Name: Création dune importance clinique Ex Vivo Mock Chirurgie de la cataracte modèle pour étudier épithéliale Wound Repair dans un microenvironnement maternelle (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 53 s
Description: Découvrez comment créer un modèle ex vivo de chirurgie de la cataracte utilisant des embryons de poulet pour étudier la cicatrisation épithéliale. Cette méthode permet d'observer les mécanismes de réparation tissulaire en temps réel.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ce travail a été soutenu par la subvention des National Institutes of Health à A.S.M. (EY021784).

Le protocole suivant est conforme aux institutionnels en soins des animaux et l&#39;utilisation des lignes directrices du Comité de l&#39;Université Thomas Jefferson et à la Déclaration ARVO pour l&#39;utilisation d&#39;animaux dans Vision Research. 1. Configuration et préparation des Objectifs de la Culture ex vivo des plaies <ol><li> Passer trois plats 100 mm de Pétri dans, une hotte à flux laminaire stérile. Remplir deux des boîtes de Pétri à moitié avec du tampon Tris / dextrose (tampon TD; 140 mM de NaCl, 5 mM de KCl, 0,7 mM de Na 2 PO 4, 5 mM de D-glucose, 8,25 mM de base Tris, pH à 7,4 avec HCl) à la température ambiante , laissant le troisième vide. Des milieux de culture pré-chaud (Media 199 additionné de 1% de L-glutamine et 1% de pénicilline / streptomycine) à 37 o C. Remarque: La blessure norme guérison milieux de culture est sans sérum, comme cela se produit in vivo; toutefois, les cultures de réparation de plaie peuvent être cultivées avec succès dans des conditions définies de médias qui comprennent le sérum ou d&#39;autres facteurs. </li><li> Retirer fertile d embryonnaireay 15 White Leghorn poussin oeuf de l&#39;incubateur (tenue à 37,7 ° C avec doux balancement) </li><li> Placez l&#39;oeuf sélectionné dans la hotte à flux laminaire et à l&#39;extérieur de la coque propre avec 70% d&#39;éthanol à partir d&#39;une bouteille de lavage. Effectuer toutes les procédures ci-dessous dans des conditions aseptiques dans la hotte à flux laminaire, en utilisant des solutions et des instruments stériles. </li><li> Crack oeufs et placer le contenu dans la boîte de 100 mm de Pétri vide. Décapitez embryon en utilisant une pince standard et des ciseaux fins. Placez la tête d&#39;embryon de poulet dans une boîte de Pétri contenant un tampon de TD et jetez le reste de l&#39;embryon. Eventuellement garder les têtes d&#39;embryon de poulet dans un tampon TD pour une courte période de temps, pas plus de 15 min. </li><li> Placez la tête d&#39;embryon de poulet sur un couvercle de boîte de Pétri. En utilisant des pinces de haute précision, retirez l&#39;objectif avec son humeur vitrée de l&#39;œil fixé dans la séquence suivante. Pincez l&#39;arrière de l&#39;œil avec la pince pour créer une petite ouverture dans le fond de l&#39;œil. </li><li> Ensuite, saisir l&#39;humeur vitrée wvec pinces et tirez doucement sur le corps vitré avec un mouvement de roulis, le vitré avec l&#39;objectif fixé seront délogés de l&#39;œil. Fixer la lentille / vitré dans la boîte de Pétri contenant un tampon restante de TD. Laisser les lentilles de rester dans un tampon TD pour pas plus de 30 min. </li><li> Déplacer la lentille dans une nouvelle boîte de Pétri de couvercle sous un microscope à dissection. De ce point sur toutes les actions nécessaires sous un microscope de dissection. Avec des pinces de haute précision brosser soigneusement toute corps ciliaire (cellules pigmentées) qui ont été délogés avec la lentille en utilisant le bord de la pince, en prenant garde de ne pas endommager les tissus de la lentille. Remarque: Le retrait du corps ciliaire garantit que les types de cellules qui ne sont pas endogènes à la lentille ne sont pas inclus dans la culture plaie de réparation. </li><li> Séparer la lentille à partir de l&#39;humeur vitrée avec des pinces de haute précision par pincement le corps vitré à partir de sa liaison avec la capsule postérieure du cristallin. </li><li> Utilisation de haute précision Pince transférer la lentille dans une petite gouttede tampon TD (environ 200 ul) dans une boîte de culture tissulaire de 35 mm. </li></ol> 2. Réalisation de chirurgie de la cataracte Mock <ol><li> Orienter la lentille dans la goutte de tampon TD dans la boîte de 35 mm avec la face antérieure de la lentille vers le haut. Remarque: La antérieure de la lentille est facilement identifié par la présence d&#39;un anneau dense dans le tissu qui prend note de la frontière entre la partie antérieure et région équatoriale de l&#39;épithélium de la lentille. En revanche, il existe une absence de marquage sur la partie postérieure de la capsule du cristallin à laquelle