Name: Scléral Cross-linking Utilisation de la riboflavine et Ultraviolet-A rayonnement pour la prévention des Axial Myopie dans un modèle de lapin (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 56 s
Description: Découvrez le cross-linking scléral avec riboflavine et rayonnement UVA pour prévenir la myopie axiale chez le lapin. Cette méthode chirurgicale permet d'explorer de nouvelles stratégies thérapeutiques en ophtalmologie expérimentale.

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Les auteurs sont reconnaissants à Mme Dalia Sela et M. Emi Sharon pour leur travail technique professionnel et excellent dans le laboratoire.

Les animaux ont été traités conformément à la résolution d&#39;ARVO concernant l&#39;utilisation des animaux dans la recherche. Le protocole d&#39;étude a été approuvé par le Comité institutionnel de laboratoire de recherche animale (d&#39;approbation ne 022-4598-2;. 021211). 1. Préparation pour la chirurgie # 1 <ol><li> Peser et anesthésier à 13 jours d&#39;âge lapin blanc de Nouvelle-Zélande avec une injection intramusculaire de chlorhydrate de kétamine à 100 mg / ml (100 mg / kg) et de chlorhydrate de xylazine 25 mg / ml (12,5 mg / kg). Ces doses sont utilisées en raison de la durée de l&#39;intervention chirurgicale. Assurer le niveau approprié de l&#39;anesthésie par l&#39;absence d&#39;un réflexe de la douleur. </li><li> L&#39;utilisation d&#39;un tampon de coton stérile, appliquer une petite quantité de pommade ophtalmique à l&#39;œil non opéré pour empêcher la cornée de se dessécher. Appliquer 0,9% de solution saline normale tombe sur la cornée de l&#39;oeil opéré pendant l&#39;opération pour empêcher les cornées de se dessécher. </li><li> Effectuer trois mesures de longueur axiale dans chaque oeil après une anesthésie topique (oxybuprocaine chlorhydrate de 0,4%) à l&#39;aide d&#39;une échographie A-scanner, puis en moyenne les mesures. Appliquer la sonde perpendiculairement à la cornée centrale. </li></ol> 2. Surgery # 1 - Pre Cross Step Lier <ol><li> En utilisant des pinces et des ciseaux ophtalmiques chirurgicales sous un microscope opératoire ophtalmique, faire une péritomie conjonctivale 360 ​​° avec des pinces et des ciseaux ophtalmiques chirurgicales. </li><li> En utilisant une pince à angle ou un crochet de muscle identifier les quatre muscles droits extraoculaires et de les isoler avec un 2-0 en soie tressée sutures non aiguilletés. NOTE: Les sutures de soie vont aider à déplacer le globe dans la direction souhaitée. Le globe oculaire est divisé en quadrants entre les quatre muscles droits (quatre quadrants). <ol><li> Mark avec un marqueur de la peau de deux zones dans chaque quadrant, un à la sclérotique équatorial et un à la sclérotique postérieure. Ceux-ci sont les zones d&#39;irradiation. </li></ol></li><li> Préparer un 3 ml à 5 ​​ml seringue contenant 0,1% gratuit dextran-riboflavine-5-phosphate. Raccorder la seringue à une canule lacrymale 26 G ou 25 G hydrodelineator conique. </li><li> Préparer le dispositif d&#39;irradiation comprenant une source de lumière UV A (370 nm) reliée à une fibre optique sur mesure en biseau vers le bas. Suite à la mesure de la puissance de l&#39;énergie et de l&#39;étalonnage (voir note ci-dessous), régler l&#39;appareil à 57 mW / cm². REMARQUE: L&#39;étalonnage a été effectué dans le commerce par le constructeur. Cette méthode donne une dose totale de lumière ultraviolette A de 57 J / cm². (57 mW / cm 2 sur 0,2 cm 2 est de 11,4 mW / 0,2 cm 2 en utilisant 11,4 mW / 0,2 cm 2 pour 200 sec est une charge cumulative de 2,2 J par 0,2 cm 2 spot) </li></ol> 3. Chirurgie # 1 - Cross Linking <ol><li> Déplacez le globe oculaire en tirant les sutures de soie dans le sens opposé du quadrant choisi de traiter (par exemple, Pull up et nasal lors du traitement du quadrant temporal inférieur). Effectuer le mouvement du globe oculaire en utilisant une suture 2-0 soie tressée non aiguilleté qui isolates chaque muscle droit. </li><li> Appliquer la solution de photosensibilisateur contenant 0,1% gratuit dextran-riboflavine-5-phosphate sur l&#39;irradiation zone 20 secondes avant irradiation commence. </li><li> Irradier la zone d&#39;irradiation au moyen d&#39;un fait sur mesure à fibre optique en biseau vers le bas pour une durée d&#39;irradiation de 200 secondes. Mesurer l&#39;aire de chaque zone que 0,2 cm avec un rayon de 4 mm. </li><li> Appliquer une solution de photosensibilisateur contenant 0,1% sans dextran riboflavine-5-phosphate sur la zone d&#39;irradiation toutes les 20 secondes au cours de la période d&#39;irradiation de 200 secondes. REMARQUE: Effectuer l&#39;irradiation et l&#39;abandon de la riboflavine simultanément par deux chirurgiens. </li><li> Répéter les étapes 03.01 à 03.04, pour chacun des quatre quarts de cercle du globe oculaire. </li></ol> 4. Chirurgie # 1 - Poster Cross Step Lier <ol><li> Rasez la fourrure autour de l&#39;œil. Couper les marges de couvercle en utilisant des ciseaux chirurgicaux ophtalmiques puis suturer doucement la partie supérieure et des paupières inférieures en utilisant 4-0 tressé couleur ivoire de soie - 3/8 cercle re13 mm de longueur C-3 l&#39;aiguille de vers (de tarsorraphie). Appliquez une petite quantité de pommade ophtalmique sur le bord de la paupière à la fin de la procédure (chloramphénicol 5%). </li></ol> 5. Chirurgie # 1 - Soins post-opératoires <ol><li> Gardez les animaux sous une lampe chauffante pendant la récupération. Ne pas laisser un animal sans surveillance jusqu&#39;à ce qu&#39;il ait repris connaissance suffisante pour maintenir décubitus sternale. </li><li> Placez l&#39;animal dans une cage propre avec literie neuve jusqu&#39;à ce qu&#39;il soit complètement rétabli. Après la récupération, l&#39;animal sera retourné à la salle des animaux. Retour à l&#39;animal de sa mère que quand il est éveillé. </li><li> Pendant les 48 premières heures, examiner les animaux concernant l&#39;état général et des signes de maladie ou d&#39;infections. Administrer analgésie conformément à l&#39;article 1. Administrer l&#39;analgésie au besoin si un changement dans le comportement de lapin est observée. (Metamizole gouttes 50mg / kg toutes les 6 heures). </li></ol> 6. Chirurgie # 2 <ol><li> Cinquante-cinq jours après snterventionschirurgic ales # 1, peser et anesthésier le lapin par injection intramusculaire de chlorhydrate de kétamine à 100 mg / ml (100 mg / kg) et de chlorhydrate de xylazine 25 mg / ml (12,5 mg / kg). </li><li> Avec des ciseaux chirurgicaux ophtalmiques sous un microscope opératoire ophtalmique, retirer le tarsorraphie. Effectuer trois mesures de longueur axiale sur chaque oeil après une anesthésie topique (chlorhydrate de oxybuprocaine 0,4%) à l&#39;aide d&#39;une échographie A-scanner, puis la moyenne des mesures. Appliquer la sonde perpendiculairement à la cornée centrale. </li><li> Euthanize les lapins avec intrapéritonéale phénobarbital sodique (200 mg / 1,5 kg de poids corporel). </li></ol>

