Name: Protocoles pour les essais la résistance aux herbicides robuste chez différentes espèces de mauvaises herbes (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-02T11:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 52 s
Description: Découvrez un protocole robuste pour confirmer la résistance aux herbicides chez diverses espèces de mauvaises herbes. Cette méthode flexible permet d'inférer les niveaux de résistance avec des adaptations mineures pour chaque espèce.

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La recherche a été soutenue par le Conseil national de la recherche (CNR) d’Italie. Les auteurs remercient les membres du GIRE d’avoir collecté des échantillons de graines et sont reconnaissants à Alison Garside d’avoir révisé l’anglais.

1. l&#39;échantillonnage des semences et stockage <ol><li> Surveiller les champs cultivés pour la performance de l&#39;herbicide pauvres injustifiée, à savoir, pas en raison de conditions climatiques défavorables ou de traitements herbicides de faible qualité. </li><li> Prélever un échantillon de semences d&#39;une espèce à la fois et attribuer un code unique. Les graines mûres sont généralement recueillies avant la récolte des cultures de plantes qui avaient survécu au traitement (s) de l&#39;herbicide. Moniteur en temps opportun d&#39;observer si les graines tombent par plante mère à maturité. </li><li> Remplir un formulaire pour chaque échantillon en indiquant le code unique attribué, nom de l&#39;espèce, la date de collecte, coordonnées GPS, la municipalité, le nom de l&#39;agriculteur, la taille du champ, le niveau d&#39;infestation, la culture, l&#39;herbicide (s) utilisés au cours de la saison et des documents historiques du champ . </li><li> Récupérer les graines à partir d&#39;au moins 30 plantes choisies au hasard qui sont représentatifs de l&#39;infestation de champ. Assurez-vous que l&#39;échantillon de semence contient au moins 5000 graines matures. Pour un obligatoires outcrossing espèces de mauvaises herbes(Par exemple, Lolium spp. Ou Amaranthus spp.), De réduire le nombre de plantes à 10-15, en gardant le nombre total de graines autour de 5000 11. </li><li> Sous-échantillonner le champ si des taches de mauvaises herbes sont dispersés sur de vastes zones (plus d&#39;un hectare) que les différents biotypes résistant aux herbicides sont sélectionnés. </li><li> graines de magasins dans des sacs en papier non scellées marquées avec le code unique attribué. </li><li> Laisser évaporer l&#39;humidité pour, mais ne pas exposer les semences à une température élevée (par exemple, éviter de les laisser dans une voiture sous le soleil) ou à des fluctuations extrêmes de température pour éviter l&#39;induction de dormance secondaire. </li><li> Clean (enlever les balles, les graines de coque, etc.) et de les stocker à température ambiante dans un endroit sec. Après avoir effectué les premiers tests de résistance, stocker les semences pour de longues périodes de temps dans une pièce sombre à 4 ° C, de préférence dans des sacs de plastique scellés sous vide. De cette manière, les graines de préserver leur viabilité pendant une période beaucoup plus longue. </li></ol> NOTE: La dormance des graines fournit un mécanisme souple et efficace qui permet d&#39;adapter les mauvaises herbes et de persister dans les agro-écosystèmes. Pour lever la dormance et de permettre la germination des graines, différents protocoles doivent être utilisés en fonction des espèces de mauvaises herbes, à savoir le type de dormance 16. Il existe trois principales façons d&#39;éliminer la dormance: <ol><li> Vernalisation NOTE: Pour obtenir la germination simultanée et la levée des semis, une période de vernalisation de semences allant de quelques jours à une semaine est nécessaire pour éliminer la dormance physiologique de nombreuses espèces:. Par exemple, Amaranthus retroflexus, Chenopodium album, Lolium spp, Avena fatua, Polygonum persicaria , Phalaris paradoxa 17-19. Une période de jusqu&#39;à 15 jours de plus est nécessaire pour Papaver rhoeas, Cyperus difformis et Ammania coccinea et jusqu&#39;à 30 jours pour les Schoenoplectus mucronatus <sup&gt; 20. <ol><li> Mettez un peu d&#39;eau déminéralisée dans les plats en plastique. Coupez deux couches de papier filtre et les faire tremper dans l&#39;eau, enlever tout excès. Placez les graines séchées à l&#39;air sur le papier. Transférer les plats en plastique à un réfrigérateur à 4 ° C pour la période de temps requise. </li></ol></li><li> Scarification NOTE: Certaines espèces de mauvaises herbes sont plus récalcitrants à la germination que d&#39;autres en raison de la dormance mécanique, à savoir les caractéristiques du tégument, et nécessitent l&#39;utilisation d&#39;une scarification chimique utilisant de l&#39;acide sulfurique à germer 21. <ol><li> Préparer un bêcher avec de l&#39;acide sulfurique concentré (95-98%). Préparez un bécher rempli d&#39;eau. Mettez les graines dans une enveloppe de tissu non-tissé. </li><li> Faire tremper par exemple, Echinochloa spp. Ou des graines de sorgho halepense pendant 20 min ou 5 min, respectivement, dans de l&#39;acide sulfurique concentré. </li><li> Prenez l&#39;enveloppe sur le bécher en utilisant une paire de pinces et le mettre dans le bécher rempli d&#39;eau. Ouvrez leenveloppe, mettre les graines dans une petite passoire et rincer abondamment sous l&#39;eau courante. </li></ol> Variante: A. plantago-aquatica a besoin d&#39;un protocole différent 22, 23 <ol><li> Faire tremper les graines pendant 2 min dans du chloroforme. Rincer les graines avec de l&#39;eau déminéralisée