Name: Injection intracérébroventriculaire de Peptides amyloïde-ß chez les souris normales à Provoquer Pleinement Déficits cognitifs de type Alzheimer (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: Apprenez l'injection intracérébroventriculaire de peptides bêta-amyloïdes chez des souris normales pour induire des déficits cognitifs de type Alzheimer. Cette méthode sans instrument stéréotaxique facilite la découverte de médicaments.

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Cette recherche a été soutenue par une subvention de la Korea Health Technology R &amp; D Project par l&#39;Institut coréen de l&#39;industrie de la santé pour le développement (KHIDI), financé par le ministère de la Santé et Bien-être, République de Corée (numéro de subvention: H14C04660000).

Toutes les expériences sur les animaux ont été effectuées en conformité avec les National Institutes of Health Guide pour le soin et l&#39;utilisation des animaux de laboratoire (NIH Publications n ° 8023, révisée 1978) et avec le soin et l&#39;utilisation Comité des animaux du soin et l&#39;utilisation Commission institutionnelle animale de KIST (Séoul, Corée). 1. Préparation d&#39;un animal <ol><li> Préparer un groupe de 7 semaines d&#39;âge des souris ICR mâles (ou C57BL / 6). </li><li> Que les souris passent par un processus d&#39;acclimatation pendant 3-7 jours après le transport pour restaurer l&#39;homéostasie. D&#39;une manière générale, placer un groupe de 4-5 souris dans chaque cage et les maintenir à 22-23 ° C et 40% d&#39;humidité, avec un cycle 12.12 h lumière / obscurité. Fournir de l&#39; eau et de la nourriture ad libitum. Remarque: Le processus d&#39;acclimatation est essentiel pour permettre la récupération du stress de l&#39;expédition et de l&#39;adaptation à un nouveau logement, la nourriture, l&#39;eau, et l&#39;odeur ainsi qu&#39;une nouvelle cage et un cycle de lumière. Dans cette expérience, les souris ont été logées dans des Cages individuellement ventilées (IVC) situés dans le Specifique Pathogen gratuit (SPF) installation de pentatonique </li><li> Peser chaque souris et exclure les sujets dont le poids écarte ± 10% par rapport à la moyenne. </li><li> Diviser les sujets en deux groupes: un groupe de véhicules à injection (Aß (-)) et un groupe Aß-injecté (Aß (+)). Si l&#39;expérience est de tester l&#39;efficacité d&#39;un médicament candidat particulier, diviser les souris en quatre groupes: (1) Aß (-) / médicament (-), (2) Aß (-) / médicament (+), (3) Aß (+) / médicament (-), et (4) Aß (+) / médicament (+). </li></ol> 2. Préparation de peptides Aß <ol><li> Traiter les peptides Aß dérivés par synthèse chimique 5 ou à partir de sources commerciales, avec pré-refroidie 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol (HFIP) pour dissoudre tous les agrégats et de rendre les peptides homogènes 6 . <ol><li> Soniquer la solution Aß / HFIP dans un sonicateur bain-marie pendant 5 min (à température ambiante), doucement vortex et incuber la solution pendant 30 min à température ambiante. Retirez le HFIP complètement par évaporation avec de l&#39;azoteet stocker l&#39;Aß homogène à -80 ° C jusqu&#39;à utilisation. </li></ol></li><li> Préparer les monomères Aß: (. 100 uM Aß, 10% de DMSO, 90% PBS) faire 1 mM Aß diméthylsulfoxyde (DMSO) stock et diluer 10 fois dans un tampon phosphate salin (PBS) </li><li> Préparer des oligomères de Aß. <ol><li> Incuber la solution de monomère d&#39;Aß (contenant Aß (1-42) ou d&#39;Aß (1-40)) (étape 2.2.) À 37 ° C pendant 3 ou 7 jours, respectivement. </li><li> Placer la solution Aß dans un tube scellé dans un sac à fermeture à glissière contenant une serviette en papier humide pour fournir un environnement humidifié pour éviter l&#39;évaporation de l&#39;eau pendant la période d&#39;incubation. </li></ol></li><li> Confirmer les oligomères préparés par Aß de sodium dodécyl sulfate électrophorèse sur gel de polyacrylamide (SDS-PAGE) avec photoinduit reticulation des protéines non modifiées 6. </li><li> Préparer la solution PBS de contrôle contenant 10% de DMSO pour l&#39;injection ICV de véhicule. </li></ol> 3. Seringue Préparation </p&gt; <ol><li> Préparer une microseringue avec une aiguille en acier inoxydable 26 G pour l&#39;injection ICV. </li><li> Stériliser la seringue dans un autoclave avec tout autre appareil qui sera utilisé pour la procédure chirurgicale. Après