Name: Un modèle de course thrombotique Basé sur cérébrale transitoire hypoxie-ischémie (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: Découvrez un modèle d'accident vasculaire cérébral thrombotique chez la souris par hypoxie-ischémie cérébrale transitoire. Cette méthode permet d'évaluer l'efficacité thérapeutique du tPA et d'étudier les mécanismes de l'infarctus cérébral.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Cette étude a été financée par la subvention NIH NS074559 (à C. K.). Nous remercions tous les collaborateurs qui ont contribué à la rédaction des articles de recherche sur lesquels le présent rapport méthodologique est basé.

Ce protocole est approuvé par le Comité institutionnel de protection des animaux et l&#39;utilisation (IACUC) de l&#39;Université Emory et suit les Instituts nationaux de la directrice de Santé pour les soins et l&#39;utilisation des animaux de laboratoire. 1. Configuration <ol><li> Préparer le lit chirurgicale sur coussin chauffant relié avec pompe à chaleur à 37 ° C pendant au moins 15 min avant la chirurgie. Placez un rouleau de cou à l&#39;aide du canon de seringue de 3 ml sur le lit chirurgical. Préparer le gaz d&#39;anesthésie avec 2% d&#39;isoflurane dans l&#39;air médical. </li><li> Préparer pince autoclaves, des ciseaux, porte-aiguilles, micro hémostatique, des cotons-tiges et des sutures. Préparer colle tissulaire et pommade ophtalmique. </li><li> Mettre en place le système de l&#39;hypoxie et régulateurs de température avec une lampe de chauffage et sonde rectale. Préparer gaz de l&#39;hypoxie avec 2% d&#39;isoflurane dans 7,5% O 2 pondérées par 92,5% de N 2. </li><li> Une heure avant la chirurgie, les souris sont analgesized par injection sous-cutanée d&#39;une libération lente Meloxicam (4,0 mg / kg). </li></ol> &lt;p class = &quot;jove_title&quot;&gt; 2. Cérébrale transitoire hypoxie ischémie (figure 1B) <ol><li> Anesthésier vieille 10-13 semaines C57BL mâle / 6 souris pesant 22 à 30 g dans la chambre de l&#39;induction de l&#39;anesthésie avec 3% d&#39;isoflurane avant que l&#39;animal ne répond pas aux pieds squeeze, puis enlever les poils sur le cou droite en utilisant un rasoir électronique. </li><li> Placez la souris sur le lit chirurgicale reliée à 2% d&#39;isoflurane dans l&#39;air médical au taux de 2 L / min. Forelimbs sécurisés tendus le long rouleau de cou à l&#39;aide de ruban adhésif médical côtés. </li><li> Nettoyez le site chirurgical pour incision avec de la bétadine suivie par l&#39;alcool et puis des cotons-tiges. </li><li> Sous microscope à dissection, faire une incision de 0,5 cm à droite du col à l&#39;aide d&#39;une pince droite et un micro ciseaux environ 0,2 cm latérales de la peau de la ligne médiane. </li><li> Utilisez une paire de pince fine dentelées à séparer le fascia et le tissu pour exposer le droit artère carotide commune (CRAC). Soigneusement séparer le CRAC du nerf vagal en utilisant une paire de pince fine lisses. </li><li> Direct knot deux prédécoupé 5-0 suture de soie (amovible) sur le CRAC, puis recoudre la peau en utilisant 4-0 Nylon suture monofilament (figure 1C). </li><li> Appliquer une pommade oculaire des deux yeux pour prévenir la sécheresse. </li><li> Transférer rapidement les souris au système de l&#39;hypoxie et de mettre le nez et la bouche en face-masque avec 2% d&#39;isoflurane dans 7,5% d&#39;O 2 au taux de 0,5-1 L / min pendant 30 min. <ol><li> Au cours de l&#39;hypoxie, utiliser des régulateurs de température avec des lampes de chauffage pour contrôler la température rectale à 37,5 ± 0,5 ° C. Surveiller la fréquence respiratoire à 80-120 respirations / min. Le maintien de la température du corps au-dessus de 37 ° C au cours de l&#39;hypoxie est important de créer cohérent infarctus cérébral. Fréquence respiratoire basse arrive généralement après 20 min hypoxie. Retirez le masque de protection et de permettre l&#39;alimentation en air normal si la fréquence respiratoire chute en dessous de 40. Cela prend 1-2 min et ne compte pas dans la durée de l&#39;hypoxie 30 min. </li></ol></li><li> Après l&#39;hypoxie, transférersouris à un lit chirurgical et libérer les deux sutures du CRAC. Fermer la plaie avec de la colle de tissu, puis retourner la souris à la cage. Exclure les animaux si les deux des deux noeuds en direct sont de façon inattendue libérés après l&#39;hypoxie. </li><li> Surveiller les souris pour 5-10 minutes pour se remettre de l&#39;hypoxie et l&#39;anesthésie. Placez les aliments mouillés dans la cage et le retourner au centre de soins aux animaux. Remarque: Les animaux présentant légère à sévère comportement d&#39;approche indirecte à 24 h après Thi sont corrélés avec le cerveau infraction. La plupart des animaux présentant des symptômes épileptiques meurent avant l&#39;timepoint 24 heures après Thi. </li></ol> 3. laser speckle imagerie de contraste Note: Bien que ce soit pas une procédure essentielle du modèle Thi, une granularité laser système d&#39;imagerie de contraste en deux dimensions 16 peut être utilisé pour caractériser les changements de débit sanguin cérébral (CBF) pendant ou après l&#39;hypoxie-ischémie transitoire. Pour documenter les modifications de CBF sous Thi, fiche immédiatement après la stEP 2.6. Alternativement, comparer le rétablissement CBF après Thi insulte, ces procédures peuvent être effectuées après l&#39;étape 2.10. <ol><li> Passer une souris anesthésiée en position couchée et effectuer un 1 cm de long incision médiane sur le cuir chevelu avec le crâne impressionnés, mais non ouvert. </li><li> Surveiller CBF dans les deux hémisphères cérébraux sous un imageur d&#39;écoulement du sang selon le protocole du fabricant et commencer l&#39;enregistrement du débit sanguin cérébral