Name: Caractérisation de la situation dans la Metabolic Nonhuman Primates avec le test de tolérance au glucose intraveineux (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 59 s
Description: Apprenez le test de tolérance au glucose intraveineux chez les macaques pour caractériser la progression des maladies métaboliques. Cette méthode permet d'évaluer le contrôle glycémique et d'établir des cohortes pour la recherche sur le diabète.

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Les auteurs tiennent à remercier le fort soutien du personnel de soins aux animaux DHMRI CLAS, Facility Manager M. Daniel Peralta et vétérinaire traitant, le Dr Glicerio Ignacio, DVM MRCVS.

Toutes les procédures animales ont été approuvées par l&#39;Institut David H. Murdock recherche IACUC situé sur le campus de North Carolina Research (NCRC), sous protocole 14-017, la caractérisation d&#39;un modèle primate non humain du diabète et du prédiabète / résistance à l&#39;insuline et de l&#39;efficacité de la thérapeutique pour améliorer sensibilité à l&#39;insuline et la fonction métabolique. 1. Sélection animale et préparation d&#39;études <ol><li> Sélectionnez l&#39;alimentation et le poids des animaux stables sur la base des relevés mensuels de consommation alimentaire et le poids corporel. NOTE: Les animaux qui ont exposé une récente baisse de l&#39;appétit ne devraient pas être caractérisés jusqu&#39;à ce que leur apport alimentaire est stabilisée. <ol><li> Pour les animaux matures (&gt; 5-6 ans), ne sélectionnez pas les animaux dont le poids entre les mois consécutifs corps diffèrent de plus de 10%, sans examiner d&#39;abord le singe et exclure d&#39;autres causes que la modification du statut métabolique pour le changement dramatique de poids. </li></ol></li><li> Pour le glucose, l&#39;insuline et le C-Peptide analytes, préparer K 2 EDTA prélèvement d&#39;échantillons tubes avec inhibiteur de protéase (aprotinine et DPP4I). NOTE: Le cocktail DPP4I + aprotinine offre un large spectre d&#39;inhibition de la protéase si cela était nécessaire pour des analytes supplémentaires (glucagon, GLP-1). Dans le cas où les analytes supplémentaires ne sont pas collectées, les tubes de sang doivent être préparés de la même façon pour maintenir la cohérence dans le prélèvement d&#39;échantillons. Les échantillons pour essais non validés pour cette méthode doivent être collectés séparément, selon les recommandations du fabricant. <ol><li> Préparer le cocktail d&#39;inhibiteur de la protéase en mélangeant 100 mg d&#39;aprotinine lyophilisée avec 10 ml d&#39;DPP4I. Ajouter 10 ul du mélange d&#39;aprotinine + DPP4I à chaque tube de sang pour chaque millilitre de sang prélevé. </li><li> Ajouter une 10 pl supplémentaires du cocktail d&#39;inhibiteurs de protéase à chaque tube pour un éventuel excédent de collecte. Conserver les tubes de sang traité à -20 ° C jusqu&#39;à utilisation. Gardez les tubes sur la glace mouillée pendant la procedure et de spin à 4 ° C. </li><li> Utiliser un tube de séparation de sérum pour prélever un échantillon de sang à la ligne de base pour l&#39;analyse de la chimie du sérum standard. Pour la Numération de cellules sanguines (CBC), utiliser une norme K 2 EDTA sans inhibiteurs de protéase. Utiliser des cryotubes à plasma et le sérum après aliquote des échantillons de sang ont été centrifugés. </li><li> Etiqueter les tubes de sang et les cryotubes de manière appropriée à l&#39;identification des animaux, la date, la procédure, timepoint, et le volume de l&#39;échantillon. Etiqueter les cryotubes avec l&#39;analyte (s) dans le plasma pour le dosage approprié. </li></ol></li><li> Préparer la chasse d&#39;une solution saline héparinée en injectant 0,15 ml de 1000 unités USP par ml d&#39;héparine dans un sac de 250 ml de solution saline normale. Obtenir une solution de 0,06 mg