Un modèle de course thrombotique Basé sur cérébrale transitoire hypoxie-ischémie

L'objectif général de cette procédure est d'établir un modèle simple d'accident vasculaire cérébral thrombotique avec une infarctus cérébral stable et d'évaluer les effets protecteurs de l'activateur tissulaire du plasminogène, ou traitement TPA. Premièrement, l'induction d'une hypoxie-ischémie cérébrale transitoire, ou HIT, est démontrée par la double ligature de l'artère carotide commune droite, ou ACCD, et l'exposition de l'animal ligaturé à des conditions d'hypoxie afin d'induire la thrombose. Après 30 minutes de condition hypoxique, les deux nœuds situés sur l'artère carotide sont desserrés.

Dans la dernière étape, on présente l'administration et l'évaluation des effets du traitement par l'ATP. Alternativement, on peut étudier l'enregistrement en temps réel du débit sanguin cérébral, la formation du thrombus et le degré d'obstruction des vaisseaux. Ce modèle permet d'induire un accident vasculaire cérébral thrombotique chez des souris adultes et de provoquer une restauration en utilisant leur propre système de coagulation.

Nous souhaitons utiliser ce modèle pour étudier la manière dont le cerveau régule son propre débit sanguin dans des conditions d'ischémie expérimentale. Nous l'utilisons également pour étudier comment améliorer la thérapie thrombolytique. La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle, car il peut être difficile de maintenir une température corporelle adéquate et une respiration régulière durant l'infection cérébrale.

Étapes d'induction Au moins 15 minutes avant de commencer la procédure. Placer le plateau chirurgical sur un tapis chauffant réglé à 37 degrés Celsius et y placer un rouleau cervical fabriqué à partir du corps d'une seringue de trois millilitres. Régler le système d'hypoxie pour délivrer 2 % d'isoflurane dans 7,5 % d'oxygène équilibré par 92,5 % d'azote, puis régler les contrôleurs de température.

Placez une souris mâle C57BL/6 âgée de 10 à 13 semaines et pesant de 22 à 30 grammes sur le plateau chirurgical. Après avoir confirmé l'anesthésie par une pression sur l'orteil, appliquez un onguent sur les yeux de l'animal. Étirez les quatre membres le long du cou, puis roulez-les et fixez-les avec du ruban adhésif médical.

Ensuite, à l’aide d’une crème dépilatoire, raser les poils sur le cou de l’animal et nettoyer le site chirurgical. Placer maintenant le lit chirurgical sous un microscope stéréoscopique et pratiquer une incision cervicale droite de 0,5 centimètre dans la peau, en suivant la ligne médiane. À l’aide d’une pince fine, écarter la trachée et les muscles afin d’exposer l’artère carotide commune droite, puis glisser deux fils de soie prétaillés de cinq zéro sous l’artère.

Veillez soigneusement à séparer l'artère carotide du nerf vague en direct, sans sectionner les deux sutures en soie 5-0 préparées et détachables sur l'ACCD. Ensuite, utilisez des sutures en nylon monofilament 4-0 pour fermer la peau et transférez rapidement la souris vers le système d'hypoxie. Placez un masque facial sur le nez et la bouche de l'animal ainsi qu'une sonde rectale afin de maintenir une température corporelle de 37,5 degrés Celsius tout au long de l'administration de l'hypoxie.

Régler les lampes chauffantes après 30 minutes. Replacer la souris sur le plateau chirurgical et retirer les deux fils. Puis fermer la plaie avec de la colle tissulaire et remettre la souris dans sa cage en surveillant l’animal jusqu’à ce qu’il soit complètement rétabli.

Alternativement, l'imagerie par contraste du speckle laser peut être utilisée pour examiner le débit sanguin cérébral pendant et après l'hypoxie-ischémie. Placer l'animal en position prônée. Ensuite, ouvrir le cuir chevelu à l’aide d’une incision médiane d’un centimètre de longueur afin d’exposer, sans l’ouvrir, le crâne.

Ensuite, transférez immédiatement l'animal vers l'appareil d'imagerie du flux sanguin et commencez l'enregistrement du flux sanguin cérébral. Visualisez les images du flux sanguin cérébral conformément aux instructions du fabricant, à l'aide du logiciel FLPI, afin d'analyser en temps réel les régions sélectionnées. Pour évaluer les effets du traitement par l'activateur tissulaire du plasminogène (TPA), injectez les animaux par voie intraveineuse dans la veine de la queue au moment approprié, après l'occlusion carotidienne unilatérale transitoire et l'hypoxie.

Ensuite, quantifiez le volume d'infarctus par le TTC in vivo 24 heures après l'ischémie hypoxique cérébrale transitoire. Le jour suivant, utilisez un vibrotome pour obtenir des sections d'un millimètre d'épaisseur. Enfin, obtenez une série de quatre images cérébrales sectionnées par microscopie numérique et utilisez le logiciel d'imagerie approprié pour quantifier le volume d'infarctus comme le rapport entre la zone d'infarctus blanche et la surface de l'hémisphère controlatéral non endommagé.

Jusqu'à présent, cette procédure, d'autres méthodes de thrombolyse peuvent être utilisées pour évaluer leurs effets et leur potentiel clinique. Cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de l'accident vasculaire cérébral ischémique pour explorer la thérapie thrombolytique dans le cerveau.