Évaluation de la sensibilisation comportementale induite par la cocaïne et de préférence de place conditionnée chez la souris

L'objectif général de ces tâches comportementales est de permettre aux chercheurs d'évaluer des comportements liés aux drogues, tels que la récompense et la sensibilisation. Ces méthodes peuvent aider à répondre à des questions essentielles dans le domaine de la toxicomanie, comme par exemple quelles molécules ou voies contribuent à la plasticité induite par les drogues. Le principal avantage de ces techniques réside dans leur haut débit, et elles peuvent être réalisées à l’aide d’équipements fabriqués en laboratoire ou achetés. Lorsque nous réalisons des tests de préférence conditionnée pour un lieu (CPP) en utilisant différentes doses de drogue, cette approche peut révéler des différences dues à une sensibilité modifiée à la drogue et renforcer la fiabilité des résultats obtenus. Cet essai utilise des boîtes CPP à trois compartiments équipées de faisceaux photoélectriques pour une collecte automatisée des données. Prévoyez-en quatre ou plus. Cet appareil comporte deux grandes chambres, A et B, dans lesquelles les souris peuvent être introduites par un couvercle. Chaque chambre est équipée d'une source lumineuse graduable. Les chambres A et B sont rendues visuellement distinctes, par exemple blanche contre noire, et également tactiles distinctes, par exemple par des textures de sol différentes. Entre les deux grandes chambres se trouve une chambre neutre plus petite et interconnectée, ou C, accessible par des portes coulissantes. Pour plus de détails sur les boîtes CPP, y compris des informations importantes sur la mise en place d’un plan équilibré, consulter le protocole écrit. Pour ces expériences, utilisez des souris ayant subi une manipulation régulière afin de minimiser l’impact d’une manipulation animale variable sur les résultats. Préparez la salle d’essai et nettoyez soigneusement les boîtes CPP. Allumez l’équipement et baissez l’intensité de l’éclairage de la pièce. Ensuite, transférez les souris dans la zone d’essai 60 à 90 minutes avant le test. Le premier jour de test, effectuez un pré-test. Préparez les chambres en ouvrant les portes inter-chambres. Ensuite, lancez le programme informatique. Chargez le programme de test. Saisissez les identifiants des animaux et lancez la commande de démarrage. Lorsque vous êtes prêt, placez délicatement chaque souris dans la chambre centrale de l’appareil qui lui est attribué. Après les pré-tests, ramenez les souris dans leurs cages d’origine et exportez les données. À partir des résultats du pré-test, déterminez la préférence de chaque animal pour les chambres A et B. Soustrayez le temps passé dans chaque chambre de l’autre, et utilisez cette différence comme indice. Portez une attention particulière aux animaux présentant de fortes préférences lors du pré-test, indiquées ici en rouge, comme décrit dans le protocole écrit. Sélectionnez la chambre appariée à la drogue pour chaque souris en fonction de ce résultat. La somme des scores d’indice pour chaque groupe test doit être équivalente et proche de zéro. En d'autres termes, choisissez le côté préféré pour environ la moitié des souris. De plus, répartissez les animaux de manière équilibrée entre les chambres A et B au sein de chaque groupe. Si vous souhaitez conditionner plusieurs groupes simultanément, essayez d’attribuer aux animaux utilisant le même appareil des chambres opposées. Pour plus de détails, consultez le protocole écrit. Une étape critique dans la préférence conditionnée pour un lieu, lorsqu’un plan équilibré est utilisé, consiste à attribuer les chambres appariées à la drogue de sorte que les scores de pré-test soient presque égaux pour tous les groupes test et aussi proches que possible de zéro, c’est-à-dire d’absence de préférence. Pour commencer, pesez toujours chaque souris avant la phase de conditionnement. Le premier jour de conditionnement, préparez des seringues contenant de la cocaïne ou la drogue test choisie, selon le poids corporel de chaque animal. Les jours alternés, préparez des seringues contenant du sérum physiologique ou un autre véhicule approprié. Préparez les boîtes en fermant les portes inter-chambres. Chargez le programme de conditionnement sur l’ordinateur, saisissez les identifiants et lancez le programme. Ensuite, injectez aux animaux leur bolus de drogue ou de véhicule et placez-les dans leur boîte attribuée. Il est essentiel de s’assurer que le conditionnement se déroule dans les chambres A ou B correctes pour chaque souris, chaque jour, comme indiqué, car des erreurs à cette étape peuvent entraîner l’exclusion d’animaux de l’étude. Après un maximum de 30 minutes de conditionnement, ramenez les souris dans