et les sécher avec du papier absorbant. Tremper les graines dans de l&#39;acide sulfurique à 80% pendant 5 min. </li><li> Mettez les graines dans une petite passoire et les rincer sous l&#39;eau courante. </li></ol></li><li> Post-récolte maturation des graines NOTE: Graines d&#39;autres espèces de mauvaises herbes ne germent pas du tout pendant quelques mois après l&#39;échéance, quelle que soit la méthode utilisée pour lever la dormance. <ol><li> Stocker les graines pendant une période d&#39;au moins 3-4 mois à température ambiante et une faible humidité et suivez les protocoles ci-dessus pour levée de dormance (par exemple, Oryza sativa var. Sylvatica ou P. rhoeas). </li></ol></li></ol> 3. Germination <ol><li> Placer les semences à germer dans plastic plats contenant 0,6% (m / v) de gélose à 0,1% de nitrate de potassium (KNO 3) ajoutés: <ol><li> Préparer une solution de gélose à 0,6% + 0,1% de KNO 3, en utilisant de l&#39;eau désionisée. Dissoudre la gélose dans un four à micro-ondes. </li><li> Verser la solution d&#39;agar dans des boîtes en plastique. Refroidir le substrat et ensuite mettre dans les graines. </li></ol> Variante: Le sol peut également être utilisé en tant que substrat dans des boîtes de plastique. Cette pratique est particulièrement efficace pour Echinochloa spp., S. halepense et Lolium spp. </li><li> Placer des plats en plastique dans une armoire de germination pendant environ une semaine dans des conditions de lumière et de température en fonction des conditions optimales pour chacune des espèces de mauvaises herbes. Pour la plupart des espèces d&#39;hiver, la plage de température est 15/25 ° C nuit / jour et 12 h photopériode avec des tubes de néon fournissant une densité de photons photosynthétiques Flux (PPFD) de 15-30 pmol m -2 s -1. Pour de nombreuses espèces d&#39;été, la plage de température est 15/30 ° C la nuit / jour. Variante: Some espèces, telles que S. halepense, besoin d&#39;un traitement thermique. Par conséquent après la scarification, les graines de S. halepense sont soumis aux conditions suivantes: cycles de 4 heures à 45 ° C et 20 heures à 24 ° C pendant trois jours dans l&#39;armoire de germination, puis trois jours dans des conditions normales. </li></ol> 4. Semis repiquage et la croissance <ol><li> Transplant quinze à vingt jeunes plants dans des plateaux en plastique (325 x 265 x 95 mm) remplis d&#39;un mélange standard de rempotage (60% loam limoneux, 15% de sable, 15% et 10% agriperlite tourbe - en volume). NOTE: Le repiquage, au lieu de l&#39;ensemencement direct, permet un support uniforme des plantes au même stade de croissance à obtenir, ce qui est une condition préalable importante pour optimiser le rendement du traitement herbicide. </li><li> Identifier chaque plateau avec un code à barres, y compris toutes les informations pour l&#39;identification unique: Code de la population, l&#39;herbicide testé, répliquer nombre et numéro de plateau progressive &lt;./ Li&gt; <li> La place des plateaux dans une des plantes à effet de serre et de l&#39;eau chauffée au besoin pour maintenir le substrat à ou près de la capacité au champ. REMARQUE: La température de croissance varie selon les espèces de mauvaises herbes. Souvent tests sont effectués au cours de l&#39;automne / hiver / printemps, si léger est complété en utilisant des lampes de 400 W aux halogénures métalliques, qui fournissent une PPFD d&#39;environ 150 pmol m -2 s -1 et une photopériode de 12 h 24, 19. Espèces de mauvaises herbes d&#39;été avec C 4 cycle de photosynthèse nécessitent habituellement intensité lumineuse plus élevée et donc des tests sont effectués en fin de printemps-été ou l&#39;intensité de la lumière complété est d&#39;environ 400 pmol m -2 s -1 avec une photopériode de 14 h. </li><li> Utilisez un protocole différent pour certaines espèces de mauvaises herbes qui infestent le riz paddy, par exemple, A. plantago-aquatica, S. et C. mucronatus Difformis comme décrit dans 22. <ol><li> Transplanter les plants dans des barquettes en polystyrène avec 24 cellules rondes (de 55 mm de diamètre, 64 mm de profondeur) filconduit avec 60% loam limoneux, 30% de sable et 10% de tourbe (en volume). </li><li> Définissez les plateaux dans 12 cm contenants de plastique remplis d&#39;eau profondes et fermé hermétiquement par des tiges en acier inoxydable vissés pour empêcher les flottante (figure 1). </li><li> Maintenir le niveau d&#39;eau dans les récipients à 1-2 cm en dessous du niveau de la surface du sol et ajouter 1,5 g de sulfate de cuivre pour chaque récipient (qui contient de 10 à 12 L d&#39;eau) afin d&#39;éviter la prolifération des algues. </li></ol></li></ol> 5. traitements herbicides <ol><li> Les traitements avec des herbicides de prélevée: <ol><li> Après environ trois jours dans l&#39;armoire de germination tels que décrits dans la section 3, transplanter les graines en germination dans des bacs en plastique contenant le substrat décrit ci-dessus et couvrir avec une couche de sol (environ 1 cm). Ceci est une étape cruciale afin d&#39;assurer que les semis ne sortiront pas en raison de l&#39;effet de l&#39;herbicide plutôt que d&#39;une profondeur d&#39;enfouissement excessive. </li><li> Prenez le substrat au champ capaville en plaçant les plateaux, qui ont quelques trous dans le bas, sur les soucoupes remplis d&#39;eau. </li><li> Un jour après la transplantation, les bacs traiter avec l&#39;herbicide de pré-émergence 25. </li><li> Gardez le substrat au niveau ou la capacité de champ proche par addition d&#39;eau au besoin à la fois au-dessus et ci-dessous par capillarité de la