les cellules de fibres de verre sont fixés. </li><li> L&#39;utilisation de deux pinces de haute précision font une petite incision (environ 850μm) dans le centre de la capsule antérieure du cristallin, la membrane basale épaisse qui entoure le tissu de lentille, et son épithélium de lentille antérieure associée, en saisissant le tissu avec une pince dans chaque main et tirant doucement dans des directions opposées. </li><li> Retirer la masse cellulaire de la fibre, ce qui constitue l&#39;essentiel du tissu de lentille, dislodging il de ses attaches à l&#39;épithélium de la lentille et entourant capsule du cristallin par hydro-élution (une approche utilisée dans la chirurgie de la cataracte classique, calqué sur la figure 1A). </li><li> Remplir une seringue de 1 ml avec une pointe d&#39;aiguille de 27,5 G avec 300 pi de tampon TD. Insérer la pointe de l&#39;aiguille dans l&#39;incision pratiquée dans la capsule antérieure du cristallin, et à mi-chemin dans l&#39;objectif. </li><li> Appuyer doucement la seringue injecter le tampon de TD dans la masse cellulaire de la fibre de verre. Injecter entre 50 et 200 pi TD, et jamais plus de 300 pi. Respecter la masse cellulaire de la fibre se desserrer de l&#39;épithélium et capsule du cristallin. </li><li> En utilisant des pinces de haute précision, retirer la masse cellulaire des fibres desserré de la lentille à travers le site de l&#39;incision antérieure. Remarque: Cette procédure laisse la lentille de la capsule postérieure de la membrane basale à laquelle les cellules des fibres avaient été attachés dénudée de cellules, et un épithélium de lentille blessé juste à côté de ce site. </li></ol> 3. Preparing Lens blessés pour Culture ex vivo <ol><li> Aplatir le sac capsulaire du cristallin qui résulte de l&#39;opération de la cataracte décrit ci-dessus sur la boîte de culture, jusqu&#39;à côté de la cellule, en faisant cinq découpes dans la face antérieure du sac capsulaire. </li><li> Couper perpendiculaire au site de l&#39;incision initiale par rapport à l&#39;équateur de la lentille. Aplatir les résultants cinq «volets» de capsule du cristallin par un épithélium attachée sur le côté plat de la culture de la capsule vers le bas, la cellule vers le haut. Notez la lentille ex vivo blessés aujourd&#39;hui devrait prendre sur une étoile ou une forme en fleur (voir la figure 1B). </li><li> Pour sécuriser la capsule à l&#39;antenne, appuyez doucement vers le bas avec la pince à chaque point de l&#39;étoile. Cela fera une petite empreinte sur les cinq conseils les plus à l&#39;extérieur de l&#39;expiant et aboutir à la fixation soutenue à l&#39;antenne. Remarque: Il est possible d&#39;endommager la capsule lors de cette procédure et il est donc important d&#39;assurer la capsule à l&#39;antenne au plus près les conseils de la flaps que possible, ainsi que de faire le moins de points de fixation que possible (généralement deux, maximum de trois par lambeau). </li><li> Retirez le tampon de TD à partir du plat 35mm et le remplacer par 1,5 ml de milieu préchauffées. Couvrir le plat 35mm avec son couvercle et le placer dans l&#39;incubateur (37 ° C, 5% de CO 2). </li></ol> 4. Séparation de la Zone Central Migration (CMZ), où Re-épithélialisation de la zone de blessés de la Capsule Postérieure se produit, à partir de la pièce jointe d&#39;origine Zone (OAZ) de cellules épithéliales d&#39;objectif, pour l&#39;analyse quantitative. Remarque: Les cellules commencent à se déplacer dans la région CMZ immédiatement en réponse à une blessure. Par jour dans la culture suffisamment de cellules migrent à travers le CMZ pour l&#39;analyse moléculaire et biochimique, après la séparation de la CMZ et OAZ par micro-dissection 23. Ce protocole implique l&#39;élimination d&#39;un volet (OAZ) à la fois à partir de la zone blessée de la capsule. <ol><li> Observer un demarcation, clairement visible sous le microscope de dissection, entre le OAZ et CMZ (voir Figure 2A). En utilisant deux pinces de haute précision, saisir avec les deux pinces sur le bord de la ligne OAZ / CMZ, un juste à côté de l&#39;autre, de chaque côté de la ligne (voir Figure 2A, B, flèche). </li><li> En utilisant une main / une pince sur le côté CMZ continuent à tenir sur la culture blessés, tandis que de l&#39;autre main / pince, tirez doucement le long de la ligne OAZ OAZ / CMZ. Le CMZ sépare facilement de la OAZ long de cette ligne. Continuez le long de cette ligne tout autour de la culture jusqu&#39;à ce que les deux régions sont complètement séparés. </li><li> Étudier les Oaz et CMZ fractions séparées pour l&#39;analyse moléculaire telles que 24 ou biochimique analyse de l&#39;ARN-Seq tels que Western blot ou co-immunoprécipitation 23,25. </li></ol>

