Name: Évaluation de la sensibilité et de la prostate péri-Mast Cell Activation dans un modèle murin de la séparation maternelle néonatale (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 49 s
Description: Découvrez comment évaluer la sensibilité mécanique périgénitale et l'activation des mastocytes dans la prostate chez les souris C57BL/6 après séparation maternelle néonatale. Cette méthode permet d'étudier l'impact du stress précoce sur le système urogénital.

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Les auteurs tiennent à remercier Janelle Ryals, Rachel Supple et Frank Wang pour leur assistance technique. Ce travail a été soutenu par les subventions R03 DK080182 (JAC), R01 DK099611 (JAC), R01 DK103872 (JAC), la subvention P20 GM104936 (JAC) du Center of Biomedical Research Excellence (COBRE), les fonds de démarrage et le soutien de base du GM103418 P20 du Kansas Institutional Development Award (IDeA), le soutien de base du HD002528 P30 de l’IDDRC du Kansas et le programme de bourses d’études Madison and Lila Self Fellowship Program (ANP).

Toutes les expériences décrites dans ce protocole sont conformes aux directives du NIH en conformité avec les orientations définies par l&#39;Université du Kansas Medical Center Institutional Animal Care et l&#39;utilisation Comité. 1. Séparation néonatale maternelle (NMS) <ol><li> Surveiller barrages enceintes quotidienne pour les naissances de litière. Remarque: Le jour de la litière est né est considéré P0. </li><li> Sur P1, enlever le barrage de la cage de la maison et placer dans un récipient secondaire propre. </li><li> Frottez une poignée de literie entre les mains propres gantée de maintenir parfum de la cage de la maison. </li><li> Ajouter une profondeur de 1 - 2 cm de la maison de la literie cage dans un endroit propre, marquée de manière appropriée 2 L verre bécher. Ajouter environ la moitié de tout matériel supplémentaire d&#39;enrichissement de literie qui est présent dans la cage d&#39;accueil, par exemple, nestlet, papier froissé, dans le bêcher en verre. </li><li> Placez délicatement tous les chiots à partir d&#39;une seule portée, individuellement, dans le même bécher. </li><li> Placer immédiatementle bêcher dans un incubateur maintenu à 33 ° C et 50% d&#39;humidité pendant 180 min. </li><li> Retirer le barrage de l&#39;emballage secondaire et son retour à la cage de la maison. Retourner la cage à domicile à son lieu d&#39;habitation approprié dans le vivarium. </li><li> Répétez cette procédure pour chaque portée subir NMS, en utilisant des gants propres et des récipients secondaires pour chaque portée / barrage. </li><li> À la fin de la période de séparation de 180 min, retourner les litières à leurs cages à domicile dans le même ordre qu&#39;ils ont été enlevés. </li><li> Récupérer la cage d&#39;accueil de la première portée qui a été séparé plus tôt dans la journée. Retirer le barrage de la cage de la maison et placer dans un récipient secondaire propre. </li><li> Retirer le premier bécher de l&#39;incubateur et frotter une poignée de literie entre les mains gantées propres à maintenir le parfum de la cage de la maison lors de la manipulation des chiots. </li><li> Déplacez doucement les chiots, individuellement, du bécher à la cage de la maison. </li><li> Retour tout enrichissement et de la literie en restant dans le bécher pourla cage de la maison. </li><li> Retour du barrage du conteneur secondaire à la cage de la maison et de le retourner à son lieu d&#39;habitation approprié dans le vivarium. </li><li> Rincer le bécher avec de l&#39;eau et de le retourner à l&#39;incubateur. Utiliser le même bêcher pour chaque portée tout au long de la procédure de séparation. </li><li> Répétez cette procédure pour chaque portée subir NMS dans le même ordre qu&#39;ils ont été placés dans l&#39;incubateur. </li><li> Répétez cette procédure pour chaque ensemble subissant litière NMS chaque jour grâce à la P21. </li><li> Sevrer leur progéniture NMS et naïfs sur P22 en plaçant congénères du même sexe ensemble dans des cages propres complets avec de la nourriture et de l&#39;eau. Naïve chiots doivent être nés et logés dans les mêmes conditions que les souris NMS, mais subissent aucun traitement supplémentaire en dehors des tâches normales d&#39;élevage. </li></ol> 2. péri-Sensibilité mécanique <ol><li> von Frey Appareillage <ol><li> Apportez les souris à la salle d&#39;examen et de leur permettre d&#39;acclimater 30min tout en restant dans leur cage d&#39;origine. </li><li> Préparer la zone de test en plaçant une alèse absorbante sous un fil élevée tableau maille filet (79 cm x 28 cm) qui offre suffisamment d&#39;espace