Name: Préparation Facile et efficace de glycopolymères fluorescentes Tri-composants par polymérisation RAFT-contrôlée (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 54 s
Description: Découvrez la synthèse de glycopolymères fluorescents par polymérisation RAFT contrôlée. Cette méthode produit des polymères à faible dispersité pour l'étude des interactions glucides-protéines en glycobiologie.

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Ce travail a été soutenu par les laboratoires de chimie de la station expérimentale de l’Université du Missouri et par l’Association de la fibrose kystique du Missouri.

1. Synthèse de Glycomonomer 2-Lactobionamidoethyl méthacrylamide <ol><li> Dissoudre 2 g d&#39;acide lactobionique dans 3,0 ml de méthanol anhydre et ajouter lentement de l&#39;éthanol absolu dans un sage mode goutte jusqu&#39;à ce que la solution devient simplement nuageux, puis retirer les solvants via rotoévaporation. </li><li> Dissoudre le résidu, de l&#39;étape 1.1, dans 3,0 ml de méthanol anhydre et, une fois de plus, ajouter lentement de l&#39;éthanol absolu jusqu&#39;à tout trouble, puis évaporer les solvants via rotoévaporation. Répéter cette étape trois fois pour obtenir lactobiono-1,5-lactone (1,94 g, rendement de 98%). Ce produit est d&#39;une pureté suffisante pour être utilisé dans les réactions suivantes. </li><li> Ajouter 1,0 g de lactobionolactone dans 3,0 ml de methanol à N - (2-aminoéthyl) méthacrylamide (AEMA, 0,58 g) et de l&#39;éther monométhylique d&#39;hydroquinone (MEHQ, 1,0 mg), un inhibiteur d&#39;auto-polymérisation, dans 2,0 ml de methanol, puis par 1,0 ml de triéthylamine. Agiter à température ambiante pendant 48 h. </li><li> Ajouter 20 ml de H 2 O déminéralisée (DH 2 </sub&gt; O) dans le ballon de réaction, puis retirez le méthanol et de triéthylamine libre par évaporation à sec via rotoévaporation. </li><li> Pour éliminer l&#39;acide lactobionique restant, ajouter 20 ml de dH 2 O, puis passer la solution aqueuse à travers une colonne d&#39;échange d&#39;anions (forme OH -, 10 mm x 20 mm) dans un bécher de réception contenant 1,0 mg de MEHQ. </li><li> Retirer triéthylamine, produite à l&#39;étape 1.5, en évaporant à sec via rotoévaporation. </li><li> Ajouter 20 ml de dH 2 O et retirer réagi AEMA en ajoutant lentement 1 mg aliquotes de résine échangeuse de cations (forme H +) jusqu&#39;à ce qu&#39;il ne ninhydrine matériaux réactifs sont détectables. Surveiller le retrait en prenant 1 pl aliquotes de la solution après chaque addition de résine, en l&#39;appliquant sur une plaque de Chromatographie en couche mince, puis la pulvérisation de la plaque avec un ninhydrine 2% dans une solution d&#39;éthanol. Lorsque aucune couleur bleu profond est observé à se développer lorsque la plaque est chauffée à 90 ° C pendant 1 min, le point final a été atteint. </li><li&gt; filtre la solution à travers un entonnoir en verre fritté, transférer le filtrat dans un tube à essai, congeler l&#39;échantillon à -80 ° C, puis lyophiliser. </li><li> Retirer MEHQ de l&#39;échantillon par dissolution de la matière lyophilisée dans un minimum de méthanol (~ 0,5 ml), puis ajouter de l&#39;acétone anhydre froid (-20 ° C, 15 ml) pour précipiter le produit. Recueillir le précipité par filtration en utilisant un entonnoir en verre fritte, puis sécher le précipité dans un dessiccateur sous vide pour obtenir le 2-méthacrylamide lactobionamidoethyl (LAEMA) sous forme de poudre blanc cassé (0,94 g, rendement de 68%). Ce produit est d&#39;une pureté suffisante pour être utilisé dans les réactions suivantes. </li></ol> 2. Synthèse de monomère 2-Gluconamidoethyl méthacrylamide Note: La préparation de la 2-gluconamidoethyl méthacrylamide (GAEMA), qui ne possède pas un sucre pendentif, a été adapté à partir d&#39;une méthode publiée 15. <ol><li> Ajouter 2,0 g de AEMA dissous dans 10 ml de methanol à une solutionde D-gluconolactone (1,6 g) dans 30 ml de methanol et, sous agitation, ajouter lentement 1,6 ml de triéthylamine. </li><li> Agiter le mélange réactionnel à température ambiante pendant 24 h. </li><li> Filtrer le produit précipité à l&#39;aide d&#39;un entonnoir en verre fritté et rincer le précipité trois fois avec 10 ml chacune d&#39;isopropanol, puis laver avec 10 ml d&#39;acétone. Sécher le produit précipité dans un dessiccateur sous vide. </li></ol> 3. RAFT glycopolymère Synthèse <ol><li> Pour retirer le MEHQ présent dans N commercial inhibiteur - (2-hydroxyéthyl) acrylamide (HEAA), ajouter 1 ml de HEAA dans un tube de microcentrifugation de 2 ml, puis on ajoute 0,5 g de nanoparticules d&#39;oxyde d&#39;aluminium. Centrifuger le tube à 300 g pendant 30 sec, et d&#39;utiliser la couche supérieure HEAA dans la réaction suivante. </li><li> Ajouter avec précaution 32,8 mg de LAEMA (70,0 pmol), 1,7 mg de AEMA (10,5 pmol) et 27,5 ul de HEAA (270 pmol), le tout dissous dans 0,4 ml de dH 2 O, dans un tube de Schlenk de 1 ml bien nettoyé, ainsi ayant une Monomer rapport molaire de 20: 3: 77. </li><li> Dans une réaction parallèle, afin de produire des polymères de contrôle qui ne possèdent pas de sucre pendentif, au lieu d&#39;utiliser LAEMA à l&#39;étape 3.2, substituer 21,4 