<ol><li>Walker, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+precursors+for+the+mesenchymal+cells+involved+in+injury+response+and+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Unique precursors for the mesenchymal cells involved in injury response and fibrosis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107, 13730-13735 (2010).</li>
<li>Friedl, P., Gilmour, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collective+cell+migration+in+morphogenesis%2C+regeneration+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Molecular+cell+biology%22%5BJournal%5D)">Collective cell migration in morphogenesis, regeneration and cancer.</a> Nature reviews. Molecular cell biology. 10, 445-457 (2009).</li>
<li>Riahi, R., Yang, Y., Zhang, D. D., Wong, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+wound-healing+assays+for+probing+collective+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+laboratory+automation%22%5BJournal%5D)">Advances in wound-healing assays for probing collective cell migration.</a> Journal of laboratory automation. 17, 59-65 (2012).</li>
<li>Khalil, A. A., Friedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determinants+of+leader+cells+in+collective+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+biology+%3A+quantitative+biosciences+from+nano+to+macro%22%5BJournal%5D)">Determinants of leader cells in collective cell migration.</a> Integrative biology : quantitative biosciences from nano to macro. 2, 568-574 (2010).</li>
<li>Walker, J. L., Wolff, I. M., Zhang, L., Menko, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+SRC+kinases+signals+induction+of+posterior+capsule+opacification%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Activation of SRC kinases signals induction of posterior capsule opacification.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 48, 2214-2223 (2007).</li>
<li>Sta Iglesia, D. D., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+the+basement+membrane+after+corneal+debridement%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Disruption of the basement membrane after corneal debridement.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 41, 1045-1053 (2000).</li>
<li>Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Brown, M., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+for+the+study+of+recurrent+corneal+epithelial+erosions%3A+alpha9beta1+integrin+implicated+in+progression+of+the+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">A mouse model for the study of recurrent corneal epithelial erosions: alpha9beta1 integrin implicated in progression of the disease.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 45, 1775-1788 (2004).</li>
<li>Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Tadvalkar, G., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Removal+of+the+basement+membrane+enhances+corneal+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+eye+research%22%5BJournal%5D)">Removal of the basement membrane enhances corneal wound healing.</a> Experimental eye research. 93, 927-936 (2011).</li>
<li>Stepp, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wounding+the+cornea+to+learn+how+it+heals%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+eye+research%22%5BJournal%5D)">Wounding the cornea to learn how it heals.</a> Experimental eye research. 121, 178-193 (2014).</li>
<li>Kuwabara, T., Perkins, D. G., Cogan, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sliding+of+the+epithelium+in+experimental+corneal+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Sliding of the epithelium in experimental corneal wounds.</a> Investigative ophthalmology. 15, 4-14 (1976).</li>
<li>Sherrard, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+corneal+endothelium+in+vivo%3A+its+response+to+mild+trauma%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+eye+research%22%5BJournal%5D)">The corneal endothelium in vivo: its response to mild trauma.</a> Experimental eye research. 22, 347-357 (1976).</li>
<li>Stramer, B. M., Zieske, J. D., Jung, J. C., Austin, J. S., Fini, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+controlling+the+fibrotic+repair+phenotype+in+cornea%3A+implications+for+surgical+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms controlling the fibrotic repair phenotype in cornea: implications for surgical outcomes.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 44, 4237-4246 (2003).</li>
<li>Escamez, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+model+of+wound+healing+in+genetically+modified+skin-humanized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+investigative+dermatology%22%5BJournal%5D)">An in vivo model of wound healing in genetically modified skin-humanized mice.</a> The Journal of investigative dermatology. 123, 1182-1191 (2004).</li>
<li>Werner, S., Breeden, M., Hubner, G., Greenhalgh, D. G., Longaker, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+keratinocyte+growth+factor+expression+is+reduced+and+delayed+during+wound+healing+in+the+genetically+diabetic+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+investigative+dermatology%22%5BJournal%5D)">Induction of keratinocyte growth factor expression is reduced and delayed during wound healing in the genetically diabetic mouse.</a> The Journal of investigative dermatology. 103, 469-473 (1994).</li>
<li>Tarin, D., Croft, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructural+studies+of+wound+healing+in+mouse+skin.+II.+Dermo-epidermal+interrelationships%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+anatomy%22%5BJournal%5D)">Ultrastructural studies of wound healing in mouse skin. II. Dermo-epidermal interrelationships.</a> Journal of anatomy. 106, 79-91 (1970).</li>
<li>Croft, C. B., Tarin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructural+studies+of+wound+healing+in+mouse+skin+I.+Epithelial+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+anatomy%22%5BJournal%5D)">Ultrastructural studies of wound healing in mouse skin I. Epithelial behaviour.</a> Journal of anatomy. 106, 63-77 (1970).</li>
<li>Winstanley, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epithelial+reaction+in+the+healing+of+excised+cutaneous+wounds+in+the+dog%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+comparative+pathology%22%5BJournal%5D)">The epithelial reaction in the healing of excised cutaneous wounds in the dog.</a> Journal of comparative pathology. 85, 61-75 (1975).</li>
