Name: A Novel Microsurgical Modèle pour Heterotopic, en bloc de la paroi thoracique, Thymus, et Transplantation cardiaque chez la souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 24 s
Description: Découvrez un modèle murin innovant de transplantation combinée de paroi thoracique, thymus et cœur pour étudier la tolérance immunitaire et la survie des allogreffes. Cette technique microchirurgicale avance la recherche en transplantation vasculaire.

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Ce travail a été financé par l’American Association of Plastic Surgeons 2014 Academic Scholar Award.

Toutes les procédures opérationnelles ont été réalisées en conformité avec l&#39;Université Johns Hopkins et le ministère de l&#39;Agriculture des États-Unis et les exigences de service de la santé publique. Ce protocole suit le Comité soin et l&#39;utilisation des animaux de l&#39;Université Johns Hopkins, comité d&#39;examen institutionnel adopté des lignes directrices (numéro de protocole M013M490). Les données de survie final a été enregistrée pour les procédures chirurgicales décrites ci-dessous. Les deux animaux donateurs et bénéficiaires reçoivent une anesthésie de préemption à l&#39;aide de la buprénorphine à 0,1 mg / kg sc une heure avant la chirurgie et de la buprénorphine animal receveur est ré-administré à la même dose après la transplantation et re-dosé en fonction des besoins dans les premières 48 heures après l&#39;opération. 1. donateurs allogreffe Recovery Remarque: Commencez la partie donneur de la greffe 40 min plus tôt que la greffe de destinataire pour minimiser le temps d&#39;anesthésie bénéficiaire et pour faciliter un temps de fin simultanée ou légèrement oreilleheure de fin lier par rapport à la préparation de destinataire. <ol><li> Utilisez instruments de microchirurgie stériles standard et des gants stériles pour la procédure. Notre laboratoire utilise la stérilisation en autoclave des instruments de microchirurgie. </li><li> Anesthésier la souris donneuse (mâle) en utilisant l&#39;isoflurane induction vaporisateur à 4%. L&#39;aide de tondeuses mécaniques atraumatiques supprimer les cheveux de la cervicale, thoracique et la région abdominale. Placez l&#39;animal en décubitus dorsal et de maintenir l&#39;isoflurane sur 1-2% à travers un cône de nez. Assurer une anesthésie adéquate tout au long de la procédure en évaluant périodiquement le réflexe pincement de l&#39;orteil de retrait. </li><li> Avant l&#39;incision de la peau, largement préparer le dispositif en appliquant povidone iodée antiseptique suivi par l&#39;alcool isopropylique l&#39;aide d&#39;un coton-tige stérile. </li><li> Commencez par une incision cutanée transversale superficielle avec des ciseaux à travers la peau cervicale et abdominale. Reliez les deux incisions bilatéralement le long des lignes axillaire. </li><li> En utilisant des pinces de microchirurgiedisséquer la région cervicale bilatérale pour identifier, ligaturer et diviser les veines jugulaires externes avec 6-0 suture de soie et des ciseaux. Ensuite, en utilisant l&#39;électrocoagulation diviser les muscles sterno pour exposer les veines jugulaires internes et les artères carotides communes, bilatéralement. Passez un fil de suture 6-0 de soie sous le côté gauche et le côté droit de la carotide commune et veines jugulaires internes à la mode en vrac. NOTE: Elles seront attachées et divisés tard dans l&#39;étape 1.9. </li><li> Diviser fortement les muscles de la sangle et tissu cellulaire lâche associé, situé en avant de la trachée, l&#39;aide de ciseaux pour libérer les pièces jointes restants de la région cervicale. </li><li> Bistouri électrique bipolaire et dissection, diviser les grands muscles pectoraux et clavicules pour exposer les vaisseaux sous-claviers et ligaturer (6-0 de suture de soie) et diviser proximale. </li><li> Ensuite, doucement, saisir et retirer le pénis de l&#39;animal. Le long de la face dorsale du pénis visualiser la veine dorsale du pénis, et désinfecter larégion avec de l&#39;alcool isopropylique. En utilisant une aiguille 30 G, injecter 30.000 unités d&#39;héparine par voie intraveineuse à travers la veine dorsale et permettent le pénis pour reculent de retour à sa position initiale. Fuite partielle de la solution d&#39;héparine dans le tissu environnant peut se produire. </li><li> En utilisant les liens en vrac préalablement placés autour de l&#39;artère carotide commune et la veine jugulaire interne, ligaturer et diviser les structures, au niveau bilatéral. </li><li> Utilisation des ciseaux à côté de faire une incision transversale intrabdominal. Éviscérer les intestins pour exposer la infrahepatic la veine cave inférieure et injecter 2 ml de solution de cardioplégie Euro-Collins froid dans le infrahepatic la veine