d&#39;héparine / ml. Dessiner 40 - 60 ml de cette solution dans une serrure saline de rinçage entre les échantillons. Dessinez un supplément de 1 ml et 5 ml dans des seringues séparées pour le rinçage du port de perfusion de dextrose avant et après la perfusion, respectivement. </li></ol> 2.Sédation animale et préparation <ol><li> Retirer les aliments de la cage de l&#39;animal au moins 14 heures avant la procédure, et pas plus de 18 heures. NOTE: Il est important que les animaux soient à jeun pendant la procédure afin d&#39;éviter toute variation post-prandiale dans les valeurs glycémiques. Il est également une précaution pour éviter la régurgitation et l&#39;aspiration du contenu de l&#39;estomac tandis anesthésiés. </li><li> animaux Sobriété pour la durée de la procédure IVGTT avec de la kétamine administrée par voie intramusculaire comme une anesthésie générale, à 10 mg / kg. Administrera kétamine supplémentaire (5 - 10 mg / kg) à des intervalles de 20 - 30 minutes ou selon les besoins, au cours de la procédure. <ol><li> Peser l&#39;animal sous sédation. Placer l&#39;animal dans une position couchée latéralement sur une table de procédure chauffée. </li><li> Surveiller les paramètres cliniques, toutes les 15 à 20 minutes pour assurer que l&#39;animal se trouve dans un plan stable d&#39;anesthésie. Mesurer la fréquence cardiaque (100 - 200 bpm) et SPO 2 (&gt; 92%) avec un oxymètre de pouls. Mesurer la fréquence respiratoire (20 - 50 respirations / min) w<html> vec un chronomètre, comptage respirations visuellement ou à la main plus de quinze secondes et en multipliant par quatre. Mesurer la température (&gt; 97 ° F) par voie rectale. Surveiller la couleur de la muqueuse autour de la gomme et les lèvres (humides, rose). </li></ol></li><li> Préparer deux sites de la canule. Utilisez tondeuses pour couper les cheveux de la zone d&#39;intérêt où le cathéter sera inséré, et stériliser toute la région avec des gommages alternées de chlorhexidine et 70% d&#39;alcool. <ol><li> Placer un cathéter dans la région des veines gauche ou à droite céphalique ou saphènes et l&#39;attacher à une chasse d&#39;eau saline héparine (0,06 mg d&#39;héparine / ml) avec un robinet à trois voies. Ceci est le site de prélèvement de sang d&#39;échantillonnage. </li><li> Placer le second cathéter dans une jambe ou un bras dans la région des veines saphènes ou céphaliques et attacher un orifice. Utilisez ce site pour la perfusion de dextrose. Utilisez un petit, 1 ml de solution saline de rinçage héparinée pour maintenir le brevet de la canule avant la perfusion de dextrose. </li></ol></li></ol>e_title &quot;&gt; 3 Procédure IVGTT. REMARQUE: La procédure IVGTT se compose de 8 sang nul échantillonnage points de temps (tableau 1). <ol><li> Prenez l&#39;échantillon de référence et d&#39;utiliser un glucomètre portatif pour mesurer le taux de glucose sanguin à jeun. Obtenir un échantillon de sérum pour l&#39;analyse de la chimie standard, ainsi que d&#39;un échantillon de sang pour un CBC afin d&#39;évaluer la santé globale de l&#39;animal. Recueillir des échantillons de plasma pour doser les niveaux de glucose et d&#39; insuline à partir de l&#39;échantillon de référence en utilisant un kit validé pour une utilisation avec des macaques selon les instructions du fabricant 8, 9. NOTE: Il est important d&#39;avoir un pré-tirage de 0,5 ml prélevés sur la canule avant de prendre un échantillon pour la collecte de sang pour éliminer le sang résiduel ou de l&#39;héparine dans le cul-de-espace de la canule. </li><li> Après l&#39;obtention de l&#39;échantillon de référence, faire infuser la dose de 50% de glucose (250 mg / kg) pendant 30 secondes dans le port d&#39;infusion de dextrose. REMARQUE: Les modèles à plus forte dose (500 mg / kg) peuvent être utilisés,si la dose doit être fixé dans les procédures afin