Name: Méthode détude Palatal Fusion utilisant statique Organ Culture (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-09-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 58 s
Description: Découvrez une méthode de dissection palatine et de culture d'organes statique pour étudier le développement du palais chez la souris. Cette technique permet d'évaluer les effets de médicaments sur la fusion palatine et de mieux comprendre les mécanismes du bec-de-lièvre.

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Toutes les procédures décrites doivent être effectuées en conformité avec les directives et règlements pour l&#39;utilisation d&#39;animaux vertébrés, y compris l&#39;approbation préalable par le Comité institutionnel de protection et d&#39;utilisation des animaux locale. 1. Préparation des instruments de dissection et Culture Media <ol><li> Prélavage tous les instruments à utiliser dans la dissection avec 3% de peroxyde d&#39;hydrogène, puis autoclave à 121 ° C pendant 20 min. Filtre BGJb support avec une solution antibiotique et antimycotique en utilisant un filtre de 0,22 um de taille de pore avec aspiration par le vide dans une hotte. </li></ol> 2. Préparation de l&#39;équipement Culture <ol><li> Couper filtres à membrane de polycarbonate qui soutiendront les organes palatines en petits triangles, pulvériser avec 70% d&#39;alcool et laissez-les sécher. Préparer Centre-Well Organ Culture Dish (60x15 mm) en plaçant une grille propre et stérilisée triangle équilatéral-forme de fil (20 mm) sur la plaque de culture de l&#39;orgue. Ensuite, remplissez le puits avec 1 ml de BGJB milieux de culture des médias. NOTE: Les médias devraient être suffisantes pour atteindre le niveau de la grille sans submerger les palais. Placez les filtres à membrane, côté brillant vers le bas, sur le dessus de la grille (3-4 membranes par grille) .Depending sur l&#39;expérience, de traitement (protéines, anticorps ou inhibiteurs) peuvent être ajoutés aux médias </li></ol> 3. Mouse Embryo prélèvement et la préparation de la Culture <ol><li> Pour obtenir des embryons de souris de type sauvage, l&#39;utilisation chronométré 13,5 enceinte souris CD-1 souche de fond génétique. Nettoyer la zone de dissection avec 70% d&#39;éthanol. REMARQUE: Les autres souches de souris peuvent être utilisés. Nous préférons souris CD-1 en raison du nombre plus grand de la litière. </li><li> Euthanasier les souris enceintes à E13.5 DPC (jours après le coït) avec 5% d&#39;isoflurane suivie par dislocation cervicale pour assurer la mort en utilisant des protocoles approuvés. </li><li> Vaporiser éthanol à 70% sur la surface abdominale ventrale pour éviter d&#39;avoir les cheveux abdominale bâton pour les instruments. Puis ouvrir la cavité abdominale ventraleutilisant un pointus-blunt ciseaux d&#39;exploitation et de micro-pinces à disséquer pour localiser l&#39;utérus. Utilisation de la pince, soulever l&#39;ensemble de l&#39;utérus et le séparer du corps de coupe au niveau du corps de l&#39;utérus et à la pointe des cornes utérines avec une lumière ciseaux de fonctionnement. </li><li> Placez l&#39;utérus sur une serviette en papier propre sur de la glace (Selon le guide de protocole pour les soins et l&#39;utilisation des animaux de laboratoire). Couvrir l&#39;utérus avec une autre serviette de papier propre pour éviter la contamination. Stériliser les instruments utilisant 70% d&#39;éthanol pulvérisation avant l&#39;utilisation ultérieure. L&#39;utérus et les embryons peuvent être transportés au laboratoire sur de la glace. </li><li> Dans une hotte à flux laminaire ouverte, assurez attentivement une petite ouverture dans le sac jaune avec des ciseaux d&#39;exploitation nettes et les micro-blunt-pinces à disséquer. Faire l&#39;ouverture plus large, puis poussez-le doucement d&#39;extérioriser l&#39;embryon de la vésicule ombilicale. </li><li> Transférer les embryons immédiatement à une boîte de Pétri avec froid saline tamponnée au phosphate 1X (PBS) pH 7,4. Pour assurer le bon stade, exl&#39;embryon amine sous un microscope à dissection pour le corps, la taille de la tête et du membre morphologie. NOTE: Les embryons qui ne sont pas au bon stade de développement ne sont pas utilisés pour l&#39;expérience. </li></ol><img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/53063/53063fig2.jpg" /> Figure 2. Limb Bud Morphologie. L&#39;avant et membres postérieurs sont vérifiés pour le degré de sangle indentation entre les chiffres. À E13.5, tous les condensations chiffres sont de premier plan, avec la sangle et indentations distales entre les chiffres apparaissant très distincte. Les chiffres de derrière sont derrière par une demi-journée 12 Rangée supérieure:. Membres antérieurs, rangée inférieure: membre postérieur. 