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DOI: 10.3791/52824-v
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le trafic de signalisation et module récepteur cellulaire réactivité aux ligands et est, elle-même, répondant à des conditions cellulaires, y compris la signalisation induite par le ligand. Ici, nous décrivons une technique puissante et flexible pour évaluer quantitativement le trafic des récepteurs induite par le médicament en utilisant immunomarquage et analyse colocalizational.
L’objectif global de l’expérience suivante est d’évaluer quantitativement la colocalisation spatiale des paires cibles, dans ce cas, en examinant le trafic de récepteurs induit par la drogue. Ceci est réalisé en traitant des cellules vivantes cultivées avec un médicament pour induire un trafic de récepteurs modifié. Dans un deuxième temps, le double immunomarquage des récepteurs cibles et des compartiments de trafic intracellulaire permet la localisation spatiale des paires cibles par microscopie confocale multicanaux.
L’analyse quantitative de colocalisation est utilisée pour mesurer la tendance des récepteurs et des compartiments cibles à se trouver au même endroit. Les résultats montrent des changements dans le trafic des récepteurs après un traitement médicamenteux basés sur la colocalisation des récepteurs et des compartiments de trafic intracellulaire. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes comme la colocalisation par superposition, est qu’elle fournit des mesures quantifiées de la colocalisation, ce qui permet ensuite des analyses beaucoup plus puissantes et des plans expérimentaux complexes.
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