immédiatement après la chirurgie de la CCAO (étape 2.6). Continuer pendant 50 min. </li><li> Voir l&#39;image CBF avec des unités arbitraires dans une palette de 16 couleurs et d&#39;analyser en temps réel les régions sélectionnées en utilisant le logiciel MoorFLPI suivant les instructions du fabricant (figure 2). </li><li> Après l&#39;enregistrement de l&#39;image CBF, fermer le cuir chevelu avec de la colle tissulaire et le réexpédier vers la cage. </li></ol> 4. administration du tPA <ol><li> Injecter animaux à la veine de la queue avec le solvant ou 10 mg / kg tPA recombinant (220-300 &amp;# 956; l de 1 mg / m tPA) à raison de 0,5, 1 ou 4 heures après, plus tCCAo hypoxie (Figure 4). </li></ol> 5. Brain Damage détection avec plusieurs options Remarque: Pour recueillir des échantillons de cerveau, euthanasier les souris à 1, 4 ou 24 heures après Thi. <ol><li> Effectuer méthode de quantification du volume de l&#39;infarctus par in vivo chlorure de 2,3,5-triphényltétrazolium (TTC) à 24 heures après Thi insulte comme décrit précédente. 17 <ol><li> Intrapéritonéale injecter animaux avec une solution 1,4 M de mannitol (~ 0,1 ml / g de poids corporel) 30 minutes avant la perfusion transcardial. Souris perfuser Transcardial avec PBS suivis par 10 ml de 2% TTC. </li><li> Retirer le cerveau des animaux avec des instruments chirurgicaux après 10 min et la placer dans du paraformaldéhyde 4% pour la fixation pendant la nuit et dans la section 1 mm d&#39;épaisseur avec un vibratome. </li><li> Prenez une série de quatre lames de cerveau est segmenté par microscope numérique et quantitatififier le volume de l&#39;infarctus par le rapport de la zone infarcie (zone blanche sur le côté droit) de la surface de la, hémisphère controlatéral intact à l&#39;aide du logiciel ImageJ. </li></ol></li><li> Sinon, effectuer la formation de thrombose par immunofluorescence à 1 h après Thi insulte. <ol><li> Congeler le cerveau fixe dans le composé PTOM et les cerveaux à l&#39;article 12 um d&#39;épaisseur à l&#39;aide d&#39;un cryostat. </li><li> Incuber la lame de cerveau de lapin anti-anticorps de fibrinogène (1: 100) à la suite de chèvre anti-lapin Alexa 488 fluo colorant (1: 200) pour observer la fluorescence sur un microscope fluorescent. </li></ol></li><li> Sinon, effectuez une obstruction des vaisseaux par injection dans la veine de la queue de 100 pi 2% colorant bleu Evans à 4 h après Thi insulte. <ol><li> Euthanasier les souris et rapidement couper la tête pour enlever le cerveau dans du paraformaldéhyde 4% après Evans injection bleu. Remarque: Il faut 5-10 min pour Evans circulation bleu avec la couleur bleue à la fois antérieurs et hind membres. </li><li> Sectile cerveau fixé à 100 um d&#39;épaisseur en utilisant un microtome à glissière et d&#39;observer la fluorescence en utilisant un filtre d&#39;émission de 680 nm sur un microscope fluorescent. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Broderick, J. P., Hacke, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+acute+ischemic+stroke%3A+Part+I%3A+recanalization+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Treatment of acute ischemic stroke: Part I: recanalization strategies.</a> Circulation. 106 (12), 1563-1569 (2002).</li>
<li>Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiological+basis+of+translational+stroke+research%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Pathophysiological basis of translational stroke research.</a> Folia Neuropathol. 47 (3), 213-227 (2009).</li>
<li>Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+two+pathophysiologies+of+focal+brain+ischemia%3A+implications+for+translational+stroke+research%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">The two pathophysiologies of focal brain ischemia: implications for translational stroke research.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 32 (7), 1310-1316 (2012).</li>
<li>Macrae, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+stroke+research--advantages+and+disadvantages+of+the+most+common+rodent+models+of+focal+ischaemia%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Preclinical stroke research--advantages and disadvantages of the most common rodent models of focal ischaemia.</a> Br. J. Pharmacol. 164 (4), 1062-1078 (2011).</li>
<li>Niessen, F., Hilger, T., Hoehn, M., Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+clot+preparation+determine+outcome+of+recombinant+tissue+plasminogen+activator+treatment+in+experimental+thromboembolic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Differences in clot preparation determine outcome of recombinant tissue plasminogen activator treatment in experimental thromboembolic stroke.</a> Stroke. 34 (8), 2019-2024 (2003).</li>
<li>Orset, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+in+situ+thromboembolic+stroke+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Mouse model of in situ thromboembolic stroke and reperfusion.</a> Stroke. 38 (10), 2771-2778 (2007).</li>
<li>Watson, B. D., Dietrich, W. D., Prado, R., Ginsberg, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Argon+laser-induced+arterial+photothrombosis.+Characterization+and+possible+application+to+therapy+of+arteriovenous+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Argon laser-induced arterial photothrombosis. Characterization and possible application to therapy of arteriovenous malformations.</a> J. Neurosurgery. 66 (5), 748-754 (1987).</li>
<li>Sun, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergy+of+combined+tPA-edaravone+therapy+in+experimental+thrombotic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Synergy of combined tPA-edaravone therapy in experimental thrombotic stroke.</a> PLoS One. 9, e98807(2014).</li>