<li>Wormstone, I. M., Wride, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ocular+lens%3A+a+classic+model+for+development%2C+physiology+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+transactions+of+the+Royal+Society+of+London.+Series+B%2C+Biological%22%5BJournal%5D)">The ocular lens: a classic model for development, physiology and disease.</a> Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological. 366, 1190-1192 (2011).</li>
<li>Danysh, B. P., Duncan, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lens+capsule%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+eye+research%22%5BJournal%5D)">The lens capsule.</a> Experimental eye research. 88, 151-164 (2009).</li>
<li>Awasthi, N., Guo, S., Wagner, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Posterior+capsular+opacification%3A+a+problem+reduced+but+not+yet+eradicated%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Posterior capsular opacification: a problem reduced but not yet eradicated.</a> Archives of ophthalmology. 127, 555-562 (2009).</li>
<li>Walker, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+attempts+to+reduce+posterior+capsule+opacification+after+cataract+surgery--a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+experimental+ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Pharmacological attempts to reduce posterior capsule opacification after cataract surgery--a review.</a> Clinical & experimental ophthalmology. 36, 883-890 (2008).</li>
<li>Schmidbauer, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Posterior+capsule+opacification%5BTitle%5D)+AND+%22International+ophthalmology+clinics%22%5BJournal%5D)">Posterior capsule opacification.</a> International ophthalmology clinics. 41, 109-131 (2001).</li>
<li>Menko, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+central+role+for+vimentin+in+regulating+repair+function+during+healing+of+the+lens+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+biology+of+the+cell%22%5BJournal%5D)">A central role for vimentin in regulating repair function during healing of the lens epithelium.</a> Molecular biology of the cell. 25, 776-790 (2014).</li>
<li>Chauss, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+state-specific+mitochondrial+dynamic+regulatory+networks+are+revealed+by+global+transcriptional+analysis+of+the+developing+chicken+lens%5BTitle%5D)+AND+%22G3+%28Bethesda%29%22%5BJournal%5D)">Differentiation state-specific mitochondrial dynamic regulatory networks are revealed by global transcriptional analysis of the developing chicken lens.</a> G3 (Bethesda). 4, 1515-1527 (2014).</li>
<li>Leonard, M., Zhang, L., Bleaken, B. M., Menko, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+roles+for+N-Cadherin+linked+c-Src+and+fyn+kinases+in+lens+development%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+dynamics+%3A+an+official+publication+of+the+American+Association+of+Anatomists%22%5BJournal%5D)">Distinct roles for N-Cadherin linked c-Src and fyn kinases in lens development.</a> Developmental dynamics : an official publication of the American Association of Anatomists. 242, 469-484 (2013).</li>
<li>Sieg, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FAK+integrates+growth-factor+and+integrin+signals+to+promote+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+cell+biology%22%5BJournal%5D)">FAK integrates growth-factor and integrin signals to promote cell migration.</a> Nature cell biology. 2, 249-256 (2000).</li>
<li>Sieg, D. J., Hauck, C. R., Schlaepfer, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Required+role+of+focal+adhesion+kinase+%28FAK%29+for+integrin-stimulated+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+cell+science%22%5BJournal%5D)">Required role of focal adhesion kinase (FAK) for integrin-stimulated cell migration.</a> Journal of cell science. 112 (Pt 16), 2677-2691 (1999).</li>
<li>Hauck, C. R., Hsia, D. A., Schlaepfer, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+focal+adhesion+kinase--a+regulator+of+cell+migration+and+invasion%29%5BTitle%5D)+AND+%22IUBMB+life%22%5BJournal%5D)">The focal adhesion kinase--a regulator of cell migration and invasion).</a> IUBMB life. 53, 115-119 (2002).</li>
<li>Zhao, X., Guan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+adhesion+kinase+and+its+signaling+pathways+in+cell+migration+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+drug+delivery+reviews%22%5BJournal%5D)">Focal adhesion kinase and its signaling pathways in cell migration and angiogenesis.</a> Advanced drug delivery reviews. 63, 610-615 (2011).</li>
<li>Menko, A. S., Bleaken, B. M., Walker, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional-specific+alterations+in+cell-cell+junctions%2C+cytoskeletal+networks+and+myosin-mediated+mechanical+cues+coordinate+collectivity+of+movement+of+epithelial+cells+in+response+to+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+cell+research%22%5BJournal%5D)">Regional-specific alterations in cell-cell junctions, cytoskeletal networks and myosin-mediated mechanical cues coordinate collectivity of movement of epithelial cells in response to injury.</a> Experimental cell research. 322, 133-148 (2014).</li>
<li>Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing--aiming+for+perfect+skin+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Wound healing--aiming for perfect skin regeneration.</a> Science. 276, 75-81 (1997).</li>
<li>Ferguson, M. W., O'Kane, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scar-free+healing%3A+from+embryonic+mechanisms+to+adult+therapeutic+intervention%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+transactions+of+the+Royal+Society+of+London.+Series+B%2C+Biological%22%5BJournal%5D)">Scar-free healing: from embryonic mechanisms to adult therapeutic intervention.</a> Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological. 359, 839-850 (2004).</li>
<li>Redd, M. J., Cooper, L., Wood, W., Stramer, B., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing+and+inflammation%3A+embryos+reveal+the+way+to+perfect+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+transactions+of+the+Royal+Society+of+London.+Series+B%2C+Biological%22%5BJournal%5D)">Wound healing and inflammation: embryos reveal the way to perfect repair.</a> Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological. 359, 777-784 (2004).</li>
<li>Nodder, S., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing+in+embryos%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Anatomy+and+embryology%22%5BJournal%5D)">Wound healing in embryos: a review.</a> Anatomy and embryology. 195, 215-228 (1997).</li>
<li>Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y., Longaker, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+repair+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Wound repair and regeneration.</a> Nature. 453, 314-321 (2008).</li>
</ol>