mg de GAEMA (70,0 pmol) dans la réaction. </li><li> Pour le tube de Schlenk respective (ie, 3.2 ou 3.3), ajouter successivement 50 ul de DMF contenant 0,53 mg de (acide 4-cyanopentanoïque) -4-dithiobenzoate (1,9 pmol, l&#39;agent RAFT), et 50 pi de DMF contenant 250 ug de 4,4-azobis- (acide 4-cyanovalérique) (0,9 pmol, initiateur). Mélanger délicatement par tapotement des doigts. </li><li> Congeler le contenu contenues dans le tube de Schlenk employant une glace sèche: bain d&#39;éthanol (75 g de glace sèche dans 100 ml d&#39;éthanol), appliquer un vide au sein de 10-50 mTorr, puis fermez le robinet de Schlenk et permettre la solution de décongeler lentement à température ambiante . Répétez ce cycle gel-dégel évacuer deux fois de plus. Veiller à ce que tous les réactifs sont dissous après le dernier dégel. </li><li> Placez le tube de Schlenk dans un ba plastique refermableg, évacuer l&#39;air du sac, puis le sceller. Transférer le sac contenant le tube de Schlenk à un bain d&#39;eau préchauffé à 70 ° C et incuber pendant 24 heures. </li><li> Transférer avec précaution la solution dans le tube de Schlenk dans un sac de dialyse prêt (MWCO = 3,500), et on dialyse contre dH 2 O (2 x 10 L) pendant 24 heures, en changeant la dH 2 O toutes les heures pendant les 8 premières heures. Après dialyse, transférer l&#39;échantillon du tube de dialyse dans un tube à essai, congeler l&#39;échantillon à -80 ° C, puis il lyophiliser. </li></ol> Remarque: La résultante statistique poly-méthacrylamide / acrylamide (PMA) des copolymères contenant pendentif 4- O -β-D-galactopyranosyl-D-gluconamide (lactobionamide) (de l&#39;étape 3.2) ou D-gluconamide (de l&#39;étape 3.3), respectivement, sont obtenu. Pour la commodité de la discussion, ces deux glycopolymères sont abrégés comme PMA-LAEMA et PMA-GAEMA, respectivement. 4. Post-modification de glycopolymères avec des fluorophores </p&gt; <ol><li> Dissoudre 5,0 mg de glycopolymère PMA-LAEMA ou PMA-GAEMA contenant ~ 0,9 umoles de groupes fonctionnels de type amine primaire dans 0,9 ml de solution saline tamponnée au phosphate (PBS, phosphate de sodium 0,1 M, 0,15 M de NaCl, pH 7,5), respectivement. </li><li> Ajouter lentement 0,6 mg d&#39;ester de succinimidyle de carboxyfluorescéine dans 100 pi de DMF à la solution sous agitation rapide. Incorporer délicatement les réactions pendant 16 heures dans l&#39;obscurité à la température ambiante. </li><li> Bien protégé de la lumière, de charger l&#39;échantillon dans un tube de dialyse prêt (MWCO = 3,500) et dialyser contre dH 2 O (2 L) pendant 16 heures, en changeant la solution de dialyse toutes les heures pour les 8 premières heures. Après dialyse, transférer l&#39;échantillon du tube de dialyse dans un tube à essai, congeler l&#39;échantillon à -80 ° C, puis il lyophiliser. </li></ol> Remarque: la suite de la lyophilisation, glycopolymères fluorescentes PMA-LAEMA-fluorescéine et PMA-GAEMA-fluorescéine, respectivement, sont obtenues. 5. Caractérisation de la Glycopolymères <ol><li> Calculer le nombre moyen de poids moléculaire (M n), le poids moléculaire moyen (M w) de poids et la dispersité (Mw / Mn) des glycopolymères sur un système de CLHP commercial équipé d&#39;une Chromatographie par permeation de gel (GPC) logiciel, un GPC colonne convenable pour le poids moléculaire d&#39;intérêt, et un détecteur d&#39;indice de réfraction, en utilisant 0,1 M de tampon Tris / 0,1 M de chlorure de sodium (pH 7) comme éluant à un débit de 0,6 ml / min 14 d&#39;écoulement. Utiliser les normes de polyéthylèneglycol comme étalons de poids moléculaire (PM: 200-1,200,000 g / mol). </li><li> Quantifier les concentrations réelles de groupes fonctionnels amine primaire dans les glycopolymères 16. Analyser la teneur totale en glucides des glycopolymères synthétisés selon une méthode publiée 17. </li><li> Effectuer des essais de composition de structure et la pureté du glycomonomers LAEMA, GAEMA et glycopolymères PMA-LAEMA, PMA-GAEMA dans D 2 O par spectroscopie RMN 14. </li></ol> 6. Les essais de liaison de l&#39;glycopolymères synthétiques avec lectine billes revêtues d&#39;agarose <ol><li> Ajouter 1,5 ml de PBS à 50 pi de suspension de Erythrina lectine (ECL) des billes d&#39;agarose revêtues d&#39;crista-galli, centrifuger à 300 g pendant 1 min, et soigneusement enlever et éliminer le surnageant. Répétez cette étape deux fois, puis remettre en suspension les perles dans 0,5 ml de PBS. </li><li> Ajouter 3 pg de PMA-LAEMA-fluorescéine ou PMA-GAEMA-fluorescéine (contrôle négatif) dans 6 pi de PBS à la suspension des perles, et incuber les mélanges, dans l&#39;obscurité, à température ambiante pendant 1 h. </li><li> Laver les mélanges avec 1,5 ml de PBS trois fois et les billes de remettre en suspension dans 0,2 ml de PBS. Chargez une aliquote (4 pi) dans un puits sur une lame immunofluorescence de microscope (revêtement téflon), couvrir avec une lamelle, et d&#39;observer par microscopie de fluorescence à l&#39;aide d&#39;un filtre FITC (excitation longueur d&#39;onde: 467-498 nm, longueur d&#39;émission: 513- 566 nm) et un objectif 10X pour examiner la liaison de til fluorescent glycopolymères avec les billes 14. </li></ol>

