Name: Conditions affectant espace social Drosophila melanogaster (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 4 s
Description: Découvrez la quantification de l'espace social chez Drosophila melanogaster à l'aide d'une chambre expérimentale dédiée. Cette méthode permet d'étudier les facteurs génétiques et environnementaux influençant le comportement social des mouches.

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Les auteurs tiennent à remercier le Dr Tadmiri Venkatesh pour ses encouragements à préparer ce manuscrit, Dova Brenman et Selwyn Chui pour leurs commentaires constructifs, Elyssa Burg et Wayne Rasband pour la conception de la macro dans ImageJ pour toutes les distances entre les oiseaux et pour les distances du plus proche voisin. Les auteurs tiennent également à remercier les examinateurs pour leurs commentaires constructifs.
A.A.A, M.C.C. et A.F.S étaient responsables de la conception de la recherche ; S.N.J., A.A.A., M.N., Z.R. et A.J.M. ont réalisé les expériences. A.A.A, M.N., A.J.M., M.C.C et A.F.S. ont analysé les données ; A.R.M. et A.F.S. ont rédigé le manuscrit.
Ce travail a été soutenu par des bourses de recherche PSC-CUNY, financées conjointement par le Congrès du personnel professionnel et la City University of New York à A.F.S. ; par un financement interne de l’Université Western à A.F.S. ; par une bourse d’études en mathématiques, biologie, chimie et géologie pour les enseignants en formation et par une bourse de l’Alliance Louis Stokes pour la participation des minorités à A.A.A.