l&#39;autoclave, placez l&#39;appareil sous la lumière UV pendant 20 min. </li><li> Envelopper l&#39;aiguille de la microseringue avec du Parafilm afin de régler sa longueur de 3,8 mm pour permettre le maximum de précision dans la profondeur de l&#39;injection dans le cerveau (figure 1A). (Pour les souris B6, ajuster l&#39;aiguille de la seringue à 3,6 mm). Remarque: La compression du Parafilm conduira à la profondeur de l&#39;injection dépassant 3,6 mm ventral. Pour éviter que le Parafilm d&#39;être comprimé lors de l&#39;insertion de l&#39;aiguille, envelopper densément l&#39;aiguille plusieurs fois. </li><li> Laver l&#39;espace intérieur de la seringue avec 70% d&#39;éthanol, deux fois. </li><li> Soniquer la seringue et l&#39;aiguille dans un sonicateur bain-marie pendant 30 min à température ambiante. </li><li> Laver l&#39;espace intérieur de la seringue avec 70% d&#39;éthanol, deux fois. </li><li> Rincer la seringueavec de l&#39;eau distillée et sécher complètement dans une hotte pendant plus de 30 min. Laissez la seringue propre sous une lumière UV pendant 20 minutes avant de commencer l&#39;injection de Aß. </li></ol> 4. Aß injecté modèle murin Préparation Remarque: nettoyer le champ opératoire avec un désinfectant pour maintenir des conditions stériles et stériliser les instruments chirurgicaux pour l&#39;injection ICV en utilisant 70% d&#39;éthanol et de l&#39;exposition aux UV. <ol><li> Anesthésier la souris par injection intrapéritonéale d&#39;un mélange de xylazine (20 mg / kg) et tiletamine .HCl / zolazépam HCl (80 mg / kg) avant l&#39;injection ICV. Placez la souris sur un tapis chaud pour maintenir sa température corporelle tout anesthésié et confirmer une anesthésie adéquate en évaluant la réponse pied-pincement. </li><li> Appliquer des gouttes de PBS stérile pour les deux yeux pour prévenir le dessèchement de la cornée pendant la procédure (figure 1B). </li><li> Préparer deux miroirs en tirant plusieurs lignes droites verticales sur leurs surfaces en cas de difficulty injection de la seringue perpendiculairement. </li><li> Placer un miroir (M1), juste à côté du corps de la souris et l&#39;autre (M2) en face de la tête. Maintenir M1 parallèle à la ligne médiane imaginaire entre les deux yeux de la souris et disposer M2 perpendiculaire à M1, de sorte que les deux plans forment un angle de 90 ° (figure 1C). Placez M1 sur le côté gauche de la souris si le chercheur est droitier. Placez M1 sur le côté droit de la souris si le chercheur est gaucher. </li><li> Vaporiser éthanol à 70% sur le milieu du front de la souris et le frotter avec des cotons-tiges sèches. Ne pas mouiller trop grande d&#39;une zone du front afin d&#39;éviter la diminution de la température corporelle due à l&#39;évaporation de l&#39;alcool. </li><li> Essuyez la même zone sur le front avec une solution de chlorhexidine à 2% en utilisant un nettoyage des cotons-tiges. Répéter les lavages avec de l&#39;alcool et de la chlorhexidine pour un total de trois fois chacun. Remarque: Si nécessaire, raser les poils sur le front de la souris afin de minimiser la possibilité de contamination </li><li> Localiser bregma. <ol><li> Avec le pouce et l&#39;index, tenir fermement vers le bas la peau du front, directement au-dessus des deux yeux dans la mesure où les deux yeux font saillie. Faites glisser la peau du dos pour faire le front tendu et de minimiser les mouvements du crâne sous la peau. </li><li> Former un triangle invisible en affectant trois sommets: les deux yeux de la souris et le point où le pouce et l&#39;index se rencontrent, le bregma. (Figures 1B, flèche rouge: bregma) </li></ol></li><li> Localisez le point d&#39;injection avec un ruban à mesurer: -1,0 ± 0,06 mm en arrière bregma, 1,8 ± 0,1 mm latéralement à la suture sagittale, et 2,4 mm de profondeur (figure 1D, étoiles bleues: points d&#39;injection dans chaque hémisphère). (Pour les souris B6: -0.9 mm postérieur, 1,7 mm latérales, et 2,2 mm de profondeur) </li><li> Remplir la seringue avec une solution d&#39;Aß de 10 ul avec une solution ou d&#39;un véhicule en excès, afin d&#39;éviter l&#39;injection d&#39;air accidentelle. </li><li> Placez la seringue à thle point e d&#39;injection (décrit dans le protocole 4.7). Faire la seringue perpendiculairement au plan du point d&#39;injection. Aligner images réfléchies de la seringue dans les deux miroirs avec les lignes