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</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Un protocole facile et efficace pour glycopolymères fluorescentes à base de RAFT tri-composant, avec et sans un glucide pendentif, et leur utilisation dans un test de lectine de liaison, est démontré dans ce rapport. Le protocole commence avec la préparation de glycomonomers LAEMA et GAEMA. Grâce à un RAFT contrôlée copolymérisation en une étape, avec un rendement reproductible glycopolymères, la composition de monomères et prévisible faible dispersité, sont obtenus. Après post-modification de glycopolymères avec ester carboxyfluorescéine succinimidyl, la liaison de l&#39;glycopolymère marqué par fluorescence respective résultant est facilement vérifiable pour sa spécificité de la lectine de liaison. Dans les étapes de préparation initiale des glycomonomers qui doivent être utilisés dans les synthèses ultérieures de glycopolymère, l&#39;acide lactobionique facilement disponibles et ont été utilisés gluconolactone. En théorie, tous les glucides de l&#39;intérêt, de monosaccharides à oligosaccharides complexes, peuvent être converted pour glycomonomers en conjuguant le sucre cible sur le groupe hydroxyle primaire en C6 de glucose. À la suite de l&#39;oxydation du résidu de la réduction du glucose, et sa déshydratation subséquente à une lactone, le produit peut ensuite être facilement mis à réagir avec l&#39;aminé primaire sur AEMA pour former le glycomonomer correspondant. D&#39;autres exemples de cette route peut être vu dans un récent rapport 14. Il convient de noter que, avant d&#39;entreprendre toute étape de polymérisation, MEHQ, un inhibiteur de polymérisation efficace, doit être retiré de toutes les préparations de monomères et glycomonomer juste avant l&#39;utilisation. Cela est aisément réalisé en utilisant le minimum de méthanol pour dissoudre le glycomonomer qui possède MEHQ puis traiter immédiatement avec de l&#39;acétone à -20 ° C pour précipiter le produit exempt d&#39;inhibiteur avec un rendement élevé. Essentiel dans tout régime de polymérisation radicalaire, attention au détail et des puretés monomères sont mis en évidence. Comme il est typique d&#39;un système de polymérisation RAFT, il consiste àune source de radicaux, un agent de RAFT, un monomère et de solvant. Dans cette présentation visualisées, un système de polymérisation RAFT en une seule étape est décrite qui met l&#39;accent sur la production de copolymères statistiques générées à partir d&#39;un mélange réactionnel possédant trois monomères différents dans une solution aqueuse. Deux réactions de RAFT médiée par différents sont présentés dans lequel une glycomonomer utilise une suspension qui possède une, extrémité non réductrice d&#39;hydrate de carbone (par exemple, β-D-galactose), et l&#39;autre, possédant un polyol sans résidu hydrate de carbone lié. Commun aux deux réactions à médiation étaient RAFT des monomères possédant un groupe hydroxyle unique qui sert de molécule d&#39;espacement, et un autre possédant une amine libre de post-modification avec un fluorophore amino-réactif. Puisque la présence d&#39;oxygène dans le mélange de réaction et de l&#39;environnement est préjudiciable à la polymérisation RAFT médiation, son retrait de retracer les niveaux est facilement réalisée via plusieurs épisodes de gel-evaCuate-dégel cycles tout en maintenant le récipient de réaction en tube de Schlenk sous vide poussé. Il convient de noter que le rapport molaire de monomères différents dans la réaction peut être ajustée selon les besoins. En outre, en faisant varier la quantité d&#39;agent RAFT utilisé, la longueur des polymères obtenus peut être contrôlée 18. Cependant, le rapport molaire de l&#39;agent de RAFT à l&#39;initiateur doit toujours être supérieure à deux pour assurer la faible polydispersité du produit. Dans ces conditions, l&#39;évolution de la copolymérisation est stable, et la reproductibilité de la réaction est très élevée. Cela étant dit, il est peu probable que l&#39;on obtient une répartition totalement uniforme de tous les monomères participant à l&#39;intérieur d&#39;un copolymère statistique, en raison de leur vitesse de polymérisation différents. La caractérisation de la distribution des différents monomères dans le polymère est encore très difficile. Le procédé de post-modification, présentée ici, est à la fois plus simple et plus amenable à l&#39;utilisation d&#39;un plus grand choix de marqueurs fluorescents, par rapport à d&#39;autres protocoles appliqués aux glycopolymères d&#39;étiquettes 2,11. Celles-ci comprennent la plupart des fluorophores réagissant avec les amines solubles dans l&#39;eau, les points quantiques, biotine, et autres. Les spécificités de liaison des glycopolymères, marqués synthétisés sont facilement vérifiables utilisent lectines avec les affinités de liaison connus. PMA-GAEMA possédant pas de sucre pendentif est un contrôle négatif approprié. Glycopolymères avec différentes étiquettes fluorescentes préparés par cette voie ont été utilisés avec succès dans les enquêtes de la lectine à médiation bactérienne liaison 14. Comme présenté, cette préparation facile et efficace de glycopolymères fluorescentes statistiques devrait fournir un grand potentiel pour une grande variété de la recherche glycobiological.