1. Matériel et réactifs Créé interne (Voir Liste des Matériaux pour les autres) <ol><li> Préparer un appareil d&#39;anesthésie froid Drosophila comme décrit précédemment 8. </li><li> Préparer un aspirateur à la mouche comme décrit précédemment 13. </li><li> Préparer des chambres et les détenteurs de l&#39;espace social. <ol><li> Commandez ou faire des vitres et des entretoises acryliques pour créer les chambres de l&#39;espace social. Chaque chambre de l&#39;espace social se compose de deux panneaux de verre carrés (17,6 cm x 17,6 cm, avec une épaisseur de 0,3 cm), deux bonnes entretoises acryliques de triangle (avec une hauteur de 16,5 cm, une base de 8,9 cm, avec une épaisseur de 0,3 cm ), et deux espaces rectangulaires (9 cm par 1,5 cm avec une épaisseur de 0,3 cm) (Figure 1A). </li><li> Assembler le verre et la chambre de l&#39;espace social acrylique tel qu&#39;il est identique à la chambre de la figure 1B. Pour ce faire, commencez par placer une entretoise triangulaire plat sur le dessus d&#39;un panneau carré de verre de telle sorte que l&#39;angle droitde l&#39;entretoise triangulaire est aligné avec l&#39;un des coins du panneau carré. Ensuite, placez la deuxième entretoise plate triangulaire sur le dessus du panneau carré, miroir de la première entretoise triangulaire. REMARQUE: Assurez-vous de porter des gants pour ne pas contaminer les morceaux avec des huiles et des parfums de vos mains. </li><li> Placez deux petites entretoises rectangulaires plats sur le dessus du panneau carré, le long de la côté de la vitre qui ne sont pas couverts. Les entretoises acryliques sur le dessus du plan carré doivent maintenant former une arène triangulaire. </li><li> Placer un deuxième panneau carré de verre au-dessus des entretoises acryliques tels que il est aligné au-dessus du panneau de verre d&#39;origine ci-dessous. </li><li> Utilisez quatre clips liant pour fixer les vitres et les entretoises pour former la chambre de l&#39;espace social. Placez un clip près du coin, sur le long côté de chacune des entretoises triangulaires, les fixant à l&#39;intérieur des vitres. Sur ces mêmes côtés, placez un clip dans le coin adjacent, sur chacune des entretoises rectangulaires, les sécuriser dansl&#39;autre les panneaux de verre. </li><li> Assembler un pied de support et une pince de ballon de telle sorte que la pince maintient la chambre de l&#39;espace social dans une position verticale, comme la chambre de l&#39;espace social repose sur son bord au-dessus de la surface de travail. </li><li> Pour chaque répétition dans l&#39;expérience, assembler une chambre de l&#39;espace social et soutenir tenir. </li></ol></li><li> Préparer un appareil de réponse de dosage d&#39;escalade pour vérifier la capacité d&#39;escalade de vol testés. <ol><li> Utiliser un appareil à contre-courant, comme décrit précédemment 14,15. </li></ol></li><li> Assurer des conditions d&#39;éclairage homogènes en effectuant l&#39;expérience sur une surface de travail recouvert d&#39;une couverture de banc blanc et devant un fond blanc. </li></ol> 2. Préparer les mouches avant l&#39;expérience <ol><li> Maintenir mouches dans des bouteilles contenant norme Drosophila volent la nourriture. Gardez-les dans une chambre d&#39;incubation à 25 ° C sur un cycle de 12 heures de lumière / obscurité. </li><li> Un ou deux jours avant l&#39;eXperiment, la collecte et le sexe vole sous anesthésie froid, comme décrit précédemment 8. <ol><li> Refroidir l&#39;appareil d&#39;anesthésie froid à -4 ° C. Lieu vole dans 50 ml tubes en plastique. Immerger entièrement les tubes en plastique contenant des mouches dans la glace dans un seau à glace isolé, attendez au moins 5 minutes pour les mouches à devenir immobile. </li><li> Placer vol sur la feuille de polyethylene de l&#39;appareil d&#39;anesthésie froid. A RT, utiliser une loupe binoculaire pour séparer les mâles des femelles. Maintenir les mouches, en groupes, dans des flacons contenant norme mouche drosophile alimentaire, ne dépassant pas 40 mouches par flacon. </li></ol></li><li> Deux heures avant le début de l&#39;expérience, en sorte que la température de la salle où l&#39;expérience sera effectuée est comprise entre 24-25 ° C et l&#39;humidité est d&#39;environ 50%. </li><li> Transférer les mouches dans de nouveaux flacons contenant de la nourriture, et de les placer pendant 2 heures sur la surface de travail où l&#39;expérience sera effectuée. NOTE: Pour ces expérits, les souches de mouches utilisées étaient Drosophila souches melanogaster: Canton-spéciales ou Canton-S (CS), w 1 118 Cs 10 (ou W - w 1 118 par croisement 10 fois à Canton-S), de l&#39;Oregon et Samarkand mouches étaient tous de notre laboratoire les stocks 16; Elwood mouches ont été recueillies à l&#39;automne 2011 dans le quartier Elwood de Huntington, à Long