Name: Rideau Colonne Débit: Optimisation de lefficacité et sensibilité (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: Découvrez l'optimisation des colonnes à flux rideau pour améliorer l'efficacité et la sensibilité en chromatographie HPLC. Cette méthode avancée facilite l'analyse d'échantillons traces en sciences environnementales et forensiques.

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L’un des auteurs (DK) accuse réception d’une bourse australienne de troisième cycle.

Attention: S&#39;il vous plaît se référer à des fiches de données de sécurité (FDS) pour tous les matériaux et réactifs avant utilisation (c. -à- FS pour le méthanol). Assurer l&#39;utilisation de toutes les pratiques de sécurité appropriées lors de la manipulation des solvants et chromatographie liquide haute performance (HPLC) éluant. Veiller à l&#39;utilisation appropriée des contrôles techniques de HPLC analytique équilibre et détecteur instrumentation, et d&#39;assurer l&#39;utilisation des équipements de protection individuelle (lunettes de sécurité, gants, blouse, pantalon de longueur, et des chaussures fermées). Remarque: Ce protocole contient des instructions sur la façon d&#39;utiliser une colonne de CF sur un système de CLHP couplée à un détecteur UV-Vis. Le protocole a été écrit en supposant que le lecteur a des connaissances de base et de l&#39;expérience en chromatographie. 1. Mise en place d&#39;HPLC Instrument Remarque: Cette section peut être modifiée pour répondre aux besoins des analystes, à savoir, le choix des solvants, détecteur de longueur d&#39; onde et le débit quisont appropriées pour l&#39;échantillon d&#39;intérêt. <ol><li> Préparer l&#39;instrument de HPLC avec 100% d&#39; eau ultrapure (par exemple, l&#39; eau Milli-Q) pour la ligne A et 100% de méthanol pour la ligne B comme phase mobile et purger les pompes selon les exigences du fabricant. </li><li> Réglez le détecteur UV-Vis à 254 nm. </li><li> Choisissez soit un mode de répartition du flux pré-injection de set-up, ou un double débit de la pompe set-up. Pour le mode split-flow passer à l&#39;étape 2, pour le mode de pompe double passez à l&#39;étape 3. </li></ol> Configuration du système 2. Split-débit <ol><li> Débrancher la ligne de pompe de la valve d&#39;injection de l&#39;échantillonneur automatique. </li><li> Joindre une pièce en T à la ligne de la pompe. </li><li> Fixer un morceau de 0,13 mm id tube de 15 cm à chaque port de la pièce en T. </li><li> Connecter un tube de la pièce en T à l&#39;injecteur valve d&#39;auto-échantillonneur. </li><li> Réglez la pompe à 1,0 ml min -1. </li><li> Avant la connexion des lignes de pompe à l&#39;entrée de la colonne CF, régler le rapport de segmentation de l&#39;écoulement à 40%: 6<html> 0% (ligne médiane: ligne périphérique) comme suit dans l&#39;étape 2.7. </li><li> Tuning du rapport d&#39;entrée CF sur le système d&#39;écoulement divisé <ol><li> Mesurer la masse de deux collecte des récipients vides en utilisant une balance analytique et étiqueter un récipient collecteur central et une autre périphérique (un pour la ligne de l&#39;auto-échantillonneur pour centrer le port et l&#39;autre pour la ligne de la pièce en T au port périphérique) . </li><li> Pour 1,0 min, recueillir la phase mobile sortant de la ligne venant de l&#39;injecteur (au point qui sera relié à la colonne) dans le récipient de collecte, dont la masse a été mesurée en 2.7.1. </li><li> Peser le récipient de collecte à l&#39;échelle analytique et déterminer la masse de phase mobile recueillies. </li><li> Répéter les étapes 2.7.2 à 2.7.3 pour l&#39;éluant sortant de la ligne à partir de la pièce en T qui doit être raccordé au port périphérique. </li><li> Déterminer le pourcentage d&#39;écoulement (ml.min -1) à partir de chaque ligne d&#39;écoulement selon les équations suivantes: 1 &quot;src =&quot; / files / ftp_upload / 53471 / 53471eq1.jpg &quot;/&gt; </li><li> Réglez le rapport de débit à 40%: 60% (± 2%) (ligne de l&#39; injecteur à orifice central: la ligne de T-pièce au port périphérique). Si la ligne de l&#39;injecteur vers le centre du pourcentage d&#39;écoulement