de faire des comparaisons longitudinales. <ol><li> Rincer le port de perfusion avec 5 ml de solution saline héparinée pour vous assurer qu&#39;il n&#39;y a pas de dextrose à gauche dans le port. La fin de la perfusion est T0. Demandez au technicien de remplacer les gants, comme le dextrose résiduel de la perfusion peut contaminer les échantillons sanguins ultérieurs. </li></ol></li><li> Le premier post-perfusion point de temps d&#39;échantillonnage est au T3 min, à partir de la fin de la perfusion de dextrose, suivie T5 min, T7 min, T10 min, T15 min, T20 min, et le dernier échantillon point de temps est T30 min. Recueillir le plasma de chaque timepoint au dosage du glucose et d&#39;insuline avec l&#39;échantillon de référence (voir étape 3.1). <ol><li> Au T3 min point de temps, utilisez le glucomètre portatif pour vérifier à nouveau le niveau de glucose dans le sang. REMARQUE: Les lectures glucomètre au niveau de référence et T3 sont uniquement destinés à confirmer la perfusion du glucose. Le niveau de glucose dans le sang au T3 min point de temps devrait être co ~ 100 mg / dl supérieurmpared au niveau de glucose dans le plasma à jeun de base. </li></ol></li></ol> 4. Récupération et transformation d&#39;animaux échantillon <ol><li> Retirez les canules et appliquer une pression sur les sites cathétérisés pour hémostase après la T30 min point de temps. Surveiller l&#39;animal jusqu&#39;à ce qu&#39;il ait repris conscience et est assis. Offre d&#39;alimentation une fois que l&#39;animal est complètement rétabli. </li><li> Immédiatement placer chaque échantillon de sang total en K 2 tubes EDTA sur la glace. Centrifuger à 3000 tours par minute à une température de 4 ° C dans les 10 minutes de la collecte. échantillons aliquote de plasma en cryotubes, congeler et conserver à -80 ° C jusqu&#39;à l&#39;analyse. <ol><li> Laisser le sang dans le tube de sérum pour l&#39;analyse de la chimie du sérum étalon reposer à température ambiante pendant au moins 20 minutes et pas plus de 30 minutes avant centrifugation à 3000 tours par minute à température ambiante. Congeler les échantillons de sérum avant d&#39;être testés dans les 48 heures de la collecte. NOTE: Réfrigérer l&#39;ensemble des échantillons de sang prélevés pour l&#39;analyse CBC jusqu&#39;à ce quesayed dans les 24 heures de la collecte. </li></ol></li></ol> 5. Traitement de données <ol><li> Après avoir établi les courbes d&#39;insuline plasmatique et de glucose, de déterminer le taux de clairance de glucose K de la pente du logarithme naturel des valeurs de glucose au- dessus de référence 16, 17. NOTE: Un PSN sain peut être prévu d&#39;avoir un taux de clairance de glucose K bien au- dessus 1, souvent supérieure à 2 ou plus, comme un animal en bonne santé sera souvent revenir à leurs valeurs de glucose de base dans les 30 minutes. Comme la production d&#39;insuline diminue, le taux de clairance de glucose K va baisser de façon plus spectaculaire, tombant en dessous de 1. </li><li> Calculer l&#39;AUC dans son ensemble, comme la somme des totaux de la zone des trapèzes représentant l&#39;aire sous la courbe de chaque segment de ligne entre points de temps, à travers T30 16, 17. NOTE: Traditionnellement, l&#39;AUC des dix premières minutes de la procédure est considérée comme la acute réponse insulinique au glucose (AIR), tandis que l&#39;AUC du 20 dernières minutes de la procédure est considérée comme la réponse de l&#39; insuline en retard (RIL). Comme l&#39;animal devient plus dysmétabolique, l&#39;AUC de l&#39; insuline va augmenter, ce qui reflète une compensation pour l&#39; augmentation insensibilité à l&#39; insuline. Étant donné que les transitions d&#39;animaux vers un diabète patent, cependant, l&#39;ASC va diminuer, souvent d&#39; abord dans la phase aiguë de l&#39; insuline, capturée par l&#39;air. </li></ol>