Island, New York, États-Unis 8. Outre mention contraire, les résultats présentés ont été obtenus avec Canton-S vole (dans les tons de rouge). </li></ol> 3. réalisation de l&#39;expérience <ol><li> Effectuer l&#39;expérience 12 heures-15 heures (heure de Zeitgeber - le temps en heures après l&#39;apparition de la lumière - de ZT 4 à 7). </li><li> Préparer la chambre de l&#39;espace social pour le transfert de mouches. <ol><li> Placez un plat de la chambre de l&#39;espace social sur une surface de travail, avec le côté contenant entretoises rectangulaires les plus proches de votre corps. </li><li> Retirer one pince plus proche de votre corps et faites glisser une entretoise rectangulaire vers l&#39;extérieur, la création d&#39;un espace d&#39;environ 1 cm entre les entretoises rectangulaires. </li><li> Avec du ruban et un marqueur, l&#39;étiquette de la chambre de l&#39;espace social dans un coin supérieur avec le sexe, la souche, et le nombre de répétition. Prenez soin de veiller à la bande ne couvre pas partie de l&#39;arène triangulaire intérieure. </li></ol></li><li> Transférer les mouches dans la chambre de l&#39;espace social. <ol><li> Transfert d&#39;oiseau de leur flacon contenant de la nourriture dans un nouveau flacon vide. Aspirer d&#39;oiseau de la fiole vide et de les transférer dans la chambre de l&#39;espace social. <ol><li> Inspirez à attirer les mouches dans la pointe de l&#39;aspirateur. Placez le bout dans la fente de 1 cm entre les entretoises rectangulaires de la chambre de l&#39;espace social et expirez à un taux uniforme de forcer les mouches dans l&#39;arène intérieure triangulaire. </li><li> Immédiatement glisser l&#39;entretoise rectangulaire en place, la fermeture de la base de l&#39;arène intérieure triangulaire, et placez le clip de liant de retour sur. </li></ol></li&gt; </ol></li><li> Sur un pad battant, qui est situé sur le banc différent de celui où le travail expérimental a lieu, maintenez la chambre de l&#39;espace social verticale tels que les entretoises rectangulaires sont sur le bas côté. Pound trois fois pour assurer toutes les mouches ont tombé au fond de l&#39;arène. NOTE: En raison de l&#39;entretoise acrylique qui sortait de la plus petite taille de la chambre (figure 1D), bang coudes sur la surface de travail tout en conservant un maintien sûr sur des appareils pour assurer les mouches ont tombé au fond. </li><li> Lancer une minuterie. </li><li> Placez la chambre de l&#39;espace social sur la surface de travail et utiliser le support de soutien et flacon pince pour le maintenir en position verticale. Placez une règle ou un autocollant de longueur connue à plat contre la chambre de l&#39;espace social, mais ne couvrant pas toute partie de l&#39;arène triangulaire intérieure. <ol><li> Pour les expériences placées horizontalement, ne placez pas la chambre de l&#39;espace social dans le stand de soutien; au lieu de jeter les plats de la chambre de l&#39;espace social sur la surface de travail. </li></ol&gt; </li><li> Quand les mouches se sont installés, généralement après environ 30 min, prendre une photo de la chambre de l&#39;espace social. Assurez-vous que la trame contient toute l&#39;arène intérieure triangulaire, la règle, et l&#39;étiquette. </li><li> Répétez l&#39;expérience pour chaque génotype et l&#39;état (idéalement 3 répétitions internes et 3 répétitions indépendants). </li></ol> 4. Analyser les données de l&#39;espace social <ol><li> Importez les macros suivantes dans ImageJ 17 <ol><li> ImageJ est disponible ici: http://rsbweb.nih.gov/ij/. </li><li> Vous pouvez créer une commande &quot;Distances de mesure» dans le menu Plugins en sauvegardant les macros ci-dessous dans un fichier nommé &#39;Measure_Distances.txt&#39; dans le dossier ImageJ / plugins, dans le sous-dossier macro, et en utilisant le menu Aide&gt; Mise à jour de la commande des menus ». </li><li> Copier dans un fichier .txt les macros qui sont fournis dans les données complémentaires et ont été publiés à l&#39;origine dans 3. </li></ol></li><li> Téléchargez les photos sur un ordinateur, et ouvrir un picture en utilisant ImageJ. <ol><li> Créer une échelle en traçant une ligne des 0 cm à 1 cm marques sur la règle dans l&#39;image, et sous l&#39;onglet Analyser, choisir la fonction Echelle Set pour définir une échelle de 1 cm pour cette distance (même approche pour l&#39;autocollant de longueur connue). Choisissez l&#39;option globale avant d&#39;appliquer l&#39;échelle de l&#39;image. </li><li> Recadrer l&#39;image en utilisant la fonction des cultures sous l&#39;onglet Image telle qu&#39;elle comprend toutes les mouches, tout en retirant autant du reste de l&#39;image que possible. </li><li> Une photo en noir et blanc en choisissant 8 bits à partir de l&#39;option Type sous l&#39;onglet Image. </li><li> Retirez