<li>Levine, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anoxic-ischemic+encephalopathy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Anoxic-ischemic encephalopathy in rats.</a> Am. J. Pathol. 36, 1-17 (1960).</li>
<li>Rice, J. E. 3rd, Vannucci, R. C., Brierley, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+immaturity+on+hypoxic-ischemic+brain+damage+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+Neurol%22%5BJournal%5D)">The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat.</a> Annals Neurol. 9 (2), 131-141 (1981).</li>
<li>Vannucci, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+stroke+in+the+female+diabetic%2C+db%2Fdb%2C+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Experimental stroke in the female diabetic, db/db, mouse.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 21 (2), 52-60 (2001).</li>
<li>Adhami, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+ischemia-hypoxia+induces+intravascular+coagulation+and+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Cerebral ischemia-hypoxia induces intravascular coagulation and autophagy.</a> Am. J. Pathol. 169 (2), 566-583 (2006).</li>
<li>Shereen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+diffusion+tensor+imaging+and+neuropathological+correlation+in+a+murine+model+of+hypoxia-ischemia-induced+thrombotic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Ex vivo diffusion tensor imaging and neuropathological correlation in a murine model of hypoxia-ischemia-induced thrombotic stroke.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 31 (4), 1155-1169 (2011).</li>
<li>Michaud, J. P., Pimentel-Coelho, P. M., Tremblay, Y., Rivest, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+Ly6C+low+monocytes+after+cerebral+hypoxia-ischemia+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">The impact of Ly6C low monocytes after cerebral hypoxia-ischemia in adult mice.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 34 (7), e1-e9 (2014).</li>
<li>Zoppo, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virchow%27s+triad%3A+the+vascular+basis+of+cerebral+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Neurol.+Dis%22%5BJournal%5D)">Virchow's triad: the vascular basis of cerebral injury.</a> Rev. Neurol. Dis. 5, 12-21 (2008).</li>
<li>Dunn, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+speckle+contrast+imaging+of+cerebral+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+Biomed.+Eng%22%5BJournal%5D)">Laser speckle contrast imaging of cerebral blood flow.</a> Annals Biomed. Eng. 40 (2), 367-377 (2012).</li>
<li>Sun, Y. Y., Yang, D., Kuan, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mannitol-facilitated+perfusion+staining+with+2%2C3%2C5-triphenyltetrazolium+chloride+%28TTC%29+for+detection+of+experimental+cerebral+infarction+and+biochemical+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Mannitol-facilitated perfusion staining with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) for detection of experimental cerebral infarction and biochemical analysis.</a> J. Neurosci. Methods. 203 (1), 122-129 (2012).</li>
<li>Lozano, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+and+regional+mortality+from+235+causes+of+death+for+20+age+groups+in+1990+and+2010%3A+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Global and regional mortality from 235 causes of death for 20 age groups in 1990 and 2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study.</a> Lancet. 380 (9859), 2095-2128 (2010).</li>
<li>Murray, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disability-adjusted+life+years+%28DALYs%29+for+291+diseases+and+injuries+in+21+regions%2C+1990-2010%3A+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Disability-adjusted life years (DALYs) for 291 diseases and injuries in 21 regions, 1990-2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study.</a> Lancet. 380 (9859), 2197-2223 (2012).</li>
<li>Dirnagl, U., Macleod, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stroke+research+at+a+road+block%3A+the+streets+from+adversity+should+be+paved+with+meta-analysis+and+good+laboratory+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharm%22%5BJournal%5D)">Stroke research at a road block: the streets from adversity should be paved with meta-analysis and good laboratory practice.</a> Br. J. Pharm. 157 (7), 1154-1156 (2009).</li>
<li>Dirnagl, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+concerted+appeal+for+international+cooperation+in+preclinical+stroke+research%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">A concerted appeal for international cooperation in preclinical stroke research.</a> Stroke. 44 (6), 1754-1760 (2013).</li>
<li>Khatri, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revascularization+end+points+in+stroke+interventional+trials%3A+recanalization+versus+reperfusion+in+IMS-I%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Revascularization end points in stroke interventional trials: recanalization versus reperfusion in IMS-I.</a> Stroke. 36 (11), 2400-2403 (2005).</li>
<li>Rosenberg, R. D., Aird, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular-bed--specific+hemostasis+and+hypercoagulable+states%5BTitle%5D)+AND+%22New+Eng.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Vascular-bed--specific hemostasis and hypercoagulable states.</a> New Eng. J. Med. 340 (20), 1555-1564 (1999).</li>
<li>Majid, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+vulnerability+to+permanent+focal+cerebral+ischemia+among+3+common+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Differences in vulnerability to permanent focal cerebral ischemia among 3 common mouse strains.</a> Stroke. 31 (11), 2707-2714 (2000).</li>
</ol>