4. Bouche Dissection <ol><li> Placer un embryon à la fois dans une boîte de Pétri avec du PBS sous le microscope à dissection. Utilisation de petits ciseaux de dissection et pincettes séparer la tête du corps de l&#39;embryon. </li><li> Tenant délicatement le crâne de la souris au-dessus du niveau des yeux avec une pince (en évitantle processus maxillaire) faire deux incisions sur les deux côtés de la ligne de la lèvre. Ensuite, retirer la mandibule et la langue. Isoler la région de processus maxillaire en faisant une coupure au niveau des yeux et retirer le cerveau, les yeux, la cloison nasale et des tissus attenants. </li></ol><img alt="Figure 3" src="/files/ftp_upload/53063/53063fig3.jpg" /> Figure tissus 3. Bouche recueillies auprès 13,5 embryons, lorsque les rayons du palais avaient élevées mais pas en contact. Les étagères palatines ont été mises en culture d&#39;organes sur un filtre à l&#39;interface des médias de l&#39;air pendant 72 heures dans le modèle statique. (A) Niveau de dissection sur E13.5 embryons. (B) Blue Stars délimitent les zones à maintenir le tissu avec une pince lors de la dissection. (C) Vue de lames palatines disséqués placés sur une membrane filtrante de trapèze. (D) Vue de côté de la boîte de culture après le placement de la palais disséqués et plus de milieux de culture. <ol start="3"><li> Placez le côté orale palatine et retirer la cloison nasale et le tissu autour d&#39;elle, en gardant le palais primaire fixé pour l&#39;aider à orienter d&#39;avant en arrière. Utilisez une spatule en cuillère et transférer très soigneusement les étagères palatines (côté nasal bas) pour les filtres préparés sur les grilles dans les boîtes de culture. REMARQUE: Régler le volume des médias pour permettre interface appropriée air-médias. </li><li> Sous le microscope stéréo, disséquer le palais primaire et utiliser des pinces pour placer les étagères palatines près de l&#39;autre. Les étagères palatines ne seront pas fusionner si elles ne sont pas mises en contact. Couper le filtre à membrane triangulaire où la partie antérieure du palais est situé. La forme trapézoïdale aidera à localiser la partie antérieure du palais. </li><li> Culture les étagères palatines individuellement ou avec deux ou trois dans la même boîte de culture d&#39;organes, selon BGJb milieux de culture. </li></ol> 5. La culture souris Tablettes palatines <ol><li> Incuber le tissues à 37 ° C dans un mélange de gaz humidifié (CO 2 et 95% d&#39;air de 5%) pendant 72 heures, et de changer le milieu tous les 24 heures. </li></ol> 6. Traitement Palais pour l&#39;analyse histologique <ol><li> Fixer les palais après 72 h en culture avec 4% de formaldéhyde / tampon phosphate salin O / N à 4 ° &#160; C. Puis, doucement avec une pipette de transfert laver le tissu dans la boîte de culture avec du PBS. Enveloppez les palais dans un morceau de lingettes de laboratoire et dans l&#39;intégration des cassettes. REMARQUE: Emballage dans les palais des lingettes de laboratoire à prévenir leur perte au cours du processus de déshydratation. </li><li> Déshydrater le tissu après 70%, 80% et jusqu&#39;à 100% de lavages d&#39;éthanol pendant 1 heure, suivi par la procédure régulière de paraffine d&#39;intégration. Pour l&#39;enrobage, placer la partie antérieure du palais face au plateau. </li><li> Couper 6 um sections en série dans l&#39;orientation coronale d&#39;avant en arrière. Une section complète du palais donnera 350-450 sections. Colorer les sections avec hématoxyline et l&#39;éosine (H &amp; E). 10 Score chaque section 20 ème utilisant le décrit précédemment Score Fusion Mean (MFS) échelle (tableau 1). 8 </li></ol>