pour permettre à l&#39;enquêteur d&#39;approcher de la face inférieure sans effaroucher les souris, environ 55 cm de hauteur. </li><li> Placez jusqu&#39;à 12 souris, individuellement, sous, les chambres de plastique perforés claires (11 cm x 5 cm x 3,5 cm) sur le dessus de la table de treillis métallique. Placez un objet lourd sur le dessus des chambres pour empêcher les souris de se échapper. </li><li> Acclimater la souris pour un 30 minutes supplémentaires sur l&#39;écran avant l&#39;évaluation de seuil de retrait. </li></ol></li><li> Évaluation périgénitale Sensibilité mécanique <ol><li> Effectuer la méthode de haut en bas en utilisant un ensemble standard de gradués monofilaments von Frey 43. Utilisez les monofilaments suivantes: 1,65 g, 2,36 g, 2,83 g, 3,22 g, 3,61 g, 4,08 g, 4,31 g et 4,74 g. <ol><li> Maintenir la base de la g monofilament 3.22 et exposer le mono rétractéefilament. Remarque: Certains modèles peuvent ne pas avoir un monofilament rétractée. </li><li> Situer la sonde de telle sorte que le monofilament est orienté verticalement et lorsque la souris est alerte, immobile, et son poids du corps est réparti également entre les pattes de derrière l&#39;appliquer soit à la gauche ou à droite du scrotum, en évitant la ligne médiane, jusqu&#39;à ce qu&#39;une légère pli est observé dans le filament. </li><li> Tenez le monofilament en place pendant 10 secondes ou jusqu&#39;à ce que l&#39;animal montre une réponse positive. Remarque: Une réponse positive est considérée comme une secousse rapide ou saut en réponse à la demande de monofilament ou léchage ou de comportement de morsure dirigé vers le monofilament. Si les mouvements de la souris lors de l&#39;application de monofilament de 10 sec sans afficher ces comportements, le monofilament doivent être retestés après une 1 min longue période minimale de repos. Si une souris se déplace ni ni présente l&#39;un des comportements énumérés ci-dessus lors de l&#39;application de monofilament de 10 sec, il est considéré comme une réponse négative. </li><html><li> Enregistrer la réponse, positive ou négative, dans un cahier de laboratoire ou un ordinateur portable et répétez cette procédure sur toutes les souris restantes en utilisant la 3,22 g monofilament. </li><li> Testez toutes les souris de nouveau en utilisant la prochaine monofilament appropriée. Remarque: Si la souris a présenté une réponse négative au monofilament 3,22 g, 3,61 g appliquer le monofilament de la même manière et enregistrer la réponse. Si la souris a montré une réponse positive à la monofilament 3,22 g, 2,83 g appliquer le monofilament et enregistrer la réponse. </li></ol></li><li> Continuer l&#39;essai de chaque souris en utilisant la prochaine monofilament plus ou moins, selon le cas, pour une période supplémentaire de 4 applications après la première réponse positive est observée. </li><li> Souris Retour à cages à domicile. </li><li> Utilisez la valeur de la finale monofilament von Frey appliquée dans la série de procès dans des unités de journaux pour calculer un seuil g de retrait de 50% comme décrit dans Chaplan et al. 43. </li></ol></li></ol>title &quot;&gt; 3. acidifiés Bleu de Toluidine Mast Cell coloration <ol><li> Traitement des tissus <ol><li> On dissèque le tissu de la prostate à partir de 44 souris qui ont été perfuses avec intracardiaque glacée paraformaldehyde à 4% 45. Postfix le tissu dans du paraformaldéhyde 4% pendant 1 heure à température ambiante puis cryoprotect dans 30% de saccharose dans 1 x PBS à 4 ° CO / N. </li><li> Préparer un petit (30 ml) de bain d&#39;heptane et le placer sur la glace sèche. </li><li> Rincez le tissu de la prostate chez 1x PBS et sécher en utilisant un devoir essuyer la lumière. </li><li> Insérez le tissu de la prostate dans l&#39;heptane froid jusqu&#39;à ce qu&#39;il soit congelé. </li><li> Immédiatement placer le tissu de la prostate congelé dans un contenant cryomoule milieux de montage et les placer sur carboglace. </li><li> Magasin cryomoules à -20 ° C. </li><li> Transversalement couper le tissu de la prostate en 7 cryosections um d&#39;épaisseur à l&#39;aide d&#39;un cryostat. </li><li> Passer 8-12 cryosections non-série qui couvrent la longueur du tissu, sur des lames de microscope chargés positivement. </li><li> Magasin terminé diapositives à -20 ° C jusqu&#39;à leur traitement ultérieur. </li></ol></li><li> Préparation acidifiés bleu de toluidine <ol><li> Ajouter 1 g de bleu de toluidine O à 100 ml 70% d&#39;éthanol et de vortex jusqu&#39;à en solution pour préparer une solution mère à 1%. La solution stock peut être conservé à température ambiante pendant jusqu&#39;à trois semaines. </li><li> Ajouter 