Un air sec Chromosome Dropping rapide Méthode de préparation adéquate pour les poissons dans les usines

L’objectif global de cette méthode est de préparer des chromosomes végétaux adaptés à la technique de fluorescence en C deux en utilisant des sondes d’ADN à copie unique et à haute copie. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés en cytogénétique et en recherche génomique, telles que la détection des réarrangements chromosomiques, l’ordonnancement de marqueurs génétiques sur les chromosomes et l’analyse comparative entre différentes espèces. Le principal avantage de cette procédure est que la préparation des propagations chromosomiques devient rapide, facile et efficace.

La suspension cellulaire peut être conservée à moins 20 degrés jusqu’à deux mois et utilisée pour la préparation des chromosomes si nécessaire. Nous avons d’abord eu cette idée de cette méthode lorsque nous avons observé que la qualité et le nombre de chromosomes appropriés augmentaient considérablement au cours des jours humains Faire germer 10 à 20 graines d’orge sur deux couches de papier filtre humide dans une boîte de Pétri dans des conditions sombres pendant deux jours à 22 à 24 degrés Celsius après deux jours. Coupez les racines vigoureuses d’une longueur d’un à deux centimètres de la graine à l’aide d’une lame de rasoir.

Ensuite, préparez de l’eau glacée en plaçant une bouteille en verre de 500 millilitres contenant de l’eau froide du robinet dans de l’eau glacée pilée. Aérez l’eau glacée et plongez les extrémités des racines pendant 20 heures pour augmenter la fréquence des cellules en métaphase. Transférez les racines de l’eau dans 50 millilitres d’éthanol fixateur d’acide acétique pour les fixer à température ambiante pendant deux jours après la fixation.

Lavez 10 à 20 racines avec 30 millilitres d’eau glacée du robinet dans un haut-parleur en verre de 50 millilitres pendant cinq minutes à deux reprises. Transférez les racines une à une dans 30 millilitres de tampon de citrate à l’aide d’une pince. Lavez les racines en secouant deux fois le haut-parleur en verre pendant cinq minutes.

Placez ensuite les racines sur du papier filtre pour éliminer complètement le liquide au microscope. Coupez le tissu non méristématique indésirable à l’aide d’une lame de rasoir. L’étape la plus critique de cette procédure consiste à déterminer le temps de digestion approprié qui peut varier entre les différentes espèces.

Ici, jusqu’à 20 pointes de racines sont incubées dans un millilitre de mélange d’enzymes à 37 degrés Celsius pendant environ 50 minutes. Pour ramollir le tissu végétal dans un verre de montre sous un microscope, retirez l’enzyme par pipetage et lavez les extrémités des racines sur de la glace avec cinq millilitres de tampon de citrate de 0,01 molaire pour remplacer l’enzyme résiduelle. Continuez à laver les pointes des racines avec un millilitre d’éthanol à 96 % deux fois soigneusement dans le même verre de montre.

Remplacez ensuite l’éthanol par 10 à 15 microlitres de fixateur fraîchement préparé par pointe. Transférez les pointes des racines avec le fixateur dans un tube de deux millilitres et désintégrez les tiges des racines avec une aiguille de dissection ou une pince. Tapotez 20 fois le tube pour remettre les cellules en suspension et obtenir une suspension cellulaire.

Ensuite, placez deux à trois couches de papier de soie imbibé d’eau sur une plaque chauffante à 50 degrés Celsius. Plongez les lames microscopiques dans de la glace, de l’eau froide du robinet au réfrigérateur pendant 30 minutes. Placez ensuite les lames sur le papier de soie humide, pipetez sept à 10 microlitres de suspension cellulaire et déposez-la à une distance de 20 centimètres sur la lame refroidie placée sur la plaque chauffante.

Poursuivez avec 10 microlitres du mélange d’éthanol d’acide acétique au même endroit que la suspension cellulaire sur la lame, et maintenez la lame sur la plaque chauffante. Au bout de deux minutes, placez la lame sur la plaque chauffante sans le mouchoir humide et laissez-la sécher pendant une minute supplémentaire. Vérifiez les lames à l’aide d’un microscope à contraste facial pour contrôler la qualité de la propagation chromosomique.

