévu, les trois types de cellules immunitaires ont été détectés au sein de l'intima des tissus artériels du donneur après développement.Cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine du transport pour explorer la réduction vasculaire médiée par l'alloimmunité et la sclérose artérielle du greffon.

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