d&#39;orifice est supérieure à 40%, d&#39; augmenter la perte de charge en diminuant le diamètre intérieur du tube, ou en augmentant sa longueur. Si la ligne de l&#39; injecteur central de pourcentage d&#39;écoulement d&#39;orifice est inférieur à 40%, d&#39; augmenter le diamètre interne du tube ou de diminuer la longueur du tube. </li><li> Une fois que les rapports de débit sont réglés tourner la pompe, hors tension. </li><li> Connecter la ligne de l&#39;injecteur à l&#39;orifice central de l&#39;entrée de la colonne et la ligne de la pièce en T vers le port périphérique de l&#39;entrée de la colonne. </li><li> Rampe lentement le débit à 1,0 ml min -1 à 100% en ligne B. </li><li> Équilibrer la colonne (4,6 mm de longueur id x 100 mm) en laissant100% de methanol (ligne B) de la phase mobile de circuler à travers la colonne à 1,0 ml min - 1 pendant 10 min. Ce temps est mis à l&#39;échelle en fonction des dimensions des autres colonnes, l&#39;utilisateur peut employer. </li><li> Pour le réglage de la sortie CF passez à l&#39;étape 4. «Tuning du flux de sortie CF &#39;. </li></ol></li></ol> Configuration 3. Système de pompe double <ol><li> Brancher la pompe du système de HPLC à l&#39;injecteur, puis connectez la ligne de l&#39;injecteur à l&#39;orifice d&#39;entrée central de la colonne. </li><li> Brancher la pompe supplémentaire directement au port périphérique d&#39;entrée de la colonne. Notez que cette deuxième pompe-circuite l&#39;injecteur. </li><li> Rampe du débit de la pompe du système connecté au port central de débit à 0,4 ml min -1 (représentant 40% du débit total de 1,0 ml min -1) à 100% de méthanol (ligne B). </li><li> En même temps que l&#39; étape 3.3, augmente ou diminue la vitesse de la pompe à écoulement périphérique de 0,6 ml min -1 (représentant 60% du débit total de1,0 ml min -1) à 100% de méthanol (ligne B). </li><li> Équilibrer la colonne (4,6 mm de longueur id x 100 mm) en permettant à 100% de methanol (ligne B) de la phase mobile à circuler à travers la colonne à 1,0 ml min - 1 pendant 10 min. Ce temps est mis à l&#39;échelle en fonction des dimensions des autres colonnes, l&#39;utilisateur peut employer. </li><li> Pour le réglage de la sortie CF passez à l&#39;étape 4. «Tuning du flux de sortie CF &#39;. </li></ol> 4. Tuning des FC Outlet Débit <ol><li> Connecter le port de sortie centrale vers le détecteur UV-visible à l&#39;aide d&#39;un morceau de 0,13 mm id tube 15 cm. </li><li> Connecter un morceau de 0,13 mm id tube de 15 cm de l&#39;orifice de sortie périphérique de la colonne FC. </li><li> Peser la masse de deux navires de collecte vides sur la balance analytique et étiqueter un récipient central et l&#39;autre périphérique. </li><li> Pour 1,0 min, recueillir la phase mobile sortant du détecteur (écoulement central) UV-Vis dans l&#39;étiquette de récipient de collecte central, dont la masse a été mesurée en 4.2. </li><li> Peser le récipient de collecte contenant l&#39;éluant recueilli à l&#39;échelle analytique et déterminer la masse de phase mobile recueillies. </li><li> Répéter les étapes 04.04 à 04.05 pour l&#39;éluant sortant de la ligne à partir de l&#39;orifice de sortie périphérique. </li><li> Déterminer le pourcentage de l&#39;écoulement de chaque ligne d&#39;écoulement selon les équations suivantes: <img alt="équation 2" src="/files/ftp_upload/53471/53471eq2.jpg" /></li><li> Régler le rapport d&#39;écoulement à 21%: 79% (± 2%) (débit de sortie central de l&#39; UV-Vis: Débit de sortie périphérique de la ligne). Si le pourcentage d&#39;écoulement central de l&#39;UV-Vis est supérieure à 21%, d&#39; augmenter la chute de pression en diminuant le diamètre intérieur du tube fixé à la sortie du détecteur UV-Vis, ou en augmentant sa longueur. Si le pourcentage d&#39;écoulement central de l&#39;UV-visible est inférieure à 21%, d&#39;augmenter le diamètre intérieur du tube fixé à la sortie du détecteur UV-Vis, ou diminuer la longueur du tube. A chaque fois que la longueur du tube a été changé, répéterétapes 04/03 à 04/07. Remarque: La colonne CF en mode id 2.1 mm «virtuel» est prêt pour l&#39;analyse. </li></ol>