soucoupe. Cette procédure favorise la permanence de l&#39;herbicide à la profondeur appropriée (par exemple, où les graines en germination sont) d&#39;une bonne efficacité du traitement. </li></ol></li><li> Les traitements avec des herbicides de post-levée: <ol><li> Vaporiser les plantes quand elles atteignent le stade 2-3 feuilles (ie, le stade de croissance 12-13 de l&#39;échelle de croissance BBCH Extended 26). </li><li> A partir du jour après le traitement, régler le système d&#39;irrigation selon les besoins en eau des espèces de mauvaises herbes et de la saison (par exemple, pour Echinochloa spp., Il fournit de l&#39;eau pendant 3 minutes 4 fois par jour, à intervalles réguliers, de 9 h à 9 h). L&#39;eau est DIScontribué à l&#39;aide d&#39;un système d&#39;irrigation par aspersion automatique. Variante: le glyphosate est appliqué à l&#39;usine BBCH stade 14-21. </li></ol></li><li> la préparation de l&#39;herbicide et de la distribution. REMARQUE: Tous les herbicides (pré- et post-levée) sont appliquées en tant que formulations commerciales avec des tensioactifs à deux doses recommandées, la dose recommandée de champ (1x) et trois fois (3x). <ol><li> Si nécessaire, préparer la solution d&#39;agent tensio-actif en vrac, selon les instructions de l&#39;étiquette; la concentration finale est généralement exprimé comme un pourcentage du volume final (par exemple, 0,3%) ou que le volume à distribuer par unité de surface (par exemple, une L ha -1). </li><li> Utiliser la solution d&#39;agent tensio-actif en tant que solvant pour la solution herbicide (soluté) afin de maintenir la bonne concentration de l&#39;ingrédient actif. Préparer la solution de l&#39;herbicide le plus concentré premier (3x). Calculer la quantité de produit commercial à être dissous dans la solution d&#39;agent tensio-actif (ou dans de l&#39;eau désionisée si unagent tensio-actif est non nécessaire) en utilisant l&#39;équation suivante: herbe Dose = [(Dose champ x Dose max) x V fin] / V del Où: = dose Dose d&#39;herbes aux herbicides (ml), dose champ = champ aux herbicides Dose (ml ha -1), Dose max = dose maximale délivrée, V nageoire = volume final de la solution (L), V del = volume délivré par le banc pulvérisateur (L ha -1). </li><li> Diluer (2: 1, v / v) de la solution herbicide 3x pour préparer le concentré moins une (1 x). Cette procédure réduit le risque de faire des erreurs lors de la pesée ou de pipetage des herbicides. concentration de la solution de l&#39;herbicide est exprimée par le volume à distribuer par unité de surface (L ha -1). </li><li> Lancer la séquence de traitement avec la dose d&#39;herbicide inférieure (1x). De cette façon, il n&#39;y a pas besoin de laver l&#39;armoire de pulvérisation entre deux traitements avec le même herbicide. </li><li> Distribuer la solutio herbiciden aide d&#39;un pulvérisateur de précision banc délivrer 300 L ha -1 (± 1%), à une pression de 215 kPa, et une vitesse de 0,75 m sec -1, avec un boom équipé de trois ventilateurs plat (gamme étendue) des buses hydrauliques . </li><li> Laver l&#39;armoire de pulvérisation deux fois lorsque l&#39;herbicide est modifié en utilisant l&#39;eau de Javel à 1% (v / v), puis rincez. Variante: le glyphosate est appliqué avec un volume de pulvérisation de 200 L ha -1 27. REMARQUE: Une attention particulière doit être payée lorsque herbicides hautement biologiques, tels l&#39;sulfométuron ou flazasulfuron sulfonylurées, sont utilisés. Dans ce dernier cas faire un lavage avec une solution d&#39;eau de Javel et l&#39;autre avec de l&#39;ammoniac (2,5% v / v), suivi d&#39;un rinçage avec de l&#39;eau prudent. </li></ol></li></ol> 6. Collecte et Analyse des données <ol><li> Grâce à un lecteur de code à barres, qui identifie automatiquement chaque plateau, enregistrer le nombre de plantes qui ont survécu au traitement ainsi que la biomasse estimée Visuel (VEB). Les plantes sont culEssed comme étant morts si elles ne montrent pas de croissance active indépendamment de la couleur ou d&#39;une autre apparence. <ol><li> Procéder à l&#39;évaluation de trois ou quatre semaines après traitement (WAT) en fonction des herbicides testés (par exemple, pour trois WAT inhibiteurs ACCase et quatre WAT pour des inhibiteurs de l&#39;ALS ou le glyphosate). </li><li> Évaluer l&#39;efficacité générale de traitement en incluant une population sensible (vérifiez S) dans toutes les expériences, à savoir, une population recueillie dans un site qui n&#39;a jamais ou rarement traitées avec des herbicides. </li><li> La survie des plantes Express comme pourcentage du nombre de plantes traitées, compté juste avant le traitement à l&#39;herbicide, et de calculer l&#39;erreur standard (SE) par valeur moyenne (valeur des deux répétitions signifie). </li><li> Le VEB est obtenue par une comparaison visuelle de la biomasse végétale entre les traités et le contrôle de la même population 25, 28 non-traitées. Une note, allant de 10 pour les plantes ne sont pas affectées par l&#39;herbicide (par rapport au chèque non-traitée) à 0 quandles plantes sont bien morts, est remis à chaque bac traité. </li></ol></li><li> populations attribuent à quatre catégories basées sur les résultats obtenus à partir de traitements avec deux doses d&#39;herbicides: S lorsque moins de 5% des plantes ont survécu à l&#39;1x doses d&#39;herbicide, SR où les survivants ont varié de 5% à 20% à 1x doses d&#39;herbicides, R Lorsque plus 20% des plantes ont survécu aux 1x doses d&#39;herbicides et RR où les survivants sont plus de 20% à la dose d&#39;herbicide 1x et plus de 10% à la dose d&#39;herbicide 3x 17. </li></ol>