L&#39;AVC est un problème majeur de santé d&#39;une importance croissante pour toute société avec un vieillissement de la population. Globalement, l&#39;AVC est la deuxième principale cause de décès avec un taux d&#39;environ 5,9 millions d&#39;événements mortels en 2010, ce qui équivaut à 11,1% de tous les décès 18. L&#39;AVC est également la troisième cause d&#39;années de vie ajustées sur l&#39;incapacité (DALY) perdues dans le monde en 2010, passant de la cinquième position en 1990 19. Ces donn...

Thrombolyse et recanalisation est la thérapie la plus efficace de l&#39;AVC ischémique aigu dans la pratique clinique 1. Cependant, la majorité des recherches de neuroprotection préclinique a été effectuée dans un modèle transitoire mécanique d&#39;obstruction (intraluminal suture d&#39;occlusion de l&#39;artère cérébrale moyenne) qui produit une récupération rapide de la circulation sanguine cérébrale après le retrait de l&#39;occlusion vasculaire et montre peu ou pas d&#39;avantages par tPA thrombolyse. Il a été suggéré que le choix douteux de modèles d&#39;AVC a contribué, au moins en partie, à la difficulté de traduire la thérapie neuroprotectrice aux patients 2,3. Par conséquent, il est une demande croissante pour l&#39;emploi de modèles d&#39;AVC thromboembolique tPA-sensibles dans la recherche préclinique, mais ces modèles ont aussi des problèmes techniques (voir Discussion) 4-7. Nous décrivons ici un nouveau modèle d&#39;accident thrombotique fondée sur hypoxique-ischémique (THI) insulte transitoire unilatérale et ses réponses à la thérapie intraveineuse tPA 8. Le modèle de course Thi a été développé sur la base de la procédure Levine (de ligature permanente de l&#39;artère carotide commune unilatérale suivie d&#39;une exposition à l&#39;hypoxie transitoire dans une chambre) qui a été inventé pour des expériences avec des rats adultes en 1960 9. La procédure Levine originale tombe dans l&#39;oubli parce il ne produit des dommages au cerveau variables, mais la même insulte causée neuropathologie cohérente chez les petits rongeurs quand il a été ré-introduit par Robert Vannucci et ses collègues comme un modèle de néonatale encéphalopathie hypoxique-ischémique (HIE) en 1981 10. Au cours des dernières années, certains enquêteurs ré-adapter le modèle Levine-Vannucci à des souris adultes en ajustant la température dans la chambre 11 hypoxique. Il est plausible que les lésions cérébrales incompatibles dans la procédure Levine origine peuvent résulter de fluctuations de température du corps des rongeurs adultes dans la chambre hypoxique. Pour tester cette hypothèse, nous avons modifié la procédure Levine en administrant gaz hypoxiqueà travers un masque, tout en maintenant la température à coeur de rongeur à 37 ° C sur la table chirurgicale 12. Comme on s&#39;y attendait, le contrôle de la température du corps rigoureux considérablement augmenté la reproductibilité de la pathologie induite par HI-cérébrale. L&#39;insulte HI déclenche également la coagulation, l&#39;autophagie et de gris et de blessures 13 matière blanche. D&#39;autres chercheurs ont également utilisé le modèle de HI pour enquêter post-AVC réponses inflammatoires 14. Une caractéristique unique du modèle de course de HI est qu&#39;il suit de près la triade de l&#39;Virchow de la formation de thrombus, y compris la stase du flux sanguin, lésions endothéliales (par exemple à cause du stress oxydatif HI-induite), et hypercoagulabilité (activation plaquettaire HI-induite) ( Figure 1A) 15. En tant que tel, le modèle de HI peut capturer des mécanismes physiopathologiques pertinents pour AVC ischémique dans le monde réel. Avec cette idée en tête, nous avons affiné le modèle HI avec ligature réversible de l&#39;ONUilateral artère carotide commune (donc de créer une insulte HI transitoire), et testé ses réponses aux tPA thrombolyse avec ou sans edaravone. Edaravone est un piégeur de radicaux libres déjà approuvé au Japon pour traiter l&#39;AVC ischémique dans les 24 heures de l&#39;apparition 9. Nos expériences ont montré que aussi brève que 30 minutes transitoire HI déclenche myocarde thrombotique, et que le traitement combiné tPA-edaravone confère des avantages synergiques 8. Nous décrivons ici les procédures chirurgicales détaillés et des considérations méthodologiques du modèle Thi, qui peuvent être utilisés pour optimiser les traitements de reperfusion de l&#39;AVC ischémique aigu.