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Les auteurs sont affiliés à une organisation de recherche sous contrat (Crown Bioscience) active dans le domaine des maladies métaboliques.

Le IVGTT évalue la capacité de libération d&#39;insuline stimulée par le glucose par une seule perfusion de dextrose en fonction du poids du corps 5, 12, 13. De l&#39;essai, le taux de glucose sanguin à jeun et le taux d&#39;insuline est atteint, et il permet une évaluation de la capacité de l&#39;animal à la libération d&#39;insuline et de retourner le niveau de glucose élevé vers la ligne de base. Ceci permet à l&#39;utilisateur des informations pour caractériser l&#39;animal comme le glucose normal et sain...

L&#39;IVGTT est un essai fonctionnel pratique qui est couramment utilisé pour déterminer la fonction β-cellulaire chez l&#39; homme , à différents états métaboliques 5, 7. Dans les modèles animaux de diabète de type 2, il est bien reconnu comme un outil pour caractériser les animaux qui montrent métabolique progression de la maladie de une saine à un état de dysmétabolique hyperglycémique 8, 9. Le modèle animal le plus proche de DT2 est démontrée chez les primates non humains (PSN), dont rhésus et cynomolgus macaques sont des exemples notables. Ces animaux développent naturellement DT2 avec les mêmes facteurs de risque de l&#39; âge et de l&#39; obésité contribue à sa fréquence comme chez les humains 10. En outre, il existe une progression de la maladie et de la pathologie du pancréas similaire montrant des dépôts amyloïdes que la maladie progresse dysmétabolique 11. Nous rapportons ici sur notre méthode standard de l&#39;exécution d&#39;une IVGTT dans les PSN dans le cadre de notre caractérisation de colonie de l&#39;état métabolique chez ces animaux. Cette méthode estfacile à réaliser par rapport à l&#39; autre, beaucoup plus de temps et des techniques coûteuses 2. Le IVGTT est utile pour caractériser une grande colonie d&#39;animaux rapidement et fréquemment. Une fois pris en compte avec le taux d&#39;hémoglobine glyquée (HbA1c), l&#39;histoire l&#39; alimentation et la nourriture de l&#39; apport de l&#39;animal, ainsi que leur pour cent de la masse maigre et la graisse corporelle, la IVGTT est normalement suffisant pour caractériser l&#39; état et la progression du métabolisme de l&#39;animal vers le diabète manifeste 6 , 8. HbA1C représente le niveau glycémique moyenne sur la durée de vie d&#39;une cellule de sang rouge, fournissant une mesure fiable des niveaux de glucose au cours des six semaines précédentes à trois mois. Lorsque mesurée à partir de l&#39;échantillon de sang à jeun base de l&#39;IVGTT, cette valeur fournit une fenêtre sur le contrôle glycémique pendant les mois entre les procédures. Si l&#39;animal est passé d&#39;dysmétabolique à diabétiques depuis leur IVGTT dernière, une valeur d&#39;HbA1C beaucoup plus élevé que leur valeur précédente indiqueraitque la transition a commencé peu après leur IVGTT dernière, alors que, d&#39;une valeur de HbA1C plus proche de leur valeur précédente indiquerait qu&#39;ils ont récemment transition. En général, chez les macaques rhésus, HbA1C valeurs supérieures à 6% sont considérés comme anormaux, et indiquer un mauvais contrôle glycémique 10, 23. glycémies doivent être interprétés dans le contexte du comportement et l&#39;état général de l&#39;animal dans son ensemble. macaques diabétiques - comme les humains - exposition hyperphagie, polydipsie, polyurie et. le logement des animaux de groupe fournit d&#39;importants défis à la mesure de ces indicateurs et la prise en charge individuelle requis pour dysmétabolique et des singes diabétiques. Nous recommandons individuellement le logement des animaux afin que des soins plus personnalisés peuvent être fournis, et des marqueurs comportementaux de la santé du singe plus facilement être surveillé 8. En outre, les macaques diabétiques présenteront une perte de poids, ainsi que d&#39;un profil lipidique élevée (augmentation de lacholestérol, hypertriglycéridémie) et le métabolisme minéral perturbé dans la chimie du sérum. Il est important de mesurer les marqueurs de la fonction hépatique et rénale dans la chimie du sérum, que des dommages à ces organes sont souvent des complications de l&#39; avancement métabolique trouble / diabète, et peuvent être co-déterminants de la glycémie, des lipides et des déséquilibres minéraux 9, 11, 18, 24 . En utilisant cette méthode, les valeurs historiques générées à partir de plusieurs caractérisations fréquentes au cours de la vie d&#39;un singe sont d&#39;une valeur particulière. Si d&#39;autres procédures, comme une pince de glucose ou classé glucose perfusion (GGI), sont nécessaires pour évaluer pleinement la santé d&#39;un animal, il est souvent sur la caractérisation initiale lorsque leur histoire est indisponible. IVGTTs Cependant, une fois une ligne de base a été établie, répétées d&#39;une fréquence de tous les trois mois sont normalement suffisantes pour suivre les progrès d&#39;un animal. Ceci est particulièrement important lorsque les animaux sont enrôlés dans des études multiples à travers unannée civile basée sur leur statut métabolique. Bien que leur santé peut demeurer relativement stable pendant des années à la fois, lorsque l&#39;état métabolique d&#39;un animal se détériore, une augmentation spectaculaire de la résistance à l&#39;insuline et une intolérance au glucose peut se produire très rapidement. Les valeurs d&#39;HbA1c permettent une certaine interpolation de la baisse ou l&#39;amélioration de l&#39;état de santé de l&#39;animal entre les procédures prévues trois mois d&#39;intervalle. Pour cette raison, cette méthode est idéale pour caractériser les animaux utilisés dans de multiples études longitudinales au cours de leur durée de vie naturelle.