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<li>Collavo, A., Strek, H., Beffa, R., Sattin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+an+ACCase-inhibitor-resistant+Lolium+rigidum.+population+based+on+the+use+of+ALS+inhibitors%3A+weed+population+evolution+observed+over+a+7+years+field-scale+investigation%5BTitle%5D)+AND+%22Pest+Manag.+Sci%22%5BJournal%5D)">Management of an ACCase-inhibitor-resistant Lolium rigidum. population based on the use of ALS inhibitors: weed population evolution observed over a 7 years field-scale investigation.</a> Pest Manag. Sci. 69 (2), 200-208 (2013).</li>
<li>Scarabel, L., Panozzo, S., Savoia, W., Sattin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Target-site+ACCase-resistant+Johnsongrass+%28Sorghum+halepense%29.+selected+in+summer+dicot+crops%5BTitle%5D)+AND+%22Weed+Technol%22%5BJournal%5D)">Target-site ACCase-resistant Johnsongrass (Sorghum halepense). selected in summer dicot crops.</a> Weed Technol. 28 (2), 307-315 (2014).</li>
<li>Hess, M., Barralis, H., Bleiholder, H., Buhur, L., Eggers, T., Hack, H., Strauss, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+extended+BBCH+scale+-+general+for+the+description+of+the+growth+stages+of+mono-+and+dicotyledonous+weed+species%5BTitle%5D)+AND+%22Weed+Res%22%5BJournal%5D)">Use of the extended BBCH scale - general for the description of the growth stages of mono- and dicotyledonous weed species.</a> Weed Res. 37 (6), 433-441 (1997).</li>
<li>Collavo, A., Sattin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+glyphosate-resistant+Lolium.+spp.+biotypes+found+in+a+European+annual+arable+cropping+system+also+affected+by+ACCase+and+ALS+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Weed+Res%22%5BJournal%5D)">First glyphosate-resistant Lolium. spp. biotypes found in a European annual arable cropping system also affected by ACCase and ALS resistance.</a> Weed Res. 54 (4), 325-334 (2014).</li>
<li>Scarabel, L., Cenghialta, C., Manuello, D., Sattin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+and+management+of+imidazolinone-resistant+red+rice+%28Oryza+sativa.+L.%2C+var.+sylvatica.%29+in+Clearfield%C2%AE+Italian+paddy+rice%5BTitle%5D)+AND+%22Agronomy%22%5BJournal%5D)">Monitoring and management of imidazolinone-resistant red rice (Oryza sativa. L., var. sylvatica.) in Clearfield® Italian paddy rice.</a> Agronomy. 2 (4), 371-383 (2012).</li>
<li>Zelaya, I. A., Anderson, J. A. H., Owen, M. D. K., Landes, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+spectrophotometric+and+HPLC+methods+for+shikimic+acid+determination+in+plants%3A+Models+in+glyphosate-resistant+and-susceptible+crops%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Agric.+Food+Chem%22%5BJournal%5D)">Evaluation of spectrophotometric and HPLC methods for shikimic acid determination in plants: Models in glyphosate-resistant and-susceptible crops.</a> J. Agric. Food Chem. 59 (6), 2202-2212 (2011).</li>
</ol>