<ol><li>McBrien, N. A., Gentle, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+sclera+in+the+development+and+pathological+complications+of+myopia%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Retin.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Role of the sclera in the development and pathological complications of myopia.</a> Prog. Retin. Eye Res. 22, 307-338 (2003).</li>
<li>Saw, S. M., Gazzard, G., Au Eong, K. -G., Tan, D. T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myopia%3A+attempts+to+arrest+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Myopia: attempts to arrest progression.</a> Br. J. Ophthalmol. 86, 1306-1311 (2002).</li>
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<li>Whitmore, W. G., Curtin, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scleral+reinforcement%3A+two+case+reports%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+Surg%22%5BJournal%5D)">Scleral reinforcement: two case reports.</a> Ophthalmic Surg. 18, 503-505 (1987).</li>
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</ol>

Les auteurs déclarent qu&#39;ils ont aucun intérêt financier concurrents.

Nous présentons la première étude in vivo de la prévention de la myopie axiale dans un modèle de lapin en utilisant une technologie de réticulation avec la riboflavine et l&#39; irradiation UVA. Bien que différents animaux de laboratoire peuvent être utilisés dans ce type d&#39;étude, nous avons choisi des lapins principalement en raison de la taille des yeux et de la nécessité d&#39;effectuer la réticulation sur la surface sclérale. Nous avons constaté que l&#39;exposition de la sc...

Myopie est le plus fréquent des troubles de réfraction. La prévalence de la myopie aux Etats - Unis et en Europe est signalé à être autour de 30%, et dans les pays d&#39; Asie , il affecte jusqu&#39;à 60% des 1,2 de la population générale. Progression Myopic se produit dans jusqu&#39;à 50% des myopes, généralement à un taux d&#39;environ -0.5 dioptries sur un intervalle de deux ans 3. Les coûts de santé imposées par la myopie sont considérables, y compris les frais de lunettes, lentilles de contact et la chirurgie réfractive et les coûts liés aux risques accrus pour la santé du glaucome, de la cataracte, décollement de la rétine et de la déficience visuelle 4-6. Dans les études animales de la myopie, la réduction visée est induite par suturer la paupière 7-10, le placement d&#39;un obturateur à une courte distance de l&#39;œil et le tatouage de la cornée 11. Cependant, la myopie artificielle de se produire dans ces études, le processus d&#39;occlusion doit être réalisée sur des animaux très jeunes, car aucune expérimentation vue de privation carried sur des spécimens adultes ont donné de bons résultats. L&#39; une des caractéristiques importantes de la myopie sévère est une modification pathologique de la sclérotique à l&#39; amincissement progressif de la sclérotique, probablement en raison d&#39;un mécanisme de rétroaction perturbée de emmétropisation après privation visuelle 12 ou en raison d&#39;un trouble métabolique de la sclérotique, comme dans Ehlers- Danlos 13. En fin de compte, les deux mécanismes conduisent à un étirement et un amincissement de la sclère, de la rétine et de la choroïde due à des anomalies structurales de la sclérotique myope tels qu&#39;un diamètre des fibres de collagène a diminué 14,15 et les troubles 16 fibrillogenèse. Plusieurs études ont montré que l&#39; altération de réticulation du collagène est un facteur important dans le processus d&#39;affaiblissement de la sclérotique myope 17-18. Wollensak et al. , 19-21 induit une réticulation du collagène par application de la riboflavine photosensibilisateur et le rayonnement ultraviolet A (UVA) irradiation (370 nm)et a noté une augmentation significative de 157% de la rigidité de porcin et humain in vitro sclérotique 19 et une augmentation de 465% de la rigidité de lapin in vivo scléral (module de Young) 20. Réticulation a également eu un effet à long terme sur le lapin sclérotique in vivo: la rigidité a augmenté de 320,4% après 3 jours, 277,6% après 4 mois, et 502% au bout de 8 mois (le module d&#39;élasticité de Young) 22. Tentatives thérapeutiques pour arrêter la progression de myopie ont été publiés 23-26 mais le succès de ces méthodes est controversée. Aucun moyen efficace de prévenir la myopie progressive a été trouvé à ce jour. L&#39;étiologie de la myopie est encore controversée, et son traitement pose un défi. Sur la base de ces découvertes, on suppose que la reticulation scléral peut servir comme un moyen de traitement en fonction de la progression de la sclère-myope. Le but de cette étude est d&#39;examiner le collagène crosslinki scléralng d&#39;effet sur le développement de la myopie axiale induite par l&#39;axe visuel occlusion.