tout bruit de fond de l&#39;image en allant à la fonction de seuil sous l&#39;option Ajuster de l&#39;onglet Image. Faites glisser les curseurs pour améliorer ou retirer le contraste afin que le corps de chaque volée peut être clairement vu sans autres marques dans l&#39;image. Si il ya des marques qui ne sont pas les mouches, les capturer avec l&#39;outil rectangulaire et les supprimer. </li><li> Met lemesures à l&#39;aide de l&#39;Outil de mesures Set sous l&#39;onglet Analyser. Choisissez Région, centre de masse, Centroid et Etiquette d&#39;affichage. Ensuite, choisissez les particules Analyser disposent sous l&#39;onglet Analyser pour créer une liste numérotée de tous les points noirs représentant les mouches. <ol><li> Lors de l&#39;utilisation analyser des particules; taille de l&#39;ensemble 0,01-0,1 (Ne pas choisir unité de pixel); circularité de 0,00 à 1,00; Voir les contours; afficher les résultats, et ajouter à gestion. </li><li> Veiller à ce que chaque point noir (chaque particule) est une représentation précise des mouches qui sont dans l&#39;image originale, en comparant la liste numérotée à l&#39;image originale. NOTE: Si des mouches qui sont très proches les unes étant comptés comme une particule, dessiner manuellement une ligne blanche pour séparer les deux mouches sur l&#39;image binaire. </li></ol></li><li> Alors que la liste est sélectionné, utiliser le plus proche voisin - Liste distances macro sous la deuxième option macros dans l&#39;onglet Plugins pour créer une nouvelle liste contenant les distances, en cm, d&#39;EAch voler à leur plus proche voisin. </li></ol></li><li> Copiez les plus proches des distances voisines de ImageJ et coller dans une colonne d&#39;un programme de feuille de calcul. <ol><li> Compiler toutes les données de chaque répétition sur la même feuille de calcul et d&#39;organiser par le génotype et l&#39;état. </li></ol></li><li> Effectuer l&#39;analyse des données en utilisant un logiciel statistique. Dans cette expérience, Graph Pad Prism (version 6 pour MacOSX, GraphPad Software, San Diego Californie, www.graphpad.com) a été utilisé pour effectuer une analyse de la variance, et Tests de Kruskal-Wallis, Tukey et post-hoc tests de Dunnet. </li><li> La distribution des distances en résulte une distribution non paramétrique 1, et les données sont représentées en tant que boîte et moustaches de Tukey pour éliminer les valeurs aberrantes (). </li></ol> 5. Escalade Assay (Comportement de contrôle) <ol><li> Utilisez un test d&#39;escalade comme un contrôle à vol d&#39;essai capacité à monter 14,15,18. <ol><li> Utilisez l&#39;appareil à contre-courant de telle sorte que trois essais cun être exécuté en parallèle. </li></ol></li><li> Transfert de 50 à 100 mouches naïfs (mouches qui n&#39;a pas été testé avant) dans trois fioles de test différents, et enclenchez-les 1 er, 3 e et dernier fentes au bas de l&#39;appareil à contre-courant, avec des flacons frais vides dans les emplacements opposés. </li><li> Place, flacons vides fraîches dans les emplacements vides au bas de l&#39;appareil. </li><li> Appuyez sur le bas de l&#39;appareil trois fois, de telle sorte que toutes les mouches sont au fond de chaque tube, à initier l&#39;expérience. </li><li> Démarrer la minuterie pour 15 secondes (temps suffisant pour ~ 100% de 3-7 jours anciens Canton-S pour atteindre le flacon haut - voir figure 3F). </li><li> Faites glisser la partie supérieure de l&#39;appareil à contre-courant, à déplacer les flacons haut par une fente. </li><li> Recueillir les mouches en tapotant l&#39;appareil vers le bas, pour mettre toutes les mouches dans les flacons de fond. <ol><li> 1 ère et 2 ème tubes (ou 3 ème et 4 ème, 5 ème </shaut&gt; et 6 e) correspondent respectivement aux mouches qui ne sont pas arrivés en haut et les mouches qui ont atteint le flacon dessus. </li></ol></li><li> Calculer l&#39;indice de performance (PI). <ol><li> Comptez le nombre de mouches dans chaque flacon. </li><li> Le PI est le pourcentage de mouches en mesure de monter sur le tube supérieur. </li><li> Les moyens de la PI suivent une distribution normale 1, et les données sont représentées comme des graphes en colonnes de l&#39;erreur standard moyenne plus ou moins à la moyenne (SEM). REMARQUE: Sinon, la PI peut être calculée comme le pourcentage de mouches capables d&#39;atteindre la partie supérieure du flacon inférieur (pour les mouches âgées, 5 sec est le temps suffisant pour quantifier une différence dans capacité à monter entre infectés et non infectés de 12 jours Canton-S quantifiés à partir d&#39;une image fixe: voir résultats). D&#39;autres ont utilisé différentes mesures de performance dans géotaxie induite sursaut-négatives, qui sont également appropriés pour quantifier capacité à monter 19-22. </li></ol></li></ol>