1 g NaCl à 100 ml d&#39;eau dans un bécher placé sur le dessus d&#39;une plaque d&#39;agitation. </li><li> Ajuster le pH de la solution de NaCl en utilisant du HCl 12 M jusqu&#39;à un pH de 0,5 à 1,0 est atteint. </li><li> Préparer la solution de travail de 0,25% bleu de toluidine en combinant 8 ml de la solution de bleu de toluidine et 32 ​​ml de la solution de NaCl à 1%. Introduire à la pipette de haut en bas pour assurer l&#39;incorporation totale de la solution stock bleu de toluidine et mélanger à l&#39;aide d&#39;un vortex. La solution de travail doit être fait frais et jeté après utilisation. </li></ol></li><li> La coloration de la prostate cryosections <ol><li> Retirez les diapositives à être transformés du congélateur et laisser équilibrer à température ambiante pendant environ 30 mdans. </li><li> Laver les coupes de tissu par immersion individuellement les diapositives pendant environ 1 seconde dans un tube conique de 50 ml contenant une quantité suffisante de PBS 1x faire en sorte que les coupes de tissus montées sur les glissières seront complètement immergés. Laisser les lames sécher à l&#39;air sur une serviette en papier. </li><li> Placer les lames dans un bocal de coloration de verre contenant suffisamment de solution de travail bleu de toluidine 0,25% à veiller à ce que les coupes de tissus les diapositives montées seront complètement submergés et incuber pendant 10 - 15 min tandis que sur une plate-forme rocker fixé à 15 tours par minute. </li><li> Tremper les lames dans du PBS 1X pour environ 1 sec pour laver l&#39;excès de bleu de toluidine. </li><li> Placer les lames dans une boîte à tiroir ou un rack de telle sorte que les coulisseaux se trouvent sur les côtés pour permettre le drainage. </li><li> Sécher les lames dans un four à 37 ° C pendant un minimum de 2 heures ou O / N à température ambiante. </li><li> Déshydrater diapositives rapidement en utilisant de l&#39;alcool, permettant aux diapositives sécher complètement entre les expositions à l&#39;alcool. Diapositives sec, par une vidange sur une serviette en papier unnd dos d&#39;essuyage et les bords avec un devoir essuyer la lumière. <ol><li> Plonger les lames dans EtOH à 95% pendant environ 1 sec et laisser sécher complètement. Répétez cette procédure 1 - 10 fois jusqu&#39;à ce que le tissu sèche plus bleu que la pourpre. </li><li> Plonger les lames dans EtOH à 100% pendant environ 1 sec et laisser sécher complètement. Répétez cette procédure 1 - 10 fois jusqu&#39;à ce que le tissu est foncé au bleu moyen, mais pas violet. </li></ol></li><li> Fixer la tache en incubant les lames dans 100% de xylène pendant 3 min. Laisser sécher. </li><li> Lamelle les diapositives avec du glycérol, PBS, ou supports de montage permanent basé xylène. Égoutter les supports en excès et stocker à température ambiante. </li></ol></li><li> Cellules Quantifier Mast <ol><li> Visualisez les coupes de tissus de toluidine bleui à un grossissement de 20x en utilisant la microscopie optique (figure 2). </li><li> Compter le nombre total des mastocytes présents dans la zone et de visualiser la différence entre les mastocytes et non dégranulés dégranulés. 40X magnification peut être nécessaire de confirmer l&#39;état de granulation dans des mastocytes. Remarque: les mastocytes non-dégranulés présentent métachromasie dense avec pas ou contour faible nucléaire et / ou ne extrusion granulaire autour de la cellule. Mastocytes dégranulés présenter métachromasie moins intense et d&#39;avoir un aperçu clair évidente du noyau et / ou de granules libres dans le cytoplasme et à l&#39;extérieur de la frontière de la cellule. </li><li> Continuer d&#39;évaluer le nombre total de mastocytes non dégranulés dégranulés et dans la totalité de la coupe de tissu en cours. Répétez cette procédure sur au moins 7 sections supplémentaires distincts, couvrant la longueur de chaque tissu. </li><li> Calculer le pourcentage de dégranulés (DG) de mastocytes totaux pour chaque tissu / souris selon l&#39;équation suivante: (DG mastocytes / Total mastocytes) x 100. </li></ol></li></ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Ce protocole fournit une méthodologie pour utiliser le stress néonatal, sous la forme de NMS, pour induire une symptomatologie indicatif de CP / CPPS chez les souris mâles adultes. Comme les adultes, les souris NEM affichent allodynie mécanique périgénitale importante, ainsi que la preuve de la dégranulation des mastocytes dans le tissu de la prostate. L&#39;utilisation de NMS est une nouvelle approche pour développer un modèle préclinique de CP / CPPS en ce qu&#39;elle reproduit le stress de la vie au début qui est sou...