<table><tbody><tr><td>2-0 sutures tressées en soie non aiguilletées&nbsp ;</td><td>ETHICON</td><td>W193</td><td></td></tr><tr><td>4-0 tressé soie couleur ivoire</td><td>ETHICON</td><td>W816</td><td></td></tr><tr><td>0,1 % sans dextran-5-phosphate 1 mg :1 ml</td><td>Concept pour Pharmacy Ltd</td><td>D2-5025</td><td></td></tr><tr><td>Source lumineuse UV A (370 nm)&nbsp ;</td><td>O/E LAND Inc</td><td>NCSU033B</td><td></td></tr><tr><td>Fibre optique biseautée sur mesure&nbsp ;</td><td>Prizmatix Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>26 G canule lacrymale&nbsp ;</td><td>Beaver-visitec International Ltd.&nbsp ;</td><td></td><td></td>REF581276</tr><tr><td>hydrodélinéateur conique de 25 g [Blumenthal]&nbsp ;</td><td>Beaver-visitec International Ltd.&nbsp ;</td><td></td><td></td>REF585107</tr><tr><td>lapins de 13 jours</td><td>Harlan&nbsp ;</td><td>1NZWR40</td><td></td></tr><tr><td>Biomètre à ultrasons</td><td>Allergan-Humphrey</td><td>820-519</td><td></td></tr><tr><td>Marqueur cutané</td><td>Devon</td><td>4237101664X</td><td></td></tr></tbody></table>

scléral cross-linking utilisation de la riboflavine et ultraviolet-a rayonnement pour la prévention des axial myopie dans un modèle de lapin

Scleral Cross-linking Using Riboflavin and Ultraviolet-A Radiation for Prevention of Axial Myopia in a Rabbit Model

les personnes myopes, en particulier ceux avec une myopie sévère, sont plus à risque que la normale de la cataracte, le glaucome, décollement de la rétine et des anomalies choriorétiniennes. En outre, la myopie pathologique est une cause commune irréversible de la déficience visuelle et la cécité 1-3. Notre étude démontre l&#39;effet de la réticulation à l&#39;aide scléral riboflavine et le rayonnement ultraviolet Un rayonnement sur le développement de la myopie axiale dans un modèle de lapin. La longueur axiale du globe oculaire a été mesurée par un balayage par ultrasons en Nouvelle-Zélande lapins blancs âgés de 13 jours (mâle et femelle). L&#39;œil a ensuite subi 360 ° péritomie conjonctivale avec réticulation scléral, suivie par tarsorraphie. allongement axial a été induite chez 13 jours d&#39;âge des lapins New Zealand en suturant les paupières de l&#39;oeil droit (de tarsorraphie). Les yeux ont été divisés en quarts de cercle, et chaque quadrant a deux zones d&#39;irradiation sclérales, chacune avec une surface de 0,2 cm et un rayon de 4 mm. La réticulation a été effectuée en abaissant 0,1%riboflavine-5-phosphate sur les zones d&#39;irradiation de 20 secondes avant que le rayonnement ultraviolet et une irradiation toutes les 20 secondes pendant le temps d&#39;irradiation de 200 secondes libre dextran. UVA (370 nm) a été appliquée perpendiculairement à la sclérotique à 57 mW / cm² (dose de lumière UVA totale, 57 J / cm²). Tarsorrhaphies ont été enlevés le jour 55, suivie par des mesures de longueur axiale répétées. Cette étude démontre que la réticulation scléral avec la riboflavine et le rayonnement ultraviolet Un rayonnement empêche effectivement l&#39;allongement axial induite par une occlusion dans un modèle de lapin.

Les figures 1 et 2 illustrent graphiquement les mesures de la longueur axiale des deux groupes. Groupe 1 lapins ont subi une réticulation scléral et tarsorraphie sur l&#39;œil droit tandis que l&#39;œil gauche n&#39;a pas été opéré (Figure 1). Groupe 2 lapins ont subi seulement péritomie et tarsorraphie sur l&#39;œil droit tandis que l&#39;œil gauche n&#39;a pas été opéré (Figure 2). <p class="jove_content" fo:keep-t...

On démontre l&#39;effet de la réticulation scléral avec la riboflavine et des UVA sur un oeil de lapin élongation axiale. allongement axial a été induite chez 13 jours d&#39;âge des lapins de Nouvelle-Zélande (mâle et femelle) en suturant les paupières de l&#39;oeil droite (tarsorraphie).

Scléral Cross-linking Utilisation de la riboflavine et Ultraviolet-A rayonnement pour la prévention des Axial Myopie dans un modèle de lapin

Myopic individuals, especially those with severe myopia, are at higher-than-normal risk of cataract, glaucoma, retinal detachment and chorioretinal ...