tracées sur les miroirs d&#39;un point de vue fixe (figure 1C). </li><li> Commencez d&#39;insérer l&#39;aiguille jusqu&#39;à ce que l&#39;emballage de parafilm atteint la peau. </li><li> Conserver la seringue de maintien de main ferme et utiliser d&#39;autre part pour injecter 5 pi de la solution Aß ou d&#39;un véhicule, lentement pendant 5 secondes sans interruption. Assurez-vous que la seringue reste perpendiculaire partout. Après avoir terminé l&#39;injection, attendez 3 à 5 secondes avant de retirer la seringue pour la diffusion. </li><li> En supposant que la position du triangle d&#39;origine, exercer une pression modérée pour protéger le crâne de tous les mouvements inutiles. Retirez la seringue sans inclinaison. </li><li> Placez la souris Aß-injecté sur le pavé chaud pour la récupération et de maintenir sa position sternale. Ne laissez pas la souris sans surveillance jusqu&#39;à ce qu&#39;elle reprenne conscience et ne pas retourner le mOuse à une cage contenant des souris non-chirurgicale jusqu&#39;à ce qu&#39;il ait complètement récupéré. </li><li> Laver la seringue selon les étapes 3,3-3,6. </li><li> surveiller la mobilité postopératoire des souris et vérifier tout signe d&#39;infection ou de maladie chez les souris pendant 5-7 jours. </li></ol><img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/53308/53308fig1.jpg" /> La figure 1. L&#39; injection de Aß dans la région de ICV (A) de l&#39; aiguille de la seringue Parafilm gainés par rapport à une aiguille de seringue non modifiée. (B) PBS tombe sur les yeux pour prévenir la sécheresse; le triangle formé sur le front de la souris avec le pouce, l&#39;index, et les deux yeux de souris, ainsi que la ligne médiane imaginaire à égale distance de chaque oeil; (C) deux miroirs (M1 et M2) avec de multiples lignes verticales tracées sur les surfaces perpendiculaires à aider l&#39; injection de l&#39;aiguille de seringue; (D) le triangle avec les points d&#39;injection, indicATED comme des étoiles bleues (-1,0 ± 0,06 mm de bregma et 1,8 ± 0,1 mm sagittale) sur chaque hémisphère de la souris; Flèche verte: parafilm, flèche rouge: bregma <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53308/53308fig1large.jpg" target="_blank">S&#39;il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a> 5. Confirmation de Aß Injection par Y-labyrinthe et analyses du cerveau <ol><li> Évaluer la mémoire de travail de souris Aß-injectées par des tests Y-maze 3,7,8 <ol><li> Attendre 3 jours après l&#39;injection de l&#39;apparition des déficits de la mémoire. </li><li> Effectuer les tests Y-labyrinthe en utilisant un labyrinthe en plastique noir avec trois bras identiques étiquetés A, B et C, dont chacune des branches à un angle de 120 ° par rapport au centre du labyrinthe (largeur x longueur x hauteur, 10 cm x 40 cm x 12 cm). </li><li> Placez une souris au niveau du bras de démarrage (bras A) et permettre au sujet d&#39;explorer librement le labyrinthe pendant 8 min. </li><li> Mesurer le nombre d&#39;entrées dans chaque bras et calculer le alterntaux de ation de chaque sujet 3,9. </li></ol></li><li> examiner directement le cerveau post-mortem pour vérifier si l&#39;injection ciblé la région ICV appropriée. <ol><li> Anesthetize la souris par la même procédure que celle décrite dans la section 4.1. Puis sacrifier la souris par dislocation cervicale. </li><li> Décapitez la souris et enlever la peau pour exposer le crâne à l&#39;aide des ciseaux chirurgicaux. Retirer les tissus et les muscles du crâne. </li><li> Faire des coupes sur la suture lambdoïde (entre le pariétal et interpariétales) sans endommager le cerveau. Retirer l&#39;occipital et les os interpariétales, le pariétal et os frontaux. Retirer l&#39;os du crâne en utilisant une pince et d&#39;isoler le cerveau du crâne en soulevant les méninges. </li><li> Laver le cerveau dans une solution saline stérile refroidi et coupé la région du cerveau ICV dans la direction coronale avec un couteau chirurgical (figure 2). </li><li> Confirmer la région d&#39;injection par rapport à la trace de l&#39;insertion de l&#39;aiguille sur letissu cérébral (Figure 2). Vérifiez si la trace de l&#39;aiguille a atteint l&#39;un des ventricules. Si la trace de l&#39;aiguille ne répond pas ou passer à travers les ventricules, exclure les données de ce sujet de l&#39;analyse des résultats expérimentaux. </li></ol></li></ol>