cave inférieure. Assurer injection appropriée en visualisant la décoloration du foie et de la cessation des battements du cœur avant d&#39;avancer à l&#39;étape suivante. REMARQUE: solution Euro-Collins est préparé dans notre laboratoire, voir tableau de réactifs et d&#39;instruments spécifiques. </li><li> Utilisation de ciseaux accéder à la cavité intra-thoracique via une diaph bilatéralincision de l&#39;abdomen ragmatic exposée. Elargir l&#39;incision céphalique à travers les muscles intercostaux et de côtes. Refléter la paroi thoracique exposer le cœur, le thymus, et de grands navires tout en assurant simultanément la préservation des vaisseaux thoraciques internes le long de la paroi thoracique. </li><li> Injecter le sus-hépatique veine cave inférieure avec 4 ml de solution de cardioplégie Euro-Collins froid. </li><li> Identifier la racine de l&#39;aorte et de tracer de manière distale à l&#39;aorte descendante. Réduire fortement l&#39;aorte descendante (préservation de longueur maximale). </li><li> Identifier le tronc pulmonaire et diviser juste en amont de son point de dérivation (préservation de longueur maximale). Ensuite, en utilisant 2 ml de solution de cardioplégie Euro-Collins froide, rincez le tronc pulmonaire et cardiaque en plaçant un cathéter à extrémité en plastique souple dans la lumière de l&#39;artère pulmonaire. </li><li> L&#39;utilisation d&#39;une suture de soie 6-0, et diviser ligaturer la veine cave inférieure, les veines pulmonaires de confluence, et les branches de l&#39;accessoire veine cave supérieure bilatérale. Puis éleveret disséquer le céphalique coeur des pièces jointes le long de la principale bronches souches et de la trachée avec soin de ne pas entrer les voies respiratoires. Bistouri électrique forte et bipolaire disséquer la paroi thoracique, le thymus, et le cœur complètement libérer de la souris donneuse. </li><li> Enfin, couper la paroi thoracique de l&#39;allogreffe ex vivo à une taille plus petite, avec des ciseaux, le long du sternum et costae latéral, avec un soin de ne pas perturber les vaisseaux thoraciques internes (figure 1A). Pour minimiser l&#39;hémorragie après la revascularisation, utiliser electrocauterization bipolaire le long des frontières du sternum osteomusculocutaneous. </li><li> Placez l&#39;allogreffe dans 10 ml de froid (4 o Celcius) solution Euro-Collins si le destinataire est pas préparé pour encart. Toutefois, si le bénéficiaire est prêt à encart, transférer l&#39;allogreffe droite du champ opératoire bénéficiaire. </li></ol> 2. Bénéficiaire Préparation Remarque: Pour réduire le temps d&#39;anesthésie bénéficiaire,commencer la préparation du destinataire à une station opérationnelle séparée environ 40 min avant la fin de la récolte donneur d&#39;allogreffe. <ol><li> Utilisez un ensemble distinct de instruments de microchirurgie stériles standard et des gants stériles pour la procédure. </li><li> Anesthésier la souris receveuse (mâle ou femelle) en utilisant l&#39;isoflurane induction vaporisateur à 4%. L&#39;aide de tondeuses mécaniques atraumatiques enlever les poils de la région cervicale et thoracique droite. </li><li> Placez la souris en position couchée et l&#39;angle du membre supérieur droit légèrement en bas formant un angle de 110 degrés entre la tête et du membre supérieur droit. Maintenir une anesthésie sur 1-2% d&#39;isoflurane à travers un cône de nez. </li><li> Placez pétrole pommade ophtalmique sur les yeux de souris en utilisant un applicateur coton-tige. Avant l&#39;incision de la peau, largement préparer le site opératoire en utilisant povidone iodée antiseptique suivi par l&#39;alcool isopropylique. </li><li> Avec des ciseaux, faire une incision de la peau de la ligne médiane le long de la bor inférieure droiteder de la mandibule et d&#39;étendre l&#39;incision inféro- latéralement à la région thoracique droite. Utilisation de dissection avec des pinces microvasculaires, mobiliser la veine jugulaire externe par la circonférence gratuitement le navire de tissus mous et adventice. Divisez toutes les branches à l&#39;aide de l&#39;électrocoagulation, et enlever le lobe droit de la glande sous-maxillaire utilisant dissection et l&#39;électrocoagulation à l&#39;espace libre pour l&#39;allogreffe. </li><li> Assurer suffisamment de longueur de la veine jugulaire externe à se retourner sur un brassard, et ligaturer la veine jugulaire externe utilisant une suture de soie 6-0. Insérez la veine à travers la lumière d&#39;un brassard prédécoupée de polyimide et d&#39;utiliser une pince bulldog microvasculaire de fixer le complexe navire-manchette en place. Ensuite, en utilisant des ciseaux, proximale diviser la veine jugulaire externe, Evert sur le brassard, et fixer en place avec une suture de nylon 10-0. (Figure 1B) </li><li> Diviser