L'objectif général de cette procédure est d'observer les effets du réticulation sclérale à l'aide de riboflavine et de rayonnement ultraviolet A pour induire une myopie axiale chez un modèle animal de lapin. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la réticulation sclérale, telles que : comment diriger le rayonnement UVA vers des zones sclérales spécifiques ? Le principal avantage de cette technique réside dans son utilisation combinée du rayonnement UVA, de la fibre optique et de la chirurgie afin d'atteindre les zones sclérales d'intérêt.L'intervention chirurgicale sera assistée par Orly Gal-Or, une interne du service d'ophtalmologie du centre médical Rabin. Avant de commencer la procédure, vérifiez l'absence de réponse au réflexe douloureux et utilisez un coton stérile pour appliquer une petite quantité de pommade ophtalmique sur l'œil non opéré. Ensuite, appliquez une anesthésie topique sur chaque œil.Et en plaçant la sonde perpendiculairement à la cornée centrale, utiliser un appareil d'échographie en mode A pour effectuer trois mesures de la longueur axiale des yeux. Ensuite, sous un microscope opératoire ophtalmique, utiliser une pince et des ciseaux chirurgicaux ophtalmiques pour réaliser une péritomie conjonctivale à 360 degrés. Utiliser un crochet musculaire pour localiser les quatre muscles droits extraoculaires.Ensuite, isoler les muscles à l’aide de deux sutures en soie tressée sans aiguille pour créer quatre quadrants. À l’aide d’un marqueur cutané, délimiter une zone d’irradiation au niveau de la sclérotique équatoriale et une zone d’irradiation au niveau de la sclérotique postérieure dans chaque quadrant. Puis, charger une seringue de trois à cinq millilitres avec une solution photosensibilisatrice de riboflavine 5 phosphate à 0,1 pour cent sans dextrane et fixer une canule lacrymale de calibre 26.À présent, allumez un dispositif d'irradiation équipé d'une source de lumière UVA de 370 nanomètres reliée à une fibre optique personnalisée inclinée, puis réglez l'appareil à 57 milliwatts par centimètre carré. Vingt secondes avant le début de l'irradiation, déplacez le globe oculaire en tirant sur les fils de suture en soie dans la direction opposée au quadrant à traiter, puis appliquez une solution de photosensibilisateur sur la zone d'irradiation. Ensuite, utilisez la fibre optique personnalisée pour irradier la zone sélectionnée pendant 200 secondes, en appliquant la solution de photosensibilisateur sur la zone toutes les 20 secondes.Une fois les quatre quadrants irradiés, découper les bords de la paupière avec des ciseaux. Ensuite, utiliser quatre fils de soie tressés de couleur ivoire pour suturer délicatement les paupières supérieure et inférieure. Appliquer une petite quantité de pommade ophtalmique sur le bord de la paupière et placer le lapin sous une lampe chauffante.Une fois que l'animal est complètement rétabli, placez-le dans une cage propre avec de la litière neuve. Cinquante-cinq jours après la réticulation, utilisez des ciseaux ophtalmiques chirurgicaux pour retirer la tarsorraphie. Ensuite, effectuez trois mesures de la longueur axiale sur chaque œil, comme vient de l'être démontré.Chez les animaux ayant subi un croisement scléral et une tarsorrhaphie, la longueur axiale moyenne a diminué après la suture des paupières, par rapport à l'œil non opéré. Chez les animaux ayant subi uniquement une péritymie et une tarsorrhaphie, en revanche, la longueur axiale moyenne a augmenté dans l'œil expérimental. En effet, les yeux ayant subi un croisement scléral ont présenté une augmentation moindre de la longueur axiale globalement, par rapport aux yeux ayant uniquement subi une péritymie.Bien que la différence entre les groupes concernant la longueur axiale moyenne des yeux qui n'ont pas subi de chirurgie ne soit pas statistiquement significative. Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de se rappeler de préparer à l'avance tout l'équipement nécessaire. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de la myopie, qui ont exploré les effets de la riboflavine et des radiations UVA sur la rétine, la choroïde et la sclérotique.Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez bien comprendre comment visualiser des zones sclérales spécifiques d'intérêt et appliquer des traitements ciblés par rayonnement UVA. N'oubliez pas que la réalisation de chirurgies sur des yeux aussi petits, dotés de muscles droits délicats, peut s'avérer extrêmement difficile, et que la courbe d'apprentissage nécessaire à la maîtrise de cette technique doit être acceptée. Les implications de cette technique s'étendent à la prévention des complications pathologiques liées à la myopie.Bien que cette méthode puisse fournir des informations sur la prévention de la myopie axiale, elle peut également être appliquée à d'autres affections telles que les zones sclérales minces.

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