<table><tbody><tr><td>Allegra X-15R Centrifugeuse</td><td></td><td></td><td>plasma : 4 &#176 ; C à 3 000 tr/min pendant 10 min</td></tr><tr><td>Sérum de centrifugeuse</td><td></td><td></td> Sorvall ST16R <td>: 22 &#176 ; C à 3 000 tr/min pendant 10 min</td></tr><tr><td>Thermo Scientific -86 &#176 ; C Congélateur, Forma 88000 Series</td><td></td><td>Modèle : 88500A</td><td></td></tr><tr><td>Dextrose 50 % (D50)</td><td>Webster</td><td>07-8008986</td><td>I.V. perfusion de glucose</td></tr><tr><td>3 ml Luer Lock Seringue</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td></td><td>Prélèvements sanguins en série</td></tr><tr><td>5 ml Luer Lock Seringue</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td></td> Sérum <td>sérum héparinisé</td></tr><tr><td>10 ml Luer Lock Suppy</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td></td><td>livraison d’éponges de gaze I.V. D50</td></tr><tr><td>2 x 2</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td>366.23000.4</td><td>Utilisé sec, avec 70 % d’alcool et 2 % de solution Chlorohex</td></tr><tr><td>4 ml de tubes séparateurs de sérum&nbsp ;</td><td>Midwest Veterinary Supply</td><td>366.45000.4</td><td>tube de prélèvement sanguin pour panel superchem</td></tr><tr><td>K2EDTA, 2 ml</td><td>VWR</td><td>95057-239</td><td>tubes de prélèvement sanguin</td></tr><tr><td>Aprotinin, 100 mg</td><td>Sigma</td><td>A1153-100MG</td><td>tube de prélèvement sanguin additif protéase</td></tr><tr><td>22 G x 1" Cathéters</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td>193.75250.2</td><td>Cathéter I.V.</td></tr><tr><td>Bouchon d’injection avec capuchon</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td>001.11500.2</td><td>%50 dextrose port de perfusion</td></tr><tr><td>Porus Tape, 1/2" x 10 yd</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td>001.85000.2</td><td>maintenir l’adhérence des cathéters et de l’hep. Locks</td></tr><tr><td>Chlorhexidine Solution 2 %</td> <td>Midwest Veterinary Suppy</td><td>193.08855.3</td><td>site de cathéter de préparation</td></tr><tr><td>70 % d’éthanol</td><td>VWR</td><td>71001-654</td> garrot de <td>site de cathéter de préparation</td></tr><tr><td></td><td>Webster</td><td>07-8003432</td><td></td></tr><tr><td>robinet d’arrêt à 3 voies</td><td>Midwest Veterinary Supply</td><td>366.28510.4</td><td>serrure hep.</td></tr><tr><td>37" kit d’extension</td><td>Webster</td><td>07-8454200</td><td>serrure hexagonale</td></tr><tr><td>Exel 50-60cc LL Seringues</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td>001.12250.2</td><td>Sérum physiologique hépariné</td></tr><tr><td>250 ml sac 0,9 % sérum physiologique</td><td>Webster</td><td>07-8365593</td><td>chasse d’eau</td></tr><tr><td>1 000 U Héparine, 10 ml</td><td>Webster</td><td>07-883-4916</td><td></td></tr><tr><td>Kétamine (Ketaset) 100&nbsp ; mg/ml</td><td>Fort Dodge</td><td>(AV commandé)</td><td></td></tr><tr><td>Precision Xtra glucose-test strips 50/bx</td><td>Abbott (American Diabetes Wholesale)</td><td>9381599728K7</td><td>test baseline/T3 glycémie</td></tr><tr><td>Masimo Rad 57</td><td>DRE</td><td>6052057V</td><td>pulse-oximeter</td></tr><tr><td>Pavia Thermomètre rectal</td><td>Patterson</td><td>07-8391335</td><td></td></tr><tr><td>Precision Xtra Glucometer</td><td>Abbott</td><td>9381599728K7</td><td>Glucomètre à main</td></tr></tbody></table>

caractérisation de la situation dans la metabolic nonhuman primates avec le test de tolérance au glucose intraveineux