le muscle sterno droite avec électrocoagulation bipolaire pour exposer l&#39;artère carotide commune. Mob circonférenceilize l&#39;artère céphalique au point le plus distal dans la région cervicale. Ceci est accompli en utilisant dissection du navire avec une pince pour enlever les tissus mous et adventice environnante. </li><li> Utilisation 6-0 suture de soie, ligaturer et de diviser l&#39;artère carotide commune. Passez l&#39;artère à travers la lumière d&#39;un brassard prédécoupée polyimide et le fixer en place avec une pince microvasculaire bulldog aussi près de l&#39;entrée thoracique que possible. Diviser le navire distale, dilater doucement le récipient à l&#39;aide d&#39;un dilatateur microchirurgicale, Evert sur le brassard, et fixer en place avec une suture de nylon 10-0. (Figure 1B) NOTE: Le dilatateur microchirurgicale spécifique est décrite dans le tableau de réactifs et d&#39;instruments spécifiques. </li></ol> 3. allogreffe Inset <ol><li> Maintenir l&#39;instrumentation stérile standard et des gants stériles pour placer l&#39;allogreffe dans le destinataire région cervicale à l&#39;envers et la position oblique. </li><li> Ensuite, placez l&#39;AOR donateurs descendantelumière tic plus de la construction de manchette artérielle du destinataire et le fixer en place avec une suture de nylon 10-0 (figure 1C et 1D). </li><li> Façonner la même anastomose comme dans l&#39;étape 3.2 entre l&#39;artère pulmonaire du donneur et l&#39;éversé construction veine jugulaire-brassard externe de la souris receveuse (figure 1C et 1D). </li><li> Commencez par retirer pince microvasculaire veineuse (de serrage de la veine jugulaire externe), puis relâchez la pince artérielle (carotide commune de serrage de l&#39;artère). Au cours de la reperfusion artériel, inspecter la totalité de l&#39;allogreffe de traiter toute hémorragie. Si l&#39;hémorragie est visualisé, réappliquer la pince artérielle pour minimiser la perte de sang et d&#39;atténuer la source d&#39;une hémorragie par électrocoagulation bipolaire. </li><li> Inspectez la greffe et d&#39;assurer l&#39;hémostase. Libérer et retirer complètement la pince artérielle microvasculaire. Observez le cœur à montrer des signes de reperfusion, qui seront instantanément apparente avec l&#39;expansion du volume rapide des cavités cardiaques, et d&#39;attendre que bmanger pour commencer dans les 0,5-1 min. Utilisez saline chaude (35 ° Celsius) pour humidifier le cœur. </li><li> Drapé de la paroi thoracique dans une position anatomique afin de ne pas induire de vrillage ou de tensions sur les anastomoses. Fermez la peau de la plaie chirurgicale est en utilisant 6-0 sutures continues de nylon (figure 1E). </li></ol> 4. Soins postopératoires <ol><li> Administrer un fluide intrapéritonéale bolus de solution saline 0,3 ml normale immédiatement après l&#39;opération pour le remplacement des liquides. </li><li> Puis injecter en sous-cutané de la buprénorphine (0,1 mg / kg) et de l&#39;enrofloxacine (5 mg / kg) pour la prophylaxie de la douleur et de l&#39;infection, respectivement. </li><li> Placez l&#39;animal sous une lampe de chaleur jusqu&#39;à ce que le réveil de l&#39;anesthésie et de revenir à décubitus sternal. Lors de la récupération, inspecter le col de visualiser le battement de coeur en fibrillation de l&#39;allogreffe assurer perfusion d&#39;allogreffe adéquate. </li><li> Une fois éveillé et dans la position couchée, retourner la souris dans une cage séparée (sans la compagnie d&#39;autres souris) Où il peut recevoir de la nourriture et l&#39;eau ad libitum. En raison de tout mouvement mineur restrictive temporaire du membre supérieur droit, laisser une source de nourriture de gélatine sur le plancher de la cage. </li><li> Observez la souris receveuse pour 1 h après l&#39;opération, puis le retourner à l&#39;établissement de la cage où il peut recevoir de la nourriture et de l&#39;eau ad libitum et est inspecté trois fois par jour pendant les 24 premières heures pour l&#39;activité et l&#39;apport nutritionnel. Surveiller les souris des signes de douleur et de détresse et de re-dose avec la buprénorphine (0,1 mg / kg) sous-cutanée deux fois par jour au besoin pendant les 72 premières heures. Examiner les animaux tous les jours par la suite et les peser chaque semaine. </li><li> Consultez un membre du personnel vétérinaire si des souris montrent des signes de douleur, la détresse, ou diminution de la consommation d&#39;alimentation. Envisager l&#39;euthanasie précoce (dans notre protocole de la technique de l&#39;euthanasie emploie CO 2 surdosage pendant 7 min, suivie par dislocation cervicale). </li><li> Cessation des battements du cœur de l&#39;allogreffe est définie comme un effet spécifique incitant la souris pour être sacrificed. </li></ol>

