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DOI: 10.3791/53282-v
Eva Porlan1, Beatriz Martí-Prado2,3, Antonella Consiglio4,5, Isabel Fariñas2,3
1Cell Division and Cancer Group,Spanish National Cancer Research Centre (CNIO), 2Centro de Investigaciones Biomédicas en Red sobre Enfermedades Neurodegenerativas (CIBERNED), 3Departmento de Biologìa Celular,Universidad de Valencia, 4Institut de Biomedicina de la Universitat de Barcelona (IBUB), 5Department of Molecular and Translational Medicine, Fibroblast Reprogramming Unit,University of Brescia
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Nous décrivons ici une procédure basée sur l’utilisation de particules lentivirales pour la modification génétique à long terme des cellules souches neurales et/ou de leurs cellules épendymaires adjacentes dans la niche neurogène ventriculaire-sous-ventriculaire adulte qui permet l’analyse séparée des effets autonomes et non autonomes des cellules dépendantes de la niche sur les cellules souches neurales.
L’objectif global de cette procédure est d’administrer de faibles volumes de particules lentivirales à titre élevé portant des constructions d’ADN spécifiques à la zone ventriculaire-subventriculaire de la souris adulte pour infecter tous ses types de cellules ou au ventricule latéral pour affecter uniquement les cellules épendymaires. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés sur les interactions que les cellules souches neurales de la niche ventriculaire-sous-ventriculaire adulte ont avec leurs cellules épendymaires voisines. Le principal avantage de cette technique est que les vecteurs lentiviraux s’intègrent dans le génome des cellules cibles de manière indépendante du cycle cellulaire, ce qui permet une diffication à long terme des cellules rarement divisées. L’étudiante diplômée Beatriz Mart m’aidera à démontrer la procédure
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