<ol><li>Nawshad, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palatal+seam+disintegration+to+die+or+not+to+die+that+is+no+longer+the+question%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+dynamics+an+official+publication+of+the+American+Association+of+Anatomists%22%5BJournal%5D)">Palatal seam disintegration to die or not to die that is no longer the question.</a> Developmental dynamics an official publication of the American Association of Anatomists. 237, 2643-2656 (2008).</li>
<li>Strong, E. B., Buckmiller, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+the+cleft+palate%5BTitle%5D)+AND+%22Facial+plastic+surgery+clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Management of the cleft palate.</a> Facial plastic surgery clinics of North America. 9, 15-25 (2001).</li>
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<li>Carette, M. J., Ferguson, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fate+of+medial+edge+epithelial+cells+during+palatal+fusion+in+vitro+an+analysis+by+DiI+labelling+and+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Development+%28Cambridge%2C+England%29%22%5BJournal%5D)">The fate of medial edge epithelial cells during palatal fusion in vitro an analysis by DiI labelling and confocal microscopy.</a> Development (Cambridge, England). 114, 379-388 (1992).</li>
<li>Ferguson, M. W., Honig, L. S., Slavkin, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+cultured+palatal+shelves+from+alligator+chick+and+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+record%22%5BJournal%5D)">Differentiation of cultured palatal shelves from alligator chick and mouse embryos.</a> The Anatomical record. 209, 231-249 (1984).</li>
<li>San Miguel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ephrin+reverse+signaling+controls+palate+fusion+via+a+PI3+kinase+dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+dynamics+an+official+publication+of+the+American+Association+of+Anatomists%22%5BJournal%5D)">Ephrin reverse signaling controls palate fusion via a PI3 kinase dependent mechanism.</a> Developmental dynamics an official publication of the American Association of Anatomists. 240, 357-364 (2011).</li>
<li>Kang, P., Svoboda, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PI+3+kinase+activity+is+required+for+epithelial+mesenchymal+transformation+during+palate+fusion%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+dynamics+an+official+publication+of+the+American+Association+of+Anatomists%22%5BJournal%5D)">PI 3 kinase activity is required for epithelial mesenchymal transformation during palate fusion.</a> Developmental dynamics an official publication of the American Association of Anatomists. 225, 316-322 (2002).</li>
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<li>Kaufman, M. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKaufman%2C+MH+%22The+Atlas+of+Mouse+Development%22">The Atlas of Mouse Development</a>. , Elsevier. (1992).</li>
<li>Taher, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+gene+expression+analysis+of+murine+limb+development%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Global gene expression analysis of murine limb development.</a> PloS one. 6, e28358(2011).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont pas d’intérêts financiers concurrents.

Le protocole à cet article fournit une méthode de disséquer étagères palatines à partir d&#39;embryons au jour embryonnaire 13,5. Étagères palatines des embryons de souris ont été cultivées dans un milieu de culture exempt de sérum dans une atmosphère de 95% d&#39;O 2 5% de CO2 à 37 ° C. Palatal dissection réussie dépend de manière critique de plusieurs facteurs, à chaque étape au cours de la procédure à partir du moment embryonnaire des souris euthanasiés à la fin de la culture. Un des facteurs les plus impo...