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Les auteurs n’ont rien à divulguer.

L&#39;étape la plus importante dans ce protocole est l&#39;injection ICV de Aß. Ce protocole est conçu pour injecter Aß dans la région ICV de souris sans instruments stéréotaxiques 11,12. Avant de commencer une expérience, une période préliminaire d&#39;injections de pratique avec un colorant bleu au lieu de Aß devrait avoir lieu pour obtenir une dextérité suffisante. Immédiatement après l&#39;injection, il est nécessaire de vérifier si l&#39;injection de pigment a été effectuée correctement. Sortez soigneuse...

Étant donné que l&#39;amyloïde-β (Aß) est une caractéristique pathologique de la maladie d&#39;Alzheimer (AD), le développement de modèles animaux AD a mis l&#39;accent sur la surexpression neuronal de Aß. Parce que les mutations dans la protéine précurseur de l&#39; amyloïde (APP) ou de la préséniline (PS) , conduisent à des perturbations de l&#39; équilibre Aß et , finalement , à la pathogenèse de la MA familiale 1, les modèles de souris portant les mutations du gène APP ou PS ont été généralement accepté. Parmi le large éventail de souris transgéniques, des modèles de souris prototypiques sont les suivants: Tg2576, PDAPP, APP / PS1 et APP23. Dans le cerveau, ces souris présentent généralement une agrégation Aß et éventuellement des plaques séniles; la formation de plaque est suivie par des troubles cognitifs importants tels qu&#39;ils montrent une faible performance dans les tests comportementaux de l&#39;apprentissage et de la mémoire. La génération de l&#39;utilisation de souris transgéniques qui imitent naturellement la pathologie AD humaine a ainsi contribué à la société de recherche de AD en nous permettant de suivre la progression de la diSease. Cependant, en utilisant des souris transgéniques est peu rentable et prend du temps car il faut plusieurs mois pour les souris pour développer des plaques d&#39; Aß et plus encore pour montrer synaptique induite par Aß ou des anomalies comportementales 2,3. Développé à l&#39;origine comme une alternative à surmonter les inconvénients des modèles de souris transgéniques, les modèles non transgéniques sont également couramment utilisés en raison de leurs avantages distincts. modèles AD induite par Pathogen-peuvent être produits par l&#39;injection directe de Aß dans le cerveau, alors que les déficits cognitifs AD-like peuvent également être déclenchées par d&#39;autres produits chimiques et physiques des moyens tels que l&#39;injection de composés neurotoxiques tels que la scopolamine, l&#39;induction des lésions dans les domaines liés cognition tels que l&#39;hippocampe, ou par lésions corticales 4. Cependant, l&#39;induction non pathogène de la déficience cognitive ne reflète pas fidèlement la physiopathologie fondamentale de la MA; à la place, il n&#39;imite ses résultats symptomatiques. En revanche, un modèle de AD induite par un agent pathogène, l&#39;A46; modèle de souris -injected, non seulement peut montrer des anomalies comportementales AD-like, mais peut également présenter une pathologie Aß, la caractéristique commune partagée par AD familiale et sporadique. Malgré la difficulté à visualiser les plaques Aß dans le tissu cérébral, le plus grand avantage du modèle de Aß injecté qui le rend attrayant pour une enquête antidumping est sa contrôlabilité. Les chercheurs peuvent éliminer les différences individuelles dans les modèles de souris qui peuvent conduire à des données erronées dans les études liées à la drogue. le traitement médicamenteux est activé en temps voulu en fonction du mécanisme du médicament candidat; d&#39;élaborer, un inhibiteur de l&#39;agrégation Aß peut être appliqué avant l&#39;injection de Aß. En outre, les enquêteurs peuvent supposer que la transformation pathogène qui se pose après l&#39;injection Aß est dérivée de l&#39;exposition Aß parce que les autres facteurs sont étroitement contrôlés, y compris les différences individuelles. Dans ce protocole, une description vivante de how pour induire un phénotype de type AD chez des souris normales par Aß intracérébroventriculaire (ICV) injection sans instruments stéréotaxiques est présenté. Minimiser dégâts d&#39;insertion provoqué aux tissus du cerveau est essentielle pour prévenir la possibilité de dommages structuraux et l&#39;inflammation induite par lésion. Un manque de compétences dans la manipulation de la souris conduit à une lésion neuronale inattendue. En outre, les techniques qui permettent à l&#39;angle et la profondeur appropriée à atteindre lors de l&#39;injection sont particulièrement importants pour contourner les erreurs fréquentes. En plus, une explication vive détaillée de l&#39;injection ICV, la fiabilité du modèle produit par le protocole suivant est également illustré dans les sections suivantes. Le protocole suivant pourrait être un outil fiable et facile à comprendre, qui contribue à la recherche de AD, fournissant ainsi un tremplin qui pourrait finalement conduire à une découverte significative pour la société AD.