Les auteurs déclarent qu’ils n’ont pas d’intérêts financiers concurrents.

Voici décrit une technique de préparation d’un modèle de culture de réparation de plaies qui consiste à effectuer une chirurgie de la cataracte ex vivo sur des lentilles d’embryons de poussin après leur retrait de l’œil. L’épithélium du cristallin réagit à cette blessure cliniquement pertinente par un processus de réparation qui imite étroitement celui qui se produit in vivo et partage des caractéristiques avec la réparation de la plaie dans d’autres tissus épithéliaux2,4. Bien que le protoco...

La chirurgie de la cataracte cliniquement pertinente, maquette, modèle de cicatrisation des plaies ex vivo épithéliale décrit ici a été développé pour fournir un outil pour étudier les mécanismes qui régulent la réparation des tissus épithéliaux en réponse à une blessure. Principales caractéristiques qui visaient pour la création de ce modèle comprenaient 1) offrant des conditions qui reproduites étroitement la réponse in vivo pour blessant dans un cadre de culture, 2) la facilité de moduler les éléments de régulation de la réparation, et 3) capacité à l&#39;image du processus de réparation, dans sa totalité, en temps réel. Le défi était donc de créer un modèle de culture dans lequel il a été possible d&#39;étudier et manipuler, épithéliale réparation de blessure dans microenvironnement natif des cellules. La disponibilité de ce modèle plaie réparation ouvre de nouvelles possibilités pour identifier les signaux de signalisation endogènes de la matrice des protéines, des cytokines et des chimiokines qui régissent le processus de réparation. En outre, le modèle est idéal pour examiner comment unn épithélium est capable de se déplacer comme une feuille collective réépithélialisation de la plaie 2,3, et pour la détermination de la lignée de cellules mésenchymateuses de tête au niveau du bord de la plaie qui fonctionne dans la direction de la migration de l&#39;épithélium collective 4 blessé. Ce modèle fournit également une plate-forme permettant d&#39;identifier des thérapeutiques qui pourraient favoriser la cicatrisation efficace et prévenir la blessure aberrante réparation 5. Il existe déjà un certain nombre de modèles disponibles plaie réparation, à la fois dans la culture et in vivo, qui ont fourni la plupart de ce qui est connu sur le processus de réparation de la plaie aujourd&#39;hui. Dans les modèles de blessures animaux, tels que la cornée et la peau 6-12 13-17, il ya la possibilité d&#39;étudier la réponse du tissu à blessant dans le contexte de tous les médiateurs de réparation qui pourraient être impliqués dans le processus, y compris les contributions de la vasculaire et le système nerveux. Cependant, il ya des limites à la manipulation de l &#39;expérienceconditions mentales in vivo, et il est pas encore possible de mener des études d&#39;imagerie de la réponse de réparation in vivo, de façon continue au fil du temps. En revanche, la plupart des modèles de culture in vitro plaie réparation, telles que la plaie de zéro, peuvent être facilement manipulés et suivis dans le temps, mais manquent le contexte de l&#39;environnement de l&#39;étude de la cicatrisation des plaies dans les tissus in vivo. Bien ex vivo modèles offrent l&#39;avantage d&#39;étudier le processus blessures de réparation continue dans le temps dans le cadre du microenvironnement des cellules associée à la capacité de moduler les régulateurs moléculaires de réparation à tout point de temps dans le processus, il ya quelques modèles qui correspondent à ceux-ci paramètres. Ici, on décrit un procédé hautement reproductible pour générer ex vivo de cicatrisation epitheliale cultures qui reproduisent la réponse d&#39;un tissu épithélial à une blessure physiologique. Utilisation de la lentille d&#39;embryon de poulet comme source de tissus, un ex vivo mock chirurgie de la cataracte est effectuée. La lentille est un tissu idéal à utiliser pour ces études car il est auto-contenue dans une capsule de la membrane basale épaisse, avasculaire, pas innervé, et libre de toute stroma associé 18,19. Dans la maladie humaine, la chirurgie de la cataracte traite une perte de vision due à l&#39;opacification de la lentille, et implique l&#39;élimination de la masse de cellules de la fibre de verre, qui comprend la plus grande partie de la lentille. A la suite de la chirurgie de la cataracte vision est restaurée par l&#39;insertion d&#39;une lentille intraoculaire artificielle. La procédure de chirurgie de la cataracte, par élimination des cellules de la fibre, induit une réponse de lésion de l&#39;épithélium de la lentille adjacente, qui répond en ré-épithélialisation de la zone postérieure de la capsule du cristallin qui a été occupée par les cellules de la fibre. En chirurgie de la cataracte, comme dans la plupart des réponses plaie de réparation, il se produit parfois un résultat aberrant fibrotique à la réponse de cicatrisation de la plaie, associée à l&#39;apparition de myofibroblastes, qui, dans la lentille postérieure est connu comme Capsule opacification 20-22. Pour générer le modèle de cicatrisation de la plaie de la chirurgie de la cataracte, une procédure de chirurgie de la cataracte est imité dans les lentilles retirés de l&#39;œil d&#39;embryon de poulet pour produire une blessure physiologique. Enlèvement de microchirurgie de fibres de verre résultats des cellules dans une zone de la plaie circulaire très cohérent entouré par les cellules epitheliales du cristallin. Cette population de cellules reste fermement attachée à la capsule de la lentille membrane basale et est blessé par la procédure chirurgicale. Les cellules épithéliales migrent sur ​​la zone dénudée de la membrane basale endogène de guérir la plaie, dirigé par une population de cellules mésenchymateuses vimentine riche connus dans le processus de réparation en tant que cellules de 1 chef. Avec ce modèle, la réponse d&#39;un épithélium de blessure peut être facilement visualisé et suivie avec le temps dans le cadre de la micro-environnement des cellules. Les cellules sont facilement accessibles à des modifications de l&#39;expression ou l&#39;activation de molécules susceptibles de jouer un rôle dans la cicatrisation des plaies. Une puissante fonctionnalité de eest le modèle est la capacité à isoler et à étudier les changements spécifiques à la migration dans le cadre de la cicatrisation des plaies. La possibilité de préparer un grand nombre de plaies appariés ex vivo pour la guérison de cultures âgées études est un autre avantage de ce modèle. Ainsi, ce système de modèle fournit une occasion unique de démêler les mécanismes de la cicatrisation des plaies et de la thérapeutique de test pour leur effet sur le processus de cicatrisation des plaies. L&#39;ex vivo maquette modèle de chirurgie de la cataracte est prévu d&#39;avoir une large applicabilité, fournissant une ressource essentielle pour les mécanismes de réparation des lésions de l&#39;étude.

