Name: Humain Vaste externe Biopsie de muscle squelettique Utilisation de la Weil-Blakesley Conchotome (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 16 s
Description: Apprenez une technique de biopsie musculaire percutanée du vaste externe utilisant le conchotome de Weil-Blakesley. Cette méthode sécurisée permet d'obtenir suffisamment de tissu pour l'analyse histochimique et moléculaire avec un inconfort minimal.

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Nous tenons à remercier les participants à l’étude d’avoir rendu ce travail possible, ainsi que le personnel du Centre de recherche biomédicale du NIHR à Southampton et du Wellcome Trust Clinical Research Facility, University Hospital Southampton, pour leur aide dans les mesures de l’étude.
Ce travail a été soutenu par le Centre de recherche biomédicale du NIHR Southampton, le service de nutrition, l’unité d’épidémiologie du parcours de vie du MRC et l’Université de Southampton. Ce rapport est une recherche indépendante menée par le NIHR BRC Funding Scheme. Les opinions exprimées dans cette publication sont celles des auteurs et ne sont pas nécessairement celles du NHS, du NIHR ou du ministère de la Santé. L’AMB est soutenu par une bourse de recherche clinique du NIHR, le HPP est soutenu par le Centre de recherche biomédicale du NIHR Southampton.

déclaration éthique: Une description de la procédure de biopsie musculaire nous suivons au sein de notre institution suit maintenant. La procédure de biopsie musculaire est utilisé dans l&#39;étude sarcopénie Hertfordshire qui a été approuvé par le Comité de recherche numéro Hertfordshire 07 / Q0204 / 68. Tous les participants ont donné leur consentement éclairé écrit 20. REMARQUE: Un seul opérateur peut effectuer la procédure, aidé par un assistant qui peut engager le participant dans la conversation afin de réduire l&#39;anxiété et veiller à ce qu&#39;ils sont à l&#39;aise en tout temps. La salle de procédure devrait être équipée d&#39;un évier, un canapé réglable en hauteur, des surfaces propres et un chariot de procédure. 1. Préparer le participant (Figure 2) <ol><li> Demandez au participant de poser confortablement, couchée sur un canapé. Exposer la cuisse préférée à partir du pli de l&#39;aine. Étaler une feuille absorbante jetable sous la cuisse exposée. Assurez-vous que la jambe reste droit et détendu tout au long de la procédure, maisla cuisse est raidit momentanément pour décrire le vaste externe. </li><li> Marquer le site de procédure environ les deux tiers vers le bas d&#39;une ligne imaginaire de l&#39;épine iliaque antéro supérieure à la rotule. </li></ol> 2. Préparer la peau (Figure 2) <ol><li> Raser la peau à environ 4 cm de diamètre entourant le site de biopsie proposé avec une lame de rasoir stérile et nettoyer la peau avec un tampon imbibé d&#39;alcool. Remarque: il est d&#39;empêcher tout coincement ultérieur des cheveux dans la plaie pendant le processus de guérison. Cette étape est facultative en fonction de la préférence de l&#39;opérateur. </li><li> Infiltrer la peau et le fascia recouvrant avec un anesthésique local. Utiliser une aiguille de 25 G pour élever une bulle sous-cutanée de lidocaïne 2% puis infiltrer plus profondément dans le tissu sous-cutané avec une aiguille 23 G. Viser à pénétrer dans au moins la moitié d&#39;un pouce en fonction de la teneur en tissus sous-cutanés au niveau du site de biopsie. Cette profondeur doit être suffisante pour assurer que les fas recouvrantcia est anesthésié. Prévoir 2 - 5 min pour l&#39;anesthésie à l&#39;action. Confirmer l&#39;anesthésie en sondant la peau en douceur avec la pointe de la lame