Les auteurs déclarent qu’ils n’ont pas d’intérêts financiers concurrents.

Plusieurs étapes dans les protocoles sont essentiels pour une évaluation réussie de la résistance aux herbicides dans une population: 1) les graines doivent être prélevés à maturité à partir de plantes qui avaient survécu au traitement (s) de l&#39;herbicide. Maturation des graines sur la plante mère est cruciale pour éviter des difficultés dans la germination des graines plus tard; 2) la bonne conservation des semences est recommandé d&#39;éviter la prolifération de moisissures qui pourraient empêcher la germination; 3...

<html> Les herbicides sont la mesure de contrôle des mauvaises herbes les plus largement utilisés, ce qui représente jusqu&#39;à 50% du marché de la protection mondiale des plantes 1. Ils sont des outils relativement bon marché, éviter les pratiques de la culture des sols main-d&#39;œuvre et de temps, et, finalement, aboutir à une production rentable, sûre et rentable alimentaire 2. Cependant, la grande phénologique et la variabilité génétique présente chez de nombreuses espèces de mauvaises herbes, avec une sur-dépendance sur l&#39;utilisation d&#39;herbicides, se traduit souvent par la sélection des populations de mauvaises herbes résistantes aux herbicides. L&#39;introduction d&#39;herbicides sélectifs avec une cible métabolique très spécifique 3-5 a considérablement augmenté le nombre de cas de résistance au fil des ans. À ce jour, 240 espèces de mauvaises herbes dicotylédones (140 et 100 monocotylédones) à travers le monde ont développé une résistance aux différents sites d&#39;herbicides d&#39;action (SoA) 4. Ceci est une préoccupation majeure pour la gestion des mauvaises herbes et plus généralement pour la production agricole durable. e_content &quot;&gt; La détection précoce de la résistance, basée sur des tests fiables, fréquemment exécutées dans une serre, est une étape clé pour gérer les mauvaises herbes résistantes aux herbicides. Différentes approches ont été développées selon les objectifs, le niveau de précision, le temps et les ressources disponibles nécessaires, comme ainsi que les espèces de mauvaises herbes considérées 6-12. Toutefois, lorsque la confirmation du statut de la résistance d&#39;un nouveau biotype des mauvaises herbes est nécessaire (par exemple, un groupe d&#39;individus qui partagent plusieurs caractéristiques physiologiques, y compris la capacité de survivre un ou plusieurs herbicides appartenant à un groupe particulier est utilisé à une dose qui, normalement, les contrôler), un dosage biologique robuste de la plante entière doit être effectuée dans un environnement contrôlé 4, 11. Un biotype est rarement résistant à un seul herbicide. Chaque biotype est donc caractérisé par un profil de résistance certaine, à savoir, le nombre et le type de SoA des herbicides, il est résistant à, et par une résistance donnéeà chaque niveau 13 herbicide. La détermination précoce et fiable de la tendance de fond ou une résistance multiple 5, 14 est important pour la gestion de la résistance sur le terrain. Il est à noter que la résistance aux herbicides n&#39;a rien à voir avec la tolérance naturelle que certains présentent des espèces de mauvaises herbes à certains herbicides, par exemple, les espèces de dicotylédones vs herbicides ACCase inhibant, espèces monocotylédones vs 2,4-D, Equisetum arvense vs. glyphosate. Cet article présente une approche robuste pour tester biotypes résistants aux herbicides putative échantillonnés dans des domaines où un mauvais contrôle par l&#39;herbicide (s) avait été signalée. Variantes pertinentes aux protocoles standards en ce qui concerne les espèces de mauvaises herbes impliqués sont présentés. Les avantages par rapport à d&#39;autres techniques / protocoles basés soit sur ​​des essais biologiques de la plante entière à l&#39;aide de seulement une dose d&#39;herbicide 15, ou le traitement des graines dans des boîtes de Pétri 8 sont liés à la Reliab ultérieureilité et la possibilité de déduire le niveau de résistance en raison de l&#39;inclusion de deux doses d&#39;herbicides dans les expériences. Cependant, pour les tests de résistance de routine, les mêmes méthodes peuvent être appliquées à une seule dose d&#39;herbicide, réduisant ainsi les coûts. En plus de permettre la confirmation du statut de la résistance, l&#39;information obtenue peut être utilisée à la fois pour optimiser les étapes de recherche suivants et / ou concevoir des stratégies de gestion de la résistance sonores.