Dans les deux dernières décennies, des enquêtes avec glycopolymères synthétiques ont connu un développement lent mais continu, ce qui démontre un potentiel important dans l&#39;examen des mécanismes infectieuses telles que la recherche qui se concentre sur la reconnaissance lectine traite 1-3. Depuis glycopolymères synthétiques possédant des fragments de sucre polyvalents présentent beaucoup plus élevés efficacités de lectine de liaison, par rapport aux glucides monovalents, ils sont d&#39;une grande demande dans le domaine de la glycobiologie 3. D&#39;un intérêt particulier dans la recherche clinique est l&#39;utilisation de glycopolymères fluorescents pour caractériser la liaison avec des glucides disponibles sur la surface des cellules respiratoires humaines et glycoprotéine muqueuse bactérienne de lectine-médiation. Début des études in vitro utilisé commercialement disponibles glycopolymères base de polyacrylamide dans des tests de liaison bactériennes. Plusieurs de ces sondes ont montré des résultats prometteurs, mais ont soulevé des préoccupations concernant les écarts, facilité d&#39;obtention, et lot-à-lot à la fois polpoids moléculaire Ymer et le contenu de glycoepitope. Un protocole économique en laboratoire a été élaboré qui donnerait pour un contrôle satisfaisant de la teneur en structure, la taille, et la pureté de glycopolymères synthétiques ciblant lectines bactériennes. A la recherche d&#39;une approche synthétique appropriée à glycopolymères, une technique relativement nouvelle de polymérisation a été testé en utilisant un type de polymérisation radicalaire contrôlée qui employait réversible par addition-fragmentation de transfert de chaîne (RAFT) 4 agents. Ces réactifs RAFT ont été récemment utilisé dans quelques préparations glycopolymère 5-7. Par rapport aux autres protocoles de préparation de glycopolymère, des polymérisations RAFT médiée démontrent plusieurs avantages, y compris la tolérance à une variété de structures monomères et les conditions de réaction, la compatibilité potentielle avec des solutions aqueuses, et une faible dispersité de taille des produits polymères souhaités 8,9. D&#39;intérêt considérable existe des protocoles pour la préparation du RAFT-baglycopolymères tri-composant SED, permettant le contrôle des compositions de monomères différents, dont chacun peut avoir des fonctions distinctes 10-13. Cependant, la plupart des travaux de recherche antérieurs soit manqué anomériques hydrates de carbone pendants 10, ou employer intensifié polymérisations en résultent dans les copolymères tri-séquencés, qui se composent d&#39;homopolymères liés de manière covalente, qui servent souvent des fins différentes de celles des polymères statistiques qui sont des copolymères dans lesquels la séquence de monomère résidus suivent une règle statistique 9-13. Récemment, en utilisant le composé du RAFT thiocarbonylthio (acide 4-cyano pentanoïque) -4-dithiobenzoate dans un environnement aqueux, la préparation d&#39;un groupe de RAFT repose-glycopolymères statistiques tri-composant linéaires contenant des sucres suspensions spécifiques et leur application à la lectine à médiation par la liaison bactérienne des tests ont été signalés 14. L&#39;objectif global de cette méthode, présentée d&#39;une manière visuelle, est de préparer trois composantsglycopolymères fluorescentes statistiques via copolymérisation RAFT-contrôlée. En raison de la facilité du protocole de polymérisation en une seule étape, le contrôle précis sur la longueur et des compositions de polymères, et la grande reproductibilité de la réaction, ce protocole peut être facilement appliquée à d&#39;autres synthèses sur la base de RAFT-glycopolymères avec structures désirées.