aiguille ou un scalpel. </li></ol> 3. Préparer un champ stérile (figure 2) <ol><li> Se laver les mains avec du savon et de maintenir les mains propres jusqu&#39;à ce qu&#39;une blouse stérile est usée. Couvrir les mains avec des gants stériles avant de créer un champ stérile sur le chariot de la procédure. </li><li> Stériliser le site de biopsie avec une solution alcoolique de chlorhexidine / d&#39;isopropyle 2% ou un désinfectant à base d&#39;iode de la peau. Appliquer un champ stérile avec une ouverture adhésive pour exposer le site de biopsie, mais également de maintenir un champ stérile. </li></ol> 4. Effectuez la procédure (Figure 2) <ol><li> Avec un scalpel taille 11, faire un 5 - mm incision 10 sur la peau et vers le bas et à travers le fascia sus-jacente. Insérer la pointe mordre fermé du conchotome à travers l&#39;incision à angle droit à l&#39;axe long du fémur, à une demi-profondeur de la moyenne d&#39;un pouce. Si l&#39;utilisation requisela main libre pour tenir et soutenir la cuisse entourant le site de biopsie tandis que la pointe de l&#39;conchotome est ouvert et fermé dans le muscle. </li><li> Tourner le conchotome à 90 - 180 ° à couper le muscle. Retirer le conchotome et ouvrir la pointe sur une gaze stérile humidifié par une solution saline normale stérile. Répétez la procédure dans le site de la plaie simple, si nécessaire, pour obtenir le tissu musculaire suffisante. Transférer la gaze dans un récipient placé sur la glace. Transférer le récipient vers un laboratoire de préparation pour traiter le muscle selon le protocole de l&#39;établissement local. </li></ol> 5. Procédure Post (Figure 2) <ol><li> Appliquer une pression directe sur la plaie jusqu&#39;à 5 min. Fermez la plaie avec stéristrips en plaçant les parallèles à la plaie par opposition à angle droit pour éviter potentiellement enlever le tissu cicatriciel et la réouverture de la plaie si les stéristrips sont supprimés par inadvertance. Placer un pansement absorbant stérile sur les stéristrips et attacher un à deux couchesbandage pour la compression et le fixer avec du ruban adhésif. </li><li> Expliquer la méthode de pansement pour le participant, car ils auront à effectuer un changement de pansement 3 - 4 jours après la procédure. Assurez-vous que le participant retire le bandage de compression avant d&#39;aller au lit plus tard ce soir-là. </li></ol> Conseils 6. Postes Biopsie <ol><li> Informer le participant qu&#39;il est courant d&#39;éprouver une certaine rigidité de la cuisse qui peut être soulagée par des exercices doux (par exemple., Marche). Utilisez analgésie simple comme l&#39;acétaminophène. Avertir le participant à propos de l&#39;engourdissement transitoire autour du site de biopsie qui peut persister jusqu&#39;à deux semaines, ainsi que la complication potentielle d&#39;infection de la plaie. </li></ol> 7. Instructions pour la procédure Message Sujet <ol><li> Demandez au participant d&#39;éviter une activité vigoureuse pendant 72 heures (comme l&#39;escalade, la course, le levage lourd). Demandez au participant d&#39;éviter l&#39;immersion dans l&#39;eau pendant 48-72 h. Cependant, charger le participant pour envelopper un film plastique ou similaire autour du site de biopsie en ayant une douche pour garder le pansement sec. </li><li> Demandez au participant de changer le pansement après 3 - 4 jours et retirer les stéristrips après une semaine. NOTE: Le participant doit donner des instructions écrites pour l&#39;après biopsie des soins, les pansements de rechange et les détails de l&#39;équipe responsable de l&#39;exécution de la procédure d&#39;appel d&#39;urgence. </li></ol>