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</ol>

Ce travail a été soutenu par l’UWS et ThermoFisher Scientific.

Cette étude a porté sur l&#39;analyse inter-laboratoires des colonnes de chromatographie des FC pour tester les performances d&#39;analyse en termes d&#39;efficacité et de sensibilité. La colonne CF a été mis en place avec un système de pompage double comme décrit dans la section «3. Système de pompe à double mis en place &quot;pour obtenir un rapport d&#39;écoulement de 40:60 (centre: périphérique) à l&#39;entrée de la colonne FC. Le 40:60 (centre: périphérique) rapport de débit a été atteint en réglant le débit de cha...

Au cours des dernières années, la technologie de colonne pour chromatographie liquide haute performance (HPLC) a beaucoup progressé; les capacités de pointe ont considérablement augmenté en grande partie grâce à l&#39;utilisation de tailles de particules plus petites et les particules de coquille de base plus efficaces. Depuis les séparations sont généralement plus efficaces, un flux sur l&#39; effet a été une augmentation de la sensibilité depuis les pics sont maintenant plus nette et donc plus grand 1-8. Néanmoins, l&#39;hétérogénéité radiale de lit est toujours un facteur limitant dans l&#39;exécution de toutes les colonnes, mais ce n&#39;est pas une nouvelle histoire depuis chromatographistes ont connu depuis de nombreuses années. Lits de colonne sont hétérogènes tant dans la direction radiale 12/09, et le long de la colonne axe 10,12-15. L&#39;effet de paroi est particulièrement un important contributeur à la perte de 7,16-18 performance de séparation. Shalliker et Ritchie 7 récemment passé en revue les aspects de lit de la colonne hétérogénéité et donc ce ne sont pas nécessairement discussed ici plus loin. Bien qu&#39;il suffise de dire, que la variation de densité de tassement de lit colonne et les effets de paroi conduisent à une déformation de la fiche de soluté, de telle sorte que les bandes éluent à travers la colonne dans les bouchons qui ressemblent partiellement remplis soupe bols plutôt que de minces disques solides plates 7 qui sont généralement représenté dans les textes de l&#39;enseignement de base. Quand les expériences ont été réalisées de telle sorte que la migration des solutés à travers le lit peut être visualisé les profils de bouchon à l&#39;intérieur de la colonne ont été partiellement creuse et la section de queue de la bande est en grande partie l&#39;élément de paroi de la prise d&#39;échantillon. Le résultat final est que cela prend beaucoup plus de plaques pour séparer ces bouchons «partiellement creux» que ce qui serait nécessaire si les disques ont été solides et plat 12,14,17. Pour surmonter la bande d&#39; élargir les questions associées à des effets de paroi et la variation de densité de tassement radiale, une nouvelle forme de technologie de colonne appelée Active Technology Flow (AFT) a été conçu 7,19. Le but de cette conception étaitpour éliminer les effets de paroi à travers la séparation physique du solvant d&#39; élution le long de la zone de paroi, de celle de la phase mobile d&#39; élution dans la zone centrale radiale de la colonne 19. Il existe deux principaux types de colonnes AFT; Segmented Flow (PSF) colonnes parallèles et flux de rideau (CF) colonnes 7. Depuis ce protocole vise à l&#39;utilisation et l&#39;optimisation des colonnes des FC, des colonnes PSF ne seront pas examinées plus avant. Rideau Flow (CF) Rideau Flow (CF) formats de colonne utilisent embouts AFT à la fois l&#39;entrée et la sortie de la colonne. embouts AFT se composent d&#39;un fritte annulaire situé à l&#39;intérieur d&#39;un raccord multiport. La fritte est