<table><tbody><tr><td>souris mâles adultes</td><td>Charles River</td><td>C57BL/6&nbsp ;</td><td>10-13 semaines (22-30 g)</td></tr><tr><td>Système d’anesthésie animale de laboratoire mobile</td><td>VetEquip</td><td>901807</td><td>anesthésie</td></tr><tr><td>Réservoir d’air médical (comprimé) Airgas</td><td></td><td>UN1002</td><td>anesthésie</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Healthcare</td><td>NDC 66794-013-25</td><td>anesthésie</td></tr><tr><td>Laboratoire multi-stations Anesthésie animaleSystème d’anesthésie animale</td><td>Surgivet</td><td>V703501</td><td>système</td></tr> <tr><td>d’hypoxie7,5 % O2 équilibré par 92,5 % N2 réservoir</td><td>Airgas</td><td>UN1956</td> Système <td>d’hypoxie</td></tr><tr><td>Régulateur de température avec lampe chauffante&nbsp ;</td><td>Cole Parmer&nbsp ;</td><td>EW-89000-10</td><td>Régulateurs de température</td></tr><tr><td>Sonde rectale</td><td>Cole Parmer&nbsp ;</td><td>NCI-00141PG</td><td>Régulateurs de température</td></tr><tr><td>Microscope de dissection&nbsp ;</td><td>Olympe&nbsp ;</td><td>Configuration chirurgicale</td> <td>SZ40</td></tr><tr><td>Pompe à chaleur avec coussin chauffant</td><td>Gaymar&nbsp ;</td><td>Dispositif chirurgical</td> <td>TP700</td></tr><tr><td>Pince fine incurvée (dentelée)</td><td>Instrument chirurgical</td> <td>FST</td><td>11370-31</td></tr><tr><td>Pince fine incurvée (lisse)</td><td>FST</td><td>11373-12</td><td>instrument chirurgical</td></tr><tr><td>micro-ciseaux</td><td>FST</td><td>15000-03</td><td>Instrument chirurgical</td></tr><tr><td></td><td>FST</td><td>12060-01</td><td>Instrument chirurgical</td></tr><tr><td>Halsted-Mosquito hémostats</td><td>FST</td><td>13008-12</td><td>instrument chirurgical</td></tr><tr><td>5-0 suture en soie&nbsp ;</td><td>Harvard Apparatus</td><td>624143</td><td>fournitures chirurgicales</td></tr><tr><td>4-0 Suture monofilament en nylon</td><td>LOOK</td><td>766B</td><td>Fournitures</td></tr><tr><td>chirurgicales Colle tissulaire</td><td>Abbott Laboratories</td><td>NC9855218</td><td>fournitures chirurgicales</td></tr><tr><td>Puralube Vet ointement</td><td>Fisher</td><td>NC0138063&nbsp ;</td><td>prévention de la sécheresse oculaire</td></tr><tr><td>Imageur de flux sanguin MoorFLPI-2</td> Source laser <td>Moor</td><td>780-nm</td><td>Laser Speckle Contrast Imaging</td></tr><tr><td>Mannitol</td><td>Sigma</td><td>M4125</td><td>in vivo TTC</td></tr><tr><td>2,3,5-triphényltétrazolium chlorure (TTC)&nbsp ;</td><td>Sigma</td><td>T8877</td><td>in vivo TTC</td></tr><tr><td>Vibratome</td><td>Stoelting</td><td>51425</td><td>section du cerveau pour in vivo TTC&nbsp ;</td></tr><tr><td>Microscope numérique</td><td>Dino-Lite</td><td>AM2111</td><td>imagerie du cerveau entier</td></tr><tr><td>composé O.C.T</td><td>Sakura Finetek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>chèvre anti-lapin Alexa Fluro 488</td><td>Invitrogen</td><td>A11008</td><td>Immunohistochimie</td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Vibratome</td><td>ultrapro 5000</td><td>section du cerveau pour IHC</td></tr><tr><td>Evans bleu</td><td>Sigma</td><td>E2129</td><td>Détection vasculaire perfusion</td></tr><tr><td>Microtome Microscopie</td><td>électronique Sciences</td><td>5000</td><td>section du cerveau pour l’histologie</td></tr><tr><td>Avertin (2, 2, 2-Tribromoéthanol)</td><td>Sigma</td><td>T48402</td><td>euthanasie</td></tr><tr><td>Microscope fluorescent</td><td>Olympus</td><td>DP73</td><td></td></tr><tr><td>Meloxicam SR</td><td>ZooPharm</td><td></td><td>AINS analgésie</td></tr></tbody></table>