<table><tbody><tr><td>Chlorure de sodium (NaCl)</td><td>Fisher</td><td>Scientific S271-3</td><td>Utilisation à 140 mM dans le tampon TD</td></tr><tr><td>Chlorure de potassium (KCl)</td><td>Fisher Scientific</td><td>P217-500</td><td>Utilisation à 5 mM dans le tampon TD</td></tr><tr><td>Phosphate de sodium (Na2HPO4)</td><td>Sigma</td><td>S0876</td><td>Utilisation à 0,7 mM dans le tampon</td></tr><tr><td>TD D-glucose (dextrose)</td><td>Fisher Scientific</td><td>D16-500</td><td>Utilisation à 0,5 mM dans le tampon TD</td></tr><tr><td>Base Tris</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP152-1</td><td>Utilisation à 8,25 mM dans le tampon TD</td></tr><tr><td>Acide chlorhydrique</td><td>Fisher Scientific</td><td>A144-500</td><td>Utilisation pour le pH du tampon TD à 7,4</td></tr><tr><td>Milieu 199</td><td>GIBCO</td><td>11150-059</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Corning/CellGro</td><td>25-005-CI</td><td>Utilisation à 1 % dans le milieu199</td></tr><tr><td>Pénicilline/streptomycine</td><td>Corning/ CellGro</td><td>30-002-CI</td><td>Utilisation à 1 % dans Media199</td></tr><tr><td>Boîtes de Pétri de 100 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875711Z</td><td></td></tr><tr><td>Unité de filtration Stericup</td><td>Millipore</td><td>SCGPU01RE</td><td>Utilisation pour filtrer stériliser les médias</td></tr><tr><td>Pince Dumont #5 (besoin de 2)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Boîte de culture cellulaire de 35 mm</td><td>Corning</td><td>430165</td><td></td></tr><tr><td>27 G 1 ml SlipTip avec aiguille de glissement de précision</td><td>BD</td><td>309623</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux fins</td><td>Outils de sciences fines</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Pinces standard</td><td>Outils de sciences fines</td><td>91100-12</td><td></td></tr><tr><td>Autres articles nécessaires : Instruments de dissection générale, &nbsp ; œufs de poule Leghorn blanc fertiles, incubateur d’œufs de contrôle (humidifié, 37,7 ° ° ; C), capot à flux laminaire, microscope</td><td></td><td></td><td></td> de dissection par stéréovision binoculaire</tr></tbody></table>

création d&#39;une importance clinique<em&gt; ex vivo</em&gt; mock chirurgie de la cataracte modèle pour étudier épithéliale wound repair dans un microenvironnement maternelle

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Le principal obstacle à la compréhension de la façon dont un tissu épithélial effectue la réparation d’une plaie est la disponibilité limitée de modèles dans lesquels il est possible de suivre et de manipuler la réponse de la plaie ex vivo dans un environnement qui imite étroitement celui des lésions du tissu épithélial in vivo. Ce problème a été résolu par la création d’un modèle de réparation ex vivo des lésions épithéliales cliniquement pertinent basé sur la chirurgie de la cataracte. Dans ce modèle de culture, la réponse de l’épithélium du cristallin à la blessure peut être suivie en direct dans le microenvironnement natif des cellules, et les médiateurs moléculaires de la réparation de la plaie peuvent être facilement manipulés pendant le processus de réparation. Pour préparer les cultures, le cristallin est retiré de l’œil et une petite incision est pratiquée dans la partie antérieure du cristallin à partir de laquelle la masse interne des cellules de la fibre du cristallin est retirée. Cette procédure crée une plaie circulaire sur la capsule postérieure du cristallin, l’épaisse membrane basale qui entoure le cristallin. Cette zone de plaie où les cellules fibreuses ont été attachées est située juste à côté d’une monocouche continue de cellules épithéliales du cristallin qui reste liée à la capsule du cristallin pendant l’intervention chirurgicale. L’épithélium blessé, le type de cellule à partir duquel les cellules fibreuses sont dérivées au cours du développement, répond à la lésion de l’élimination des cellules fibreuses en se déplaçant collectivement sur la zone de la plaie, dirigée par une population de cellules de réparation riches en vimentine dont les progéniteurs mésenchymateux sont endogènes au cristallin1. Ces propriétés sont typiques d’une réponse normale de cicatrisation des plaies épithéliales. Dans ce modèle, comme in vivo, la réparation des plaies dépend des signaux fournis par l’environnement endogène qui est maintenu de manière unique dans ce système de culture ex vivo, offrant une occasion idéale pour la découverte des mécanismes qui régulent la réparation d’un épithélium après une blessure.

Ex Vivo modèle créé pour étudier le processus de cicatrisation des plaies dans microenvironnement natif des cellules Pour étudier les mécanismes impliqués dans la régulation de la cicatrisation d&#39;un épithélium sein microenvironnement natif des cellules, un ex vivo maquette modèle de chirurgie de la cataracte cliniquement pertinente a été créé. Ce modèle est créé à partir de tissus de verre qui offre de nombreux avantages en raison de ses propriétés intrinsèques: 1) la l...

décrit ici l’établissement d’un modèle de chirurgie simulée de la cataracte ex vivo cliniquement pertinent qui peut être utilisé pour étudier les mécanismes de la réponse lésionnelle des tissus épithéliaux dans leur microenvironnement natif.

Création d&#39;une importance clinique<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Mock Chirurgie de la cataracte modèle pour étudier épithéliale Wound Repair dans un microenvironnement maternelle

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to ...