constituée de trois parties: une partie centrale radiale poreuse qui est aligné avec l&#39;orifice central de l&#39;embout, une partie extérieure poreuse qui est aligné avec le port de périphérique (s) de l&#39;embout et une bague imperméable, sépare les deux parties poreuses empêchant toute croix-Flow entre les régions centrales et extérieures radiales de la 19 fritte. La figure 1 illustre la conception de la fritte AFT et la figure 2 illustre le format de colonne FC. Dans ce mode de fonctionnement (CF), l&#39;échantillon est injecté dans l&#39;orifice central radial du raccord d&#39;entrée, tandis que la phase mobile supplémentaire est introduit à travers l&#39;orifice périphérique de l&#39;entrée vers «rideau» de la migration des solutés à travers la zone centrale radiale de la colonne. D&#39;où l&#39;échantillon pénètre dans le lit dans la zone centrale radiale de la colonne avec la zone extérieure de la colonne ayant une phase mobile seulement passée à travers elle. Des études ont montré que le rapport volumétrique de débit d&#39;environ 40:60 (central: port périphérique) pour l&#39;entrée embout d&#39;une colonne de 4,6 mm de diamètre interne (id) est 6,7,16 optimale. La sortie AFT de la colonne de CF permet le réglage de l&#39;écoulement central et périphérique à leur part relative et peut varier à presque toutes les rati souhaitéeo grâce à la gestion de la pression. L&#39;optimisation d&#39;une colonne de CF peut considérablement améliorer divers aspects fonctionnels de la technologie de colonne, tels que l&#39;efficacité de la séparation ou de la sensibilité de détection. De cette manière , un «mur», «infini diamètre» ou la colonne «virtuelle» est établie 6,10,18,20. Le but de colonnes des FC est de gérer activement la migration de l&#39;échantillon à travers la colonne pour empêcher l&#39;échantillon d&#39;atteindre la zone de paroi. Ainsi, la concentration de soluté à la sortie du détecteur est maximisée, ce qui augmente la sensibilité d&#39;environ 2,5 fois plus grand que le format de colonne classique pour l&#39;utilisation de rayons ultraviolets (UV) , la détection 16, et encore plus pour l&#39;utilisation de la détection par spectrométrie de masse 6. colonnes des FC sont idéales pour les échantillons de faible concentration, car la sensibilité de détection est augmentée. En outre, elles sont idéales lorsqu&#39;il est couplé à DÉBIT détecteurs limités, tels que le spectromètre de masse (MS) 6. un Acolonne FT dans un format identifiant de 4,6 mm, par exemple, peut être réglé pour délivrer le même volume de solvant à un détecteur comme une colonne de format identifiant norme 2,1 mm lorsqu&#39;il est utilisé dans les mêmes vitesses linéaires, en ajustant la sortie de flux central à 21%. De même, la colonne AFT pourrait également être réglé pour délivrer le même volume de charge à un détecteur comme une colonne id 3,0 mm, en ajustant la sortie de flux central à 43%. En fait , tout format de colonne «virtuel» pourrait être produit en fonction de l&#39;exigence analytique 6,18,22. L&#39;utilisation de ces embouts spécialement conçus à l&#39;entrée et la sortie assure qu&#39;une colonne de paroi moins vrai est établie. Il y a deux façons de mettre en place le système de distribution de solvant aux ports centraux et périphériques de l&#39;entrée:. Split system-flux 6 et deux 6,7 système de pompe figure 3 illustre chacun de ces systèmes de CF set ups. Système Split-débit jena split system-flow (figure 3A) le débit de la pompe menant à l&#39;injecteur est pré-injecteur split en utilisant un mort zéro volume de pièce en T, où un flux de phase mobile d&#39;écoulement est relié à l&#39;injecteur, qui est ensuite relié à