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</ol>

Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts ni aucune divulgation financière à déclarer.

Il existe une multitude de phénomènes qui tenir compte dans l&#39;enquête immunologique de l&#39;allotransplantation, qui comprennent, mais ne sont pas limités à des mécanismes de rejet aigu et chronique, la présentation directe et indirecte antigène, une sensibilisation de la destinataire, ou l&#39;induction de chimérisme mixte. 19 modèles animaux sont devenus l&#39;étalon-or pour l&#39;étude de l&#39;immunologie de transplantation, et des modèles de souris sont populairement mises en œuvre en raison de leur...

La transplantation cardiaque est le traitement de choix de l’insuffisance cardiaque en phase terminale. Les progrès techniques et les innovations pharmacologiques ont propulsé le domaine à des taux d’acceptation précoce des greffons supérieurs à 90 %. Malgré cela, la survie à 5 ans de 60 à 80 % des greffons est au point mort et le rejet chronique, caractérisé par une vasculopathie de greffe, reste inévitable. 14-16 De plus, les patients sont soumis à de multiples interventions chirurgicales et à une immunosuppression à vie, qui sont associées à des déformations de la paroi thoracique et à des séquelles et toxicités médicales, respectivement. Le besoin d’approches innovantes pour prolonger la survie de l’allogreffe, minimiser les besoins immunosuppresseurs et offrir des options reconstructives pour les déformations anatomiques est pressant.
L’allotransplantation composite vascularisée offre une stratégie unique pour améliorer les résultats de la transplantation cardiaque, tant d’un point de vue immunologique que reconstructif. 17 Les allogreffes composites vascularisées sont également uniques en ce sens qu’elles ont une source inhérente de cellules souches hématopoïétiques dérivées d’un donneur, qui a montré une capacité favorable à réduire l’immunosuppression et à induire et maintenir un chimérisme mixte. 1-8 De plus, la co-transplantation du thymus a montré qu’elle prolongeait la survie des greffes d’organes solides et des allogreffes composites vascularisées. 2,9-11 La combinaison de ces stratégies avec la transplantation cardiaque offre une solution novatrice aux défis susmentionnés auxquels la transplantation cardiaque est confrontée. 18
Les modèles murins constituent d’excellentes plateformes pour l’investigation mécaniste in vivo en raison de la disponibilité d’anticorps et de souches consanguines et knock-out bien définies. 19-21 Bien que la transplantation cardiaque chez la souris soit couramment étudiée à l’aide d’un modèle de greffe de suture microchirurgicale intra-abdominale hétérotopique22-25, un modèle de technique de brassard hétérotopique, cervical et sans suture s’est avéré extrêmement reproductible, fiable et comporte moins de taux de thrombose. 19,26,27 L’objectif de cette étude est de développer une technique de transplantation hétérotopique en bloc de la paroi thoracique, du thymus et du cœur chez la souris afin d’étudier les mécanismes immunologiques de l’allotransplantation combinée d’organe solide et de composite vascularisé à l’aide d’une technique de brassard cervical sans suture. Cette allogreffe en grappe est perfusée par l’anastomose de l’aorte descendante du donneur vers l’artère carotide commune droite et de l’artère pulmonaire du donneur vers la veine jugulaire externe droite. La préservation des vaisseaux thoraciques internes et des branches du thymus associées est primordiale pour perfuser la paroi thoracique (sternum, côtes, muscles et peau) et le thymus.