<table><tbody><tr><td>Sacs en papier</td><td>Celcar SAS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vaisselle en plastique</td><td>ISI plast S.p.A.</td><td>SO600</td><td>Plastique transparent</td></tr><tr><td>Acide sulfurique 95-98 %</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>320501</td><td></td></tr><tr><td>Tissu non tissé</td><td>Carretta Tessitura</td><td>Art.TNT17</td><td>Poids 17 g m-2</td></tr><tr><td>Chloroforme >99.5 %</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2432</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A1296</td><td></td></tr><tr><td>Nitrate de potassium >99.0 %</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8394</td><td></td></tr><tr><td>Bacs en plastique</td><td>Giganplast</td><td>1875/M</td><td>600 x 400 x 110 mm</td></tr><tr><td>Barquettes en plastique</td><td>Piber plast</td><td>G1210A</td><td>325 x 265 x 95 mm</td></tr><tr><td>Barquettes en polystyrène</td><td>Plastisavio</td><td>S24</td><td>537 x 328 x 72 mm, 24 cellules rondes (6x4)</td></tr><tr><td>Sulfate de cuivre</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>451657</td><td></td></tr><tr><td>Agriperlite</td><td>Blu Agroingross sas</td><td></td><td></td>AGRI100</tr><tr><td>Peat</td><td>Blu Agroingross sas</td><td>TORBA250</td><td></td></tr><tr><td>Armoire de germination</td><td>KW</td><td>W87R</td><td></td></tr><tr><td>Buses</td><td>Teejet</td><td>XR11002-VK, TP11001-VH</td><td>Le deuxième type de buses est utilisé uniquement pour le glyphosate Générateur de</td></tr><tr><td>codes-barres</td><td>Toshiba TEC</td><td>SX4</td><td></td></tr><tr><td>Étiquettes avec code-barres</td><td>Felga</td><td>TT20200</td><td>Stick-in étiquettes avec coins arrondis</td></tr><tr><td>Lecteur de codes-barres</td><td>Cipherlab</td><td>8300-L</td><td>Terminal de données portable</td></tr><tr><td>Pulvérisateur de table Construit</td><td></td><td></td><td>maison</td></tr><tr><td colspan="4">Herbicides inclus dans les résultats :</td></tr><tr><td>Commercial product</td><td>Ingrédient actif</td><td>Company</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Altorex</td><td>imazamox</td><td>BASF</td><td></td></tr><tr><td>Azimut</td><td>florasulam</td><td>Dow AgroSciences</td><td></td></tr><tr><td>Biopower</td><td></td><td>Bayer Crop Science</td><td>Surfact à utiliser avec Hussar WG</td></tr><tr><td>Dash</td><td></td><td>BASF</td><td>Surfact à utiliser avec Altorex</td></tr><tr><td>Granstar</td><td>tribenuron-methyl</td><td>Dupont</td><td></td></tr><tr><td>Gulliver</td><td>azimsulfuron</td><td>Dupont</td><td></td></tr><tr><td>Hussar WG</td><td>iodosulfuron</td><td>Bayer Crop Science</td><td></td></tr><tr><td>Nominee</td><td>bispyribac-Na</td><td>Bayer Crop Science</td><td></td></tr><tr><td>Roundup</td><td>glyphosate</td><td>Monsanto</td><td></td></tr><tr><td>Trend</td><td></td><td>Dupont</td><td>Surfact à utiliser avec Granstar et Gulliver</td></tr><tr><td>Viper</td><td>penoxsulam</td><td>Dow AgroSciences</td><td></td></tr><tr><td>Weedone LV4</td><td>2,4-D</td><td>Isagro</td><td></td></tr></tbody></table>

protocoles pour les essais la résistance aux herbicides robuste chez différentes espèces de mauvaises herbes

Protocols for Robust Herbicide Resistance Testing in Different Weed Species

Des protocoles robustes pour tester les populations de mauvaises herbes résistantes aux herbicides présumées au niveau de la plante entière sont essentiels pour confirmer l’état de résistance. Les protocoles présentés, basés sur des essais biologiques de plantes entières effectués en serre, peuvent être facilement adaptés à un large éventail d’espèces de mauvaises herbes et d’herbicides grâce à des variantes appropriées. Des échantillons de semences de plantes qui ont survécu à un traitement herbicide au champ sont prélevés et entreposés au sec à basse température jusqu’à ce qu’ils soient utilisés. Les méthodes de germination diffèrent selon l’espèce de mauvaise herbe et le type de dormance des graines. Les semis à un stade de croissance similaire sont transplantés et maintenus en serre dans des conditions appropriées jusqu’à ce que les plantes aient atteint le bon stade de croissance pour le traitement herbicide. La préparation de la solution herbicide est rigoureuse afin d’éviter les erreurs non vérifiables. D’autres étapes critiques telles que le volume d’application et la vitesse de pulvérisation sont également évaluées. Les avantages de ce protocole, par rapport à d’autres basés sur des essais biologiques de plantes entières utilisant une dose d’herbicide, sont liés à la fiabilité plus élevée et à la possibilité de déduire le niveau de résistance. Des tests de dépistage diagnostique in vivo ou in vitro plus rapides et moins coûteux ont été proposés (bioessais de boîtes de Pétri, tests spectrophotométriques), mais ils ne fournissent que des informations qualitatives et leur utilisation généralisée est entravée par le montage laborieux que certaines espèces peuvent nécessiter. Pour les essais de résistance de routine, l’essai biologique proposé sur la plante entière peut être appliqué à une seule dose d’herbicide, ce qui réduit les coûts.

Pour évaluer l&#39;état de résistance d&#39;une population résistante putative, il est fondamental d&#39;inclure un chèque sensibles dans le test afin de vérifier l&#39;efficacité de l&#39;herbicide. Les résultats d&#39;un test de dépistage effectués sur P. populations rhoeas, une mauvaise herbe qui infestent les champs de blé, sont rapportés dans la figure 2, où l&#39;efficacité de quatre herbicides de post-levée sur un chèque sensibles (09-36) et d&#39;une résistante suspecté (10-91)...

Une approche robuste et flexible pour confirmer la résistance aux herbicides dans les populations de mauvaises herbes est présentée. Ce protocole permet de déduire les niveaux de résistance aux herbicides et de les appliquer à un large éventail d’espèces de mauvaises herbes et d’herbicides avec des adaptations mineures.

Protocoles pour les essais la résistance aux herbicides robuste chez différentes espèces de mauvaises herbes

Robust protocols to test putative herbicide resistant weed populations at whole plant level are essential to confirm the resistance status. The presented ...

