Rideau Colonne Débit: Optimisation de l'efficacité et sensibilité

L’objectif global de cette méthode est d’améliorer l’efficacité et la sensibilité d’une séparation grâce à l’optimisation d’une colonne d’écoulement en rideau. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine des sciences de l’environnement, de la criminalistique et dans les domaines qui nécessitent l’analyse d’échantillons de traces, où une technique de séparation efficace et très sensible est requise. Le principal avantage de cette technique est qu’elle augmente l’efficacité d’une séparation et la sensibilité de l’analyse par rapport aux méthodes conventionnelles de séparation HPLC.

Cette méthode peut fournir un moyen d’augmenter la puissance de séparation, et donc d’accélérer la capacité, de manière économique et rapide. La colonne d’écoulement rideau est un concept nouveau pour les praticiens de la HPLC, cependant, son utilisation n’est pas compliquée. Il suffit d’optimiser les rapports d’écoulement appropriés.

Tout d’abord, préparez des bouteilles d’eau 100 % ultra pure et de 100 méthanol pour les phases mobiles A et B de l’instrument HPLC. Purgez les pompes selon les exigences du fabricant. Après la purge, débranchez la conduite de pompe de la vanne d’injecteur de l’échantillonneur automatique.

Fixez une pièce en T à la ligne déconnectée. À chaque orifice de la pièce en T, fixez un tube de 0,13 millimètre de diamètre intérieur et de 15 centimètres de long. Connectez un tube de la pièce en T à la vanne d’injecteur de l’échantillonneur automatique.

Enfin, réglez la pompe sur un débit d’un millilitre par minute. Tarez deux récipients de collecte vides et étiquetez-les au centre et en périphérie. Pendant 60 secondes, utilisez le récipient central étiqueté pour collecter la phase mobile sortante de la ligne provenant de l’injecteur.

Pesez à nouveau le récipient central et déterminez la masse de la phase mobile collectée. Répétez ce processus en recueillant le flux du port périphérique avec le récipient étiqueté périphérique. Déterminez le pourcentage de débit, ou millilitres par minute, de chaque ligne à l’aide des équations indiquées.

Le port central doit être d’environ 40 % et le port périphérique d’environ 60 %. Si les valeurs diffèrent de plus de deux pour cent, modifiez la longueur ou le diamètre du tube pour ajuster le rapport de débit. Répétez ensuite les étapes de collecte et de calcul.

Ensuite, coupez le débit de la pompe et connectez la conduite d’injecteur à l’orifice central de l’entrée de la colonne. Connectez également la ligne de la pièce en T à l’orifice périphérique de l’entrée de la colonne. Augmentez lentement le débit à un millilitre par minute de phase mobile à 100 % B.To terminez le réglage du système, faites couler 100 % de méthanol à un millilitre par minute pendant 10 minutes pour équilibrer la colonne.

Pour commencer, utilisez un tube pour connecter l’orifice de sortie central au détecteur UV-Vis. Connectez le même type et la même longueur de tube à l’orifice de sortie périphérique de la colonne CF. Ensuite, réglez la pompe sur un débit d’un millilitre par minute.

Tarez deux récipients de collecte vides et étiquetez-les de nouveau, l’un pour la collecte centrale et l’autre pour la collecte périphérique. Pendant 60 secondes, utilisez le récipient étiqueté central pour collecter la phase mobile sortante du détecteur UV-Vis. Peser à nouveau le récipient de collecte pour déterminer la masse de solution éludée.

Répétez ce processus avec l’orifice de sortie périphérique et le récipient de collecte étiqueté. Déterminez maintenant le pourcentage de débit de chaque ligne comme effectué précédemment avec le débit d’entrée. La ligne UV-Vis doit être de 21 % et le débit de sortie périphérique doit être de 79 %.

Si le rapport de débit s’écarte considérablement, ajustez la taille du tube fixé à la sortie du détecteur UV-Vis pour modifier le pourcentage de débit central. Il est important que les rapports d’écoulement entre le central et le périphérique à l’entrée et à la sortie de la colonne suivent ce protocole pour assurer des performances optimales de la colonne d’écoulement en rideau. Les colonnes à technologie d’écoulement actif ont été développées à l’aide d’une conception de fritte spécialisée dans les raccords d’extrémité de colonne multiports pour surmonter l’hétérogénéité du lit de colonne et améliorer les performances de séparation.

Un mélange d’essai contenant du phénétiole, du butylbenzène et du pentylbenzène a été analysé sur des colonnes conventionnelles de 4,6 et 2,1 millimètres de diamètre interne, et sur une colonne d’écoulement à rideau de 4,6 millimètres de diamètre interne. La séparation du mélange illustre l’amélioration des performances en termes d’efficacité et de sensibilité d’une colonne d’écoulement en rideau par rapport aux colonnes standard. L’utilisation d’une colonne d’écoulement à rideau a augmenté le signal pour le butylbenzène malgré la réduction du volume de crête.

Une fois maîtrisée, cette technique peut être mise en place en moins d’une demi-heure si elle est correctement exécutée. La configuration de la colonne d’écoulement en rideau peut être réutilisée à l’infini, mais les rapports de débit doivent être vérifiés régulièrement. Lors de cette procédure, il est important de se rappeler d’être aussi proche que possible des rapports de débit prescrits.

La colonne d’écoulement rideau a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de la HPLC pour repousser les limites des colonnes et des instruments UPLC afin d’obtenir une analyse plus rapide des échantillons sans compromettre les performances de séparation. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez comprendre l’importance des colonnes d’écoulement en rideau, car elles peuvent fournir une meilleure séparation que les colonnes HPLC conventionnelles.