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Aucun n’a été déclaré.

Pour assurer la sécurité des participants et effectuer la biopsie musculaire efficace, il est essentiel de faire attention aux étapes critiques dans le protocole. Les participants doivent être sélectionnés après avoir examiné attentivement les critères d&#39;exclusion pour éviter des complications comme des saignements et une mauvaise cicatrisation de la plaie. asepsie stricte pendant toute la procédure est essentielle. Application de la technique correcte assurera le confort des participant...

Obtenir le muscle squelettique pour le diagnostic d&#39;une myopathie et autres maladies dégénératives neuromusculaires repose sur des méthodes sûres et efficaces qui sont acceptables et non invalidantes pour les patients 1. Historiquement, les méthodes d&#39;obtention de tissus musculaires pour l&#39;analyse comprenaient les biopsies ouvertes réalisées sous anesthésie générale ou de post-mortem. Ces techniques ont permis la visualisation directe du muscle et permis un morceau de muscle plus grande à biopsie. Compte tenu des inconvénients potentiels de ces techniques ont pour le patient en termes de durée d&#39;hospitalisation et de récupération, les méthodes percutanées de biopsie du muscle «semi-ouvertes» ont été introduites comme des alternatives. Cette technique a été réalisée par Duchenne (1806-1875), qui a utilisé une aiguille auto-construit avec un trocart et a été en mesure d&#39;obtenir un échantillon de muscle à partir d&#39; un sujet vivant sans anesthésie générale 2. Depuis lors, diverses formes d&#39;aiguilles de biopsie ont été utilisées 3,4,5. Cependant, la biopsie nEedle développé par Bergstrom en 1962 a été le plus couramment utilisé dans la pratique clinique; à la fois chez les enfants et les adultes, ainsi que dans la recherche 6,7,8,9,10. Il possède un trocart pointu, une canule de coupe et une tige de poussée pour expulser le poste de tissu biopsie. Les rendements musculaires obtenus à partir de cette procédure ont été signalés à aller de 25 -293 mg après échantillonnage 11,9 répétée. Henriksson a introduit le conchotome Weil-Blakesley en 1979 comme une méthode de biopsie musculaire semi-ouverte de remplacement (Figure 1) 12. L&#39;instrument est une structure unique contrairement à la construction Bergstrom et est conçu comme une pince avec une pointe mordre pointu. La taille de la pointe peut varier de 4 à 6 mm de largeur. Lorsque les deux bords de la pointe mordante opposent, un creux est formé qui assure la capture du muscle. Le conchotome est inséré à travers un 5 - 10 mm incision de la peau et évite la nécessité d&#39;un trocart pour pénétrer les muscles et le fascia recouvrant un scalpel peut être utilisé pour faire une voie vers le muscle. Cette méthode permet de contrôler la pénétration tissulaire avec un degré élevé de manoeuvrabilité 13,14. Il est particulièrement utile pour les sites où une pression excessive pourrait endommager les structures osseuses neurovasculaires ou sous - jacents , par exemple., Sur le site du jambier antérieur 15,14. Les rendements musculaires en utilisant le conchotome peuvent être variables et dans notre pratique 20 - 200 mg de muscle a été obtenu après un échantillonnage répété. Un avantage potentiel de la conchotome sur l&#39;aiguille Bergstrom, en plus du degré élevé de manoeuvrabilité qu&#39;il offre, est que la pointe de mordre n&#39;a pas besoin d&#39;être aiguisé ou remplacé aussi souvent que le trocart de Bergstrom construire 16. L&#39;objectif global de la biopsie musculaire en utilisant la conchotome Weil Blakesley est d&#39;obtenir des quantités suffisantes de tissu musculaire pour permettre histochimie et l&#39;analyse moléculaire à la fois de diagnostic et de recherétude ch. Il est une procédure simple et sûre qui peut être appris facilement. Avec cette technique, le muscle approprié pour la biopsie comprend biceps, triceps, deltoïde, gastrocnémien, jambier antérieur, soléaire et les sacrospinals 17,15,7,18,14. La partie la plus externe du vaste externe est le site le plus couramment utilisé pour la biopsie car elle évite les principales structures neurovasculaires au sein de la cuisse. Il est identifié environ les deux tiers vers le bas d&#39;une ligne imaginaire joignant l&#39;épine iliaque antéro-supérieure et la rotule. Les données de morphologie musculaires, par exemple la zone de myofibre, proportions myofibres, la densité capillaire dérivé de vastus lateralis échantillonnage sont largement disponibles dans la littérature permettant une comparaison entre les études 11,19.

<table><tbody><tr><td>Weil-Blakesley conchotome</td><td>Gebr&uuml ; der Zepf Medizintechnik, D&uuml ; rbheim, Allemagne</td><td>Aucun</td><td>Pointe de morsure de 6 mm</td></tr><tr><td>5 ml de lidocaïne à 2 %</td><td>Utilisation générique</td><td>Aucun</td><td>Un flacon de 5 ml devrait suffire pour une anesthésie adéquate</td></tr><tr><td>Tampon d’alcool</td><td>Utilisation générique Utilisation générique</td><td>Aucun</td>(e) <td></td></tr><tr><td>Seringue de 5 ml</td><td>Utilisation générique</td><td>Aucun(e)</td><td></td></tr><tr><td>Aiguilles stériles de 25 g et 23 g</td><td>Utilisation générique</td><td>Aucun(e)</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel stérile de taille 11</td><td>Utilisation générique</td><td>Aucun</td><td></td></tr><tr><td>Carrés de gaze stériles</td><td>Usage générique</td><td>Aucun</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de sodium 0,9 % 10 ml</td><td>Fannin</td><td>1122/002/001</td><td></td></tr><tr><td>Steri-Drape&trade ; Petit Champ avec Ouverture Adhésive</td><td>3M</td><td>1020</td><td></td></tr><tr><td>ChloraPrep 2 % p/v /70 % v/v solution cutanée&nbsp ;</td><td>CareFusion</td><td>270400</td><td>Deux</td></tr><tr><td>Steri-Strip&trade ; 1/4 pouce x 3 pouces Fermetures cutanées adhésives renforcées</td><td>3M</td><td>R1541</td><td></td></tr><tr><td>Pansement stérile PRIMAPORE 15 cm x 8 cm</td><td>Smith & &nbsp ; Neveu</td><td>66000318</td><td></td></tr><tr><td>Bandage en crêpe de coton Hospicrepe 233 7,5 cm x 4,5 m</td><td>Hartmann</td><td>915562</td><td></td></tr><tr><td>Bandage cohésif souple Co-Plus LF</td><td>BSN medical</td><td>2904565</td><td></td></tr><tr><td>Feuille absorbante jetable Usage générique</td><td></td><td>Aucun</td><td></td></tr><tr><td>Ruban adhésif micropore ou transpore</td><td>Usage générique</td><td>Aucun</td><td></td></tr><tr><td>Blouse stérile avec papier stérile serviettes</td><td>Utilisation générique</td><td>Aucun</td><td></td></tr><tr><td>Gants stériles</td><td>Utilisation générique</td><td>Aucun</td><td></td></tr></tbody></table>