La douleur pelvienne chronique est pas en soi une maladie, mais plutôt un terme associé à la douleur continue spontanée et / ou évoquée vécue par les patients diagnostiqués avec le syndrome du côlon irritable (IBS), la cystite interstitielle / syndrome de la vessie douloureuse (IC / PBS), vulvodynie, ou le syndrome de douleur pelvienne prostatite chronique / chronique (CP / CPPS). Ces syndromes sont souvent des comorbidités et partagent beaucoup de caractéristiques en ce qu&#39;ils présentent aucune pathologie associée ou étiologie identifiée, bien que a été montré un dysfonctionnement dans le système immunitaire, le système nerveux central et le système nerveux périphérique de contribuer à l&#39;entretien et à la progression de ces troubles 1 -3. Les patients souffrant de douleurs pelviennes chroniques sont plus susceptibles de présenter des symptômes de plus, non-pelvienne liée à des troubles fonctionnels de la douleur et des troubles de l&#39;humeur, y compris l&#39;anxiété, la dépression et le trouble panique 4-6, qui a été associée avec le fonctionnement altéré de la hypothalamo hypophysosurrénalien (HHS) 7-10. L&#39;exposition au stress de la vie au début ou à un traumatisme est un facteur de risque important pour le développement des anomalies HPA et les syndromes de douleur chronique associée 10,11 et, comme tel, un sous-ensemble significatif de patients atteints de troubles de douleur pelvienne fonctionnels ont indiqué avoir vécu les événements de l&#39;enfance indésirables tels que l&#39;abus ou la négligence 12-14. des modèles de rongeurs de la séparation maternelle néonatale (SMN), qui consiste à enlever les chiots de leur mère pour une période de temps au cours de la période d&#39;avant le sevrage, ont été utilisées pour les deux dernières décennies pour étudier les résultats de début de stress de la vie. En général, NMS a été montré pour augmenter l&#39;activation de l&#39;axe HPA, et les comportements de type anxieux qui en résultent, en affectant directement l&#39;expression des gènes dans l&#39;hypothalamus, ainsi que de perturber la régulation en aval de structures limbiques 15-18. Perturbation du bon fonctionnement de l&#39;axe HHS a été montré pour contribuer à l&#39;augmentation colorectal 19-22 </sup&gt; Vaginale et 16 sensibilité affichée par les modèles de NMS de rongeurs, mais malgré une caractérisation de l&#39;effet à long terme de 23-25 ​​postnatale inflammation de la vessie, de l&#39;impact de début stress de la vie a largement pas été étudié dans les organes génito-urinaires. Par conséquent, l&#39;étude suivante décrira comment effectuer NMS chez les souris et plus tard d&#39;évaluer la sensibilité mécanique périgénitale et l&#39;infiltration des mastocytes / activation dans la prostate pour valider l&#39;utilisation de souris mâles NMS comme un modèle préclinique pour CP / CPPS. De tous les troubles diagnostiqués de douleurs pelviennes chroniques, CP / CPPS est peut-être le syndrome de moins bien reconnu et caractérisé, en dépit d&#39;une prévalence à vie d&#39;environ 14% 26 et les coûts annuels de patients estimés à $ 4400 (deux fois celle de la lombalgie ou la polyarthrite retour l&#39;arthrite 27). Les patients atteints de CP / CPPS rapport douleurs au niveau du périnée, du rectum, de la