la orifice central de l&#39;embout d&#39;entrée de la colonne. Le second flux de phase mobile d&#39;écoulement passe par l&#39;injecteur et est connecté au port périphérique à l&#39;entrée de la colonne. Au cours de la séparation de l&#39; écoulement, le pourcentage de flux d&#39;écoulement est ajusté à 40/60 (centre: périphérique) avant que les lignes sont raccordées à la colonne, soit de l&#39; injecteur au centre et à la pompe périphérique. Système à deux de la pompe La colonne CF requiert deux courants d&#39;écoulement à l&#39;entrée embout de la colonne. Selon le type d&#39;échantillonneur automatique / injecteur de l&#39;instrument de HPLC, split-débit mis en place ne peut pas être possible, et ainsi CF peut alors être réalisé par 2 pompes (figure 3B) 21. Chaque pompe est allouée et reliée soit à l&#39;orifice central ou périphérique et le débit est réglé pour représenter 40% du débit pour le port central et 60% pour le port périphérique. Par exemple, si le débit total est de 1,0 ml min -1, le débit de la pompe centrale est réglée à 0,4 ml min - 1 et la pompe périphérique est réglé à 0,6 ml min -1. Le choix du mode de fonctionnement est largement dépendante de l&#39;instrumentation par HPLC et le mode de fonctionnement chromatographique. Par exemple, dans certains autosamplers un changement de pression entre l&#39;échantillon position de charge et de l&#39;échantillon injecter position peut se produire perturber le rapport d&#39;écoulement divisé et donc dans ce cas une double pompe mis en place serait recommandé pour des performances optimales des FC. Quel que soit le système de distribution de solvant mis en place choisie pour l&#39;entrée de la colonne CF, l&#39;optimisation de sortie CF reste le même. L&#39;orifice central de sortie de la colonne CF est fixé au détecteur ultraviolet-visible (UV-VIS) avec le Smalde peur que le volume possible de tubes pour réduire au minimum les effets de post-colonne volume mort. Depuis, les colonnes des FC émulent colonnes étroites calibre, volume mort entre la sortie de la colonne et le détecteur est préjudiciable à la performance de séparation de la colonne CF. Il est essentiel d&#39;assurer la plus petite quantité de volume du tube entre l&#39;orifice central et le détecteur UV-Vis pour minimiser les effets du volume mort, tels que l&#39;élargissement de bande, une perte de l&#39;efficacité et de la sensibilité. Par conséquent, l&#39;utilisation de tubes de forage étroit (0,1 mm id) est conseillé pour permettre facilement les ajustements de pression sans ajouter de volume mort inappropriée. Tubing est également attaché au port périphérique et dirigé à perdre. A la sortie de la colonne CF, le rapport de segmentation peut être ajusté à n&#39;importe quel rapport qui correspond à la fin de l&#39;analyste. Quand un id CF de 4,6 mm est utilisé, par exemple, il est souvent commode de régler le rapport comme étant soit 43:57 ou 21:79 (centre: périphérique) pour émuler une colonne «virtuelle» de 3,0 mm id ou colonne id 2,1 mm,avec respect. De cette façon, les performances de séparation est facilement banc marqué. Le rapport de segmentation est mesurée par pesée de la quantité d&#39;écoulement sortant du détecteur qui est relié à l&#39;orifice central et le débit sortant du port périphérique pendant une période de temps. Le flux de pourcentage à travers chaque orifice peut alors être déterminée et le rapport peut être ajusté en modifiant la longueur du tube attaché ou en utilisant un tube ayant un diamètre intérieur différent (id). Ce protocole vidéo détaille les procédures d&#39;exploitation et d&#39;optimisation d&#39;une colonne CF pour une meilleure performance chromatographique.

