Une nouvelle approche qui élimine la manipulation pour l'étude de l'agression et le «perdant» dans Effet Drosophila melanogaster

Au cours de la mouche des fruits combats, les comportements observés, combattre la dynamique, et l'apprentissage et la mémoire associée sont influencés par les conditions expérimentales. Le protocole présenté ici décrit une nouvelle procédure qui élimine entièrement la manipulation des mouches pendant les expériences. Cela améliore la dynamique de combat et permet la formation d'effets de «perdant» forts.

L’objectif global de cette méthode est d’introduire la formation d’effets perdants et gagnants chez la drosophile, la mélanine, le gaster en éliminant la manipulation des mouches de la procédure comportementale. La plupart des études comportementales sur les animaux qui sont menées en laboratoire impliquaient la manipulation des animaux. La manipulation des animaux, à son tour, induit généralement du stress chez les animaux, et le stress peut interférer avec les études comportementales que vous essayez d’effectuer pour essayer d’éliminer la manipulation stressante des animaux.

Nous avons développé une nouvelle chambre pour nos études d’agression chez les mouches des fruits qui élimine complètement la manipulation des animaux avant, pendant ou après les expériences. En utilisant ces nouvelles chambres, tous les paramètres comportementaux que nous avons mesurés se sont avérés meilleurs. En utilisant cette méthode, nous minimisons la viabilité comportementale entre les individus.

Nous réduisons le temps nécessaire pour générer une relation de dominance claire, et nous avons pu induire de fortes mentalités de perdant et de gagnant. Ces chambres sont faciles à utiliser et peuvent être polyvalentes pour étudier différents comportements des mouches des fruits. Pour commencer l’expérience, élevez et entretenez des stocks de mouches dans un incubateur à cycle d’obscurité légère de 12 heures à 25 degrés Celsius et 50 % d’humidité relative.

Ensuite, préparez des flacons d’isolement en chauffant de la nourriture fraîche pour mouches jusqu’à ce qu’elle soit fondue. À l’aide d’une pipette à pasti, transférez environ 1,5 millilitre de nourriture pour mouches fondue dans des tubes à essai en verre vides et laissez la nourriture se solidifier avec un pinceau fin. Retirez délicatement une chrysalide mâle à un stade avancé de la fiole de stock et placez-la sur le côté d’un tube à essai contenant de la nourriture fraîchement préparée.

Fermez les flacons d’isolement avec du coton, conservez les flacons d’isolement dans l’incubateur. Après l’isolement, les mouches sont prêtes à être peintes. Anesthésez la mouche avec du dioxyde de carbone, puis avec un cure-dent fin.

Placez un petit point de peinture acrylique sur le thorax et évitez de peindre la tête, les ailes, l’abdomen ou les pattes. Laissez sécher la peinture pendant environ 10 secondes et transférez doucement les mouches dans leurs flacons d’isolement d’origine. Remettez les flacons d’isolement dans l’incubateur.

Poursuivez la préparation de l’appareil en chauffant la nourriture fraîche pour mouches jusqu’à ce qu’elle soit fondue. À l’aide d’une pipette postérieure, transférez 0,8 millilitre d’aliments dans le couvercle du flacon à bouchon à vis et laissez les aliments refroidir. Une fois que les aliments sont froids.

Appliquez une petite goutte de pâte de levure fraîche au centre de la surface de la tasse de nourriture. Lavez l’appareil et les chambres de combat individuelles avec de l’eau avant chaque utilisation et séchez-les avec une serviette en papier. Ensuite, appliquez une goutte de mastic sur la tasse de nourriture et placez-la au centre de chaque chambre de combat.

Couvrez les chambres de combat avec le couvercle de l’appareil. Placez l’appareil couvert sous une source lumineuse et installez une caméra vidéo au-dessus de la structure. Commencez les expériences comportementales en insérant des séparateurs en plastique dans chaque chambre de combat.

Retirez le bouchon en coton du tube d’isolation et positionnez le tube sous un trou ouvert sur le côté de l’appareil. Laissez la mouche entrer dans la chambre de combat par l’axe géo négatif. Fermez ensuite la paroi coulissante Une fois que la mouche est entrée dans la chambre, répétez la procédure pour introduire la deuxième mouche dans la chambre de combat de l’autre côté de l’appareil.

Ensuite, remettez l’appareil en position d’enregistrement vidéo éclairé. Commencez l’enregistrement vidéo et retirez le séparateur en plastique pour permettre aux mouches d’interagir pour des expériences d’effet perdant. Enregistrez les premiers combats pendant 20 minutes pour assurer la formation de solides relations de dominance.

Au bout de 20 minutes, replacez délicatement le séparateur en plastique dans les chambres de combat pour séparer les mouches et arrêter la vidéo. Donc, pour induire une forte mentalité de perdant, assurez-vous que les mouches établissent et maintiennent une relation de dominance lors du premier combat, puis minimisez la perturbation de l’animal lors de l’insertion des séparateurs pour séparer les mouches. Après une période de repos de 10 minutes, commencez l’enregistrement et retirez délicatement le séparateur en plastique.

Laissez les mouches interagir pendant 20 minutes supplémentaires. Arrêtez l’enregistrement après 20 minutes pour terminer l’expérience. Retirez les mouches des chambres comportementales par l’axe géographique négatif en inversant la procédure décrite avant que la nouvelle méthode ne soit utilisée pour observer les premiers combats.

En moyenne, la première rencontre est observée au bout de deux minutes. La première fente se produit après quatre minutes et les mouches établissent une relation de dominance après huit minutes. Pendant les 12 minutes restantes, la relation de dominance est renforcée.

Au fur et à mesure que les gagnants se précipitent de plus en plus et que les perdants battent en retraite de plus en plus. La nouvelle approche a été utilisée pour quantifier l’effet perdant, le pourcentage de perdants qui perdent leurs deuxièmes combats lors des deuxièmes combats. Un effet significatif est observé lorsque les perdants précédents ont été associés à des gagnants familiers ou à des gagnants inconnus pour leurs deuxièmes combats.

Lors de cette procédure, il est important de se rappeler d’effectuer une agression en utilisant des mouches mâles âgées de six à sept jours qui se levaient dans l’isolement social. Ainsi, une fois maîtrisées, ces chambres permettent une introduction, une surveillance, des interactions et une séparation faciles des mouches sans aucune manipulation, ce qui induit un fort effet de perdant. L’utilisation de séparateurs pour séparer les mouches après le premier combat permet de varier le protocole expérimental.

Nous pouvons garder les gagnants et les associer à un adversaire différent lors du deuxième combat pour induire un effet de gagnant Avec de petits ajustements, les mêmes chambres peuvent être utilisées pour étudier la parade nuptiale, la locomotion et d’autres comportements sociaux de la mouche des fruits. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’effectuer des tests d’agression et de la façon d’induire un effet plus lâche sans manipuler les mouches avant et pendant les expériences.