prostate, pénis, testicules, et / ou à l&#39;abdomen 28, l&#39;expérience d&#39;un salutgher degré de stress psychologique que les patients témoins 29, et couramment présente avec des symptômes de ou sont diagnostiqués avec la douleur ou les troubles de l&#39;humeur pelviennes chroniques concomitantes 5,29-31. Infection récurrente, l&#39;épithélium qui fuit, une inflammation neurogène, et l&#39;auto-immunité ont tous été supposé que les causes sous-jacentes potentielles de CP / CPPS 2,32,33, ainsi que l&#39;activation des mastocytes et la dégranulation 34. Sécrétions prostatiques exprimé à partir d&#39;hommes atteints de CP / CPPS avaient augmenté tryptase des mastocytes et le facteur de croissance des nerfs (NGF) niveaux 34, et une étude plus récente confirme que la tryptase et la carboxypeptidase A (CPA3), un marqueur de l&#39;activation des mastocytes, ont également été augmenté dans le urine de patients CP / CPPS 35. Le rôle potentiel des mastocytes dans l&#39;apparition et le maintien de CP / CPPS a été une préoccupation majeure de la recherche animale sur ce syndrome jusqu&#39;ici. Le modèle de rongeur le plus couramment employé utilisé pour étudier CP / CPPS est une prostatite auto-immune expérimentale (PAE) modèle gensurvoltage par injection sous-cutanée de l&#39;antigène de la prostate dans de l&#39;adjuvant complet de Freund, qui se traduit par des degrés variés de l&#39;inflammation de la prostate selon l&#39;espèce et la souche utilisée 34,36-39. Il a été démontré infiltration de cellules de mât et l&#39;activation / dégranulation à augmenter après l&#39;induction de l&#39;EAP 34,35,40. Les souris transgéniques déficientes en soit mastocytes 34 ou le récepteur PAR2 tryptase 35 ne développent pas la sensibilité de la prostate tactique suivante EAP, contrairement aux souris de type sauvage du PAE. Bien que ce modèle préclinique reproduit bon nombre des caractéristiques de CP humaine / CPPS, le protocole d&#39;induction ne sont pas indicatifs de la condition humaine, qui a une étiologie diverse et souvent ne comporte pas l&#39;inflammation directe, une infection ou une blessure de la prostate. L&#39;influence de début stress de la vie sur le développement de CP / CPPS chez les humains est largement passée objet d&#39;aucune enquête; Toutefois, une étude menée par Hu et al. 41, a démontré que moin qui ont rapporté une histoire de physique de l&#39;enfance, émotionnel, et / ou d&#39;abus sexuels étaient beaucoup plus susceptibles d&#39;éprouver des symptômes évocateurs d&#39;CP / CPPS. En outre, ils ont montré que la douleur et les scores urinaires ont été augmentées chez les patients ayant des antécédents de violence physique et psychologique. Nous avons précédemment démontré que le même paradigme dans NMS femelle C57BL / 6 souris produit une hypersensibilité vaginal et l&#39;expression du gène anormal à la fois dans le vagin et la vessie suggestif de sortie de l&#39;axe HPA 16 dysfonctionnelle. Cette preuve combiné avec la forte prévalence de CP / CPPS patients présentant des comorbidités 42 autres, y compris les IC / PBS et troubles de l&#39;humeur, qui ont été présentées plus clairement être lié à la vie tôt le stress exposition 12-14, fournit la justification de l&#39;utilisation d&#39;un NMS modèle d&#39;enquêter CP / CPPS chez la souris.