<table><tbody><tr><td>La solution</td><td></td><td></td><td>n’est pas achetée dans le commerce, mais plutôt préparée en laboratoire. Pour faire une solution de 500 ml, ajoutez l’ingrédient indiqué ci-dessous à 330 ml d’eau distillée doublement. Bien mélanger, puis verser le reste des 170 ml d’eau double distillée dans la solution jusqu’à un volume final de 500 ml. Ingrédients : 1,02 g KH2PO4, 3,66 g K2HPO4, 0,56 g de KCl, 0,42 g de NaHCO3 et 17,52 g de glucose.</td></tr><tr><td>Suture</td><td>Ethilon</td><td>MWI 72667</td><td>6-0 Ethilon

https://www.mwivet.com (MWI - Fournitures vétérinaires)</td></tr><tr><td>Veine de brassard en polyimide (21G)</td><td>Vention Medical</td><td>141-0043</td><td>http://www.ventionmedical.com/products-and-services/polyimide-tubing/</td></tr> <tr><td>Artère de brassard en polyimide (24G)</td><td>Vention Medical</td><td>141-0027</td><td>http://www.ventionmedical.com/products-and-services/polyimide-tubing/</td></tr> <tr><td>Cathéter à embout en plastique souple</td><td>Terumo</td><td>SR*OX2419CA</td><td>24G x 3/4"&nbsp ;</td></tr><tr><td>Dilatateur microchirurgical</td><td>S& T</td><td>D-5a.1</td><td>Dilatateur, 11 cm, FH, 0,1 mm AT10d</td></tr></tbody></table>

a novel microsurgical modèle pour heterotopic, en bloc de la paroi thoracique, thymus, et transplantation cardiaque chez la souris

A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice

L’exploration de nouvelles stratégies en transplantation d’organes pour prolonger la survie de l’allogreffe et minimiser la nécessité d’une immunosuppression d’entretien à long terme doit être poursuivie. L’utilisation de la greffe de moelle osseuse vascularisée et de la co-transplantation du thymus s’est révélée prometteuse à cet égard dans divers modèles animaux. 1-11 La greffe de moelle osseuse vascularisée permet le transfert ininterrompu de cellules de moelle osseuse du donneur dans le microenvironnement préservé du donneur, et l’incorporation de tissu thymique avec la greffe de moelle osseuse vascularisée a montré qu’elle augmentait le chimérisme des lymphocytes T, jouant finalement un rôle de soutien dans l’induction de la régulation immunitaire. La combinaison d’une allotransplantation d’organe solide et d’une allotransplantation composite vascularisée peut combiner de manière unique ces stratégies sous la forme d’un nouveau modèle de transplantation. Les modèles murins constituent un excellent paradigme pour explorer les mécanismes du rejet aigu et chronique, du chimérisme et de l’induction de la tolérance, fournissant ainsi la base pour propager des stratégies de survie d’allogreffe supérieures pour des modèles animaux plus grands et une application clinique future. Dans ce cadre, nous avons développé un nouveau modèle hétérotopique de paroi thoracique, de thymus et de transplantation cardiaque chez la souris en utilisant une technique de brassard cervical sans suture. L’expérience dans les contextes de transplantation syngénique et allogénique est décrite pour de futures investigations immunologiques plus larges à l’aide d’un manuscrit pédagogique et d’un supplément vidéo.

Syngéniques C57BL / 6 greffes atteint survie à long terme. La conception de l&#39;allogreffe (Figure 1) est avérée réussie du point de vue de la survie des animaux et la capacité à évaluer la survie d&#39;allogreffe en cours. Cela a été démontré par la peau sus-jacente reste la croissance viables, actifs allogreffe continue cheveux, et battements de coeur ont pu être évalués avec la visualisation et la palpation. Données de survie est représenté sur la figure 2 pour les...

Pour étudier l’allotransplantation combinée d’organe solide et de composite vascularisé, nous décrivons un nouveau modèle hétérotopique de paroi thoracique, de thymus et de transplantation cardiaque en bloc chez la souris en utilisant une technique de brassard cervical sans suture.

A Novel Microsurgical Modèle pour Heterotopic, en bloc de la paroi thoracique, Thymus, et Transplantation cardiaque chez la souris

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression ...

