Une alternative simple à injection stéréotaxique pour Brain Knockdown spécifique de miARN

Ici, nous démontrons l’utilisation d’un peptide pénétrant dans les cellules avec un oligonucléotide antisens modifié pour neutraliser spécifiquement les micro-ARN dans le cerveau des souris. Cela a été réalisé en concevant un antigo contre le 29 mai. Dans cette étude, nous avons utilisé des mâles antigo pour cibler les microARN qui verrouillent les modifications des acides nucléiques.

C’est-à-dire que des modifications LNA ont été incorporées à cinq positions différentes. Dans ce cas, l’incorporation de modifications LNA augmente son affinité de liaison au micro-ARN. De plus, il confère une résistance au noyau et améliore donc l’efficacité du ciblage des microARN.

Des complexes de l’ANTIGO MAR avec le peptide ont été préparés in vitro et injectés aux souris par la veine de la queue. L’inactivation du microARN a entraîné des changements comportementaux qui suggèrent l’implication de ce microARN dans l’ataxie : trois injections consécutives ont suffi à induire un changement notable de la démarche après le traitement, le tissu cérébral a été collecté et l’inactivation du microARN a été confirmée. Les CPP ou peptides auto-pénétrants sont récemment apparus comme des vecteurs attrayants pour l’administration d’acides nucléiques.

Ici, nous avons utilisé un tel peptide neurotrope riche en arginine qui peut subir une complexation basée sur la charge avec l’ANL, qui, après administration dans la circulation systémique, atteindra son site cible désigné, c’est-à-dire les cellules neuronales dans ce cas, et assurera la libération correcte de l’ANL dans ces cellules. Les séquences des membres de la famille ME 29 ont été récupérées de mease et l’antisens 16 MER a été synthétisé avec des modifications d’acides nucléiques verrouillables à cinq positions régulièrement espacées pour préparer des complexes. Les solutions peptidique et antigo de concentrations appropriées ont été préparées séparément dans du glucose stérile à 10 %.

Dans des conditions aseptiques. La solution d’Antigo a été ajoutée lentement goutte à goutte à la solution peptidique en agitant doucement. L’addition lente et l’agitation douce sont essentielles pour la formation de complexes monodispersés dont la taille est dans l’échelle tricale.

L’antigo a été ajouté en trois parties égales à chaque fois, ce qui a permis de laisser une minute pour le mélange, suivie d’une minute d’incubation sans mélange. Une addition rapide peut conduire à l’agrégation des complexes et aux précipitations. Le complexe Antigo est maintenant prêt à être injecté.

Le complexe a été administré par injection dans la veine caudale. Les souris ont été renvoyées dans la même cage. Des tests comportementaux pour l’ataxie ont été effectués quotidiennement, trois heures après l’injection.

La souris était tenue par sa queue, ne lui permettant pas de toucher les objets environnants. Remarquez la façon dont les membres postérieurs sont écartés pendant 10 secondes. Dans le test du rebord, les souris devaient marcher le long du rebord mince de la cage.

Les souris marchent à travers un canal mince, laissant des empreintes de pas avec des pieds encrés sur une bande de papier épais et absorbant, n’encrant que les pattes arrière. Pour éviter de confondre les données De quatre membres, voyons L’effet du traitement antigo. Nous avons isolé le cerveau et d’autres tissus des souris traitées et contrôlées.

Nous avons constaté que le peptide R VG délivrait un siRNA marqué par fluorescence spécifiquement au cerveau, mais pas à d’autres tissus comme le foie. Un peptide témoin non neurotrope RVM a délivré l’ARNsi au foie. Les souris traitées avec ANTIER 29 ont présenté des anomalies au niveau des membres postérieurs.

souris contrôlées traitées avec un anme brouillé pouvaient négocier le rebord, mais après un traitement avec anme contre MARE 29, les souris ont montré de légers défauts dans ce test. Dans l’essai d’empreinte, il y avait un raccourcissement frappant de la longueur des pas chez les souris traitées. De plus, nous avons confirmé par le biais de QR tpcr que les niveaux de 29 A et 29 B étaient régulés à la baisse pour le développement de thérapies à base de micro NNA.

L’administration d’anti-microARN spécifiques au cerveau est un défi en raison de la barrière hémato-encéphalique. En utilisant la technique présentée ici, nous pouvons éviter la méthode conventionnelle d’administration des anti-microARN au cerveau. Cette méthode rend l’inactivation des microARN techniquement réalisable et augmente la spécificité des tissus.