Simple et test olfactif pour souris assistée par ordinateur

L’objectif global de l’expérience suivante est de tester la discrimination olfactive innée, la préférence olfactive ou l’évitement et la sensibilité olfactive chez la souris. Ceci est réalisé en exposant la souris à un nouvel attractif ou appelant, et à une odeur neutre, qui est l’eau. Pendant ce temps, une caméra vidéo enregistre la séance comportementale.

Ensuite, la vidéo est analysée dans l’image J à l’aide des macros fournies pour obtenir le temps passé dans les paramètres d’odeur et d’eau. Les résultats montrent le comportement de préférence ou d’évitement des odeurs par rapport à l’eau parmi différents génotypes sur la base de l’analyse assistée par ordinateur post-hoc. Le principal avantage du test olfactif par rapport à l’utilisation d’une arène et d’une arène auditives dédiées est qu’il utilise une arène familière et qu’il est donc d’achèvement rapide et de configuration simple.

De plus, il utilise du matériel peu coûteux démontrant que la procédure sera Emmanuel Abry, selon l’étudiant de mon laboratoire. Pour cette expérience, utilisez des souris mâles de trois à cinq mois, des souris noires C 57, six souris de type sauvage et des souris transgéniques. Cette démonstration utilise deux lignes d’éjection et des contrôles de compagnons de portée.

Pour les arènes expérimentales, utilisez des cages à souris propres et stérilisées avec trois centimètres de litière. Ensuite, préparez la configuration de l’appareil photo. Positionnez-le à 58 centimètres au-dessus du sol de la cage sur un support de trépied personnalisé.

Faites quelques marques sur le comptoir pour indiquer où doit se trouver la position de la cage. Pour une image centrale, réglez l’appareil photo pour qu’il enregistre une vidéo de 320 x 240 pixels à environ 15 images par seconde. Pour préparer l’auteur du test, conservez les concentrés de chaque odeur dans un solvant dans la mesure du possible.

Pour le test de préférence, préparez une solution de 10 % en poids par volume de beurre d’arachide dans de l’huile d’arachide. Pour le test d’évitement, avoir une solution à 98 % d’acide méthylbutyrique. Pour le test de sensibilité, prélevez l’urine féminine d’une souris de la même souche un à deux jours avant le test.

Retenez une femelle avec son ventre au-dessus de la grille de la cage et recueillez les gouttes de son urine dans un plat en plastique. Prélever des échantillons sur plusieurs femelles pour normaliser. Pour une variabilité individuelle, prélevez tous les échantillons dans un tube de 1,5 millilitre et stockez-le à moins 20 degrés Celsius.

Pour commencer, habituez les animaux, placez-en un dans une cage nettoyée et laissez-le explorer. Pendant cinq minutes, l’environnement de la cage d’essai doit ressembler à celui de la cage d’essai. Répétez la phase d’habituation une fois chaque jour de test, lorsque la période d’habituation est terminée, démarrez l’enregistrement et pipetez 60 microlitres d’un parfum agréable.

Dans ce cas, versez du beurre de cacahuète sur une paroi opposée, pipetez la même quantité d’eau. Un parfum neutre, appliquez les gouttes à environ 10 centimètres sur chaque mur. Laissez maintenant l’animal explorer pendant deux minutes, puis arrêtez l’enregistrement et renvoyez la souris dans sa cage d’origine.

Répétez le processus avec chaque souris à tester. Toujours avec de nouvelles cages d’essai. Trois à cinq jours Après avoir effectué tous les tests de préférence, effectuez le test d’évitement à l’aide d’une nouvelle cage de test.

Pour chaque souris, effectuez le test d’évitement. Comme pour le test d’attraction, remplacez uniquement l’odeur agréable par l’odeur d’évitement, qui est l’acide méthylbutyrique. Pour le test de sensibilité, une cage peut être réutilisée entre les essais pour la même souris.

Marquez donc le côté eau de la cage et préparez-vous à nettoyer les parois courtes avec du papier imbibé d’éthanol à 70 % entre les essais. Le jour de l’expérience, faites quatre concentrations d’urine avec la série de dilution décuplée. En utilisant de l’eau doublement distillée, comme pour le test d’évitement, habituez chaque animal à sa cage d’essai pendant cinq minutes.

Ensuite, exposez chaque souris à l’urine à la dilution la plus élevée au début, qui est de un à 10 000. Pendant l’enregistrement, appliquez la dilution d’urine dans la cage d’essai et appliquez de l’eau sur la paroi opposée. Comme pour les autres tests, laissez l’animal explorer.

Pendant deux minutes. Ensuite, transférez l’animal dans une cage de souris propre. Une fois que tous les animaux ont connu la concentration la plus faible, nettoyez toutes les parois de la cage d’essai et répétez le test sur chaque souris en utilisant l’urine la plus concentrée suivante.

Continuez ce processus jusqu’à ce que l’urine pure soit testée. Après avoir collecté toutes les données d’une expérience, ouvrez les vidéos de l’image J pour obtenir des détails de réglage et de traitement dont les détails sont fournis dans le protocole texte à l’aide des protocoles décrits. Deux lignes d’éjection différentes.

Les groupes B et C ont été comparés à des témoins fabriqués sur litière ; le groupe A.Un test T non directionnel de Student avec une variance égale ou inégale compare le temps passé entre l’odeur et l’eau au sein des génotypes. Comparez le comportement entre les génotypes à l’aide d’un inova unidirectionnel. Dans le test d’évitement, la réponse à l’odeur répulsive de deux acides méthylbutyriques était comme prévu pour les groupes A et B, mais le groupe C n’a montré aucun comportement d’évitement à cette odeur.

Dans le test de sensibilité, le seuil d’attraction a été obtenu en soustrayant le temps passé avec l’urine du temps passé avec l’eau, l’urine préférée à l’eau à une dilution de un à 1000. Alors que les deux groupes expérimentaux, B et c avaient besoin d’une concentration 100 fois plus grande pour montrer une préférence. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en quelques heures si elle est exécutée correctement, puis après cette procédure, d’autres méthodes comme l’apprentissage olfactif et l’extinction peuvent être effectuées pour étudier la plasticité olfactive et l’apprentissage.