<table><tbody><tr><td>Souris femelles C57BL/6 enceintes</td><td>Rivière Charles</td><td>027</td> Les <td>femelles gestantes programmées ou non doivent être surveillées quotidiennement pour l’accouchement à l’intérieur.</td></tr><tr><td>Bécher en verre de 2</td> <td>LSigma-Aldrich</td><td>CLS10002L</td><td>Chaque portée du SGEN sera conservée dans le même bécher pendant toute la durée de la période de séparation de 21 jours.</td></tr><tr><td>Incubateur à air pulsé VWR, Basic</td><td>VWR International</td><td>414005-124</td><td>L’incubateur doit se tenir à 33&deg ; C et 50 % d’humidité.</td></tr><tr><td>Test tactile Évaluateur sensoriel, kit de 20 (Esthésiomètre Semmes-Weinstein Von Frey pour l’évaluation du toucher)</td><td>Stoelting</td><td>58011</td><td>Les monofilaments suivants doivent être utilisés pour l’évaluation de la sensibilité périgénitale : 1,65 g, 2,36 g, 2,83 g, 3,22 g, 3,61 g, 4,08 g, 4,31 g et 4,74 g.</td></tr><tr><td>Enclos pour animaux (12 souris 6 rats)</td><td>IITC</td><td>435</td><td>Assurez-vous de placer un objet lourd sur les enclos individuels en acrylique pour empêcher les souris de s’échapper.</td></tr><tr><td>Support en maille pour souris et rats (12 souris, 6 rats)</td><td>IITC</td><td>410</td><td>Placez le support sur une table stable pour un accès confortable.</td></tr><tr><td>Saline tamponnée au phosphate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5493</td><td>Diluez le stock 10x PBS à 1x PBS.</td></tr><tr><td>Paraformaldéhyde</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td>Une solution de paraformaldéhyde à 4 % est nécessaire pour perfuser intracardiquement les souris et postfixer les tissus en préparation de la coloration des mastocytes.</td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5016</td><td>Cryoprotect tissu fixé dans une solution de saccharose à 30 % à 4&deg ; C pendant la nuit.</td></tr><tr><td>Heptane</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>246654</td><td>Réfrigérer l’heptane sur de la glace sèche pour congeler les tissus.</td></tr><tr><td>Cryomoule standard&nbsp ;</td><td>VWR International</td><td>4557</td><td>Pour aider à la congélation du tissu prostatique avant la section du cryostat</td></tr><tr><td>Tissue-Tek OCT Compound</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td>12 x 125 ml</td></tr><tr><td>VWR Superfrost Plus Micro Slide</td><td>VWR International</td><td>48311-703</td><td>75 x 25 x 1 mm</td></tr><tr><td>Toluidine Blue O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>198161</td><td>Certifié par la Biological Stain Commission. Convient pour une utilisation comme coloration métachromatique pour les mastocytes.</td></tr><tr><td>Éthanol, absolu (200 proof)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818-4</td><td>Molecular Biology Grade, Fisher Bioreagents ; des solutions à 95 % et à 100 % seront nécessaires pour déshydrater les cryosections colorées avant la visualisation des mastocytes.</td></tr><tr>La solution de NaCl acidifié de <td>chlorure de sodium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td>doit être fraîche avant de colorer les cryosections.</td></tr><tr><td>GeneMate Tubes à centrifuger stériles de 50 ml&nbsp ;</td><td>BioExpress</td><td>C-3394</td><td>Tubes jetables utilisés pour mélanger des éléments bleu toulidine ou tremper des lames dans 1xPBS.</td></tr><tr><td>Plat de coloration Coplin pour 10 lames, avec couvercle en verre dépoli</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-815</td><td>Peut contenir jusqu’à 10 lames standard 3 x 1 po. (75 x 25 mm) glisse dos à dos. Utilisez des plats séparés pour la solution de travail Toluidine Blue, 95 % EtOH, 100 % EtOH et xylène.</td></tr><tr><td>Xylènes (histologiques)</td><td>Fisher Scientific</td><td>X3P</td><td>Une fois déshydratés, les tissus sont éliminés avec du xylène.</td></tr><tr><td>Boîtes de lames de microscope, 100 places</td><td>VWR International</td><td>82003</td><td>Les boîtes peuvent être utilisées pour le stockage et le transport de lames.</td></tr><tr><td>Fisherbrand Boîte à lames de microscope</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-400</td><td>Ces boîtes à lames sont généralement assez petites pour tenir à l’intérieur d’un cryoétatique.</td></tr><tr><td>Glycérol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5516</td><td>Le glycérol est un support de montage traditionnel.</td></tr><tr><td>Support de montage, Richard-Allan Scientific</td><td>VWR International</td><td>4111</td><td>Le support de montage lie fermement la lamelle à la glissière.</td></tr><tr><td>Verres à micro-couverture, rectangulaires, n° 1</td><td>VWR International</td><td>48393-106</td><td>Une lamelle est placée sur le tissu déshydraté et dégagé pour protéger l’échantillon.</td></tr><tr><td>Microscope optique</td><td>Nikon</td><td></td><td>Le microscope de recherche automatisé avancé Eclipse 90i, utilisé par notre laboratoire, a été abandonné et remplacé par Eclipse Ni-E. &nbsp ;</td></tr></tbody></table>