Utilisez les lames le jour même ou stockez-les en les immergeant dans de l’éthanol à 96 % dans un bocal à moins 20 degrés Celsius pour prétraiter les lames avant de pêcher. Placez les lames dans un bocal contenant 50 millilitres de deux XSSC pendant cinq minutes à l’aide d’une pince. Transférez les lames dans un bocal coplan contenant 50 millilitres d’acide acétique à 45 % pendant trois à 10 minutes.

Ensuite, transférez les lames dans un bocal coplan contenant 50 millilitres de deux XSSC pendant 10 minutes. Transférez ensuite les lames dans un bocal coplin contenant 50 millilitres de formaldéhyde à 4 %, et plongez les lames pendant 10 minutes pour fixer les chromosomes. Éliminez le formaldéhyde en rinçant les lames trois fois pendant quatre minutes chacune dans un bocal coplin contenant 50 millilitres de deux XSSC.

Ensuite, déshydratez les lames pendant deux minutes dans une série de 70 %, 90 % et 100 % d’éthanol, et séchez les lames en position verticale. Pour chaque lame, préparez une solution d’hybridation de 20 microlitres en utilisant 10 microlitres de forme désionisée amide, cinq microlitres de quatre tampons d’hybridation X, trois microlitres de la sonde et deux microlitres d’eau libre de Dns. Ajouter 20 microlitres de solution d’hybridation par lame et couvrir avec une lamelle de 24 x 32 millimètres.

Après avoir scellé la lamelle de recouvrement avec du ciment en caoutchouc, dénaturez les lames avec des sondes simultanément à 80 degrés Celsius pendant deux minutes sur une plaque chauffante, transférez les lames dans une chambre humide et incuberez-les à 37 degrés Celsius pendant la nuit. En évitant la lumière, retirez les lamelles en rinçant les lames dans un bocal d’accouplement avec deux XSSC. Placez ensuite les lames dans un bocal coplan contenant 55 à 60 degrés Celsius, deux XSSC et incubez pendant 20 minutes.

Ensuite, placez les lames dans deux XSSC dans un bocal coplan pendant deux minutes à température ambiante. Sûr. Déshydratez les lames dans un bocal coplan pendant deux minutes en une série de 70 %, 90 % et 100 % d’éthanol. Air. Séchez les lames et contre-teintez avec du dappy dans un support de montage Antifa, en évitant la lumière intense.

Analysez les lames à l’aide d’un microscope à épifluorescence. Le choix du filtre dépend du fluorochrome utilisé pour le marquage de la sonde si nécessaire. Stockez les lames à quatre degrés Celsius dans des conditions d’obscurité jusqu’à un an.

étalements de métaphase mitotiques préparés par la méthode de préparation rapide des chromosomes à l’air sec sont présentés ici. L’analyse des poissons a été effectuée à l’aide de séquences répétitives et de séquences à copie unique. Les images ont été obtenues par un microscope à épifluorescence avec un ensemble de filtres permettant l’excitation des quatre fluoros correspondants et capturées par une caméra monochrome CCD à haute sensibilité.

L’expérience sur des poissons sur des chromosomes de métaphase mitotiques de hoard et vulgari à l’aide d’une sonde à copie unique et de cinq S-R-D-N-A a révélé des signaux distincts et de haute qualité. L’hybridation du microsatellite CT CTT 10 sur les chromosomes de hordy et de BULBUS a donné lieu à un motif spécifique et distinct. L’expérience sur des poissons sur des chromosomes de métaphase mitotiques de sala serial à l’aide de la sonde PSC 119 two a permis d’obtenir des signaux spécifiques et de haute qualité.

Les avantages évidents de cette approche sont une bonne répartition, un état intact et de nombreux chromosomes en métaphase qui constituent une condition préalable parfaite pour une analyse réussie des poissons. Une fois maîtrisée, cette procédure peut être effectuée en moins de deux heures si elle est effectuée correctement. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de préparer la haute qualité mitotique méta-visage chromosome de tir pour le poisson IDE et former, une hauteur peut être extrêmement dangereuse, toujours à utiliser des graphiques et un capuchon de film lors de l’exécution de ces procédures.