L’objectif général de ce protocole est d’introduire un nouveau modèle murin d’allotransplantation d’organe solide et de composite vascularisé afin d’étudier les effets du tissu hématopoïétique et lymphoïde primaire vascularisé dérivé d’un donneur sur la tolérance immunitaire et la survie prolongée de l’allogreffe. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la transplantation reconstructive, telles que le rôle de l’os et du thymus vascularisés sur l’induction de la tolérance. Le principal avantage de cette technique est que, pour la première fois, la combinaison de la moelle osseuse et du thymus vascularisés est transplantée avec un organe solide, le cœur et le système de modèle de masse immunologiquement polyvalent.Les implications de cette technique s’étendent de la recherche immunologique fondamentale à l’application thérapeutique dans le domaine clinique pour traiter des défauts tissulaires complexes et améliorer simultanément la survie à long terme dans la transplantation d’organes solides. La démonstration de cette procédure sera assurée par le Dr BC Oh et le Dr Georg Furtmuller, boursiers postdoctoraux au département de chirurgie plastique et reconstructive de l’Université Johns Hopkins. Pour commencer, après avoir anesthésié une souris donneuse mâle selon le protocole textuel, tout en portant des gants stériles, utilisez une tondeuse mécanique pour enlever les poils de la région cervicale, thoracique et abdominale.Sur une surface chirurgicale stérile, placez l’animal en position couchée. Fixez un cône nasal et maintenez l’isoflurane à 1 à 2 %Avant l’incision cutanée, préparez largement le site d’incision en utilisant un coton-tige stérile pour appliquer un antiseptique iodé à base de povidone suivi d’alcool isopropylique. À l’aide de ciseaux, effectuez un transfert superficiel des incisions cutanées sur la peau cervicale et abdominale.Reliez les deux incisions bilatéralement, le long des lignes médio-axillaires. À l’aide d’une micropince, disséquez la région cervicale de manière bilatérale pour identifier les veines jugulaires externes. Et avec une suture en soie 6-0, ligaturez les vaisseaux avant d’utiliser des ciseaux pour les diviser.Ensuite, avec l’électrocautérisation, divisez les muscles sterno-cléido-mastoïdiens pour exposer bilatéralement les veines jugulaires internes et les artères carotides communes. Passez une suture en soie 6 0 sous les artères carotides communes gauche et droite et les veines jugulaires internes, respectivement, de manière volumineuse. À l’aide d’une électrocautérisation bipolaire et d’une dissection nette, divisez les muscles pectoraux majeurs et les clavicules pour exposer les vaisseaux sous-claviers.Suture en soie 6-0 utilisée pour ligaturer et diviser les vaisseaux proximalement. Ensuite, saisissez et retirez doucement le pénis de l’animal. Le long du dos du pénis, localisez la veine dorsale et utilisez de l’alcool isopropylique pour désinfecter la région.Ensuite, à l’aide d’une aiguille de calibre 30, injectez 30 000 unités d’héparine par voie intraveineuse à travers la veine dorsale et laissez le pénis reculer vers sa position d’origine. Avec les attaches en vrac précédemment placées autour de l’artère carotide commune et de la veine jugulaire interne, ligaturez et divisez les structures bilatéralement. Utilisez maintenant des ciseaux pour faire une incision transversale afin d’accéder à la cavité abdominale.Éviscérez les intestins pour exposer la veine cave inférieure intrahépatique et injectez deux millilitres de solution froide de cardioplégie EuroCollins dans la veine cave inférieure intrahépatique. Assurez-vous que l’injection est correcte en visualisant la décoloration du foie et l’arrêt du rythme cardiaque. À l’aide de ciseaux, accédez à la cavité intrathoracique par une incision diaphragmatique bilatérale à partir de l’abdomen exposé, en prolongeant l’incision céphalique à travers les muscles intercostaux et les côtes.L’utilisation de la soie dentaire du tronc pulmonaire et du cœur à l’aide de la solution EuroCollin est essentielle pour empêcher la micro-thromboembolie de rester à l’intérieur de la circulation coronaire. Après avoir injecté une solution froide d’EuroCollins dans la veine cave inférieure super hépatique conformément au protocole de texte, identifiez la racine de l’aorte et tracez distalement jusqu’à l’aorte descendante. Coupez brusquement l’aorte descendante, en préservant la longueur maximale.Identifiez maintenant le tronc pulmonaire et divisez-le juste à proximité de son point de branche, en préservant la longueur maximale. Ensuite, à l’aide de deux millilitres de solution froide pour cardioplégie EuroCollins, rincez le tronc pulmonaire et le cœur en plaçant un cathéter à ruban en plastique souple dans la lumière du tronc pulmonaire. À l’aide d’une suture en soie 6-0, ligaturez et divisez la veine cave inférieure, la confluence des veines pulmonaires et des branches accessoires de la veine cave supérieure bilatérale.Ensuite, évaluez et disséquez le céphalade cardiaque à partir des attaches le long de la tige principale, des bronches et de la trachée avec soin, afin de ne pas pénétrer dans les voies respiratoires. Avec l’électrocautérisation pointue et bipolaire, disséquez la paroi thoracique, le thymus et le cœur, en le libérant complètement de la souris donneuse. Enfin, à l’aide de ciseaux, coupez la paroi thoracique de l’allogreffe ex vivo à une taille plus petite le long du sternum et des costi latéraux, en prenant soin de ne pas