Characterization of Metabolic Status in Nonhuman Primates with the Intravenous Glucose Tolerance Test

Le test de tolérance au glucose par voie intraveineuse (IVGTT) joue un rôle clé dans la caractérisation de l&#39;homéostasie du glucose. Lorsque combiné avec des profils sériques biochimiques, état compris les niveaux de glucose dans le sang à la fois alimenté et à jeun, HbA1c, les niveaux d&#39;insuline, l&#39;histoire clinique de régime alimentaire, la composition corporelle, et l&#39;état de poids corporel, une évaluation du contrôle glycémique normal et anormal peut être faite . Interprétation d&#39;un IVGTT se fait par la mesure des changements dans les niveaux de glucose et d&#39;insuline dans le temps par rapport au défi dextrose. Les composants critiques à prendre en compte sont: des pics de glucose et d&#39; insuline atteint par rapport à T0 (fin de la perfusion de glucose), le taux de clairance de glucose K dérivée de la pente de la clairance rapide du glucose dans les 20 premières minutes (T1 à T20), le temps pour revenir à la ligne de base de glucose, et l&#39;aire sous la courbe (AUC). Ces mesures de IVGTT montrera des changements caractéristiques que se déplace l&#39; homéostasie du glucose à partir d&#39; un t sainoa état métabolique malade 5. Ici, nous allons décrire la caractérisation des primates non humains (rhésus et cynomolgus macaques), qui sont le modèle le plus pertinent des animaux du diabète de type II (DT2) chez l&#39;homme et l&#39;IVGTT et les profils cliniques de ces animaux d&#39;un sain maigre, à dysmétabolique obèses, et de l&#39; état 8, 10, 11 DT2.

Les résultats représentés sur la figure 1 sont démonstratives des courbes typiques de glucose et d&#39; insuline à partir matures, saines et diabétiques macaques cynomolgus au cours d&#39;une 30 min IVGTT. Les données provenant des singes diabétiques sains et avancés sont présentés dans le but de comparer les différences évidentes entre les animaux des deux extrémités de la gamme de la caractérisation métabolique. Ce protocole de IVGTT a été utilisé avec succès par les a...

L&#39;objectif de ce protocole est de présenter une méthode standard pour effectuer des tests de tolérance au glucose par voie intraveineuse (IVGTTs) pour évaluer le contrôle glycémique chez les primates non humains et d&#39;évaluer leur état métabolique de santé à dysmétabolique.

Caractérisation de la situation dans la Metabolic Nonhuman Primates avec le test de tolérance au glucose intraveineux

The intravenous glucose tolerance test (IVGTT) plays a key role in the characterization of glucose homeostasis. When taken together with serum biochemical ...

