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Employant numérique Droplet PCR pour détecter des mutations BRAF V600E dans de paraffine standard...
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JoVE Journal Biology
Employing Digital Droplet PCR to Detect BRAF V600E Mutations in Formalin-fixed Paraffin-embedded Reference Standard Cell Lines

Employant numérique Droplet PCR pour détecter des mutations BRAF V600E dans de paraffine standard de référence lignées cellulaires fixés au formol

Full Text
13,672 Views
10:16 min
October 8, 2015

DOI: 10.3791/53190-v

Nirmal Rajasekaran1, Myung Ryurl Oh3, Sung-Su Kim1, Si Eun Kim3, Young Deug Kim4, Hyun-Jeung Choi2, Bohyun Byun2, Young Kee Shin1,2

1Research Institute of Pharmaceutical Science, Department of Pharmacy, College of Pharmacy,Seoul National University, 2The Center for Anti-Cancer CDx, N-Bio,Seoul National University, 3ABION CRO, 4ABION Inc., R&D Center

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Le but de cette vidéo est de montrer comment effectuer une extraction d'ADN automatisée à partir des lignes de formol paraffine (FFPE) référence standards cellulaires et gouttelettes numérique PCR (ddPCR) analyse pour détecter des mutations rares dans un cadre clinique. Détecter des mutations dans des échantillons FFPE démontre l'utilité clinique de ddPCR dans les échantillons FFPE.

L’objectif global de cette expérience est d’isoler la génomique humaine, l’ADN à partir de lignées cellulaires standard de référence formelles et fixées intégrées à la paraffine à l’aide d’un système de préparation de tissus, puis d’analyser les mutations de bra V 600 E dans l’ADN génomique à l’aide de gouttelettes numériques. P-C-R-D-D-P-C-R Peut aider à répondre à des questions clés en oncologie moléculaire, telles que la présence et l’abondance de la mutation de la séquence RA et la quantification de l’acide nucléique à un faible nombre de copies de matrice. Bien que cette méthode soit démontrée dans l’AEP depuis les lignées cellulaires standard, elle peut également être utilisée dans d’autres échantillons biologiques juste pour vous assurer d’optimiser les conditions d’isolement de votre ADN d’intérêt.

Ce système de préparation des tissus peut être utilisé pour isoler jusqu’à 48 échantillons d’ADN génomique humain exempt de contaminants en quatre heures, par rapport à d’autres procédures manuelles. Ce système est quelque peu coûteux pour la préparation en raison de l’utilisation de billes magnétiques. Cependant, il est plus sûr et produit et de haute qualité La démonstration de la pression sera ssu A et un technicien de notre laboratoire.

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Biologie Moléculaire Numéro 104 mutation de l'ADN BRAF ddPCR la biologie moléculaire fluorescence la FFPE la biologie du cancer

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