perturber les vaisseaux thoraciques internes.Pour minimiser l’hémorragie après une revascularisation, utilisez l’électrocautérisation bipolaire le long des bords du sternum ostéo-musculo-cutané. Après avoir préparé la souris réceptrice selon le protocole de texte, placez la souris en position couchée et inclinez le membre supérieur droit avec une orientation légèrement inférieure, en formant un angle de 110 degrés entre la tête et le membre supérieur droit. Faites une incision à partir de la ligne médiane le long du bord inférieur droit de la mandibule et étendez l’incision infralatéralement à la région thoracique droite.Avec une dissection contondante à l’aide d’une pince microvasculaire, mobilisez la veine jugulaire externe en libérant circonférentiellement le vaisseau des tissus mous et des adventices. Utilisez l’électrocautérisation pour diviser toutes les branches et enlever le lobe droit de la glande sous-maxillaire avec une dissection nette et une électrocautérisation pour libérer l’espace pour l’allogreffe. Assurez-vous que la veine jugulaire est suffisamment longue pour s’inverser par-dessus un brassard et ligaturez la veine jugulaire externe à l’aide d’une suture en soie 6-0.Ensuite, insérez la veine dans la lumière d’un brassard en polyamide prédécoupé et utilisez une pince microvasculaire bulldog pour fixer le complexe de brassard vasculaire en place. Retournez le brassard et utilisez une suture en nylon 10-0 pour la fixer en place. Lors de l’électrocautérisation bipolaire, divisez le muscle sterno-cléido-mastoïdien droit pour exposer l’artère carotide commune.À l’aide d’une pince et d’une dissection contondante, mobiliser circonférentiellement les artères céphaliques jusqu’au point le plus distal de la région cervicale en enlevant les tissus mous et les adventices environnantes. À l’aide d’une suture en soie 6-0, ligaturez et divisez l’artère carotide commune. Passez l’artère dans la lumière d’un brassard en polyamide prédécoupé et utilisez une pince microvasculaire bulldog pour la fixer en place aussi près que possible de l’entrée thoracique.Divisez ensuite le récipient en distal. Utilisez un dilatateur microchirurgical pour dilater doucement le vaisseau, renversez le brassard et utilisez une suture en nylon 10-0 pour fixer en place. Tout en maintenant des conditions stériles, placez la lumière aortique descendante du donneur sur la construction du brassard artériel sur le receveur et utilisez une suture en nylon 10-0 pour la fixer en place.Façonnez une anastomose similaire entre l’artère pulmonaire du donneur et la construction de la coiffe de la veine jugulaire externe éversée de la souris receveuse. Retirez ensuite la pince microvasculaire Venus puis la pince artérielle. Ensuite, inspectez l’ensemble de l’allogreffe à la recherche d’une hémorragie et, le cas échéant, atténuez le saignement conformément au protocole de texte.Inspectez le greffon et assurez-vous de l’hémostase avant de libérer et de retirer complètement la pince microvasculaire artérielle. Observez le cœur pour identifier les signes de reperfusion, qui seront instantanément apparents avec une expansion rapide du volume des cavités cardiaques et attendez que le perlage commence dans les 30 à 60 secondes. Utilisez une solution saline chaude pour humidifier le cœur, puis placez la paroi thoracique dans une position anatomique afin de ne pas induire de plis ou de tensions sur les anastomoses.Enfin, utilisez des sutures en nylon 6-0 pour fermer la peau de la plaie chirurgicale et effectuez les soins postopératoires selon le protocole textuel. Les étapes les plus critiques de la procédure sont la réalisation d’une anastomose de bout en bout sans suture, le maintien d’une hémostase méticuleuse par électrocautérisation pendant la reperfusion et la perfusion de tous les composants du graphe tissulaire composite. L’allogreffe combinée de VCA et d’organe solide est montée sur le brassard en polyamide préalablement placé dans le cou du receveur, illustrant la position optimale du greffon et le montage méticuleux du vaisseau donneur sur la construction du brassard.La conception de l’allogreffe présentée ici a été approuvée comme réalisable pour maintenir la perfusion à la paroi thoracique avec un impact minimal sur l’animal receveur. Voici les données de survie des souris transplantées syngéniques. La durée moyenne de survie était supérieure à 109 jours, ce qui suggère que l’aspect technique de l’allogreffe transplantée est conçu pour perfuser l’intégralité de la paroi thoracique, du thymus et du cœur.De plus, ce modèle de souris est non seulement réalisable, mais peut être reproduit. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en 90 minutes si elle est réalisée dans une approche à deux équipes. Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler que l’hémostase tout au long de la procédure est primordiale, et la minimisation du pliage lors de l’insertion de l’allogreffe est également très importante.Cette technique ouvre la voie aux chercheurs dans les domaines du transport reconstructif et du transport d’organes solides pour explorer le rôle de la moelle osseuse et du thymus vascularisés en tant qu’adjuvants potentiels au transport d’organes solides pour améliorer la survie de l’allogreffe. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’établir un modèle murin d’allotransport combiné d’organe solide et de composite vascularisé par le biais d’une greffe hétérotopique de déblocage de la paroi thoracique, du thymus et du cœur.