<table><tbody><tr><td colspan="4"><fort>Réactif</fort></td></tr><tr><td>Acide lactobionique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>153516</td><td></td></tr><tr><td>D-Gluconolactone&nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G2164</td><td></td></tr><tr><td>N-(2-hydroxyéthyl)acrylamide (HEAA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>697931</td><td></td></tr><tr><td>Sel de sodium Orange II</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O8126</td><td></td></tr><tr><td>Éther monométhylique d’hydroquinone (MEHQ)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>54050</td><td>Inhibiteur de polymérisation</td></tr><tr><td>N-(2-aminoéthyl) chlorhydrate de méthacrylamide (AEMA)</td><td>Polysciences, Inc</td><td>24833-5</td><td></td></tr><tr><td>Triéthylamine</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP-616</td><td></td></tr><tr><td>Résine échangeuse d’anions IRN-78 sous forme d’hydroxyde, 80 mesh</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10343-U</td><td></td></tr><tr><td>Résine échangeuse de cations 50Wx8, 200 mesh</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>217514</td><td></td></tr><tr><td>Oxyde d’aluminium, ~150 mesh&nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A1522</td><td>Type WN-6, Neutre, Activité Super I</td></tr><tr><td>Ninhydrine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N4876</td><td>Une solution d’éthanol contenant 0,2 % de ninhydrine a été utilisée dans l’essai</td></tr><tr><td>Acide 4-cyano-4-(phénylcarbonothioylthio)pentanoïque</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>722995</td><td>Agent RAFT</td></tr><tr><td>4,4&prime ;-Azobis(4-acide cyanovalérique)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11588</td><td>Initiateur de polymérisation</td></tr><tr><td>Ester de carboxyfluorescéine succinimidylique&nbsp ;</td><td>Life Technologies</td><td>C1157</td><td></td></tr><tr><td>Erythrina Cristagalli perle d’agarose enrobée de lectine</td><td>Vector Laboratories</td><td>AL-1143&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td colspan="4"><fort>Solvant</fort></td></tr><tr><td>dH2O</td><td></td><td></td><td>Produit par le système de purification de l’eau de Barnstead, 18 megOhm-cm</td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A461-4</td><td>Grade ACS ou supérieur</td></tr><tr><td>Méthanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A454-4</td><td>Grade ACS ou supérieur</td></tr><tr><td>Éthanol absolu</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818-100</td><td>ACS grade ou supérieur</td></tr><tr><td>Diméthylformamide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>22705</td><td>grade ACS ou supérieur</td></tr><tr><td>Acétone</td><td>Fisher Scientific</td><td>A929-4</td><td>grade ACS ou supérieur</td></tr><tr><td colspan="4">Equipment</td></tr><tr><td>Membrane de dialyse (MWCO : 3 500)</td><td>Spectrum Labs</td><td>132720</td><td></td></tr><tr><td>Étalon analytique en polyéthylène glycol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O2393</td><td></td></tr><tr><td>Tube Schlenk, 1 ml</td><td>Quark Glass</td><td></td><td>Customized</td></tr><tr><td>TSK-GEL G4000 PWxl&nbsp ;</td><td>Tosoh Bioscience&nbsp ;</td><td>8022</td><td>Utilisé pour l’analyse GPC des glycopolymères</td></tr><tr><td>Empower 3 avec package GPC/SEC</td><td>Système</td> HPLC Waters Corporation <td></td><td></td></tr><tr><td>Waters Alliance&nbsp ;</td><td>Waters Corporation</td><td></td><td>Équipé d’un détecteur d’indice de réfraction (Waters 2414) et d’un détecteur de fluorescence (Waters 2475)</td></tr><tr><td>Spectromètre RMN Avance III 800 MHz</td> Microscope à fluorescence <td>Bruker Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BX43</td><td>Olympus Corporation</td><td></td><td>Utilisé avec un filtre FITC dans le test de liaison des glycopolymères</td></tr><tr><td>Rotavap / Rotoevaporator</td><td>Heidolph</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fritted entonnoir à disque</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-310-109</td><td></td></tr><tr><td>Lyophiliseur</td><td>Labconco</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lame de microscope à immunofluorescence</td><td>Polysciences</td><td>18357-1</td><td></td></tr><tr><td>Revco Ultima Plus -80&nbsp ; &#176 ; C Congélateur</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sac sous vide en plastique et pompe à main</td> Pompe à vide <td>Ziploc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>, entraînement direct, Maxima C Plus</td><td></td> Fisher Scientific <td></td><td></td></tr><tr><td>Jauge à vide</td><td>Sargent-Welch</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

préparation facile et efficace de glycopolymères fluorescentes tri-composants par polymérisation raft-contrôlée

Facile and Efficient Preparation of Tri-component Fluorescent Glycopolymers via RAFT-controlled Polymerization