leurs cages d’origine. Lorsque tous les essais sont terminés, exportez les données et ramenez les souris dans leur colonie. Cet essai utilise des réseaux photoélectriques de dimensions 4 par 8, mesurant 20 pouces par 11,5 pouces. Prévoyez entre quatre et seize unités. Placez chaque réseau dans une chambre ouverte en plexiglas noir. Dans la salle de test, préparez une lumière rouge pour éclairer les chambres. Dans le logiciel, préparez les sessions de programme pour les essais quotidiens d’habituation et d’injection. Premièrement, définissez la durée de l’essai d’habituation à 30 à 60 minutes. Une heure constitue un bon point de départ. Enregistrez les interruptions de faisceau par intervalles de cinq minutes ou moins. Deuxièmement, définissez le moment du début de l’essai dans chaque chambre au moment où le premier faisceau photoélectrique est interrompu, ce qui se produit après que l’essai a été lancé par un signal de départ. Troisièmement, définissez la durée de l’essai d’injection à 60 à 120 minutes. Si possible, pour les essais d’injection, choisissez d’initier les signaux de départ individuellement depuis les réseaux de faisceaux photoélectriques, et non de manière simultanée. La sensibilisation locomotrice nécessite une série initiale de 10 ou 11 jours consécutifs. Chaque jour, amenez les souris dans l’antichambre comportementale 30 à 60 minutes avant le test. Placez ensuite une cage translucide propre pour souris dans chaque chambre. Assurez-vous que les faisceaux photoélectriques sont centrés sur l’axe longitudinal de chaque cage. Lorsque vous êtes prêt, retirez les souris de leurs cages d’origine dans un ordre aléatoire. Tout d’abord, maintenez-les par la nuque et pesez-les. Puis, placez chacune dans sa cage de test locomotrice attribuée pour l’essai d’habituation et recouvrez-la d’un couvercle. Chaque journée comprend un essai d’habituation sans injection, suivi d’un essai d’injection. Pendant l’essai d’habituation, préparez des seringues en fonction du poids corporel actuel de chaque souris. Une fois tous les essais d’habituation terminés, chargez le programme d’essai d’injection et entrez discrètement dans la salle de test. Après avoir injecté une souris, lancez rapidement le signal de départ de la cage dans le logiciel, puis remettez la souris dans sa cage de test. Pendant les trois à quatre premiers jours de test, administrez du sérum physiologique ou un autre véhicule approprié. Pendant les sept jours suivants, administrez de la cocaïne ou la drogue test choisie. Une fois tous les essais d’injection terminés, ramenez les souris dans leur salle d’hébergement. Dans le test CPP, des souris C57 noires 6n de type sauvage ont été conditionnées uniquement avec du sérum physiologique, ou avec deux concentrations différentes de cocaïne. Le groupe recevant uniquement du sérum physiologique n’a montré aucun changement de préférence après le conditionnement, comme attendu, tandis que des préférences accrues ont été observées chez les groupes traités à la cocaïne. Le temps passé dans différentes chambres avant et après le test a démontré que les souris traitées à la cocaïne passaient plus de temps dans la chambre appariée à la cocaïne que dans l’une ou l’autre des autres chambres. Les souris ayant reçu uniquement du sérum physiologique n’ont montré aucune différence marquée dans la préférence pour les chambres, comme attendu. Ensuite, le test locomoteur a été réalisé sur des souris C67 noires 6n. Des injections de sérum physiologique ont été administrées pendant trois à quatre jours, suivies d’injections de cocaïne à quatre doses différentes pendant sept jours. Comme attendu, des changements comportementaux plus marqués ont été observés avec l’augmentation des doses de cocaïne. Pour un test de provocation, après un à deux semaines d’abstinence, chaque groupe a reçu la dose initiale de cocaïne. D’autres provocations ont ensuite été réalisées avec des périodes d’abstinence et des doses variables. Bien que cette vidéo ait démontré ces techniques à l’aide d’équipements commerciaux, de nombreux laboratoires les ont réalisées avec succès à l’aide de dispositifs construits en laboratoire. Lors de la mise en œuvre de ces procédures, il est important de s’assurer que tous les animaux reçoivent un traitement équivalent afin de réduire le stress, les erreurs et la variabilité inter-expérimentale. Les variables à prendre en compte incluent la durée de manipulation et le temps passé dans la salle de test et dans la chambre. Des prolongements de ces tests, tels que l’extinction et la rechute pour le CPP, ou des défis de sensibilisation à long terme ou croisée pour la sensibilisation locomotrice, peuvent être souhaitables. En outre, il est important d’utiliser des animaux naïfs aux drogues