un modèle de course thrombotique basé sur cérébrale transitoire hypoxie-ischémie

A Thrombotic Stroke Model Based On Transient Cerebral Hypoxia-ischemia

la recherche de l&#39;AVC a subi de nombreux revers dans la traduction de thérapies neuroprotectrices dans la pratique clinique. En revanche, la thérapie du monde réel (tPA thrombolyse) produit rarement des avantages dans des modèles expérimentaux basés mécaniques occlusion, qui dominent la recherche préclinique de course. Cette scission entre le banc et chevet suggère la nécessité d&#39;employer des modèles tPA-sensibles dans la recherche préclinique de course. À cette fin, un modèle d&#39;accident thrombotique simple et tPA-réactive est inventé et décrit ici. Ce modèle consiste en une occlusion transitoire de l&#39;artère carotide commune unilatérale et la livraison de 7,5% d&#39;oxygène à travers un masque de visage chez la souris adulte pour 30 min, tout en maintenant la température rectale des animaux à 37,5 ± 0,5 ° C. Bien que la ligature réversible de l&#39;artère carotide ou une hypoxie unilatéral supprimée chaque débit sanguin cérébral seulement de manière transitoire, la combinaison des deux injurieux provoqué une durée déficits de reperfusion, de la fibrine et le dépôt de plaquettes et une grande Infarct sur le territoire de l&#39;artère cérébrale moyenne fournie. Surtout, la queue veineuse injection de tPA recombinant à 0,5, 1 ou 4 heures post-Thi (10 mg / kg) a fourni la réduction du temps-dépendante du taux de mortalité et la taille de l&#39;infarctus. Ce nouveau modèle de course est simple et peut être normalisée dans les laboratoires de comparer les résultats expérimentaux. De plus, il induit la thrombose ou sans introduction d&#39;emboles craniectomy préformés. Compte tenu de ces avantages uniques, le modèle Thi est un complément utile au répertoire de recherche sur l&#39;AVC préclinique.

Deux dimensions contraste de granularité laser imagerie (LSCI) 16 a été utilisé pour comparer les altérations du débit sanguin cérébral (CBF) de 30 min occlusion transitoire carotide unilatérale (tCCAO), exposition de 30 min à l&#39;hypoxie (7,5% d&#39;oxygène), et 30 min unilatérale ligature de la carotide sous hypoxie (THI). Cette expérience a révélé que tCCAO sous la normoxie supprimée CBF sur la carotide hémisphère ligaturé à ~ 50% de la valeur de référence, qui récupère rapidement à plus de 85% après la ...

Les modèles d’AVC thromboemboliques sont des outils essentiels pour optimiser la thérapie de recanalisation. Nous rapportons ici un modèle murin d’AVC thrombotique basé sur une agression hypoxique-ischémique cérébrale transitoire (tHI), qui déclenche une thrombose et un infarctus, et répond favorablement à la fibrinolyse médiée par l’activateur tissulaire du plasminogène (tPA) dans une fenêtre thérapeutique similaire à celles des patients victimes d’AVC.

Un modèle de course thrombotique Basé sur cérébrale transitoire hypoxie-ischémie

Stroke research has endured many setbacks in translating neuroprotective therapies into clinical practice. In contrast, the real-world therapy (tPA ...