L'objectif général de ce test de tolérance au glucose intraveineux, ou IVGTT, est de caractériser la progression de la maladie métabolique chez les macaques, depuis un état sain jusqu'à un état dysmétabolique et hyperglycémique. Cette méthode peut être utilisée pour constituer des cohortes de sujets stratifiés selon leur statut métabolique, en vue d'études alimentaires ou pharmacologiques évaluant l'efficacité thérapeutique de traitements contre l'insulino-résistance dans le diabète. Le principal avantage de cette technique est qu'elle est facile à réaliser par rapport à d'autres méthodes plus longues et coûteuses.14 à 18 heures avant de commencer la procédure, retirez la nourriture de la cage du macaque afin d'éviter toute variation postprandiale des valeurs glycémiques. Le lendemain matin, pesez l'animal sédaté. Ensuite, placez le primate en position décubitus latéral sur une table de procédure chauffée.Toutes les 15 à 20 minutes, utilisez un oxymètre de pouls pour mesurer la fréquence cardiaque et la saturation en oxygène de la capillarité périphérique. Utilisez un chronomètre pour mesurer la fréquence respiratoire et un thermomètre pour mesurer la température par voie rectale. Vérifiez également à chaque contrôle des paramètres cliniques que la muqueuse entourant les gencives et les lèvres est humide et rose.Après avoir confirmé l'état de santé de base de l'animal, utilisez un tondeur pour raser les poils des zones où les cathéters seront insérés, puis stérilisez les deux régions à l'aide de frictions alternées de chlorhexidine et d'alcool à 70 %. Une fois les sites prêts, insérez le premier cathéter et reliez l'appât à une perfusion de sérum salin hépariné à l'aide d'un robinet en té. Ce site sert au prélèvement sanguin d'échantillonnage.Fixez le robinet avec du ruban adhésif pour le maintenir en place sur la branche. Le positionnement du cathéter est essentiel pour assurer la perméabilité et permettre des prélèvements sanguins sériés précis. Il est donc important de choisir une région médiale et plus proximale de la veine saphène afin de fixer et manipuler facilement le système de verrouillage avec la solution de rinçage héparinée.Ensuite, placer le deuxième cathéter et fixer un accès pour l'infusion de dextrose, suivie de l'administration d'un lavage de un millilitre de sérum salé hépariné afin de maintenir la canule perméable jusqu'à l'infusion de dextrose. Fixer l'accès sur le bras à l'aide de ruban adhésif pour le sécuriser. Une fois les deux cathéters en place, prélever un échantillon de référence et utiliser un glucomètre portatif pour mesurer le taux de glucose sanguin à jeun.Prélevez un échantillon de sérum pour l'analyse biochimique standard, ainsi qu'un échantillon de sang total pour un comptage sanguin complet afin d'évaluer l'état de santé général de l'animal. Inversez l'échantillon de sang total. Après chaque prélèvement sanguin, mélangez les échantillons dans des tubes EDTA contenant les inhibiteurs de protéases.Après avoir obtenu les échantillons de base, administrer la dose de dextrose à 50 % en 30 secondes par le port d'infusion de dextrose. Ensuite, rincer avec cinq millilitres de sérum salé hépariné afin qu'aucun résidu de dextrose ne demeure dans le port. À la fin de l'infusion, changer les gants, car le résidu de dextrose provenant de l'infusion pourrait contaminer les prélèvements sanguins ultérieurs.Le premier prélèvement post-perfusion est effectué trois minutes après la fin de l'infusion de dextrose, suivi de prélèvements aux temps T cinq, sept, 10, 15 et 20 minutes, le dernier prélèvement étant obtenu à T 30 minutes. Centrifuger les échantillons destinés à l'analyse du glucose et de l'insuline dans les 10 minutes suivant le prélèvement, puis aliquoter le plasma dans des cryotubes pour congélation et stockage à moins 80 degrés Celsius, jusqu'à l'analyse ultérieure des échantillons. Lors du prélèvement à T trois minutes, utiliser le glucomètre de poche pour vérifier le taux de glucose sanguin afin de confirmer l'efficacité de l'infusion de dextrose.Lorsque le dernier prélèvement a été effectué, retirez les canules en appliquant une pression sur les sites cathétérisés afin d'obtenir une hémostase, puis surveillez l'animal jusqu'à ce qu'il soit complètement rétabli. Ci-dessous, on observe les courbes typiques de glucose et d'insuline chez des macaques cynomolgus adultes sains et diabétiques au cours d'un test de tolérance au glucose intraveineux (IVGTT) de 30 minutes. Les valeurs basales de glucose à jeun chez les macaques sains peuvent être aussi basses que 50 à 60 milligrammes par décilitre, avec une augmentation initiale de la glycémie observée au temps T de trois minutes.Cela est nettement inférieur à l'augmentation typique de la glycémie plasmatique observée chez les animaux diabétiques. Au cours de la procédure, les niveaux de glucose chez les animaux sains reviennent souvent à leurs valeurs de base, tandis que les niveaux chez les animaux désmétaboliques et diabétiques ne le font pas. La courbe d'insuline accompagnant celle d'un animal sain présente deux pics, correspondant à une diminution initiale rapide de la glycémie, largement médiée par les effets périphériques de l'insuline sur le transport et la captation du glucose.L'ampleur de ces effets périphériques, même durant la première phase de la réponse à l'insuline, n'égale pas la contribution du foie à la diminution de la glycémie, qui, pendant le second pic d'insuline, plus faible mais plus prolongé, exerce l'impact le plus important sur les taux glycémiques par la suppression de la production endogène de glucose. Une fois qu'un animal est devenu fortement diabétique, la production d'insuline en réponse au bolus de dextrose diminue fortement. Les taux glycémiques resteront élevés tout au long de la procédure.Comme pour le glucose, l'élimination est désormais assurée presque entièrement par des mécanismes indépendants de l'insuline. Après cette procédure, d'autres méthodes telles que l'infusion progressive de glucose ou la technique du clamp euglycémique hyperinsulinémique peuvent être réalisées afin de répondre à des questions supplémentaires concernant la sensibilité à l'insuline. N'oubliez pas que manipuler des aiguilles exposées au sang de macaque peut présenter un danger extrême, en raison du risque d'exposition au virus de l'herpès B.Des précautions, telles que le port d'équipements de protection individuelle adéquats et une extrême prudence lors de la manipulation d'objets tranchants, doivent toujours être observées lors de l'exécution de cette procédure.