L'objectif général de cette procédure est de créer un modèle cliniquement pertinent dans lequel la réparation de la plaie peut être suivie dans son microenvironnement naturel. Cela est réalisé en premier lieu en retirant le cristallin de l'œil d'un embryon de poulet. La deuxième étape consiste à pratiquer une petite incision dans l'antérieur du cristallin.Ensuite, éluerez par voie hydrique la masse des cellules fibreuses du cristallin. Puis, aplatirez la capsule du cristallin avec l'épithélium associé en effectuant des incisions supplémentaires dans la capsule antérieure. La dernière étape consiste à fixer la culture lésée sur la boîte de culture tissulaire afin de suivre la cicatrisation de la plaie au fur et à mesure de son déroulement.En fin de compte, la microscopie enregistrement temporel, la microscopie confocale et l'analyse biochimique sont utilisées pour montrer les mécanismes de réparation des plaies dans un modèle qui reproduit fidèlement l'environnement in vivo. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la cicatrisation, comme la manière dont les cellules se déplacent de façon coordonnée pour refermer la plaie. Bien que cette méthode puisse fournir des aperçus sur le processus de réparation des plaies.Il peut également être appliqué à l'étude de la cicatrisation des plaies ABER, en particulier la fibrose et la formation de cicatrices. Commencez par placer trois boîtes de Pétri de 100 millimètres dans une hotte à flux laminaire stérile. Remplissez deux des boîtes de Pétri à moitié avec du tampon tris glucose à température ambiante, en laissant la troisième vide.Ensuite, retirez un œuf de poussin Leghorn blanc fécondé de 15 jours d’incubation de l’étuveur réglé à 37,7 degrés Celsius et nettoyez l’extérieur de la coquille avec de l’éthanol à 70 % afin de la stériliser. Ensuite, cassez délicatement l’œuf et versez son contenu dans la boîte de Pétri vide de 100 millimètres. À l’aide de pinces standard et de ciseaux fins, décapitez l’embryon et placez la tête dans l’un des compartiments contenant le tampon TST au dextrose.En moins de 15 minutes, déplacer la tête de l'embryon de poulet sur le couvercle d'une boîte de Pétri. Utiliser des pinces de haute précision pour pincer l'arrière de l'œil, créant ainsi une petite ouverture à l'arrière de l'œil. Ensuite, saisir l'humeur vitrée avec les pinces et tirer doucement sur celle-ci en effectuant un mouvement de roulis.Le vitré avec le cristallin attaché va se détacher de l'œil. Placer le cristallin et le vitré dans la boîte de Pétri restante contenant le tampon Tex extras. Laisser les cristallins dans le tampon pendant un maximum de 30 minutes avant de poursuivre la dissection.Ensuite, déplacer le cristallin vers un nouveau couvercle de boîte de Pétri sous un microscope stéréoscopique à l'aide de pinces de précision, puis brosser soigneusement les cellules du corps ciliaire qui ont été détachées avec le cristallin en utilisant le bord de la pince. Puis séparer le cristallin du corps vitré en pincant le corps vitré pour le détacher de son association avec la capsule postérieure du cristallin. Une fois séparé, transférer le cristallin dans une goutte de 200 microlitres de tampon tris-dextrose dans une boîte de culture tissulaire de 35 millimètres, et l'orienter de manière à ce que la face antérieure du cristallin soit dirigée vers le haut.L'antérieur du cristallin est facilement identifiable par la présence d'un anneau dense dans le tissu, qui marque la frontière entre la région intérieure et la région équatoriale de l'épithélium du cristallin. À l'aide de deux pinces de haute précision, pratiquer une petite incision d'environ 850 microns de longueur au centre de la capsule antérieure du cristallin en saisissant le tissu avec une pince dans chaque main et en tirant doucement dans des directions opposées. Ensuite, prendre une seringue d'un millilitre munie d'une aiguille de calibre 27,5 et la remplir avec 300 microlitres de tampon TST au dextrose.Insérez la pointe de l'aiguille dans l'incision pratiquée dans la capsule antérieure du cristallin et à environ mi-chemin dans le cristallin. Appuyez ensuite doucement sur la seringue pour injecter le tampon de dextrose TST dans le cristallin. Masse des cellules fibreuses.Injectez entre 50 et 200 microlitres de tampon pour détacher la masse cellulaire des fibres de l'épithélium environnant et de la capsule du cristallin. N'injectez jamais plus de 300 microlitres. À l'aide de pinces de haute précision, retirez la masse cellulaire des fibres détachée du cristallin par le site d'incision antérieur.Le retrait de la masse des cellules fibreuses de son insertion sur la capsule postérieure crée une zone de lésion hautement reproductible sur la membrane basale, entourée par l'épithélium lésé. À partir de la capsule capsulaire, effectuez cinq incisions dans la partie antérieure du cristallin jusqu'à l'équateur. Aplatir les cinq volets résultants de la capsule du cristallin, avec l'épithélium attaché, dans la boîte de culture, la face capsule vers le bas et la face cellulaire vers le haut.Appuyez doucement avec la pince en chaque point de l'étoile pour fixer la capsule à la boîte. Cela créera une petite indentation au niveau des cinq extrémités les plus externes de l'x explan et assurera une adhérence durable à la boîte. Ensuite, retirez le tampon tris dextrose de la boîte de 35 millimètres et remplacez-le par 1,5 millilitre de M1 99 préchauffé.Milieu supplémenté avec 1 % de L-glutamine et de pénicilline. Recouvrez le plat avec son couvercle et placez-le dans l'incubateur. Placez la boîte de culture sous le microscope stéréoscopique et observez la démarcation entre la zone centrale de migration et la zone d'attachement d'origine des cellules épithéliales.Ensuite, utilisez deux pincettes de haute précision pour saisir le bord des deux côtés de la ligne de démarcation entre les deux zones. Tirez délicatement la zone d'attachement d'origine le long de la ligne afin de séparer facilement les deux zones. Poursuivez la séparation des deux zones tout autour de la culture jusqu'à ce que les deux régions soient complètement dissociées.Étudiez les deux fractions à l'aide de techniques analytiques biochimiques ou moléculaires classiques. Immédiatement après le retrait de la masse des cellules fibreuses, une sous-population de cellules mésenchymateuses de réparation se trouve activée et migre vers le bord de la plaie épithéliale. Ces cellules migrent rapidement vers la région dépourvue de cellules de la capsule de la membrane basale endogène, la zone centrale de migration, pour amorcer le processus de cicatrisation.La plaie étant formée, la technique décrite ici prépare idéalement ce système modèle à l'observation de ce processus au microscope ou à la caméra vidéo. La cicatrisation progresse rapidement, recouvrant une zone importante de la plaie dès le premier jour en culture. Au troisième jour, le processus de cicatrisation est généralement terminé, suite à la séparation entre la zone centrale de migration et la zone d'attachement d'origine. Les différences moléculaires entre ces zones distinctes ont été analysées ici. Les niveaux de la kinase du point d'ancrage ont été mesurés dans les deux zones, et la quantité de kinase du point d'ancrage phosphorylée s'est révélée augmentée dans la zone centrale spécifique à la migration. Une fois maîtrisée, cette technique de simulation de chirurgie de la cataracte peut être réalisée en trois minutes si elle est effectuée correctement. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez bien comprendre comment créer un modèle de simulation de chirurgie de la cataracte qui imite de près la réparation des plaies dans un microenvironnement naturel.

establishment-clinically-relevant-ex-vivo-mock-cataract-surgery-model

Research

Recherche

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologie du développement

Une culture primaire de cellules endothéliales de cornée bovine a été utilisée pour étudier le mécanisme de transition endotheliale de la cornée mésenchymateuses. En outre, un modèle d'endothélium cornéen cryolésion de rat a été utilisé pour démontrer la transition de l' endothélium de la cornée mésenchymateuses in vivo.