Glycopolymères synthétiques sont des outils instrumentaux et polyvalents utilisés dans divers domaines de recherche biochimiques et biomédicales. Un exemple d&#39;une synthèse facile et efficace de glycopolymères statistiques fluorescentes bien contrôlée à l&#39;aide réversible par addition-fragmentation de transfert de chaîne (RAFT) à base de polymérisation est mise en évidence. La synthèse commence par la préparation de 2-glycomonomer lactobionamidoethyl méthacrylamide contenant un β-galactose obtenu par réaction de lactobionolactone et N - (2-aminoéthyl) méthacrylamide (AEMA). 2-méthacrylamide Gluconamidoethyl (GAEMA) est utilisé comme un analogue structural dépourvu de β-galactoside terminal. La réaction de copolymérisation RAFT médiée par suite comprend trois monomères différents: N - (2-hydroxyéthyl) acrylamide comme espaceur, AEMA comme cible pour de plus amples marquage par fluorescence, et les glycomonomers. Tolérant des systèmes aqueux, l&#39;agent de RAFT utilisé dans la réaction est de (acide 4-cyano pentanoïque) -4-dithiobenzoate.Low dispersités (≤1.32), des compositions de copolymères prévisibles, et une grande reproductibilité des polymérisations ont été observés parmi les produits. Les polymères fluorescents sont obtenus en modifiant les glycopolymères avec l&#39;ester de succinimidyle de carboxyfluorescéine ciblant les groupes fonctionnels de type amine primaire sur AEMA. spécificités de liaison de lectine des glycopolymères résultent sont vérifiées par l&#39;essai avec des perles d&#39;agarose correspondants revêtus de glycoepitope reconnaissant lectines spécifiques. En raison de la facilité de la synthèse, le contrôle serré des compositions de produits et la bonne reproductibilité de la réaction, ce protocole peuvent être traduits vers la préparation d&#39;autres glycopolymères base-RAFT avec des structures et des compositions spécifiques, comme souhaité.

Synthèse de glycomonomer L&#39;acide lactobionique a été utilisé ici comme exemple pour la préparation de glycomonomers. En utilisant des méthodes dans le rapport initial sur la synthèse de LAEMA 11, les rendements variés dans la préparation d&#39;une pureté insatisfaisante ont été observés. Le procédé de purification modifié en utilisant des résines échangeuses de cations et d&#39;anions pour éliminer la matière de départ qui n&#39;a pas réagi offert le rendement du produit stable et de haute pureté, ce qui est confirmé par 1 H et 13 spectroscopie RMN C (figure 1). La synthèse de glycopolymère RAFT et post-modification de glycopolymères avec des fluorophores A la différence des blocs-glycopolymères préparés par des polymérisations RAFT en gradins, ce protocole de copolymérisation en une seule étape offre une distribution de glycomonomer uniforme tout au long de la chaîne principale du polymère. Les glycopolymères présentés ici contiennent 20% en moles de glycomonomer, 77% en moles de HEAA comme un élément d&#39;espacement, et 3% en moles d&#39;AEMA en tant que cible pour le post-modifications (voir figure 2). 1 H et 13 spectroscopie C-RMN ont confirmé les structures des PMA-LAEMA et PMA-GAEMA (figures 3 et 4). Comme le montre la Figure 5, lorsque comploté contre les profils d&#39;élution de CPG de la glycopolymère synthétisé sans RAFT, deux PMA-LAEMA et PMA-GAEMA ont de faibles dispersités, preuve de l&#39;efficacité de l&#39;approche de RAFT. Comme prévu, PMA-GAEMA a une M n inférieure à celle du PMA-LAEMA en raison de l&#39;absence de PMA-GAEMA d&#39;un sucre suspension. L&#39;analyse des hydrates de carbone et des groupes fonctionnels de type amine primaire contenu des glycopolymères RAFT a révélé que le rapport des monomères dans les glycopolymères sur les produits est en accord avec le rapport stoechiométrique de départ monomères mis en oeuvre dans la réaction de polymérisation RAFT médiation (tableau 1). Cela signifie un contrôle serré de la compositio de monomèrens dans les glycopolymères synthétisés, comme prévu. La réaction de groupes fonctionnels amine primaire avec des fluorophores activés est une technique largement utilisée dans l&#39;étiquetage de protéine. Cette technique a été utilisée ici pour identifier les glycopolymères purifiés avec carboxyfluorescéine. Après post-modification, polymères fluorescents ont été obtenues (figure 6). Aucune dégradation des polymères marquées à la fluorescéine dans la réaction a été détectée par analyse par GPC (données non présentées). Reliure tests des glycopolymères synthétiques avec des perles d&#39;agarose lectine-enduit Pour évaluer la spécificité de la lectine de liaison des glycopolymères synthétisées, des billes d&#39;agarose lectine couché avec la spécificité de liaison de glucides connue a été utilisé. Erythrina lectine de crista-galli (ECL), utilisé dans les expériences, a une spécificité de liaison vers β-D-galactoside. Figure 7A montre clairement que PMA-LAEMA-Flfluorescéine, qui contient des β-D-galactoside en tant que suspension d&#39;hydrate de carbone, présente une forte liaison à la lectine ECL. En revanche, la liaison à la ECL du glycopolymère PMA-GAEMA-fluorescéine, qui ne possède pas un sucre suspension négative, est représentée sur la figure 7B. Ce résultat illustre l&#39;efficacité de liaison et l&#39;affinité de l&#39;glycopolymère fluorescente synthétisé. <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/52922/52922fig1.jpg" /> Figure 1. Assigné 1 H- (a) et 13 C-RMN (b) spectres (D 2 O) pour LAEMA. (Ce chiffre a été modifié depuis Wang et al. 14) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52922/52922fig1large.jpg" target="_blank">S&#39;il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a> &lt;p class = &quot;jove_content&quot; fo: keep-together.within-page = &quot;always&quot;&gt; <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/52922/52922fig2.jpg" /> Figure 2. Représentation schématique de la synthèse de glycopolymère fluorescente PMA-LAEMA contenant β-galactoside que le sucre de pendentif. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52922/52922fig2large.jpg" target="_blank">S&#39;il vous plaît, cliquez ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a> <img alt="Figure 3" src="/files/ftp_upload/52922/52922fig3.jpg" /> Figure 3. Assigné 1 H- (A) et 13 C-RMN (B) spectres (D 2 O) pour PMA-LAEMA glycopolymère. (Ce chiffre a été modifié depuis Wang et al. 14) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52922/52922fig3large.jpg" target="_blank">Plaidoyer</a>SE Cliquez ici pour voir une version plus grande de cette figure. <img alt="Figure 4" src="/files/ftp_upload/52922/52922fig4.jpg" /> Figure 4. Assigné 1 H- (A) et 13 C-RMN (B) spectres (D 2 O) pour PMA-GAEMA. (Ce chiffre a été modifié depuis Wang et al. 14) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52922/52922fig4large.jpg" target="_blank">S&#39;il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.</a> <img alt="Figure 5" src="/files/ftp_upload/52922/52922fig5.jpg" /> Figure 5. Gel traces de chromatographie de perméation de base-RAFT PMA-GAEMA et PMA-LAEMA préparés avec et sans l&#39;aide de l&#39;agent RAFT. Contrairement à la PMA-LAEMA préparé sans agent de RAFT (bleu), RAFT-<html> PMA-LAEMA basé (vert) a une dispersité beaucoup plus faible (M w / M n). Base-RAFT PMA-GAEMA (rouge) et PMA-LAEMA avoir des profils similaires GPC, mais l&#39;ancien a une plus petite M n raison de l&#39;absence de sucres pendants. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52922/52922fig4large.jpg" target="_blank">S&#39;il vous plaît, cliquez ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a> <img alt="Figure 6" src="/files/ftp_upload/52922/52922fig6.jpg" /> Figure 6. PMA-LAEMA avant et après post-modification avec fluorophore. (A) Par rapport à blanc glycopolymère non marqué (tube de gauche), marqué à la fluorescéine PMA-LAEMA montre une forte coloration jaune (tube à droite). (B) sous UV, non marqué PMA-LAEMA (tube de gauche, 1 mg / ml dans PBS) est sombre et présente avec aucune fluorescence, alors que PMA-LAEMA marqué à la fluorescéine (tube de droite, 1 mg / ml dans PBS) spectacles forte fluorescence verte.: //www.jove.com/files/ftp_upload/52922/52922fig4large.jpg &quot;Target =&quot; _ blank &quot;&gt; S&#39;il vous plaît cliquez ici pour voir une version plus grande de cette figure. <img alt="Figure 7" src="/files/ftp_upload/52922/52922fig7.jpg" /> Figure 7. Erythrina crista-galli lectine (ECL) perles revêtues d&#39;agarose lient β-D-galactoside contenant glycopolymères, et non pas ceux ne possédant pas un sucre pendentif. (A) PMA-LAEMA-fluorescéine (3 pg) ont montré une forte liaison avec ECL , alors que dans (B) PMA-GAEMA-fluorescéine, qui ne possède aucun résidu suspensions β-D-galactoside, a montré aucune liaison avec les perles de lectine-enduit. Barre d&#39;échelle = 100 um. Tableau 1. Valeurs ciblant un des paramètres de synthèse et des compositions réelles des glycopolymères. A) Ciblage des valeurs, quion souhaite des produits; b) DP, degré de polymérisation; c) NA, pas disponible. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52922/52922fig4large.jpg" target="_blank">S&#39;il vous plaît cliquez ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a> <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody style="vertical-align:middle;text-align:center"><tr><td style="width:120px"></td><td style="width:40px"> DP b </td><td style="width:70px"> Dispersité </td><td style="width:120px"> Contenu réel de glycomonomers mol% </td><td> Contenu réel d&#39;amine primaire mol% </td></tr><tr><td> Ciblage des valeurs </td><td> 100 </td><td> &lt;1,3 </td><td> 20 </td><td> 3 </td></tr><tr><td> PMA-LAEMA </td><td> 99 </td><td> 1.26 </td><td> 19 </td><td> 3.2 </td></tr><tr><td> PMA-GAEMA </td><td> 89 </td><td> 1.32 </td><td> NA c </td><td> 2.7 </td></tr></tbody></table>