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<li>Pellegrino, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Weather+forecasting+by+insects%3A+modified+sexual+behaviour+in+response+to+atmospheric+pressure+changes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Weather forecasting by insects: modified sexual behaviour in response to atmospheric pressure changes.</a> PLoS One. 8, e75004(2013).</li>
</ol>

Les auteurs déclarent qu’ils n’ont pas d’intérêts financiers concurrents.

Dans ce protocole, une procédure détaillée pour la quantification de l&#39;espace social a été décrit. Certaines étapes cruciales pour assurer l&#39;expérience est réussie sont: 1) utilisez toujours des gants lors du nettoyage et mise en place de l&#39;appareil, de garder vos propres huiles et parfums au large de la chambre intérieure de l&#39;appareil, 2) assurer mouches sont prélevés au moins un jour avant l&#39;expérience afin de réduire les effets potentiels de l&#39;anesthésie froid, 3) 2 h avant l&#39;expérience d...

Les interactions sociales sont essentielles pour le bon développement et la santé des individus au sein d&#39;un groupe dans son ensemble, et peuvent être observées dans de nombreuses espèces, des humains (Homo sapiens) à des organismes plus simples comme les mouches de fruits (Drosophila melanogaster) 5,6. Une mouche à fruit individu ou des moyens communs d&#39;actions humaine pour traiter les informations sensorielles au cours de ces interactions, que ce soit: auditif, visuel, olfactif, tactile, ou la gustation. Nous émettons l&#39;hypothèse que d&#39;autres et il ya un neurocircuitry potentiellement partagée qui sous-tend les réactions comportementales aux interactions sociales et que les cellules neuronales et les gènes impliqués pourraient être évolutif conservées 7. Une fois l&#39;interaction initiale a eu lieu, l&#39;espace social entre les individus en interaction va soit augmenter (d&#39;évitement sociale 8) ou une diminution (formation de groupe / agrégation 5). Interactions plus complexes, comme l&#39;agression ou la cour, peuvent alors avoir lieu. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Ni outils et des méthodes sophistiquées, ni de gros investissements en temps et de formation sont nécessaires pour quantifier cette simple forme de comportement social, ce qui en fait un outil d&#39;analyse puissant. Ici, nous expliquons un protocole simple qui quantifie distance inter-mouche, ou l&#39;espace social, pour évaluer l&#39;interaction sociale en groupes stables de Drosophila melanogaster, tel qu&#39;il est utilisé dans les études 1-4,9 suivantes. L&#39;espace social se réfère à une mesure de la distance entre la mouche et son plus proche voisin 10. L&#39;espace social est conforme pour une population donnée de D. melanogaster lorsque les conditions expérimentales sont conservées (en moyenne environ dans 1-2 longueurs corps), et varie par rapport à l&#39;expérience sociale de vol, ce qui augmente si l&#39;individu a été maintenu en isolement 1. Une bonne vision est nécessaire pour maintenir la distance sociale normale, mais pas odorants classiques ou CVA perception 1. Mesure de l&#39;espace social peut donc êtreutilisé comme un outil de diagnostic pour analyser les interactions sociales et de quantifier le comportement social dans D. melanogaster 1. Nous décrivons ici en détail comment effectuer cette quantification, et dans quelle mesure les variables expérimentales communes affecte ce comportement. Nous montrons que l&#39;orientation de la chambre dans laquelle le dosage est effectué, ainsi que le nombre de mouches - dans une certaine mesure - faire affecte l&#39;espace social. Il a déjà été démontré que la géométrie de la chambre affecte mouvement exploratoire spontanée de mouches 11,12, et ce phénomène pourrait finalement avoir un impact là où ils décident de s&#39;installer. Cependant, tant que la densité de mouche (mouche / cm 2) et l&#39;orientation de la chambre est maintenue même, l&#39;espace social de vol reste également constante. La robustesse de ce test est illustré par le fait que des laboratoires indépendants en utilisant différentes tailles de chambre, de la forme et l&#39;orientation peut reproduire le résultat affiché par les mutants de la whgène ite (affectant la pigmentation des yeux), qui est un espace social de hausse (triangle vertical ou horizontal dans le cercle 1, carré horizontal air de circuler dans 3). Nos résultats indiquent également que le maintien de l&#39;heure à laquelle l&#39;expérience de l&#39;espace social est effectuée est essentielle à la cohérence des résultats, comme nous le montrons que les hommes, mais non chez les femmes, sont plus éloignées dans les soirées. Cependant, les différences observées entre jour et de soir heures ne sont pas dues à l&#39;activité différences de vol, et nous discutons arguments indiquant que les niveaux d&#39;activité ne sont pas corrélés avec l&#39;espace social. Enfin, il ya des fondements génétiques à la détermination de l&#39;espace social, comme indiqué par le mutant blanc déjà décrite 1,3, et les différences entre les diverses souches consanguines et sauvages pêchés de mouches que nous présentons ici. Par conséquent, cet essai constitue un excellent outil fou d&#39;étudier les effets de la génétique ainsi que les facteurs environnementaux.

<table><tbody><tr><td>Microscope stéréo à zoom&nbsp ;</td><td>Nikon·s ; &nbsp ;</td><td>SMZ-645</td><td>N’importe quel autre oscilloscope standard pour la manipulation des mouches fonctionnerait</td></tr><tr><td>Petits pinceaux&nbsp ;</td><td></td><td></td><td>pour repousser les mouches</td></tr><tr><td>Jazz-mix</td><td>Fisher</td><td>33545</td><td>tout autre aliment standard contre la drosophile fonctionnerait</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mini-Alarm Timer/Stopwatch</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp ; Stylos</td><td></td><td></td><td></td>Sharpie</tr><tr><td>Ruban</td><td></td><td></td><td></td>adhésif</tr><tr><td>Pinces à reliure de taille moyenne</td><td>Agrafes</td><td></td><td>pour maintenir les chambres ensemble : 1-1/4 » (32mm) clips moyens avec une capacité de 5/8 »</td></tr><tr><td>petits supports</td><td>Carolina&nbsp ;</td><td>707161</td><td>pour maintenir les chambres dans une orientation verticale</td></tr><tr><td>Pinces Buret</td><td>Carolina</td><td>707362</td><td></td></tr><tr><td>Appareil photo numérique</td><td>Nikon</td><td>&nbsp ; Coolpix S8000°</td><td>pour prendre les photos</td></tr><tr><td>petite règle</td><td></td><td></td><td>pour pouvoir mettre à l’échelle l’image à</td></tr><tr><td>trois volets et la couverture</td><td></td><td></td> de banc blanche <td>pour fournir un fond blanc et une lumière homogène.</td></tr><tr>Pad <td></td><td></td><td>de martèlement n’importe</td><td>quel tapis de souris fonctionne.</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Prism 6</td><td>GraphPad Software Inc.</td><td>Prism 6 pour Mac OS X</td><td>N’importe quel logiciel d’analyse statistique avec t-test, ANOVA unidirectionnel et ANOVA à deux facteurs fonctionnerait</td></tr></tbody></table>