humain<em&gt; vaste externe</em&gt; biopsie de muscle squelettique utilisation de la weil-blakesley conchotome

Human Vastus Lateralis Skeletal Muscle Biopsy Using the Weil-Blakesley Conchotome

biopsie musculaire percutanée à l&#39;aide du conchotome Weil-Blakesley est bien établi dans la pratique clinique et la recherche. Il est une technique sûre, efficace et bien toléré. Le conchotome Weil-Blakesley a une pointe mordre forte avec un 4 - large creux de 6 mm. Il est inséré par une 5 - incision de 10 mm de la peau et peut être manoeuvré pour la pénétration tissulaire contrôlée. La pointe est ouverte et fermée dans le tissu, puis tournée de 90 -180 ° à couper le muscle. La quantité de muscle obtenues à la suite répéter l&#39;échantillonnage peut varier de 20 mg à 290 mg qui peuvent être traitées à la fois histologiques et les études moléculaires. La plaie doit être maintenu l&#39;activité physique sec et vigoureux maintenu à un minimum d&#39;environ 72 heures, bien que les niveaux normaux d&#39;activité peuvent redémarrer immédiatement après la procédure. Cette procédure est sûr et efficace quand attention est portée à la sélection des sujets, plein d&#39;asepsie et après la procédure de soins. Les deux droite et à gauche vlateralis Astus sont adaptés pour dépend de la préférence des participants biopsie.

La procédure décrite ci-dessus est sûr et acceptable dans les milieux cliniques et de recherche. Lorsque la biopsie est réalisée dans le cadre du processus de diagnostic, le muscle doit être choisi en fonction des symptômes et des signes de faiblesse musculaire du patient. Le site de biopsie doit être exempt de blessures antérieures, contractures ou instrumentation 21,1. Dans la recherche, des conditions standardisées telles que le jeûne ou l&#39; exclusion des patients attein...

Cette vidéo démontre la technique de biopsie musculaire percutanée du vaste latéral humain à l’aide du conchotome de Weil-Blakesley.

Humain<em&gt; Vaste externe</em&gt; Biopsie de muscle squelettique Utilisation de la Weil-Blakesley Conchotome

Percutaneous muscle biopsy using the Weil-Blakesley conchotome is well established in both clinical and research practice. It is a safe, effective and ...

L’objectif global de cette méthode est d’introduire une technique sûre, efficace et bien tolérée de biopsie musculaire du vaste latéral, afin d’obtenir suffisamment de tissu pour l’histochimie et l’analyse moléculaire dans les études de diagnostic et de recherche. Cette méthode peut aider les chercheurs à obtenir suffisamment de tissu musculaire avec un minimum d’inconfort et de traumatisme pour le participant. Le principal avantage de cette technique est qu’elle est sûre et acceptable dans les milieux cliniques et de recherche.Les complications sont faibles et l’inconfort est réduit au minimum lorsque la procédure est effectuée à l’aide d’une technique standard. Pour commencer, demandez au participant de s’allonger confortablement sur un canapé en position couchée. Exposez la cuisse préférée à partir du pli de l’aine et étalez une feuille absorbante jetable sous la cuisse exposée.Assurez-vous que la jambe reste droite et détendue tout au long de la procédure, mais que la cuisse est momentanément tendue pour dessiner le vaste latéral. Marquez le site de l’intervention sur environ 2/3 d’une ligne imaginaire allant de la colonne iliaque antéro-supérieure à la rotule. Pour préparer la

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Le but de cette vidéo est de présenter la technique modifiée de biopsie du muscle squelettique de Bergström sur des sujets humains.