Fentes faciales sont prédominants défauts de naissance les cranio-faciales. Aussi, en prenant en considération tous les défauts cranio-faciales possibles, ceux-ci sont la deuxième anomalie de naissance le plus commun chez les nouveaux nés 2. Fentes palatines se produisent à environ 1 pour 700 naissances aux États-Unis (US) chaque année, l&#39;incidence de la fente palatine est égale à 475 enfants nés avec une fente palatine par mois ou 15 enfants atteints de fentes par jour 3. Environ 1% des enfants nés dans le monde chaque année présentent une certaine forme de dysmorphie cranio-faciale. Fentes du palais et la lèvre ont besoin d&#39;une procédure très coûteuse et complexe avec des implications pour la vie pour les patients qui ont cette anomalie. Le coût estimé pour chaque patient avec fente orale est d&#39;environ 100 000 $ 4. Le traitement d&#39;un patient avec fente labiale et palatine nécessite une équipe de médecins, y compris cranio-faciales chirurgiens, orl, des généticiens, des anesthésistes,-orthophonistes, des nutritionnistes, des orthodontistes, prothésistes, des psychologues, des neurochirurgiens, et les ophtalmologistes. Dans palatogenesis, le palais secondaire se pose excroissances paires, qui se développent d&#39;abord verticalement et subissent palatine plateau élévation au-dessus du dos de la langue. Après l&#39;élévation, les étagères palatines appariés poussent vers la ligne médiane (à E14.5 -E15 chez la souris et chez l&#39;homme la semaine 9). L&#39;épithélium de bord médial (MEE) qui couvre la pointe du plateau adhère formant la couture médiane épithéliale. Ceci est suivi par transition épithélio-mésenchymateuse et / ou de l&#39;apoptose pour permettre mésenchymateuses confluence. Adhésion d&#39;opposer MEE est un événement essentiel dont l&#39;altération provoque une fente palatine. Cependant, peu d&#39;études ont étudié l&#39;adhérence initiale des lames palatines 5. Les formes palais dur par la différenciation des cellules mésenchymateuses en ostéoblastes de. Le développement anormal du palais peut produire cleft palais avec ou sans la participation de la lèvre. Techniques de culture d&#39;organes palais avaient été largement utilisés pour de nombreux laboratoires au cours des 30 dernières années 6,7. Dans ce protocole, nous décrivons en détail une méthode de dissection palatine et de la culture d&#39;organe statique. L&#39;avantage d&#39;une culture d&#39;organe immobile est qu&#39;il permet de fusionner étagères palatines. Cette technique a été utilisée avec succès dans notre laboratoire pour de nombreuses fusion et de signalisation expériences 8,9. Toutefois, le champ d&#39;application de la technique est très grande et peut être utilisé chaque fois que système de culture d&#39;organe statique est nécessaire, y compris l&#39;évaluation des réponses à des agents chimiques exogènes, les effets de facteurs de croissance dans différentes voies de régulation et des protéines spécifiques. <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/53063/53063fig1.jpg" /> Figure 1. Souris Palatogenesis. Les stades de développement de la bouche de souris. (BF) ele de numérisationmicrographies cTRON (SEM) du palais secondaire à des moments représentatifs de développement. Les flèches rouges montrent: la partie initiale de l&#39;adhésion palatine et de la fusion. Les flèches jaunes: le point à l&#39;espace entre les palais primaires et secondaires qui vont disparaître après la fusion (Repris de Kaufman 11 avec la permission de la revue PLoS ONE).

<table><tbody><tr><td>BGJb</td><td>Invitrogen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Lonza Inc.</td><td>17-602E</td><td>100X</td></tr><tr><td>Boîtes de Pétri</td><td>VWR</td><td>25384-088</td><td>100 x15 mm</td></tr><tr><td>Boîte de culture d’organe à puits central</td><td>Falcon&nbsp ;</td><td>#353037</td> Grille triangulaire en fil de <td>fer 60 x15 mm</td></tr><tr><td></td><td>Fabriquée sur mesure avec un treillis métallique en acier inoxydable pour bien s’adapter à la boîte de culture d’organes. &nbsp ;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filtre en polycarbonate</td><td>GE& Technologies de l’eau et des procédés</td><td>K04BP04700</td><td>Noir 0,4 micron, 47 mm</td></tr><tr><td>Stéréomicroscope</td><td>ZEISS ; Stemi SR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hotte de culture</td><td>NUAIRE Pince</td> de microdissection à flux <td></td><td></td>laminaire</tr><tr><td></td><td>Dumont Medical&nbsp ;</td><td></td><td>#5</td></tr><tr><td>Ciseaux de microdissection</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>INS14003-G</td><td>Ciseaux Vannas, droits, 8 cm de long, pointes de 0,1 mm, lames de 5 mm, de fabrication allemande</td></tr><tr><td>Ciseaux de microdissection</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>INS500086</td><td>Ciseaux Vannas, droits, 8,5 cm de long, pointes de 0,025 mm x 0,015 mm, lames de 7 mm</td></tr><tr><td>Ciseaux de microdissection</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>INS14127-G</td><td>Ciseaux à ressort incurvés, incurvés, 10,5 cm de long, lames de 8 mm, fabrication allemande</td></tr><tr><td>Currete chirurgical (cuillère, spatule)</td><td>Hu-friedy</td><td></td><td>CM 2/4</td></tr><tr><td>Protector hotte de laboratoire</td><td>Labconco</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Incubateur Thermo Scientific</td><td></td><td>Farma</td></tr><tr><td>Series11 water Jacket</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO2 incubateur</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS&nbsp ;</td><td>GIBCO</td><td>10010-023&nbsp ;</td><td>1 fois</td></tr><tr><td>Fibre optique Source lumineuse</td><td>Fiber-light&nbsp ; Dolan-Jenner</td><td>PL-750</td><td></td></tr><tr><td>Cassette d’encastrement&nbsp ;</td><td>Statlab</td><td>EC301</td><td></td></tr><tr><td>Kim Wipes</td><td>VWR</td><td>470173-504</td><td></td></tr></tbody></table>