Évaluation de la sensibilité et de la prostate péri-mast cell activation dans un modèle murin de la séparation maternelle néonatale

Assessment of Perigenital Sensitivity and Prostatic Mast Cell Activation in a Mouse Model of Neonatal Maternal Separation

La prostatite chronique / syndrome de la douleur pelvienne chronique (CP / CPPS) a une prévalence à vie de 14% et est le diagnostic urologique la plus courante pour les hommes de moins de 50 ans, mais il est le trouble le moins bien compris et a étudié la douleur pelvienne chronique. Un sous-ensemble significatif de patients avec le rapport de la douleur pelvienne chronique ayant connu le stress de début de la vie ou d&#39;abus, ce qui peut sensiblement affecter le fonctionnement et la régulation du (HPA) axe hypothalamo-hypophyso-surrénalien. L&#39;activation des mastocytes, qui a été montré à être augmentée dans l&#39;urine et exprimé sécrétions prostatiques de patients CP / CPPS, est partiellement régulée par activation en aval de l&#39;axe HPA. La séparation maternelle néonatale (NMS) a été utilisé pendant plus de deux décennies à étudier les résultats de début de stress de la vie dans les modèles de rongeurs, y compris les changements dans l&#39;axe HPA et la sensibilité viscérale. Ici, nous fournissons un protocole détaillé pour l&#39;utilisation de NMS comme un modèle préclinique de CP / CPPS dans C57BL / 6 souris mâles. Nous décrivons la méthodologiepour effectuer NMS, évaluer allodynie mécanique périgénitale, et la preuve histologique de l&#39;activation des mastocytes. Nous fournissons également des preuves que le stress psychologique précoce peut avoir des effets à long terme sur le système génito-urinaire masculin chez la souris.

Les souris qui ont subi NMS a montré des preuves de comportement indicatif de CP / CPPS. Lors d&#39;un essai avec une série graduée de monofilaments von Frey, souris NMS 8 semaines-vieux (n = 4) affiché allodynie mécanique périgénitale par rapport à leurs homologues naïfs (n = 5, figure 2). Ceci est démontré qu&#39;une réduction significative (p &lt;0,01; test t de Student) dans le seuil de retrait mécanique qui a suscité une réaction positive des comportements, enregistrée comme une secousse r...

Nous mesurons activation périgénitale mécanique de la sensibilité et des mastocytes dans la prostate des hommes C57BL / 6 qui a subi un début de paradigme du stress de la vie - la séparation maternelle néonatale, afin d&#39;induire un modèle préclinique de syndrome chronique de la prostatite chronique / de douleurs pelviennes.

Évaluation de la sensibilité et de la prostate péri-Mast Cell Activation dans un modèle murin de la séparation maternelle néonatale

Chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome (CP/CPPS) has a lifetime prevalence of 14% and is the most common urological diagnosis for men under the ...

L'objectif général de l'expérience suivante est de déterminer l'impact du stress précoce de la vie sur le système urogénital en mesurant la sensibilité mécanique péri-génitale et l'activation des mastocytes au sein de la prostate chez des souris mâles C57BL/6 ayant subi une séparation maternelle néonatale. Ceci est réalisé en effectuant d'abord une séparation maternelle néonatale sur des portées de souriceaux C57BL/6 afin d'induire un stress précoce de la vie pendant 20 jours consécutifs. La deuxième étape consiste à mesurer la sensibilité mécanique péri-génitale par l'application d'une série de monofilaments de Von Frey sur la région péri-génitale.Ensuite, une coloration au bleu de toluidine acidifié est réalisée sur des sections congelées de prostates de souris, afin de quantifier l'activation des mastocytes. Les résultats montrent que la séparation maternelle néonatale augmente la sensibilité mécanique péri-génitale et l'activation des mastocytes prostatiques, d'après nos analyses comportementales et histologiques.Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes, comme la prostatite auto-immune expérimentale, est qu'elle intègre une exposition au stre

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Infection de la prostate peut être un facteur contribuant à la médiation douleur pelvienne chez la prostatite chronique. Nous décrivons la procédure de préparation de l'inoculum bactérien standardisé, l'instillation de bactéries dans l'urètre chez les souris mâles et une méthodologie pour mesurer l'allodynie tactile chez la souris au fil du temps.

Mesure de l&#39;allodynie tactile dans un modèle murin de la prostatite bactérienne

Les mesures électroniques de von Frey constituent une alternative efficace et améliorée aux filaments de von Frey classiques, car elles permettent de mesurer rapidement et précisément les changements des seuils de retrait mécanique des rongeurs aux stimuli de pression appliqués en continu avant et après un événement inflammatoire.