Procédures Muscle squelettique humain biopsie aide de la technique de modification Bergström

Les principaux types de cellules adhérentes dérivées du muscle humain sont les cellules myogéniques et les fibroblastes. Ici, les populations cellulaires sont enrichies à l’aide d’un tri cellulaire activé par magnétisme basé sur l’antigène CD56. L’immunomarquage ultérieur avec des anticorps spécifiques et l’utilisation de techniques d’analyse d’images permettent de quantifier les caractéristiques cytoplasmiques et nucléaires dans les cellules individuelles.

Isolement et quantitative immunocytochimique caractérisation des cellules myogéniques primaires et fibroblastes de muscle squelettique humain

Méthodes pour la biopsie du vaste externe, préparation de mitochondries purifiées, et le profilage respirométrique sont décrits. L'utilisation de petit volume musculaire rend cette technique convient pour des applications de recherche clinique.

Préparation et respirométrique évaluation des mitochondries isolées de tissu musculaire squelettique Obtenu par biopsie percutanée aiguille

Nous présentons ici un protocole pour la dissection des os longs des membres postérieurs (fémurs et tibias) de la souris de laboratoire. Nous décrivons en outre une technique rapide d’isolement de la moelle osseuse de ces os qui utilise la centrifugation pour retirer la moelle osseuse de l’espace de la moelle osseuse.

Murine Hind Limb os long Dissection et moelle osseuse Isolation

Échographie 3D imaging (3DUS) permet de morphométrie rapide et rentable des tissus musculo-squelettiques. Nous présentons un protocole permettant de mesurer la longueur de volume et fascicules du muscle à l’aide de 3DUS.

L’échographie 3D : morphométrie rapide et rentable des tissus musculo-squelettiques

Marquage immunohistochimique des isoformes de la chaîne lourde de myosine a émergé comme le discriminant de l’état-of-the-art des fibres musculaires squelettiques de type (c'est-à-direde type I, type IIA, tapez IIX, type IIB). Nous présentons ici un protocole de coloration avec un nouvel algorithme semi automatisé qui facilite l’évaluation rapide de la morphologie de type fibre et fibre.

Analyse semi-automatique de souris Muscle squelettique morphologie et la Composition de la fibre de type

Nous présentons des protocoles détaillés pour effectuer des expériences de diffraction de rayon X de petit angle utilisant les muscles squelettiques intacts de souris. Avec la grande disponibilité de modèles de souris transgéniques pour les maladies humaines, cette plate-forme expérimentale peut former un banc d'essai utile pour élucider la base structurelle des maladies musculaires...

Diffraction de rayon X du muscle squelettique intact de Murine comme outil pour étudier la base structurale de la maladie de muscle

Nous présentons des techniques pour isoler, cultiver, caractériser, et différencier les cellules primaires humaines d'ancêtre de muscle (HMPCs) obtenues du tissu de biopsie de muscle squelettique.  les HMPC obtenus et caractérisés par ces méthodes peuvent être utilisés pour aborder ultérieurement des questions de recherche liées à la myogenèse humaine et à la régénération des muscles squelettiques.

Isolement, culture, caractérisation et différenciation des cellules de l'ancêtre musculaire humain de la procédure de biopsie musculaire squelettique

Décrit ici est un protocole pour l'immunoétiquetage direct des myofibres nécrotiques dans les cryosections de muscle. Les cellules nécrotiques sont perméables aux protéines sériques, y compris l'immunoglobuline G (IgG). Révéler l'apport d'IgG par les myofibres permet l'identification et la quantification des myofibres qui subissent une nécrose indépendamment de l'état musculaire.

Immunolabelling Myofiber Dégénérescence dans les biopsies musculaires

Ce rapport technique décrit une variation de la technique modifiée de Bergström pour la biopsie du tibialis de musculus antérieur qui limite les dommages de fibre.

Collection de biopsies musculaires squelettiques du compartiment supérieur du musculus humain tibialis antérieur pour l’évaluation mécanique

Ici, nous décrivons une méthode détaillée pour l’isolement des mitochondries du muscle squelettique de la souris et l’analyse ultérieure de la respiration par taux de consommation d’oxygène (OCR) à l’aide de tests respirométriques sur microplaques. Ce pipeline peut être appliqué pour étudier les effets de multiples interventions environnementales ou génétiques sur le métabolisme mitochondrial.

Isolement des mitochondries du muscle squelettique de la souris pour les tests respirométriques

Apprenez une technique de biopsie musculaire percutanée du vaste externe utilisant le conchotome de Weil-Blakesley. Cette méthode sécurisée permet d'obtenir suffisamment de tissu pour l'analyse histochimique et moléculaire avec un inconfort minimal.

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