L'objectif général de cette procédure est de tester et de confirmer la résistance aux herbicides chez un large éventail d'espèces de mauvaises herbes et d'herbicides, ainsi que d'évaluer les niveaux de résistance aux herbicides. Cela est réalisé en rompant d'abord la dormance des graines prélevées sur des plantes ayant survécu à un traitement herbicide, afin d'obtenir une germination simultanée et une émergence des plantules. Une période de vernalisation des graines, variant de quelques jours à plus d'une semaine, est nécessaire.La deuxième étape consiste à verser un milieu gélosé contenant du nitrate de potassium dans des boîtes en plastique. Les graines de Vern sont ensuite placées sur le milieu gélosé solidifié et les boîtes sont transférées dans une chambre de germination offrant les conditions optimales pour chaque espèce de mauvaise herbe. Ensuite, 15 à 20 plantules sont transplantées dans des bacs en plastique remplis d'un mélange standard de terreau.Un code-barres est attribué à chaque plateau, contenant toutes les informations nécessaires à son identification unique, et les plateaux sont placés dans une serre chauffée jusqu'à ce que les semis atteignent le stade de deux à trois feuilles. La dernière étape consiste en un traitement herbicide à l'aide d'un pulvérisateur de banc de précision ; tous les herbicides sont appliqués sous forme de formulations commerciales avec des surfactants recommandés, à deux doses : la dose recommandée sur le terrain, et le triple de celle-ci. Trois à quatre semaines après le traitement, l'évaluation finale est réalisée. Un lecteur de code-barres est utilisé pour enregistrer le nombre de plantes survivantes et la biomasse estimée visuellement par unité expérimentale.Les données sont ensuite téléchargées sur un ordinateur et analysées afin de déterminer le statut de résistance aux herbicides. Le principal avantage de cette méthode par rapport aux tests de dépistage diagnostiques in vivo ou in vitro réside dans sa robustesse et sa souplesse. Autrement dit, la méthode est fiable et peut être facilement adaptée à un large éventail d'espèces grâce à de simples modifications.Cette méthode permet de répondre à des questions essentielles liées à l’étude et à la gestion des populations de mauvaises herbes résistantes aux herbicides dans les champs de CRO, telles que le profil et le niveau de résistance. Elle permet également de planifier correctement des étapes expérimentales supplémentaires, comme des expériences de réponse. En général, les chercheurs novices dans les tests de résistance aux herbicides éprouvent des difficultés en raison du grand nombre d’étapes et d’aspects à prendre en compte et à adapter aux conditions expérimentales spécifiques.Commencez par prélever un échantillon de graines, une espèce à la fois, et attribuez-lui un code unique. Nettoyez les graines en éliminant les impuretés et en les décortiquant. Remplissez un formulaire pour chaque échantillon en indiquant le code unique attribué.Nom de l'espèce, date de collecte, coordonnées GPS, commune, nom de l'agriculteur, superficie du champ, niveau d'infestation, culture, herbicides utilisés pendant la saison et historique du champ. Conserver les graines dans des sacs en papier non scellés étiquetés avec le code unique attribué. Permettre à l'humidité de s'évaporer, mais ne pas exposer les graines à des températures élevées ni à des fluctuations thermiques extrêmes.Pour éviter l'induction d'une dormance secondaire, conservez les graines nettoyées à quatre degrés Celsius dans une pièce sombre afin de permettre la vernalisation. Ajoutez un peu d'eau déionisée dans des boîtes en plastique.Découpez deux disques et une bande de papier filtre, qui, par capillarité, formeront un pont entre l'eau et les deux disques. Imbibez le papier filtre d'eau et placez-les dans les boîtes en plastique. Ensuite, déposez les graines séchées à l'air sur le papier.Transférez les boîtes en plastique à quatre degrés Celsius pendant la période requise, selon l'espèce. Ensuite, préparez une solution d'agar à 0,6 % contenant 0,1 % de nitrate de potassium en utilisant de l'eau déionisée, dissolvez l'agar dans un four à micro-ondes et versez la solution d'agar dans les boîtes en plastique. Une fois que le substrat est refroidi, placez les graines de Vern à germer sur l'agar solidifié.Placer les boîtes en plastique dans un cabinet de germination ; la durée de la vernalisation ainsi que les conditions de lumière et de température varient selon l'espèce de mauvaise herbe. Le repiquage, plutôt que le semis direct, permet d'obtenir une population uniforme de plantes au même stade de croissance, ce qui constitue une condition préalable importante pour optimiser l'efficacité du traitement herbicide. Repiquer 15 à 20 jeunes plants dans des bacs en plastique remplis d'un mélange standard de terreau composé de 60 % de limon argileux, 15 % de sable, 15 % de perlite agricole et 10 % de tourbe. Identifier chaque bac à l’aide d’un code-barres incluant toutes les informations nécessaires à l’identification unique : code de la population, herbicide testé, numéro de répétition et numéro progressif du bac.Placer les plaques dans une serre chauffée et arroser les plantes au besoin afin de maintenir le substrat à capacité au champ ou proche de celle-ci. La température de croissance varie selon l'espèce de mauvaise herbe pour les herbicides appliqués après l'émergence. Pulvériser les plantes lorsqu'elles atteignent le stade de deux à trois feuilles ; préparer la solution de tensioactif en vrac conformément aux instructions du fabricant. La concentration finale est-elle généralement exprimée en pourcentage du volume final