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Le modèle de souris transplantation cardiaque hétérotopique a été prouvée par de nombreux chercheurs d'être une méthode importante pour étudier les mécanismes de rejet et de la réponse immunitaire. Cependant, les techniques impliquées sont toujours difficiles. En modifiant les techniques standard, nous avons eu du succès avec plus de 1000 greffes.

Transplantation cardiaque hétérotopique chez la souris

Le modèle de transplantation cardiaque col de l'utérus de souris est bien adapté pour immunologique ainsi que des études de lésions d'ischémie reperfusion. Nous avons modifié la procédure en utilisant une technique de manchette non-suture et effectué plus de 1.000 transplantations réussies avec cette approche.  Ici, nous fournissons des détails supplémentaires de cette technique pour compléter la vidéo.

Murin col de l&#39;utérus Cœur, la transplantation en utilisant une technique de modification de manchette

Une technique est démontrée pour la procédure microchirurgicale pour la transplantation hétérotopique de cœurs chez la souris, y compris des méthodes simplifiées pour le prélèvement du donneur et l’anastomose des vaisseaux receveurs.

Une méthode modifiée de Heterotopic souris coeur la transplantation

La technique du brassard raccourcit et facilite le modèle de transplantation cardiaque cervicale hétérotopique chez la souris en évitant les anastomoses de suture techniquement difficiles des petits vaisseaux. Les détails techniques présentés dans cet article vidéo devraient permettre aux chercheurs d’établir ce modèle dans leurs laboratoires.

Heterotopic col de l&#39;utérus chez la souris Transplantation cardiaque

Ici, nous décrivons un modèle préclinique de grand animal (porcin) de transplantation orthotopic de coeur qui a été fermement établi et utilisé pour étudier de nouvelles stratégies cardioprotective.

Un modèle porcin préclinique de transplantation orthotopic de coeur

Une technique originale pour la reconstruction de circuit de sang dans un modèle abdominal heterotopic de transplantation de coeur de souris est démontrée.

Reconstruction de circuit sanguin dans un modèle de transplantation de cœur de souris abdominale

Dans le présent protocole, un modèle de transplantation cardiaque de souris est utilisé pour étudier le mécanisme du rejet de l’allogreffe cardiaque. Dans ce modèle de transplantation cardiaque hétérotopique, l’efficacité de l’opération est améliorée et la survie des greffons cardiaques est assurée par une anastomose cervicale de bout en bout de l’implantation cardiaque à l’aide d’une technique de brassard modifiée.

Une technique de brassard modifiée pour un modèle de transplantation cardiaque hétérotopique cervicale de souris

Les modèles de transplantation cardiaque de souris représentent des outils de recherche précieux pour étudier l’immunologie de la transplantation. Le présent protocole détaille la transplantation cardiaque cervicale hétérotopique chez la souris qui implique la mise en place de brassards sur l’artère carotide commune du receveur et le tronc de l’artère pulmonaire du donneur pour permettre le flux sanguin laminaire.

Transplantation cardiaque cervicale hétérotopique de souris utilisant des brassards vasculaires

Ce protocole présente une technique de transplantation hétérotope cervicale hétérotopique, sans brassard, conçue pour permettre la pose fiable d’un second greffon cardiaque hétérotope afin d’évaluer la tolérance immunitaire spécifique au donneur dans des conditions physiologiques avec un minimum d’interférences de matériel étranger.

Modèle cervical sans suture de brassard pour la transplantation cardiaque hétérotope secondaire afin d’évaluer la tolérance immunitaire spécifique au donneur chez la souris

Ce protocole présente une technique simplifiée d’anastomose de suture de bout en côté pour la transplantation de cœur cervical murin, fournissant un modèle robuste et reproductible pour l’étude de l’immunologie de la transplantation.

Transplantation cardiaque hétérotope cervicale de souris utilisant la technique d’anastomose de bout en côté pour étudier l’immunologie de la transplantation

Découvrez un modèle murin innovant de transplantation combinée de paroi thoracique, thymus et cœur pour étudier la tolérance immunitaire et la survie des allogreffes. Cette technique microchirurgicale avance la recherche en transplantation vasculaire.

A Novel Microsurgical Modèle pour Heterotopic, en bloc de la paroi thoracique, Thymus, et Transplantation cardiaque chez la souris (Vidéo) | JoVE Journal

A Novel Microsurgical Modèle pour Heterotopic, en bloc de la paroi thoracique, Thymus, et Transplantation cardiaque chez la souris

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