L'objectif général de cette procédure est d'établir un modèle simple d'accident vasculaire cérébral thrombotique avec une infarctus cérébral stable et d'évaluer les effets protecteurs de l'activateur tissulaire du plasminogène, ou traitement TPA. Premièrement, l'induction d'une hypoxie-ischémie cérébrale transitoire, ou HIT, est démontrée par la double ligature de l'artère carotide commune droite, ou ACCD, et l'exposition de l'animal ligaturé à des conditions d'hypoxie afin d'induire la thrombose. Après 30 minutes de condition hypoxique, les deux nœuds situés sur l'artère carotide sont desserrés.Dans la dernière étape, on présente l'administration et l'évaluation des effets du traitement par l'ATP. Alternativement, on peut étudier l'enregistrement en temps réel du débit sanguin cérébral, la formation du thrombus et le degré d'obstruction des vaisseaux. Ce modèle permet d'induire un accident vasculaire cérébral thrombotique chez des souris adultes et de provoquer une restauration en utilisant leur propre système de coagulation.Nous souhaitons utiliser ce modèle pour étudier la manière dont le cerveau régule son propre débit sanguin dans des conditions d'ischémie expérimentale. Nous l'utilisons également pour étudier comment améliorer la thérapie thrombolytique. La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle, car il peut être difficile de maintenir une température corporelle adéquate et une respiration régulière durant l'infection cérébrale.Étapes d'induction Au moins 15 minutes avant de commencer la procédure. Placer le plateau chirurgical sur un tapis chauffant réglé à 37 degrés Celsius et y placer un rouleau cervical fabriqué à partir du corps d'une seringue de trois millilitres. Régler le système d'hypoxie pour délivrer 2 % d'isoflurane dans 7,5 % d'oxygène équilibré par 92,5 % d'azote, puis régler les contrôleurs de température.Placez une souris mâle C57BL/6 âgée de 10 à 13 semaines et pesant de 22 à 30 grammes sur le plateau chirurgical. Après avoir confirmé l'anesthésie par une pression sur l'orteil, appliquez un onguent sur les yeux de l'animal. Étirez les quatre membres le long du cou, puis roulez-les et fixez-les avec du ruban adhésif médical.Ensuite, à l’aide d’une crème dépilatoire, raser les poils sur le cou de l’animal et nettoyer le site chirurgical. Placer maintenant le lit chirurgical sous un microscope stéréoscopique et pratiquer une incision cervicale droite de 0,5 centimètre dans la peau, en suivant la ligne médiane. À l’aide d’une pince fine, écarter la trachée et les muscles afin d’exposer l’artère carotide commune droite, puis glisser deux fils de soie prétaillés de cinq zéro sous l’artère.Veillez soigneusement à séparer l'artère carotide du nerf vague en direct, sans sectionner les deux sutures en soie 5-0 préparées et détachables sur l'ACCD. Ensuite, utilisez des sutures en nylon monofilament 4-0 pour fermer la peau et transférez rapidement la souris vers le système d'hypoxie. Placez un masque facial sur le nez et la bouche de l'animal ainsi qu'une sonde rectale afin de maintenir une température corporelle de 37,5 degrés Celsius tout au long de l'administration de l'hypoxie.Régler les lampes chauffantes après 30 minutes. Replacer la souris sur le plateau chirurgical et retirer les deux fils. Puis fermer la plaie avec de la colle tissulaire et remettre la souris dans sa cage en surveillant l’animal jusqu’à ce qu’il soit complètement rétabli.Alternativement, l'imagerie par contraste du speckle laser peut être utilisée pour examiner le débit sanguin cérébral pendant et après l'hypoxie-ischémie. Placer l'animal en position prônée. Ensuite, ouvrir le cuir chevelu à l’aide d’une incision médiane d’un centimètre de longueur afin d’exposer, sans l’ouvrir, le crâne.Ensuite, transférez immédiatement l'animal vers l'appareil d'imagerie du flux sanguin et commencez l'enregistrement du flux sanguin cérébral. Visualisez les images du flux sanguin cérébral conformément aux instructions du fabricant, à l'aide du logiciel FLPI, afin d'analyser en temps réel les régions sélectionnées. Pour évaluer les effets du traitement par l'activateur tissulaire du plasminogène (TPA), injectez les animaux par voie intraveineuse dans la veine de la queue au moment approprié, après l'occlusion carotidienne unilatérale transitoire et l'hypoxie.Ensuite, quantifiez le volume d'infarctus par le TTC in vivo 24 heures après l'ischémie hypoxique cérébrale transitoire. Le jour suivant, utilisez un vibrotome pour obtenir des sections d'un millimètre d'épaisseur. Enfin, obtenez une série de quatre images cérébrales sectionnées par microscopie numérique et utilisez le logiciel d'imagerie approprié pour quantifier le volume d'infarctus comme le rapport entre la zone d'infarctus blanche et la surface de l'hémisphère controlatéral non endommagé.Jusqu'à présent, cette procédure, d'autres méthodes de thrombolyse peuvent être utilisées pour évaluer leurs effets et leur potentiel clinique. Cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de l'accident vasculaire cérébral ischémique pour explorer la thérapie thrombolytique dans le cerveau.

a-thrombotic-stroke-model-based-on-transient-cerebral-hypoxia-ischemia

Research

Recherche

JoVE Journal

Medicine

Médecine

Le modèle de rat postnatal pour une lésion cérébrale hypoxique-ischémique est un modèle bien établi de ressources humaines encéphalopathie néonatale hypoxique-ischémique (EHI). Dans cet article, nous décrivons le modèle de la HIE chez les bébés rats post-natale.

