Repérer les tissus correcte à chaque fois dans les blocs multi-tissus

L’objectif global de cette procédure est de construire un outil pour aider à l’identification des tissus dans les blocs de paraffine multitissulaires. Ceci est accompli en combinant d’abord HistoGel avec un colorant de marquage tissulaire pour former un bouchon de gel de couleur vive. La deuxième étape consiste à traiter et à encastrer les bouchons HistoGel colorés en suivant les techniques standard de traitement et d’enrobage des tissus.

Ensuite, un poinçon de biopsie est utilisé pour retirer les petits cylindres. Il s’agit d’étiquettes d’orientation ou de point d’orientation de l’échantillon. La dernière étape consiste à intégrer la tache dans un bloc multi-tissus avec l’emplacement de la tache et chaque échantillon soigneusement documenté pour une référence facile.

En fin de compte, le spot fournit un repère visuel clair pour l’orientation et l’identification des échantillons dans les microréseaux de tissus et les blocs multitissulaires. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes telles que les sutures ou les carottes asymétriques, est que le spot n’altère pas le tissu et permet une flexibilité dans la disposition des échantillons pour une analyse optimale. Nous avons d’abord eu l’idée de cette méthode lorsque nous avons reçu des demandes d’enquêteurs pour combiner des échantillons de tissus de plusieurs animaux en un seul bloc de paraffine afin d’économiser de l’argent et de simplifier l’analyse. Pour préparer les taches, commencez par ajouter 50 milligrammes de BSA de qualité biochimique à un millilitre de colorant de marquage tissulaire dans un tube conique de 15 millilitres.

Agitez le mélange pendant au moins une minute jusqu’à ce qu’il soit complètement dissous. Ensuite, chargez neuf millilitres de gel de traitement de l’hydroxyéthyle aros dans un tube conique de 15 millilitres et chauffez-le dans un micro-ondes à 30 % de puissance. Pulsez la chaleur par incréments de dix secondes jusqu’à ce que le gel soit complètement fondu.

Mélangez maintenant la solution de gel de traitement et de colorant BSA fondue dans un seul tube conique de 15 millilitres et mélangez-la soigneusement avec une pipette. Ensuite, vortex la solution et transférez-la dans un réfrigérateur pendant quelques heures pour qu’elle se solidifie. Une fois durci, retirez le dilate solide dans le gel en le relâchant doucement à l’aide d’une spatule étroite.

Coupez le bouchon en sections de cinq millimètres d’épaisseur. N’utilisez pas les extrémités arrondies. Transférez trois à six sections dans une cassette d’histologie et plongez-les dans de l’éthanol à 70 %, changez la solution à 70 % d’éthanol toutes les deux à quatre heures, et au moins trois fois sur 24 heures jusqu’à ce que les bouchons soient complètement déshydratés.

Ils lessiveront une partie du colorant de marquage dans la solution d’éthanol. L’utilisation de changements d’éthanol frais aide initialement à éliminer une partie de l’excès de colorant, ce qui permet d’obtenir un bouchon plus propre qui est moins susceptible de lessiver la couleur. Ensuite, transférez les cassettes à 80 % d’éthanol, puis à 95 % d’éthanol pendant une heure dans chaque bain.

Le colorant peut s’échapper du bouchon de gel, ce qui pourrait affecter d’autres tissus et les réactifs liquides d’un processeur de tissus automatisé. En tant que tel, la déshydratation manuelle est fortement recommandée. Cependant, le traitement automatisé est tout aussi efficace.

Complétez la déshydratation par trois lavages à 100 % éthanol pendant une heure chacun. Éclaircir les échantillons en les immergeant trois fois dans des hydrocarbures atiques ou des xylènes pendant une heure dans chaque bain. Maintenant, infiltrez les sections avec trois bains d’une heure.

En paraffine fondue. Intégrez les sections traitées comme d’habitude, et lorsque le bloc est à température ambiante, utilisez une aiguille à poinçonner dermique pour faire des noyaux ponctuels. Un bloc peut faire des noyaux de 22 millimètres ou même plus de noyaux de 1,5 millimètre.

Commencez par faire un schéma pour indiquer les emplacements et les identités souhaités de tous les morceaux de tissu individuels à incruster ensemble et l’emplacement de la tache. Préparez une copie à garder à portée de main. L’utilisation réussie des étiquettes d’orientation des échantillons nécessite une carte claire et facile à suivre qui détaille avec précision tous les échantillons biologiques, leur emplacement et leur position par rapport à l’endroit.

Après avoir traité les morceaux de tissu, disposez-les sur la station d’enrobage. Selon le schéma d’orientation des tissus, une orientation correcte est absolument essentielle. Il est également essentiel que le noyau soit plus grand que tous les morceaux de tissu qui seront intégrés dans le bloc.

Après avoir terminé l’arrangement des tissus, intégrez les taches. Tenez chaque endroit à la verticale avec une pince jusqu’à ce que la paraffine se soit solidifiée afin qu’elle ne bascule pas. Une minute ou deux devraient suffire.

Pour un kit TMA manuel, remplissez le moule TMA avec de la paraffine fondue. Pendant que le moule refroidit, fixez les points de la même manière sur les marges du réseau. Maintenant, sectionnez et colorez les sections avec la tache.

En utilisant une approche standard, des sections de cinq microns sont réalisées ici. Pour placer les sections sur des diapositives, faites-les flotter dans un bain-marie à 40 degrés Celsius, puis transférez-les sur des lames de verre chargées positivement. Une fois attachés aux lames, séchez-les à 60 degrés Celsius pendant au moins 20 minutes.

Les lames peuvent désormais être colorées manuellement ou sur un système de coloration automatisé. Pour les colorations de routine h et d, des taches spéciales ou des taches chimiques immunohisto sont apparues sous la forme d’une rondelle de couleur vive. dans le bloc de paraffine et dans toutes les sections de paraffine.

Les taches ont permis une orientation et une identification faciles des tissus dans des blocs de tissus multiples contenant des tissus d’apparence similaire provenant d’individus et de groupes de traitement différents. Lorsqu’ils étaient utilisés dans un tissu, les points de microréseau permettaient d’utiliser chaque carotte pour des échantillons de tissus précieux et les points pouvaient facilement être repérés à côté d’une carotte de microréseau de tissus. Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler qu’une documentation précise et claire de l’échantillon biologique et de l’endroit dans le bloc est essentielle à sa bonne utilisation.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de créer et d’utiliser facilement l’étiquette d’orientation de l’échantillon comme aide à l’identification des tissus dans les blocs de paraffine multitissulaires.