Une méthode simple pour l'extraction des échantillons d'eau automatisée en phase solide pour immunologique analyse des petits polluants

L'objectif général de cette méthode de préparation d'échantillons est de préconcentrer de manière automatisée, conviviale et rentable les polluants organiques de petite taille présents dans des échantillons d'eau. Cette méthode peut remplacer les procédés standards de SPE lors de l'étude de la contamination d'échantillons d'eau par des méthodes d'immunodétection, telles que les immunoessais en microplaque ou les biocapteurs. Les principaux avantages de cette technique sont l'automatisation de la procédure SPE ainsi qu'une empreinte réduite et un coût inférieur des instruments par rapport aux approches traditionnelles.

En outre, les performances du processus d'enrichissement répondent aux exigences d'analyse des immunodosages, tant en termes de faible teneur en solvant qu'en efficacité de préconcentration. Tout d'abord, filtrer un échantillon d'eau de 100 millimètres à l'aide d'un filtre de taille de pore de zéro virgule deux micromètre. Placer l'échantillon filtré dans un flacon en verre doté d'un filetage GL 45.

Préparez 300 microlitres d'éluant en diluant du méthanol dans de l'eau déionisée à 50 pour cent en volume dans un tube hermétique. Ensuite, préparez une suspension de 20 milligrammes par millilitre de particules de sorbant en silice octadécyle en ajoutant 1 600 microlitres de méthanol suivis de 400 microlitres d'eau déionisée à 40 milligrammes de sorbant en phase inversée dans un flacon en verre. Fermez hermétiquement le couvercle et agitez à l'aide d'un vortex.

Placer une membrane en nylon de taille de pore de 11 micromètres sur une double couche de papier anti-poussière. Découper deux petits morceaux dans la membrane à l’aide d’un poinçon de trois millimètres de diamètre. Ensuite, saisir l’un des petits morceaux de membrane à l’aide de pinces plates pour filtres et le placer sur un côté de la colonne.

Ensuite, vissez le raccord à fond plat avec le tube et serrez fermement. Puis, dessinez une flèche sur le corps de la colonne, pointant vers l'extrémité où la membrane a été placée. À ce stade, fixez la colonne sur le support avec la flèche orientée vers le bas.

Fixez une seringue jetable vide de 10 millilitres à l'extrémité du tube de la colonne à l'aide des raccords de verrouillage inférieurs. Agitez la suspension de sorbant avec le mélangeur vortex et pipetez rapidement 100 microlitres au centre de la colonne. Pendant l'injection, aspirez doucement la solution pipetée à travers la membrane en utilisant la seringue de l'autre main.

La préparation de la colonne SPE est très importante. Vous devez vous assurer d'aspirer correctement la solution à travers la membrane à l'aide de la seringue tout en injectant la suspension de particules dans la colonne. Sinon, les particules ne seront pas compactées de manière dense.

Répétez le processus précédent deux fois de plus, en agitant la suspension mère entre chaque étape de pipetage, afin de garantir une suspension homogène des particules dans la solution. Une fois que toute la suspension a été chargée et séchée par aspiration à l’aide d’une seringue, maintenez la seringue en place et placez le deuxième membrane en nylon par-dessus à l’aide de la pince tenue de l’autre main. Ensuite, vissez le deuxième raccord muni d’un tube et jetez la seringue.

À ce stade, resserrez la colonne sur le dispositif SPE en utilisant les connecteurs de verrouillage inférieurs. Connectez la bouteille contenant l'échantillon au dispositif en vissant le bouchon de sécurité GL 45 fourni. Ajoutez 200 microlitres d'éluant dans le réservoir d'éluant.

Ensuite, chargez 800 microlitres d'eau déionisée dans le réservoir de dilution. Vérifiez que le régulateur de pression est en position fermée en le tournant dans le sens inverse des aiguilles d'une montre jusqu'à ce qu'aucun mouvement supplémentaire ne soit possible. Après avoir mis le prototype sous tension, saisissez les valeurs 580 pour pset et 30 pour delta pset.

Pour régler le régulateur de pression, démarrez la pompe. Ensuite, tournez manuellement le régulateur de pression jusqu'à ce que la valeur lue pour preg soit inférieure mais proche de 320 millibars. Après avoir arrêté la pompe, démarrez la procédure SPE en appuyant sur démarrer dans le coin du mode automatisé.

Une fois la procédure SPE terminée, fermez le petit flacon d'échantillon et conservez-le à quatre à cinq degrés Celsius à l'abri de la lumière jusqu'à l'analyse par ELISA. Pour nettoyer le système, préparez une solution de 10 millilitres de méthanol à 70 pour cent en volume dans un flacon en verre avec filetage GL 45. Débranchez la colonne SPE, puis obturez les tuyaux à l'aide de raccords.

En mode automatisé, sélectionnez le fichier de nettoyage et démarrez-le avec les mêmes réglages de pression utilisés précédemment pour pset, delta pset et preg. La reproductibilité du tassage du sorbant a été évaluée par séchage et pesée du sorbant pipeté dans des vials en verre. La reproductibilité du temps d'injection a été testée sur des échantillons de 100 millilitres.

Les concentrations des échantillons dopés initiaux et préconcentrés ont été déterminées à l’aide d’un kit ELISA commercial de 17 bêta-estradiol. Il ressort clairement des courbes d’étalonnage que le ratio de méthanol provenant de l’échantillon enrichi n’affecte pas la sensibilité du dosage immuno-enzymatique. Les rendements de récupération, calculés respectivement pour l’eau déionisée et l’eau de mer artificielle, étaient de 128 ± 22 % et de 107 ± 6 %.

Une fois maîtrisée, la préparation d'une colonne SPE peut être effectuée en moins de cinq minutes, à condition d'être réalisée correctement. L'ensemble de la procédure SPE peut être terminé en moins d'une heure. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine des sciences de l'environnement pour explorer l'élaboration de méthodes d'immunodétection destinées à la surveillance des polluants organiques de petite taille.

Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez bien comprendre comment préparer des échantillons d'eau à l'aide de notre instrument automatisé économique pour l'analyse de polluants par des immunodosages. N'oubliez pas que le travail avec des polluants organiques et des solvants peut présenter des risques, et que des précautions telles que le port de gants adaptés et de lunettes de protection doivent toujours être prises lors de la réalisation de cette procédure.