Le modèle encéphalopathie hypoxique ischémique de l&#39;ischémie périnatale

Cette vidéo montre la procédure de reproduction d’un AVC thrombotique dans un modèle murin en bloquant l’artère carotide commune droite et en exposant la souris à un environnement pauvre en oxygène. Ce processus réduit le flux de sang et d’oxygène vers le cerveau, provoquant la formation de caillots sanguins et des lésions cérébrales.

Induction d’un AVC thrombotique par hypoxie et ischémie dans un modèle murin

Photothrombosis est une technique rapide, peu invasive pour induire petite et bien délimitée du myocarde dans les domaines d'intérêt de façon très reproductible. Il est particulièrement adapté pour étudier les réponses cellulaires et moléculaires qui sous-tendent la plasticité du cerveau chez les souris transgéniques.

Ischémie Photothrombotic: A photochimique modèle de lésion corticale minimalement invasive et reproductible pour les études de course de souris

Différents modèles murins de l'occlusion de l'artère cérébrale moyenne (MCAO) sont largement utilisés dans les recherches sur le cerveau expérimentale. Ici, nous démontrons le modèle de transcrânienne OAMC distale permanente qui produit infarctus cortical cohérente d'une taille correspondant à des dommages imposée par la majorité des accidents ischémiques cérébraux humains.

Modélisation des maladies chez les souris: Coagulation permanente de l&#39;artère cérébrale moyenne distale

L’AVC néonatal est une cause importante de lésions cérébrales précoces nécessitant un modèle translationnel avec des modèles de lésions focales cohérents et une reproductibilité élevée afin de permettre l’étude. Cette étude décrit la procédure chirurgicale détaillée pour créer une lésion d’ischémie-reperfusion focale unilatérale non hémorragique chez les rongeurs équivalents à terme.

Transitoire cérébrale moyenne Artère Occlusion Modèle de l&#39;AVC néonatale chez les rats P10

Décrit ici est le modèle d’AVC photothrombotique, où un AVC est produit à travers le crâne intact en induisant une occlusion microvasculaire permanente à l’aide d’un éclairage laser après administration d’un colorant photosensible.

Modélisation de l’AVC chez la souris: lésions corticales focales par photothrombose

Différents modèles d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne (MCAo) sont utilisés dans la recherche expérimentale sur les accidents vasculaires cérébraux. Ici, un modèle expérimental d’AVC de MCAo transitoire via l’artère carotide externe (ECA) est décrit, qui vise à imiter l’AVC humain, dans lequel le thrombus cérébrovasculaire est enlevé en raison d’une lyse spontanée du caillot ou d’un traitement.

Modélisation de l’AVC chez la souris: occlusion transitoire de l’artère cérébrale moyenne via l’artère carotide externe

Ce protocole décrit le modèle d’ischémie cérébrale focale transitoire chez la souris par occlusion intraluminale de l’artère cérébrale moyenne. De plus, des exemples d’évaluation des résultats sont présentés à l’aide de l’imagerie par résonance magnétique et de tests comportementaux.

Modèle d’occlusion transitoire de l’artère cérébrale moyenne de l’AVC

Ici, nous présentons un protocole pour établir un modèle distal d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne (dMCAO) par électrocoagulation transcrânienne chez les souris C57BL/6J et évaluons le comportement neurologique et les caractéristiques histopathologiques ultérieurs.

Induction de l’AVC ischémique aigu chez la souris à l’aide de la technique d’occlusion de l’artère moyenne distale

Cette étude présente un protocole pour l’établissement d’un modèle animal hautement reproductible de transformation hémorragique (HT) utilisant l’occlusion/reperfusion de l’artère cérébrale moyenne (MCAO/R) chez des souris C57BL/6 atteintes d’hyperglycémie aiguë.

Un modèle murin de transformation hémorragique induite par une hyperglycémie aiguë combinée à une ischémie focale transitoire

Découvrez un modèle d'accident vasculaire cérébral thrombotique chez la souris par hypoxie-ischémie cérébrale transitoire. Cette méthode permet d'évaluer l'efficacité thérapeutique du tPA et d'étudier les mécanismes de l'infarctus cérébral.

Un modèle de course thrombotique Basé sur cérébrale transitoire hypoxie-ischémie

Explorer plus de vidéos