<table><tbody><tr><td>Souris ICR</td><td>Orientbio</td><td></td><td>mâle, 6-8 semaines, 27-29 g de poids corporel</td></tr><tr><td>C57BL/6 souris</td><td>Orientbio</td><td></td><td>mâle, 6-8 semaines, 21-23 g de poids corporel</td></tr><tr><td>Amyloïde-bêta1-42</td><td>synthèse maison</td><td></td><td>concentration du stock : 1 mM/DMSO, concentration injectée : 100 &mu ; Seringue d’injection ICV M/10 % DMSO et 90 % PBS</td></tr><tr><td>(jauge 26s)</td><td>Hamilton</td><td>80308</td><td></td></tr><tr><td>Evans blue dye (EBD)</td><td>abcamBIochemicals</td><td>ab120869</td><td>1 % EBD in PBS</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>gibco</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Gradi-GelTM II Gradient PAGE Analysis Kit</td><td>ELPiS Biotech</td><td>EBS-1056</td><td>15 % Gel</td></tr><tr><td>Precision Plus ProteinTM Dual Xtra Standards</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0377</td><td></td></tr><tr><td>Kit de coloration à l’argent</td><td>GE-Healthcare</td><td>17-1150-01</td><td></td></tr><tr><td>LabDiet</td><td>Orientbio</td><td>5053</td><td></td></tr></tbody></table>

injection intracérébroventriculaire de peptides amyloïde-ß chez les souris normales à provoquer pleinement déficits cognitifs de type alzheimer

Intracerebroventricular Injection of Amyloid-&#946; Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

β amyloïde (Aβ) est un médiateur pathologique majeur de la maladie d’Alzheimer (MA) familiale et sporadique. Dans le cerveau des patients atteints de la maladie d’Alzheimer, une accumulation progressive d’oligomères et de plaques Aβ est observée. On pense que ces anomalies Aβ bloquent la potentialisation à long terme, altèrent la fonction synaptique et induisent des déficits cognitifs. Des preuves cliniques et expérimentales ont révélé que l’augmentation aiguë des niveaux d’Aβ dans le cerveau permet le développement de phénotypes de type Alzheimer. Par conséquent, un protocole détaillé décrivant comment générer de manière aiguë un modèle de souris MA via l’injection intra-ventriculaire (ICV) de Aβ est nécessaire dans de nombreux cas. Dans ce protocole, les étapes de l’expérience avec une souris injectée d’Aβ sont incluses, de la préparation des peptides au test des anomalies comportementales. Le processus de préparation des outils et des sujets animaux avant l’injection, d’injection de l’Aβ dans le cerveau de la souris par injection ICV et d’évaluation du degré de déficience cognitive est facilement expliqué tout au long du protocole, en mettant l’accent sur les conseils pour une injection ICV efficace de l’Aβ. En imitant certains aspects de la MA avec une injection désignée de Aβ, les chercheurs peuvent contourner le processus de vieillissement et se concentrer sur la pathologie en aval des anomalies Aβ.