méthode d&#39;étude palatal fusion utilisant statique organ culture

Method of Studying Palatal Fusion using Static Organ Culture

Fente labiale et palatine sont parmi les plus communs de toutes les anomalies congénitales. Les formes de palais secondaire des tablettes mésenchymateuses couverts par un épithélium qui adhère à former la couture médiane épithéliale (MES). Les théories suggèrent que les cellules MES suivent une transition épithélio-mésenchymateuses (EMT), l&#39;apoptose et la migration, faisant un palais fusionné 1. Désintégration complète du MES est la phase essentielle finale de palatine confluence avec entourant les cellules mésenchymateuses. Nous fournissons une méthode de culture d&#39;organe de palais. Le point dans le protocole vitro permet l&#39;étude des processus biologiques et moléculaires lors de la fusion. Les applications de cette technique sont nombreux, y compris les réponses à l&#39;évaluation des agents chimiques exogènes, des effets des facteurs réglementaires et de croissance et des protéines spécifiques. Culture d&#39;organe palatine a un certain nombre d&#39;avantages, y compris la manipulation à différents stades de développement qui est pas possible en utilisant des études in vivo.

La technique peut être appliquée à différents types de experiments.The étude suivante a été conçu pour tester l&#39;effet tératogène de la nicotine in vitro sur palatine fusion. Deux souches de souris ont été utilisées pour cette expérience, CD1 et C57.Palatal tissu a été traitée avec 0,06 mM et 6 concentrations de nicotine hémisulfate. Il a été observé que les schémas de fusion palatines et le calendrier étaient différents dans les deux souches différentes. Chez la souris CD1, des étagères palatines du groupe ...

Des études de développement du palais sont motivés par l&#39;incidence de la fente palatine, un défaut de naissance qui impose un fardeau de santé énorme et peut laisser durablement défigurée. Nous démontrons ici d&#39;une technique de culture étagères palatines qui peuvent être utilisés pour étudier différentes voies de signalisation impliquées dans le développement palatine et de la fusion.

Méthode d&#39;étude Palatal Fusion utilisant statique Organ Culture

Cleft lip and palate are among the most common of all birth defects. The secondary palate forms from mesenchymal shelves covered with epithelium that ...