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Cette vidéo explique comment effectuer un test de tolérance au glucose par voie orale sur une souris de laboratoire.

Test de tolérance au glucose par voie orale (OGTT) : mesure du métabolisme du glucose chez la souris

L’article décrit la génération et la caractérisation métabolique de chez les souris nourries à la diète riche en gras comme un modèle de résistance à l’insuline induite par le régime alimentaire et l’obésité. Il dispose également des protocoles détaillés pour effectuer l’épreuve d’hyperglycémie provoquée par voie orale et le test de tolérance de l’insuline, suivi des altérations du corps entier de glucose métabolisme in vivo.

Étude In Vivo du métabolisme du Glucose à haute teneur en graisses régime chez les souris nourries avec épreuve d’hyperglycémie provoquée par voie orale (HGPO) et Test de tolérance à l’insuline (ITT)

L’incidence de l’obésité augmente et augmente le risque de maladies pulmonaires chroniques. Modèles sont nécessaires pour établir les mécanismes sous-jacents et des stratégies préventives, animal bien défini. Ici, nous fournissons trois méthodes (épreuve d’hyperglycémie provoquée, pléthysmographie de corps et fixation du poumon) pour étudier l’effet de l’obésité sur résultats pulmonaires chez des souris.

Test de tolérance au Glucose intrapéritonéal, mesure de la fonction pulmonaire et la Fixation du poumon pour étudier l’Impact de l’obésité et des troubles du métabolisme sur résultats pulmonaires

Ce protocole décrit l’utilisation d’un analyseur de composition corporelle et le système de surveillance animale métabolique pour caractériser la composition corporelle et des paramètres métaboliques chez les souris. Un modèle de l’obésité induit par l’alimentation riche en graisses est utilisé à titre d’exemple pour l’application de ces techniques.

Composition corporelle et l’analyse mise en cage métabolique in Mice Fed graisse haute

L'article actuel décrit un protocole détaillé pour le jeûne intermittent isocalorique 2:1 pour protéger et traiter contre l'obésité et le métabolisme altéré de glucose dans les souris sauvages-type et ob/ob.

Évaluation des effets métaboliques du jeûne isocalorique 2:1 intermittent chez les souris

Ce protocole démontre la mesure précise et reproductible de la consommation d'oxygène dans les îlots pancréatiques non-humains de primate. Les techniques de chargement des îfles et le revêtement de la microplaque fournissent un cadre pour une mesure efficace de la respiration dans d'autres types de sphéroïdes cultivés.

Analyse de la consommation d'oxygène des primates non humains

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Nous présentons ici un protocole pour quantifier l’importance physiologique de l’impact de l’activité du tissu adipeux brun (MTD) sur le métabolisme humain. Ceci est réalisé en combinant la charge glucidique et la calorimétrie indirecte avec des mesures des changements supraclaviculaires de température. Cette nouvelle approche peut aider à développer une cible pharmacologique pour la thermogenèse des MTD chez l’homme.

Utilisation d’une combinaison de calorimétrie indirecte, de thermographie infrarouge et de glycémie pour mesurer la thermogenèse du tissu adipeux brun chez l’homme

Une batterie de tests (IMAP) pour effectuer une évaluation en profondeur de auditives et les capacités cognitives qui contribuent à l'écoute est décrite. Il est rapide à administrer, adaptées aux enfants et libre de confond linguistique. Génération de stimulus et de la gestion du protocole sont contrôlés via une plate-forme logicielle (RSI-STAR) pour assurer des procédures reproductibles.

Faire sens de l&#39;écoute: la batterie de test IMAP

Apprenez le test de tolérance au glucose intraveineux chez les macaques pour caractériser la progression des maladies métaboliques. Cette méthode permet d'évaluer le contrôle glycémique et d'établir des cohortes pour la recherche sur le diabète.

Caractérisation de la situation dans la Metabolic Nonhuman Primates avec le test de tolérance au glucose intraveineux

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