Cette section illustre des exemples de résultats qui peuvent être obtenus par une confirmation de l&#39;agrégation Aß et l&#39;évaluation labyrinthe en Y des déficits de la mémoire. En utilisant la pleine longueur Aß (1-42) peptide de 42 acides aminés, le mélange de monomères, oligomères Aß et de fibrilles (figure 3) a été produite. Par l&#39;étape de monomérisation induite HFIP, les monomères relativement homogènes (voie B) ont été obtenus. Après l&#39;incubation de 7 j...

Le amyloïde-β (Aß) -injected modèle animal permet à l&#39;administration d&#39;une quantité et d&#39;espèces de fragments Aß défini et réduit les différences individuelles au sein de chaque groupe d&#39;étude. Ce protocole décrit l&#39;injection intracérébroventriculaire (ICV) de Aß sans instrument stéréotaxique, ce qui permet la production d&#39;anomalies du comportement de type Alzheimer chez les souris normales.

Injection intracérébroventriculaire de Peptides amyloïde-ß chez les souris normales à Provoquer Pleinement Déficits cognitifs de type Alzheimer

Amyloid-&#946; (A&#946;) is a major pathological mediator of both familial and sporadic Alzheimer's disease (AD). In the brains of AD patients, ...

L'objectif général de cette procédure chirurgicale est d'effectuer une injection intracérébroventriculaire de bêta-amyloïde sans utiliser d'instruments stéréotaxiques, et d'induire rapidement des anomalies comportementales semblables à celles observées dans la maladie d'Alzheimer chez des souris normales. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la neurobiologie, notamment en ce qui concerne la découverte de médicaments contre la maladie d'Alzheimer. Le principal avantage de cette technique est que nous pouvons réaliser une injection directe de l'amyloïde bêta dans la région intracérébroventriculaire des souris sans avoir recours à des instruments stéréotaxiques, ce qui nous permet de reproduire des anomalies comportementales semblables à celles de la maladie d'Alzheimer chez la souris sans avoir à attendre le processus de vieillissement.Les implications de cette technique s'étendent à la thérapie ou au diagnostic de la maladie d'Alzheimer, car elle peut être utilisée pour étudier la pathologie en aval de l'amyloïde bêta et pour cribler des candidats médicaments. En général, les personnes novices dans cette méthode éprouveront des difficultés, car

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Modèles de souris transgéniques (Tg) de AD offrent une excellente occasion d'examiner comment et pourquoi les niveaux de Aß ou de tau dans le LCR changements que la maladie progresse chez les patients humains. Ici, nous démontrons une technique raffinée cisterna magna perforation pour l'échantillonnage CSF de série de la souris.

Une technique de recueil de série du liquide céphalorachidien de la grande citerne de souris

Cette vidéo présente une technique de perfusion continue d’anticorps spécifiques du peptide bêta-amyloïde (Aβ) dans l’hippocampe d’un rat. L’étude utilise l’implantation d’un système de canule bilatérale pour une perfusion contrôlée d’anticorps spécifiques du peptide Aβ couplée à la perfusion d’oligomères solubles Aβ (Aβo) dans l’hippocampe du rat afin d’étudier les interactions entre les oligomères et les anticorps.

Perfusion contrôlée d’anticorps spécifiques du peptide Aβ et d’oligomères Aβ dans l’hippocampe du rat

Cette vidéo montre la procédure d’injection de peptides bêta-amyloïdes, de chlorure d’aluminium et d’un facteur de croissance neuro-inflammatoire, qui contribuent collectivement à la formation de plaques amyloïdes toxiques dans la région de l’hippocampe. Cela provoque des troubles de la mémoire chez le rat, caractéristiques de la maladie d'Alzheimer.