conditions affectant espace social<em&gt; drosophila melanogaster</em

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

Le dosage de l&#39;espace social décrit ici peut être utilisé pour quantifier les interactions sociales de Drosophila melanogaste r - ou d&#39;autres petits insectes - d&#39;une manière directe. Comme nous l&#39;avons démontré précédemment 1, dans une chambre à deux dimensions, nous forçons premier vol pour former un groupe serré, permettant ensuite à prendre leur distance préférée de l&#39;autre. Après les mouches se sont installés, nous mesurons la distance au plus proche voisin (ou l&#39;espace social), le traitement d&#39;une image statique avec le logiciel gratuit en ligne (ImageJ). L&#39;analyse de la distance du plus proche voisin permet aux chercheurs de déterminer les effets des facteurs génétiques et environnementaux sur l&#39;interaction sociale, tout en contrôlant les facteurs de confusion potentiels. Divers facteurs tels que la capacité d&#39;escalade, moment de la journée, le sexe, et le nombre de mouches, peuvent modifier l&#39;espacement sociale de mouches. Nous proposons donc une série de contrôles expérimentaux pour atténuer ces effets confondants. Ce test peutêtre utilisé pour au moins deux raisons. Tout d&#39;abord, les chercheurs peuvent déterminer comment leur virage environnemental préférée (comme l&#39;isolement, de la température, de stress ou de toxines) aura une incidence sur l&#39;espacement sociale 1,2. Deuxièmement, les chercheurs peuvent disséquer les fondements génétiques et neuronales de cette forme de base du comportement social 1,3. Plus précisément, nous avons utilisé comme un outil de diagnostic pour étudier le rôle des gènes orthologues pensé pour être impliqués dans le comportement social dans d&#39;autres organismes, tels que les gènes candidats pour l&#39;autisme chez les humains 4.

La chambre de l&#39;espace social peut être utilisé comme un outil pour quantifier le comportement social de Drosophila melanogaster. Entretoises acryliques et les vitres sont clipsés pour former une arène triangulaire intérieure qui offre un espace à deux dimensions dans lequel les mouches peuvent former des groupes stables sans la présence de nombreux indices potentiellement confondants. Quand les mouches sont transférés à l&#39;arène verticale, ils sont surpris en étant tassé, et ils répondent par un comport...

L’effet des gènes et de l’environnement sur l’espace social de Drosophila melanogaster peut être quantifié à l’aide d’un paradigme analytique puissant mais simple. Nous montrons ici différents facteurs qui peuvent affecter cet espace social, et qui doivent donc être pris en considération lors de la conception d’expériences dans ce paradigme.

Conditions affectant espace social<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a ...

