Un «Patient-Like" Orthotopique Syngénique modèle de souris de carcinome hépatocellulaire Métastases

La dissémination métastatique du cancer est la principale cause de décès liés au cancer. Nous fournissons une description en profondeur de notre méthodologie de chirurgie de survie pour établir un système orthotopique "patient comme" modèle de souris syngénique pour étudier les mécanismes de métastases dans les tumeurs d'organes solides.

L’objectif global de cette procédure est d’établir un système de modèle de souris orthotopique synconique pour étudier les mécanismes de métastases dans le carcinome hépatocellulaire. Pour ce faire, il faut d’abord préparer les cellules de carcinome hépatocellulaire de souris pour l’implantation. Dans un deuxième temps, l’abdomen d’un animal syngénique receveur est ouvert et les cellules sont soigneusement injectées dans le lobe droit du foie.

En fin de compte, le succès et la reproductibilité de cette méthodologie recommandent qu’elle soit largement utilisée pour élucider les mécanismes biologiques des métastases du carcinome hépatocellulaire. Le principal avantage de cette technique par rapport aux techniques existantes comme les modèles tumoraux de xénogreffe de souris, est que notre système de modèle de tumeur syngénétique permet d’étudier le rôle de la réponse immunitaire dans les métastases tumorales. Michelle Nadu, une étudiante de premier cycle de notre laboratoire, fera la démonstration de cette procédure avec moi. Pour préparer les cellules à l’implantation, commencez par laver deux fois une culture confluente de 60 à 70 % de cellules de carcinome hépatocellulaire avec cinq millilitres de PBS.

Incuber la culture cellulaire avec deux millilitres de trypsine à 37 degrés Celsius. Après cinq minutes, comptez les cellules et diluez-les à cinq fois 10 à la cinquième cellule par millilitre de PBS. Ensuite, transférez 100 aliquotes d’un microlitre de cellules dans un tube à centrifuger stérile de 1,5 millilitre par souris et placez les cellules sur de la glace.

Avant de commencer l’intervention chirurgicale, confirmez le bon niveau d’anesthésie par l’orteil. Pincez, appliquez une pommade sur les yeux d’une souris adulte en bonne santé de 16 à 20 grammes et rasez-vous dans une zone d’environ un pouce autour de la ligne médiane de l’abdomen de l’animal. Ensuite, prenez une paire de gants en latex et lavez la peau exposée plusieurs fois avec un gommage désinfectant savonneux, suivi d’un rinçage stérile PBS pendant environ cinq minutes.

Lorsque la peau a été préparée, jetez les gants et mettez l’équipement de protection individuelle approprié. Fournissez une source de chaleur externe pour prévenir l’hypothermie anesthésique pendant la procédure, puis placez du ruban chirurgical sur les membres et la queue de l’animal pour fixer la souris en position couchée. Ensuite, faites une incision droite immédiatement inférieure au sternum xiphos et utilisez un écarteur chirurgical stérile auto-retenu pour ouvrir l’abdomen.

Lorsque le foie est visible, aspirez une aliquote de cellules dans une seringue d’un millilitre équipée d’une aiguille de calibre 20, et injectez lentement et soigneusement les 100 microlitres de cellules du carcinome hétatocellulaire dans le lobe droit du foie. Après avoir retiré l’aiguille, appliquez un coton-tige stérile pendant au moins une minute pour arrêter tout saignement. Utilisez ensuite une suture résorbable pour fermer le tissu sous-cutané, puis fermez la peau.

À l’aide de pinces chirurgicales, nettoyez la plaie avec un autre gommage désinfectant et administrez par voie sous-cutanée 100 microlitres de solution saline normale. Ensuite, immédiatement après la chirurgie, transférez la souris dans une cage propre sans compagnons et avec une litière en papier pendant au moins 24 heures. Ces foies de souris BSY ont été implantés avec cinq fois 10 contre six ME. Une souris cellules de carcinome hépatocellulaire comme nous venons de le démontrer.

Les signes cliniques cliniques de développement d’un carcinome hépatocellulaire étaient observables 63 jours plus tard, comme l’indiquait la flèche chez une souris. Une tumeur superficielle a été observée à la surface du foie avec une certaine attache à la paroi abdominale. Les poumons de cette souris présentaient également une morphologie anormale ainsi que des zones de nécrose hémorragique visible.

Chez une deuxième souris, le foie semblait grossièrement anormal, l’anomalie ressemblant très fortement à une tumeur superficielle comme contrôle attendu. Les souris qui n’ont pas été implantées n’ont pas développé de tumeurs dans le foie ou les poumons. Une fois maîtrisé, ce modèle de souris syngénétique orthotopique peut fournir une bonne plate-forme pour élucider les mécanismes biologiques des métastases et du carcinome hépatocellulaire.