Une synthèse efficace en trois étapes de glycopolymères fluorescents à base de RAFT, comprenant la préparation de glycomonomères, la copolymérisation et la post-modification, est démontrée. Ce protocole peut être utilisé pour préparer des glycopolymères statistiques basés sur RAFT avec les structures souhaitées.

Préparation Facile et efficace de glycopolymères fluorescentes Tri-composants par polymérisation RAFT-contrôlée

Synthetic glycopolymers are instrumental and versatile tools used in various biochemical and biomedical research fields. An example of a facile and ...

L'objectif général de cette procédure est la synthèse bien contrôlée de polymères linéaires statistiques glycosylés fluorescents en utilisant la polymérisation par transfert de chaîne avec addition-fragmentation réversible, ou polymérisation RAFT. Cela est réalisé en premier lieu par la synthèse du monomère glycosylé, le méthacrylamide éthyl lactobiosyle, ou L-A-E-M-A. La deuxième étape consiste à utiliser la polymérisation RAFT du L-A-E-M-A avec le méthacrylamide N-(2-aminoéthyle), ou AEMA, et l'acrylamide N-(2-hydroxyéthyle), ou AGAA, afin de synthétiser le polymère glycosylé correspondant à faible dispersité.Ensuite, le glyco-polymère est modifié sur l'une de ses amines primaires par réaction avec l'ester intermédiaire du carboxyfluorescéine, produisant ainsi un glyco-polymère marqué par la fluorescéine. La dernière étape consiste à lier le glyco-polymère marqué à la fluorescéine à des billes recouvertes de lectine (billes « arose ») présentant une spécificité connue de liaison aux glucides. Finalement, une microscopie fluorescente est utilisée pour analyser la liaison des glyco-polymères aux billes « arose », confirmant ainsi que le glyco-polymère possède l'hydrate de carbone d'intérêt et est marqué par une étiquette fluorescente.L'avantage de la polymérisation RAF par rapport aux méthodes existantes utilisant des polymérisations radicales conventionnelles réside dans le fait que ce procédé est une technique de polymérisation contrôlée qui minimise le nombre de chaînes issues de l'amorceur. Cela conduit à des polymères de masses moléculaires prédéterminées et à une très faible polydispersité. Ces polymérisations peuvent être appliquées à un mélange défini de monomères pour la préparation de glycopolymères fluorescents spécifiques.Ces glycopolymères possèdent des capacités de liaison définies qui peuvent être vérifiées à l'aide de billes revêtues de lectine. La préparation efficace de glycopolymères fluorescents devrait s'avérer d'une grande valeur pour la recherche en glycobiologie à l'avenir. Pour commencer, dissoudre deux grammes d'acide lactobionique dans trois millilitres de méthanol anhydre.Ensuite, ajoutez lentement de l'éthanol absolu goutte à goutte à la solution jusqu'à ce qu'elle devienne juste trouble. Utilisez un évaporateur rotatif pour éliminer tous les solvants. Répétez ce processus trois fois pour produire 1,94 gramme de lacto bioo one five lactone avec un rendement de 98 %.Ajouter une solution d’un gramme de lacto bio lactone dans trois millilitres de méthanol à une solution d’A EMA et de MEHQ dans deux millilitres de méthanol. Ensuite, ajouter un millilitre de triéthylamine et agiter le mélange à température ambiante. Après 48 heures, ajouter 20 millilitres d’eau déionisée au mélange et le transférer dans un évaporateur rotatif.Évaporer jusqu'à complète dessiccation. Dissoudre le résidu dans 20 millilitres d'eau déionisée et appliquer la solution sur le haut d'une colonne échangeuse d'anions de 10 par 20 millimètres. Placer un bécher contenant un milligramme de MEHQ sous la sortie et éluer la colonne dans le bécher.Après avoir prélevé la solution dans un évaporateur rotatif, dissoudre le résidu dans 20 millilitres d'eau déionisée et ajouter des aliquotes de une milligramme de résine échangeuse d'ions. Poursuivre jusqu'à ce qu'un test au anhydrant soit négatif, en effectuant les tests au anhydrant par prélèvement d'un microlitre de la solution et en l'appliquant sur une plaque de chromatographie sur couche mince. Pulvériser la plaque avec une solution de 2 % d'anhydrant dans l'éthanol et chauffer à 90 degrés Celsius pendant une minute sur un bloc chauffant.L'extrémité du processus est atteinte lorsqu'aucune couleur bleue ne se forme. Ensuite, filtrer la solution à l'aide d'un entonnoir en verre fritté dans un tube à essai. Congeler la solution à moins 80 degrés Celsius, puis la transférer dans un lyophilisateur pour lyophilisation.Dissoudre le résidu dans une quantité minimale de méthanol et précipiter le produit en ajoutant de l'acétone anhydre à moins 20 degrés Celsius. Recueillir le L-A-E-M-A précipité par filtration à l’aide d’un entonnoir en verre fritté. Transférer l’entonnoir et le précipité dans un dessiccateur sous vide pour le séchage, en ajoutant d’abord 0,5 gramme d’environ 150 mesh de nanoparticules d’oxyde d’aluminium par millilitre de HEAA de qualité commerciale dans un tube à essai de deux millilitres.Centrifuger le tube à 300 ×g pendant 30 secondes et utiliser la couche supérieure comme HEAA sans inhibiteur. Dissoudre soigneusement 32,8 milligrammes de L-A-E-M-A, 1,7 milligramme d’EMA et 27,5 microlitres d’HEAA sans inhibiteur, ainsi que 0,4 millilitre d’eau déionisée, et transférer la solution dans un tube conique bien nettoyé d’un millilitre. Ensuite, ajouter 50 microlitres de réactif raft et 50 microlitres de réactif initiateur au tube, puis mélanger en tapotant doucement sur le côté du tube avec la valve fermée. Relier le tube à une ligne sous vide et congeler le contenu à l’aide d’un bain d’éthanol et de glace sèche.Ensuite, réduire la pression dans le tube jusqu'à atteindre environ 50 millitorr à l'aide d'une pompe, puis fermer le robinet. Retirer le bain de glace sèche et laisser décongeler le contenu. Répéter soigneusement le cycle de congélation, de vide et de décongélation deux fois supplémentaires.Inspectez le tube pour vous assurer que les composants sont entièrement dissous et vortexez doucement si nécessaire. Avant la mise sous vide, retirez le tube fermé de la ligne de vide et placez-le dans un sac en plastique transparent. Évacuez l'air du sac à l'aide d'une pompe manuelle en plastique.Ensuite, placer le sac dans un bain-marie couvert à 70 degrés Celsius pendant 24 heures. Puis, retirer le tube du sac et transférer son contenu dans un sac de dialyse ayant une limite de poids moléculaire de 3 500 Daltons. Placer le sac de dialyse dans un bécher et effectuer la dialyse contre deux litres d'eau déionisée pendant 24 heures.Transférez le contenu du sac de dialyse dans un tube à essai et placez-le au congélateur à moins 80 degrés Celsius. Une fois congelé, transférez-le dans un lyophilisateur et procédez à la lyophilisation. Pour obtenir le polymère glycosylé blanc et floconneux PMA LA EMA, préparez d'abord une solution contenant cinq milligrammes de PMA LA EMA dans 0,9 millilitre de PBS.Ensuite, ajoutez lentement 0,6 milligramme de carboxy fluorescein cin, middle eter dans 100 microlitres de diméthylformeamide à la solution agitée rapidement, le microtube et le papier d’aluminium, puis agitez doucement pendant 16 heures à température ambiante. Transférez la solution dans un sac de dialyse ayant une limite de poids moléculaire de 3 500 Daltons. Placez le sac dans un bécher et effectuez une dialyse contre deux litres d’eau déionisée pendant 16 heures, en le protégeant de la lumière. Transférez le contenu du sac de dialyse dans un tube à essai.Après avoir congelé la solution à moins 80 degrés Celsius, lyophilisez-la. Pour obtenir le polymère de glyco polymère jaune floconneux marqué au fluorophore P-M-A-L-A-E-M-A, déterminez la masse moléculaire moyenne en nombre, la masse moléculaire moyenne en poids et la dispersité des glyco polymères à l’aide d’un système HPLC. Ajoutez d’abord 1,5 millilitre de PBS à une suspension de 50 microlitres de billes Aro revêtues de lectine d’Erythrina cristagalli dans un tube de centrifugeuse.Ensuite, centrifuger le tube à 300 ×g pendant une minute. Puis, éliminer le surnageant et répéter le lavage deux fois supplémentaires avant d'ajouter enfin 0,5 millilitre de PBS. Ajouter une solution de trois microgrammes de PMA LA EMA marquée avec la fluorescéine dans six microlitres de PBS au tube contenant les billes revêtues de lectine.Utilisez la P-M-A-G-A-E-M-A marquée à la fluorescéine comme témoin négatif. Ensuite, enveloppez les tubes dans du papier d'aluminium et incubez-les à température ambiante pendant une heure. Centrifugez le tube pendant une minute et éliminez le surnageant.Ensuite, reprenez, suspendez les billes dans 1,5 millilitre de PBS frais et répétez le lavage trois fois. Enfin, reprenez et suspendez les billes dans 0,2 millilitre de PBS. Transférez quatre microlitres des billes en suspension dans une cavité d'une lame pour microscope à immunofluorescence, puis recouvrez avec une lamelle en verre et enregistrez.Images de la lame obtenues à l’aide d’un microscope à fluorescence équipé d’un objectif 10 x, d’un filtre FITC et d’une caméra. Les glycopolymères ont été analysés par chromatographie d’exclusion stérique. Les polymères synthétisés sans utilisation de la technique RAFT présentent une dispersité beaucoup plus élevée que ceux fabriqués en utilisant RAFT.Lorsqu'il est marqué avec la fluorescéine, l'aspect physique du glyco-polymère change de couleur, passant du blanc à un jaune intense visible sous lumière UV. Une solution de polymère non marqué reste sombre, tandis que le polymère marqué à la fluorescéine émet une lumière verte vive, confirmant la présence du marqueur. La liaison spécifique aux billes revêtues de lectine n'a lieu qu'avec les polymères portant des résidus sucrés en position pendante : les billes émettent une lumière verte lorsqu'elles sont liées, alors qu'elles restent sombres lorsqu'elles sont traitées avec des polymères dépourvus de résidus sucrés pendantes. Cette technique de polymérisation basée sur des radeaux permet une grande flexibilité quant au type de glyco-polymères pouvant être synthétisés.L’étiquetage ultérieur des glycopolymères peut également être réalisé à l’aide d’une grande variété de réactifs fluorescents capables de réagir avec les groupes primaires dans un environnement aqueux. Les chercheurs spécialisés en biologie des glucides peuvent utiliser cette technique pour obtenir facilement des glycopolymères hautement polyvalents et bien définis. Ces glycopolymères peuvent servir d’outils pour explorer les spécificités de liaison des glucides, telles que celles observées dans les voies respiratoires de patients atteints de fibrose kystique ou celles impliquées dans de nombreux types de cancers humains.