In vitro et dans des modèles in vivo pour étudier la transition cornéenne endothéliale-mésenchymateuses

Ce manuscrit décrit comment incision-comme des lésions sur des monocouches de cellules épithéliales cultivées idéalement modèle embobiné guérison in vitro, permettant pour l’imagerie confocale ou microscopie à balayage de laser, et qui peuvent fournir de haute qualité données quantitatives et qualitatives pour l’étude de comportement de la cellule tant les mécanismes impliqués dans la migration.

Méthodes basées sur la microscopie pour l’évaluation de la Migration de cellules épithéliales lors In Vitro la cicatrisation des plaies

Un protocole pour un ancien modèle de culture de cornée orgue vivo utile pour la cicatrisation des études est exposée. Ce système de modèle peut servir à évaluer les effets des agents pour favoriser la guérison régénératrice ou toxicité des médicaments dans un environnement 3D organisé de multicellulaire.

Ex Vivo, modèle de Culture d’organes cornéenne pour la cicatrisation des études

Ici, nous présentons un protocole pour détacher les cellules endothéliales cornéennes (CEC) de la membrane de Descemet (DM) à l’aide d’un neodymium:YAG (Nd:YAG) laser comme modèle de maladie ex vivo pour la kératompathie bullous (BK).

Développement d’un modèle expérimental non invasif assisté au laser de la perte de cellules endothéliales cornéennes

Nous démontrons ici une technique optimisée pour évaluer la réparation des plaies à l’aide de peau humaine ex vivo combinée à une approche de coloration à montage complet. Cette méthodologie fournit une plate-forme préclinique pour l’évaluation des thérapies potentielles des plaies.

Modèle de plaie ex vivo humaine et approche de coloration à montage entier pour évaluer avec précision la réparation de la peau

Ici, un protocole pour créer une plaie d’abrasion épithéliale cornéenne centrale chez la souris à l’aide d’une tréphine et d’un spud de club de golf émoussé est décrit. Ce modèle de cicatrisation des plaies cornéennes est hautement reproductible et est maintenant utilisé pour évaluer la cicatrisation des plaies cornéennes compromises dans le contexte de maladies.

Un modèle d’abrasion épithéliale pour étudier la cicatrisation des plaies cornéennes

Ici, des modèles animaux basés sur la souris et le lapin sont développés pour les lésions mécaniques et chimiques de l’épithélium cornéen afin de cribler de nouveaux traitements et le mécanisme sous-jacent.

Modèles animaux ex vivo et in vivo pour les lésions mécaniques et chimiques de l’épithélium cornéen

Le présent protocole démontre les différentes étapes impliquées dans la blessure de la cornée d’un poussin embryonnaire in ovo. Les cornées régénérantes ou entièrement restaurées peuvent être analysées pour leur potentiel de régénération à l’aide de diverses techniques cellulaires et moléculaires après la procédure de blessure.

Étude de la régénération tissulaire sans cicatrices dans les cornées de poussins embryonnaires blessés

Cet article décrit un protocole visant à simplifier le processus et à rendre la préparation du sérum conditionné autologue (ACS) moins coûteuse. Aucune seringues spéciales ou perles de verre revêtues en surface n’est nécessaire. De plus, l’ACS modifié (mACS) présente des avantages concurrentiels par rapport au sérum autologue conventionnel dans la cicatrisation des plaies cornéennes des yeux murins ex vivo.

Production de sérum conditionné autologue modifié et évaluation ex vivo de son potentiel de guérison dans l’épithélium cornéen murin

Cet article décrit une méthode pour créer des plaies dans l’épithélium d’une Clytia hemisphaerica medusa vivante et imager la cicatrisation des plaies à haute résolution in vivo. En outre, une technique pour introduire des colorants et des médicaments pour perturber les processus de signalisation dans les cellules épithéliales et la matrice extracellulaire pendant la cicatrisation des plaies est présentée.

Caractérisation de la cicatrisation épithéliale in vivo à l’aide de l’organisme modèle cnidaire Clytia hemisphaerica

Cette méthode modélise la chirurgie de la cataracte in vivo en retirant les cellules de fibre du cristallin de souris adultes et en laissant derrière elle le sac capsulaire avec les cellules épithéliales du cristallin (LEC) attachées. La réponse à la blessure est ensuite évaluée à divers moments postopératoires à l’aide de critères moléculaires et morphologiques.

Modélisation de la chirurgie de la cataracte chez la souris

Découvrez comment créer un modèle ex vivo de chirurgie de la cataracte utilisant des embryons de poulet pour étudier la cicatrisation épithéliale. Cette méthode permet d'observer les mécanismes de réparation tissulaire en temps réel.

Création dune importance clinique Ex Vivo Mock Chirurgie de la cataracte modèle pour étudier épithéliale Wound Repair dans un microenvironnement maternelle (Vidéo) | JoVE Journal

Création d'une importance clinique

Explorer plus de vidéos