L'objectif général de cette procédure est de quantifier un aspect du comportement social des mouches, à savoir leur distance sociale préférée. Pour ce faire, on commence par assembler la chambre d'espace social. Pendant ce temps, un groupe de mouches est habitué à la salle d'essai contrôlée sur le plan environnemental en étant transféré dans un nouveau tube là-bas.Après deux heures, le groupe de mouches est transféré dans la chambre d'espace social. On les tape doucement pour les faire descendre, puis on les positionne verticalement à l'aide d'un support avec pince. Une fois que les mouches sont en place, leurs positions sont enregistrées et les distances entre les mouches sont calculées à partir de cette photographie par un logiciel.En fin de compte, le test de l'espace social quantifie une forme de comportement social, qui peut être utilisée pour étudier les facteurs environnementaux influents et la neurogénétique de ce comportement. Le principal avantage de cette technique pour quantifier le comportement social par rapport aux méthodes existantes, comme le suivi vidéo assisté par ordinateur, est qu'elle ne nécessite ni outils ni méthodes sophistiqués, ni d'importants investissements en temps et en formation. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine du comportement social.Nous avons utilisé cette méthode comme outil diagnostique pour étudier le rôle de gènes autologues supposés impliqués dans le comportement social et d'autres organismes, tels que les gènes candidats du trouble du spectre de l'autisme chez l'humain. J'ai eu l'idée de cette méthode lorsque j'ai remarqué à l'UCLA que, dans notre réserve, les mouches dans leurs flacons ne présentaient pas une répartition aléatoire, mais formaient des agrégats avec des intervalles dégagés entre eux. Cette procédure décrit le montage des chambres d'espace social à commencer en portant des gants.Placez un espaceur triangulaire sur un panneau carré en alignant leurs coins en un seul endroit, puis placez un deuxième espaceur triangulaire de manière à ce qu'il soit symétrique au premier. Ensuite, positionnez les deux petits espaceurs rectangulaires sur le panneau carré le long des deux bords non couverts, de sorte que les quatre espaceurs forment une arène triangulaire. Ensuite, placez un autre panneau carré par-dessus les espaceurs et utilisez quatre pinces pour fixer l'ensemble.Placer des clips aux quatre coins en commençant par les coins séparateurs triangulaires afin d'assurer un assemblage correct. Orienter la chambre verticalement avec le bord inférieur posé sur la paillasse. La température ambiante doit être identique à celle d'élevage des drosophiles et l'humidité doit être similaire. Les drosophiles utilisées pour cette expérience doivent être élevées en flacons dans des conditions standard un ou deux jours avant l'expérience, puis être collectées et sexées sous anesthésie froide avant le transfert.Populations expérimentales de 40 mouches placées dans de nouveaux tubes à mouches. Ensuite, deux heures avant l'expérience, transférer les mouches dans des nouveaux tubes et les placer sur la paillasse où les arènes seront chargées deux heures plus tard. Commencer l'expérience.Retirez le clip le plus proche et faites glisser l'espacement rectangulaire pour créer un écart d'un centimètre entre les espacements. Le coin supérieur gauche de la chambre peut être utilisé pour identifier la cohorte de mouches testée à l'aide d'une étiquette. Veillez simplement à ne pas couvrir une partie de l'arène de test.Transférez maintenant la cohorte dans un nouveau flacon vide et aspirez les mouches à partir du flacon. Ensuite, insérez l'embout de l'aspirateur dans l'interstice et expirez doucement avec une pression régulière. Les mouches doivent toutes être expulsées dans l'arène.Remettre immédiatement le calette rectangulaire en place et remplacer la pince. Donner trois coups pour faire tomber toutes les mouches au fond de l'arène. Démarrer le chronomètre et placer l'arène dans la chambre contrôlée.Fixez l'arène verticalement au flacon. Serrez dans la chambre contrôlée le long du bord de la chambre, mais pas au-dessus de l'arène. Fixez une règle ou un autocollant de longueur connue derrière les mouches.Laisser reposer environ 30 minutes. Prendre une photo, documenter toute l'arène avec la règle en vue. Ceci conclut l'essai.Il faut effectuer trois réplicats pour chaque condition. Pour vider l'arène, placez l'arène au congélateur pendant cinq à dix minutes et versez les mouches congelées dans un morgue à mouches. Dans ImageJ, ouvrez toutes les photos nécessaires pour l'analyse.À l’aide de la règle, créez une échelle à partir des marques en centimètres sous l’onglet analyser. Sélectionnez définir, échelle, puis suivez les instructions. Mais avant d’appliquer l’échelle, veillez à choisir l’option globale.À l’aide de la fonction de recadrage, ajustez les images pour ne conserver que l’espace de l’arène. Ensuite, sélectionnez l’option de type et choisissez huit bits pour rendre les images en noir et blanc. Puis, supprimez le bruit de fond à l’aide de la fonction de seuil située dans l’option ajuster de l’onglet image.Faites glisser les curseurs jusqu'à ce que le corps de chaque mouche soit clairement visible, sans créer de marques dans l'arrière-plan. Pour supprimer les marques qui ne sont pas des mouches, sélectionnez-les avec l'outil rectangle et supprimez-les. Configurez maintenant l'outil de mesure dans l'onglet analyser.Sélectionnez le centre de masse de la zone, intitulé « Centro », et affichez l'étiquette parmi les options disponibles. Ensuite, choisissez la fonction « analyser les particules » sous l'onglet « analyser ». Ceci crée une liste numérotée de toutes les mouches présentes.Vérifiez que cet outil fonctionne correctement en comparant la liste numérotée à la photo d'origine. Sélectionnez ensuite la liste. Puis allez dans l'onglet plugins et choisissez l'option macros.Ensuite, sélectionnez la macro appelée distances de la liste des voisins les plus proches. Analysez ces valeurs dans un tableur ou un logiciel statistique en utilisant le protocole décrit. La lignée sauvage récemment établie Elwood a été comparée aux souches de laboratoire consanguines Canton S certaines, et l'espacement social organique variait entre les souches de drosophiles, suggérant une composante génétique au comportement.Lors de l'exécution de cette procédure, il est important de se rappeler de maintenir des conditions environnementales contrôlées avant et pendant toute l'expérience. Cependant, une fois l'orientation, la taille et la forme de l'arène définies, celles-ci n'ont pas d'importance et n'affecteront pas le comportement, à condition de les garder constantes après leur mise en place. Cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine des neurosciences comportementales pour explorer l'effet des facteurs environnementaux sur l'espace social.Dans Joseph La Melanogaster, après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la manière d'effectuer le test d'espace social, depuis la préparation des mouches jusqu'à la mise en place et l'utilisation de l'arène d'espace social, ainsi que l'analyse d'images.