ou correspond-elle au volume à distribuer par unité de surface ?Calculez la quantité de produit commercial à dissoudre dans la solution de tensioactif. À l'aide de cette équation, la dose d'herbicide est calculée en multipliant la dose recommandée au champ par la dose maximale testée et par le volume final de la solution, le tout divisé par le volume délivré par le pulvérisateur de laboratoire. Préparez la solution d'herbicide la plus concentrée. Ensuite, diluez la solution d'herbicide trois fois pour préparer la solution moins concentrée.Cette procédure réduit le risque d'erreurs lors de la pesée ou du pipetage des herbicides. Solution d'herbicide. La concentration est exprimée en volume à distribuer par unité de surface.Commencez la séquence de traitement avec une dose plus faible d'herbicide. Ainsi, il n'est pas nécessaire de laver la cabine de pulvérisation entre deux traitements utilisant le même herbicide. Appliquez la solution d'herbicide à l'aide d'un pulvérisateur de laboratoire de précision, délivrant 300 litres par hectare à une pression de 215 kilopascals et à une vitesse de 0,75 mètre par seconde, avec une barre équipée de trois buses hydrauliques à jet plat.Lavez le cabinet de pulvérisation deux fois lors du changement d'herbicide, en utilisant de l'eau de javel à 1 %, puis rincez. Effectuez l'évaluation trois ou quatre semaines après le traitement, selon les herbicides testés, en enregistrant le nombre de plantes ayant survécu au traitement ainsi que la biomasse estimée visuellement ou BEV, à l'aide d'un lecteur de codes-barres qui identifie automatiquement chaque plateau. Les plantes sont considérées comme mortes si elles ne présentent aucune croissance active, quelle que soit leur couleur ou leur apparence.Le VEB est obtenu par comparaison visuelle de la biomasse végétale entre une parcelle traitée et une parcelle témoin non traitée de la même population. Un score variant de 10 pour les plantes non affectées par l'herbicide à 0 lorsque les plantes sont clairement mortes est attribué à chaque plaque traitée. Évaluer l'efficacité générale du traitement en incluant une population sensible dans toutes les expériences, comme une population prélevée sur un site qui n'a jamais ou rarement été traité avec des herbicides.Exprimer la survie des plantes en pourcentage du nombre de plantes traitées comptées juste avant le traitement à l'herbicide et calculer l'erreur standard. Attribuer aux populations des valeurs de perméabilité selon quatre catégories fondées sur les résultats obtenus à partir de traitements avec deux doses d'herbicide : sensible lorsque moins de 5 % des plantes survivent à la dose d'herbicide ; une fois légèrement résistant lorsque les survivants varient de 5 % à 20 % à la dose d'herbicide.Résistance un x lorsqu'au-delà de 20 % des plantes survivent à la dose d'herbicide. Résistance un x et forte résistance lorsque les survivants dépassent 20 % à la dose d'herbicide un x et plus de 10 % à la dose d'herbicide. Trois x des résultats représentatifs d'un traitement herbicide avec du panolam sur quatre populations de iopa sont présentés.Le témoin sensible a été complètement contrôlé, tandis que la population 1410 a été classée comme légèrement résistante car moins de 20 % des plantes ont survécu. La population 1411 a été contrôlée à la dose trois x, mais la survie des plantes à la dose une x a été supérieure à 20 %, elle a donc été attribuée à notre statut. Enfin, la population 1412 n’a pas été contrôlée à la dose recommandée sur le terrain (une x) ni à trois fois cette dose, elle a donc été classée dans la catégorie hautement résistante.Un deuxième exemple d'estimation visuelle de la biomasse dans des plants de pop ou de rehas traités au méthyle de trien Ron est présenté ici. Un score de 10 est attribué au témoin non traité, tandis que les bacs dont les plants sont complètement maîtrisés ont une BEV de zéro. Un score intermédiaire de cinq est attribué aux bacs.Une biomasse végétale totale, correspondant à la moitié de celle des plants non traités, dont les plants présentent une biomasse comparable à celle du témoin non traité – où les plants n'ont pas été affectés par les traitements herbicides et se sont donc révélés hautement résistants –, donne une valeur de VEB de 10. Lors de la mise en œuvre de cette procédure, il est important de garder à l'esprit que la qualité des graines de mauvaises herbes, qui doivent avoir été récoltées à maturité puis conservées, a un impact significatif sur la réussite des expériences selon cette méthode. D'autres approches, telles que celles basées sur la réponse paras, peuvent être réalisées afin de répondre précisément à des questions supplémentaires liées au niveau de résistance.Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la manière d'aborder les tests de résistance aux herbicides et d'adapter différentes étapes à diverses espèces de mauvaises herbes. En particulier, la rupture de la dormance des graines et la germination des graines. N'oubliez pas que le travail avec des herbicides ou des acides concentrés peut être extrêmement dangereux, et que des précautions telles que le port de masques, de gants et d'autres équipements de protection individuelle doivent toujours être prises lors de la réalisation de cette procédure.

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Ici, un protocole est présenté pour le dépistage efficace et précis des génotypes de tabac pour la résistance à Phytophthora nicotianae chez les semis. Il s’agit d’une approche pratique pour la sélection de précision, ainsi que pour la recherche sur les mécanismes moléculaires.

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