L'objectif général de cette procédure est de décrire une méthode de dissection du palais et de culture organique statique. Cela est réalisé en premier lieu par la collecte des embryons de souris. Dans la deuxième étape, la mandibule est retirée et le palais est disséqué.À l'étape finale, les étagements palatins sont placés dans une culture organique statique. En fin de compte, les effets de médicaments spécifiques d'intérêt sur la fusion palatine peuvent être évalués en mesurant le score moyen de fusion de la culture. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés concernant le développement du palais, telles que quels facteurs sont impliqués pendant le processus de fusion.Bien que cette méthode puisse fournir des informations sur la fusion palatine chez la souris mammifère, elle peut également être appliquée à d'autres organismes modèles tels que les palais de poulet, Maria Serrano et Israel Ibrahim. Mes étudiants diplômés démontreront cette procédure pour récolter les embryons de souris.Commencez par nettoyer la surface abdominale ventrale d'une souris gestante de 13,5 jours post-équus à l'aide d'éthanol à 70 %. Puis, à l'aide de ciseaux chirurgicaux pointus et émoussés ainsi que de pinces de dissection microchirurgicales, ouvrez la cavité abdominale. Ensuite, soulevez l'utérus entier et utilisez des ciseaux chirurgicaux légers pour sectionner au niveau du corps utérin et aux extrémités des cornes utérines afin de détacher l'utérus de la cavité corporelle, en utilisant des ciseaux chirurgicaux pointus et émoussés stérilisés à l'éthanol et des pinces de dissection microchirurgicales.Effectuez soigneusement une petite ouverture initiale dans le sac vitellin. Élargissez ensuite l'ouverture et poussez délicatement sur le tissu du sac vitellin pour faire sortir les embryons, puis transférez immédiatement les embryons dans une boîte de Pétri contenant du PBS froid. Pour disséquer les palais un par un, transférez les embryons dans une nouvelle boîte de Pétri avec du PBS frais sous un microscope stéréo.Après avoir retiré la tête du premier embryon, utilisez une pince pour saisir délicatement le crâne de la souris au-dessus des yeux et pratiquez deux incisions de chaque côté de la ligne des lèvres. Retirez la mandibule et la langue. Ensuite, pour isoler la région du bourgeon maxillaire, effectuez une coupe au niveau des yeux et retirez le cerveau, les yeux, le septum nasal et les tissus adjacents.Placez les étagères palatines avec le côté nasal vers le haut et retirez le septum nasal ainsi que les tissus environnants, en conservant le palais primaire attaché afin de préserver l'orientation. Ensuite, à l’aide d’une spatule en cuillère, transférez très soigneusement les étagères palatines, côté nasal vers le bas, sur un filtre préparé placé au-dessus d’une grille située dans une boîte de culture contenant le milieu. Ajustez le volume de milieu pour faciliter une interface air-milieu adéquate.Ensuite, sous microscope stéréoscopique, incisez la membrane triangulaire située au niveau de la partie antérieure du palais. Orientez le tissu vers la portion antérieure et utilisez une pince pour rapprocher les étagements palatins. Finalement, cultivez jusqu'à trois explants dans le même plat de culture d'organes à l'aide du milieu de culture BGJB, à 37 degrés Celsius et 5 % de dioxyde de carbone pendant 72 heures, en renouvelant le milieu toutes les 24 heures.Dans cette expérience, l'effet tératogène de la nicotine sur la fusion palatine in vitro à l'aide de deux souches de souris différentes a été étudié sur des palais isolés de souris CD1. Les étagères palatines traitées au contrôle ont poursuivi leur fusion de manière dépendante du temps, tandis que les palais traités à la nicotine ont montré un retard de fusion, particulièrement à la concentration de six millimolaire de nicotine chez les souris C57. Les étagères palatines du groupe témoin se sont également fusionnées de manière dépendante du temps au bout de 48 heures ; toutefois, les étagères palatines provenant de ces souris C57 traitées avec seulement 0,6 millimolaire de nicotine ont présenté une fusion altérée par rapport aux étagères des animaux témoins, suggérant un degré de sensibilité plus élevé des souris C57 aux effets du traitement à la nicotine comparé aux souris CD1.Lors de l'application de cette méthode, il est très important de manipuler soigneusement le tissu. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez bien comprendre comment réaliser une culture d'organe statique.

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Le présent protocole décrit l’isolement et la culture de kératinocytes oraux dérivés du palais de souris adulte. Une méthode d’évaluation utilisant l’immunocoloration est également rapportée.

Isolement et culture de kératinocytes oraux primaires du palais de souris adulte

Un protocole détaillé est présenté ici pour décrire un modèle organoïde in vitro à partir de cellules épithéliales nasales humaines. Le protocole propose des options pour les mesures nécessitant un équipement de laboratoire standard, avec des possibilités supplémentaires pour l’équipement et les logiciels spécialisés.

Culture et imagerie des organoïdes épithéliaux nasaux humains

Découvrez une méthode de dissection palatine et de culture d'organes statique pour étudier le développement du palais chez la souris. Cette technique permet d'évaluer les effets de médicaments sur la fusion palatine et de mieux comprendre les mécanismes du bec-de-lièvre.

Méthode d'étude Palatal Fusion utilisant statique Organ Culture

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