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Neuroscience

Neurosciences

Drosophila melanogaster est un système modèle génétiquement et comportemental souple qui a été utilisée pour comprendre la base moléculaire et cellulaire de nombreux processus biologiques importants pour plus d'un siècle 1. Drosophile a été bien exploitée afin de mieux comprendre la base génétique du comportement à la mouche.

Méthodes de dosage à Drosophila Comportement

Drosophila melanogaster sont utiles dans l'étude de manipulations génétiques ou environnementales qui affectent les comportements tels que l'activité locomotrice spontanée. Nous décrivons ici un protocole qui utilise des moniteurs à rayons infrarouges et des logiciels d'analyse de données pour quantifier l'activité locomotrice spontanée.

Détermination de l&#39;activité locomotrice spontanée,<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Ici, nous présentons un protocole pour quantifier l’évitement des individus stressés. Ce paradigme est à la fois puissant et facile à utiliser et peut être utilisé pour évaluer l’influence des gènes et de l’environnement sur un type d’interaction sociale chez Drosophila melanogaster.

Essai simple pour la quantification de l'évitement social en Drosophila melanogaster

Au cours de la mouche des fruits combats, les comportements observés, combattre la dynamique, et l'apprentissage et la mémoire associée sont influencés par les conditions expérimentales. Le protocole présenté ici décrit une nouvelle procédure qui élimine entièrement la manipulation des mouches pendant les expériences. Cela améliore la dynamique de combat et permet la formation d'effets de «perdant» forts.

Une nouvelle approche qui élimine la manipulation pour l&#39;étude de l&#39;agression et le «perdant» dans Effet<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Une méthode pour l' élevage Drosophila melanogaster dans des conditions axéniques et gnotobiotiques est présenté. Fly embryons sont dechorionated dans l'hypochlorite de sodium, transférés de manière aseptique à l'alimentation stérile, et élevés dans des récipients fermés. Inoculant régime alimentaire et les embryons avec des bactéries conduit à des associations gnotobiotiques, et la présence bactérienne est confirmée par plaquage du corps entier homogénats drosophile.

L&#39;élevage du Fruit Fly<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Sous axéniques et gnotobiotique Conditions

Nous démontrons un dosage pour analyser les indices environnementaux et génétiques qui influent sur le comportement d'accouplement dans la mouche des fruits Drosophila melanogaster .

Une méthode pour tester l&#39;effet des cotes environnementales sur le comportement d&#39;accouplement dans<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Nous présentons ici un protocole pour déterminer automatiquement la performance locomotrice de la drosophile aux changements de température à l’aide d’une arène programmable à température contrôlée qui produit des changements de température rapide et précis dans le temps et l’espace.

Une méthode automatisée pour déterminer la Performance de la drosophile en réponse aux changements de température dans l’espace et le temps

Les perturbateurs chimiques endocriniens (CED) représentent un grave problème pour les organismes et pour les milieux naturels. Drosophila melanogaster représente un modèle idéal pour étudier les effets d'EDC in vivo. Ici, nous présentons des méthodes pour étudier la perturbation endocrinienne dans Drosophila, traitant des effets d'EDC sur la fécondité, la fertilité, le moment développemental, et la durée de vie de la mouche.

Méthodes pour tester la perturbation endocrinienne dans le mélanogaster drosophila

Le trouble du spectre autistique (TSA) est associé à un comportement social et communicatif altéré et à l’émergence d’un comportement répétitif. Pour étudier l’interrelation entre les gènes TSA et les déficits comportementaux dans le modèle de la drosophile , cinq paradigmes comportementaux sont décrits dans cet article pour mesurer l’espacement social, l’agressivité, la parade nuptiale, le toilettage et le comportement d’habituation.

Paradigmes pour l’évaluation comportementale dans le modèle de trouble du spectre autistique de la drosophile

Le protocole présente une méthode à haut débit et rentable pour évaluer la neurotoxicité chez la mouche des fruits grâce à la quantification de la dysfonction locomotrice comme alternative aux modèles traditionnels de mammifères. Il vise à évaluer les effets neurotoxiques de composés pharmaceutiques, d’agents environnementaux ou de modifications génétiques à l’aide d’un modèle sensible, reproductible et éthiquement favorable.

Analyse comportementale de la dysfonction locomotrice chez Drosophila melanogaster comme lecture de la neurotoxicité

Découvrez la quantification de l'espace social chez Drosophila melanogaster à l'aide d'une chambre expérimentale dédiée. Cette méthode permet d'étudier les facteurs génétiques et environnementaux influençant le comportement social des mouches.

Conditions affectant espace social

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