Établissement d’un modèle de rat de la maladie d’Alzheimer par injection d’un peptide bêta-amyloïde

Cette vidéo démontre l'infusion stéréotaxique précise de bêta-amyloïde dans le gyrus denté pour établir un modèle murin de la maladie d'Alzheimer. La détermination précise des coordonnées et l'administration contrôlée des protéines bêta-amyloïdes entraînent une dégradation neuronale, perturbent le traitement de la mémoire et contribuent au développement de la maladie d'Alzheimer.

Perfusion cérébrale stéréotaxique directe de protéines bêta-amyloïdes pour un modèle de maladie d’Alzheimer

Source : Arango-Lievano, M. et. al., Imagerie longitudinale in vivo de la cerebrovasculature : pertinence pour les maladies du SNC. J. Vis. Exp. (2016)Cette vidéo montre l’imagerie in vivo à deux photons pour visualiser des plaques amyloïdes marquées par fluorescence et un système vasculaire cérébral. La fluorescence bleue marque les plaques, tandis que la fluorescence verte met en évidence les vaisseaux sanguins cérébraux. Une carte 3D de la région d’intérêt et une imagerie en mosaïque à haute...

Imagerie in vivo de vaisseaux cérébraux et de plaques amyloïdes dans un modèle murin de la maladie d’Alzheimer

Ici, nous présentons un protocole pour la perfusion cérébrale stéréotaxique directe de bêta-amyloïde. Cette méthodologie fournit un modèle murin vivo alternatif pour aborder les effets à court terme de la bêta-amyloïde sur les neurones cérébraux.

Infusion stéréotaxique des oligomères bêta-amyloïde dans les Hippocampus souris

Pour étudier les effets d’Aβo in vivo, nous avons développé un modèle basé sur des perfusions répétées d’Aβo soluble dans l’hippocampe couplées à une perfusion continue d’anticorps Aβo (6E10) dans l’hippocampe à l’aide de pompes osmotiques pour contrer l’effet neurotoxique d’Aβo.

Neurodégénérescence dans un modèle animal de chronique bêta-amyloïde Oligomère Infusion est contrecarré par Antibody traitement Infused avec les pompes osmotiques

Ce protocole décrit la synthèse, la caractérisation et injection de peptides de monomère amyloïde-β42 pour générer les toxicité amyloïde dans adult poisson zèbre à établir un modèle de la maladie d’Alzheimer, suivi d’analyses histologiques et détection de agrégations.

Modélisation de toxicité amyloïde-β42 et neurodégénérescence dans le cerveau de poisson-zèbre adulte

Il s’agit d’un protocole pour imiter la maladie d’Alzheimer chez des rats par l’évaluation des troubles de la mémoire spatiale, des changements pathologiques neuronales, fardeau de protéine (Aβ) bêta-amyloïde neuronale et l’agrégation enchevêtrements neurofibrillaires, induite par l’injection d’AB25-35 combiné Trichlorure d’aluminium et recombinantes humaines transformant le facteur de croissance-β1.

Mise en place d’un imitateur précieux de la maladie d’Alzheimer dans le modèle Animal Rat par Injection intracérébroventriculaire de protéine bêta-amyloïde composite

Le modèle d'injection de sang autologue d'hémorragie intracérébrale chez la souris décrites dans ce protocole utilise la technique de double injection pour minimiser le risque de reflux du sang jusqu'à la piste d'aiguille, pas d'anticoagulants dans le système de pompage, et élimine tous les espaces morts et tuyaux extensibles dans le système.

Injection de sang autologue au modèle spontané Hémorragie intracérébrale chez la souris

Apprenez l'injection intracérébroventriculaire de peptides bêta-amyloïdes chez des souris normales pour induire des déficits cognitifs de type Alzheimer. Cette méthode sans instrument stéréotaxique facilite la découverte de médicaments.

Injection intracérébroventriculaire de Peptides amyloïde-ß chez les souris normales à Provoquer Pleinement Déficits cognitifs de type Alzheimer (Vidéo) | JoVE Journal

Injection intracérébroventriculaire de Peptides amyloïde-ß chez les souris normales à Provoquer Pleinement Déficits cognitifs de type Alzheimer

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