Mesure des changements de sensibilité tactile dans la patte postérieure de souris à l’aide d’un appareil électronique de von Frey

Cet article décrit une méthode permettant de générer une lésion par compression de la moelle épinière (LME) reproductible chez la souris néonatale. Le modèle fournit une plate-forme avantageuse pour étudier les mécanismes de plasticité adaptative qui sous-tendent la récupération fonctionnelle spontanée.

Un nouveau-né de la moelle épinière de souris Compression Modèle de lésion

Ce protocole prévoit les mesures nécessaires pour établir et évaluer les infections néonatales chez les souris âgées de 7 jours.

Un modèle de souris contrôlée pour infection polymicrobienne néonatale

Nous avons développé un modèle de chorioamnionite pour simuler l’exposition foetale à l’inflammation maternelle (FEMI) sans complications des organismes vivants pour examiner les effets de FEMI sur le développement du tractus intestinal de la progéniture. Ceci permet l’étude des causes mécanistes pour le développement des dommages intestinaux suivant chorioamnionitis.

Un modèle murin d’exposition foetale à l’inflammation maternelle pour étudier les effets de la chorioamnionite aiguë sur le développement intestinal nouveau-né

Le paradigme du stress psychosocial chronique (SNC) utilise des facteurs de stress cliniquement pertinents pendant la grossesse chez la souris pour modéliser les troubles psychiatriques des mères et des nourrissons. Ici, nous fournissons une procédure étape par étape d’application du paradigme CGS et des évaluations en aval pour valider ce modèle.

Utilisation d’un modèle murin de stress psychosocial pendant la grossesse comme paradigme translationnellement pertinent pour les troubles psychiatriques chez les mères et les nourrissons

L’infection maternelle est un facteur de risque de troubles neurodéveloppementaux. Les modèles murins d’activation immunitaire maternelle (AMI) peuvent élucider l’impact de l’infection sur le développement et le fonctionnement du cerveau. Ici, des lignes directrices générales et une procédure sont fournies pour produire une progéniture résistante et sensible exposée à l’AMI.

Génération d’un modèle reproductible d’activation immunitaire maternelle en milieu de gestation à l’aide de Poly(I:C) pour étudier la susceptibilité et la résilience de la progéniture

Ici, nous présentons un protocole concis pour la création d’un modèle de rat prématuré, facilitant la recherche sur la gestion précoce de la douleur postnatale. La méthode consiste à réaliser une césarienne trois jours avant la naissance prévue, à extraire des petits rats prématurés par hystérectomie et à les intégrer à la progéniture biologique d’une mère porteuse.

Un modèle de rat prématuré pour les études sur la douleur

La naissance prématurée (accouchement &lt; 37 semaines) est un problème de santé mondial urgent, avec des options de prévention et de traitement sous-optimales. Nous présentons un modèle murin d’accouchement prématuré induit par une infection bactérienne vaginale ascendante et décrivons comment analyser la morbidité et la mortalité néonatales qui en résultent.

Modélisation de l’infection vaginale ascendante, de l’accouchement prématuré et de la morbidité néonatale chez la souris

Ce protocole décrit un modèle animal pour étudier comment l’adversité au début de la vie, provoquée par un environnement appauvri et des soins maternels imprévisibles pendant la période postnatale précoce, affecte le développement du cerveau et le risque futur de troubles mentaux.

La litière et la nidification limitées comme modèle d’adversité au début de la vie chez les souris

L’article propose un protocole complet pour générer un modèle murin d’activation immunitaire maternelle (MIA) afin d’étudier les effets de l’inflammation précoce de la gestation sur le neurodéveloppement, incluant des indicateurs clés pour garantir la fiabilité et la reproductibilité.

Génération du modèle souris à activation immunitaire maternelle précoce pour évaluer l’inflammation prénatale sur le neurodéveloppement

Découvrez comment évaluer la sensibilité mécanique périgénitale et l'activation des mastocytes dans la prostate chez les souris C57BL/6 après séparation maternelle néonatale. Cette méthode permet d'étudier l'impact du stress précoce sur le système urogénital.

Évaluation de la sensibilité et de la prostate péri-Mast Cell Activation dans un modèle murin de la séparation maternelle néonatale (Vidéo) | JoVE Journal

Évaluation de la sensibilité et de la prostate péri-Mast Cell Activation dans un modèle murin de la séparation maternelle néonatale

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