Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, latéral Septal Nucleus- et le striatum spécifique In Utero L'électroporation dans la souris C57BL / 6

L’objectif global de cette manipulation cellulaire in vivo est de modifier spécifiquement les cellules de certaines régions du système nerveux central du cortex de la souris, de l’hippocampe, du thalamus, de l’hypothalamus, du noyau septal latéral et du striatum. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés concernant le développement et le fonctionnement du cerveau, par exemple en identifiant différentes cascades de signalisation et en déterminant le niveau de différenciation cellulaire. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet de manipuler rapidement et efficacement divers types de cellules dans le système nerveux central sans générer de souris génétiquement modifiées, ce qui prend du temps.

En général, la démonstration de cette méthode est utile, car les personnes qui débutent dans cette méthode auront souvent du mal à trouver la bonne position d’électrode, ce qui est essentiel pour une électroporation spécifique. Pour commencer cette procédure, ouvrez la cavité abdominale d’une souris enceinte anesthésiée à l’aide d’un scalpel. Empêchez la cavité abdominale ouverte de se dessécher en l’humidifiant avec une solution saline d’alcool méthylique tiède à 0,9 %.

Ensuite, extrayez soigneusement les cornes utérines à l’aide d’une paire de pinces à anneau. Ensuite, positionnez un embryon E14 de manière à ce qu’il n’y ait pas de vaisseaux visibles au-dessus du site de ponction. Pour avoir une meilleure visualisation, utilisez une électrode de 5 millimètres pour localiser l’angle et la position de la zone souhaitée dans le cerveau pour la transfection.

Pour l’électroporation in utero de la zone corticale, injectez lentement 1,5 à deux microlitres de la solution d’ADN dans le ventricule latéral gauche. Et assurez-vous que la profondeur d’insertion est d’un à deux millimètres, mesurée à partir de la paroi utérine. Ensuite, vérifiez la coloration bleu-vert avec une démarcation nette.

Pour une meilleure visualisation, utilisez une électrode de 5 millimètres pour localiser l’angle et la position de l’endroit souhaité dans le cerveau pour la transfection. Après cela, placez le centre des palettes d’électrodes en platine de trois millimètres juste en avant des primordiums de l’oreille et assurez-vous qu’elles ne sont pas placées au-dessus des vaisseaux ou du placenta. Par la suite, appliquez une tension pour commencer la transfection.

Pour l’électroporation in utero de la formation de l’hippocampe, injectez deux microlitres de solution d’ADN dans le ventricule latéral droit d’un embryon E15. Ensuite, placez le pôle négatif des palettes d’électrodes de platine de trois à cinq millimètres juste en avant du primordium de l’oreille et le pôle positif au milieu du primordium de l’oreille. Ensuite, appliquez une tension pour commencer la transfection.

Pour l’électroporation in utero du noyau septal latéral et du striatum, injectez un microlitre de solution d’ADN dans le ventricule latéral droit d’un embryon E12. Ensuite, placez les électrodes de 5 millimètres au niveau des primordias de l’oreille. Par la suite, appliquez une tension pour commencer la transfection.

Pour l’électroporation in utero du thalamus et de l’hypothalamus, injecter un à 1,5 microlitre de solution d’ADN dans le ventricule latéral d’un embryon E12 à E13. Ensuite, attendez deux à trois minutes pour que la solution se diffuse dans le troisième ventricule. Ensuite, placez les électrodes de 5 ou trois millimètres juste en arrière de la primordia de l’oreille.

Après cela, appliquez une tension pour commencer la transfection. Ce schéma montre les positions appropriées pour les pôles positif et négatif pour la transfection des zones corticales. Et celui-ci, montre les positions des pôles positif et négatif pour transfecter les formations de l’hippocampe.

Les positions des pôles positif et négatif pour la transfection du striatum et du noyau septal latéral sont montrées ici. Et les positions appropriées des électrodes pour la transfection du thalamus et de l’hypothalamus sont montrées ici. La spécificité de la transfection dépend de la taille de l’électrode.

L’augmentation de la taille de la palette d’électrode réduit la spécificité de la transfection. Ceci est particulièrement évident dans les stades embryonnaires plus jeunes, mais également visible dans les stades embryonnaires tardifs. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en 15 minutes si elle est bien exécutée.

Lors de cette procédure, il est important de manipuler les embryons et les mères avec beaucoup de soin. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de transfecter des régions spécifiques du système nerveux central de la souris Black 6.