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Nous décrivons ici une stratégie unique pour créer des matrices biocompatibles, en couches avec des interfaces continues entre des couches distinctes pour l'ingénierie tissulaire. Un tel échafaudage pourrait fournir un environnement idéal personnalisable pour moduler le comportement cellulaire par différents indices biologiques, chimiques ou...

Gradient de densité multicouche de polymérisation (DGMP): une nouvelle technique pour la création multi-compartiment, échafaudages personnalisables pour l&#39;ingénierie tissulaire

Notre laboratoire a développé des hydrogels de polyacrylamide ADN réticulé, un système d'hydrogel dynamique, afin de mieux comprendre les effets de la modulation de la rigidité des tissus sur la fonction cellulaire. Ici, nous fournissons des schémas, des descriptions et des protocoles pour préparer ces hydrogels.

Préparation de l&#39;ADN réticulé polyacrylamide hydrogels

Nous présentons un protocole permettant de former rapidement des vésicules géantes en polymère (pGVs). En bref, les solutions polymères sont déshydratées sur des films d’agarose séchés collés à des lamelles. La réhydratation des films polymères entraîne la formation rapide de pGV. Cette méthode fait progresser considérablement la préparation de vésicules géantes synthétiques pour des applications directes dans les études biomimétiques.

Formant géants de taille polymersomes Utilisation Réhydratation Gel-assisté

Cet article décrit un procédé de production de nanoparticules polymères auto-assemblées en utilisant la polymérisation par dispersion médiée par la lumière visible. L’utilisation de la lumière visible à faible énergie pour contrôler la polymérisation permet la formation reproductible de micelles auto-assemblées ressemblant à des vers à haute teneur en solides.

Synthèse Facile de micelles Worm-like par lumière visible Mediated Dispersion Polymérisation En utilisant photoredox Catalyst

Polymérisation par précipitation non agité fournit une approche de prototypage rapide, reproductible à la synthèse de stimuli-sensibles poly (N -isopropylacrylamide) microgels de distribution de taille étroite. Dans cette synthèse de protocole, la caractérisation de la diffusion de la lumière et unique suivi de fluorescence des particules de ces microgels dans une configuration de microscopie à champ large sont démontrées.

Synthèse contrôlée et le suivi Fluorescence de très uniforme Poly (<em&gt; N</em&gt; -isopropylacrylamide) microgels

Nous présentons un protocole pour la synthèse d’hydrogels fonctionnalisés par RGD en tant que dispositifs pour l’administration de cellules et de médicaments. La procédure implique une cycloaddition d’alcyne-azoture catalysée par le cuivre (CuAAC) entre de l’acide polyacrylique modifié par des alcynes (PAA) et un dérivé de l’azoture de RGD. Les hydrogels sont formés à l’aide de la polycondensation assistée par micro-ondes et leurs propriétés physicochimiques sont étudiées.

La Synthèse des RGD-fonctionnalisé hydrogels comme un outil pour les applications thérapeutiques

Les protocoles sont décrits pour la fabrication des hydrogels biodégradables thermoresponsive basés sur hydrazone réticulation de polymères oligomères sur la balance en vrac a petite Echelle, échelle nanométrique et ce dernier pour la préparation de nanoparticules de gel et de nanofibres.

Fabrication des Thermoresponsive Hydrogels dégradable sur plusieurs échelles de longueur par Extrusion réactive, microfluidique, auto-assemblage et électrofilage

Un protocole pour la synthèse et la caractérisation du mouvement diffusif de polymères cycliques au niveau molécule unique est présenté.

Synthèse des polymères cycliques et caractérisation de leur mouvement Diffusive dans l&#39;État Melt à la molécule unique Level

Ici, nous présentons un protocole pour préparer et visualiser les structures secondaires (par exemple, des fibres, des architectures toroïdaux et nano-sphères) dérivées de polycarbodiimides hélicoïdaux. La morphologie caractérisée à la fois par microscopie à force atomique (AFM) et la microscopie électronique à balayage (SEM) a montré dépendre de la structure moléculaire, la concentration et le solvant de choix.

Morphologies auto-assemblage obtenu à partir hélicoïdaux polycarbodiimide Copolymères et leurs dérivés triazole

Les tiges de microgel avec des groupes réactifs complémentaires sont produites via la microfluidique avec la capacité de s’interconnecter en solution aqueuse. Les microgels anisométriques se coincent et s’interconnectent en constructions stables avec des pores plus grands par rapport aux systèmes sphériques. Les microgels modifiés avec GRGDS-PC forment des constructions 3D macroporeuses qui peuvent être utilisées pour la culture cellulaire.

Échafaudages 3D macroporeux interconnectés à partir de tiges de microgel

Découvrez la synthèse de glycopolymères fluorescents par polymérisation RAFT contrôlée. Cette méthode produit des polymères à faible dispersité pour l'étude des interactions glucides-protéines en glycobiologie.

Préparation Facile et efficace de glycopolymères fluorescentes Tri-composants par polymérisation RAFT-contrôlée

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