<table><tbody><tr><td>Pompe</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td> supplémentaire <td>requise si le système CF à 2 pompes doit être utilisé.</td></tr><tr><td>Colonne HPLC à flux rideau</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Non défini</td><td>Bientôt commercialisé</td></tr><tr><td>Méthanol</td><td>N’importe quelle marque</td><td></td> Tube <td>PEEK de qualité HPLC</td></tr><tr><td>N’importe</td><td>quelle marque</td><td></td><td>Différentes longueurs et diamètre intérieur.</td></tr><tr><td>Coupe-tube PEEK</td><td>N’importe quelle marque</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Balance analytique</td><td>N’importe quelle marque</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chronomètre</td><td>N’importe quelle marque</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Récipients de collecte d’éluants</td><td>N’importe quelle marque</td><td></td><td>Les flacons d’échantillons de 1 à 2 ml peuvent être utilisés comme récipients de collecte d’éluants</td></tr><tr><td>Pièce en T</td><td>N’importe quelle marque</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

rideau colonne débit: optimisation de l&#39;efficacité et sensibilité

Curtain Flow Column: Optimization of Efficiency and Sensitivity

La technologie d’écoulement actif (AFT) est une forme de technologie de colonne qui augmente les performances de séparation d’une colonne HPLC grâce à l’utilisation d’un ou plusieurs embouts multiports spécialement conçus. Les colonnes Curtain Flow (CF) appartiennent à la suite de colonnes AFT, plus précisément la colonne CF est conçue de manière à ce que l’échantillon soit injecté dans la région centrale radiale du lit et qu’un flux rideau de phase mobile entourant l’injection de soluté empêche la dispersion radiale de l’échantillon sur la paroi. La colonne fonctionne comme une colonne de « diamètre infini ». L’objectif de la conception est de surmonter l’hétérogénéité radiale du lit de colonne, et en même temps de maximiser la charge d’échantillon dans la région centrale radiale du lit de colonne, ce qui permet d’augmenter la sensibilité de détection. Le protocole décrit ici décrit la configuration du système et de la colonne CF ainsi que le processus de réglage d’une colonne « virtuelle » de diamètre infini optimisée.

Colonnes AFT ont été développés en utilisant une conception de fritte spécialisée (figure 1) dans la colonne multiport embouts pour surmonter la colonne lit hétérogénéité et d&#39; améliorer les performances de séparation. Une étude inter-laboratoire sur les performances de séparation des colonnes de chromatographie FC (figure 2) a été réalisée avec un double système de pompe mis en place (figure 3B) comme décrit dans la section 3 de ce ...

Ici, nous présentons un protocole pour le fonctionnement et l’optimisation de la colonne AFT (Active Flow Technology) en mode Curtain Flow (CF) pour des performances de séparation améliorées.

Rideau Colonne Débit: Optimisation de l&#39;efficacité et sensibilité

Active Flow Technology (AFT) is a form of column technology that increases the separation performance of a HPLC column through the use of a specially ...

L'objectif général de cette méthode est d'améliorer l'efficacité et la sensibilité d'une séparation grâce à l'optimisation d'une colonne à écoulement de rideau. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine des sciences de l'environnement, de la criminalistique et dans les domaines nécessitant une analyse d'échantillons en traces, où une technique de séparation efficace et hautement sensible est requise. Le principal avantage de cette technique est qu'elle augmente l'efficacité de la séparation ainsi que la sensibilité de l'analyse par rapport aux méthodes conventionnelles de séparation par HPLC.Cette méthode peut offrir un moyen d'augmenter la puissance de séparation, et donc la capacité de vitesse, de manière économique et efficace en termes de temps. La colonne à écoulement en rideau est un concept nouveau pour les praticiens de la CLHP ; toutefois, son utilisation n'est pas compliquée. Elle nécessite simplement l'optimisation de rapports de débit appropriés.Tout d'abord, préparez des bouteilles d'eau ultra-pure à 100 % et de méthanol à 100 % pour les phases mobiles A et B de l'instrument de HPLC. Purgez les pompes conformément aux exigences du fabricant. Après la purge, débranchez la ligne de pompe de la vanne d'injection du distributeur automatique.Fixer un raccord en T à la ligne déconnectée. Relier à chaque orifice du raccord en T un tube de 0,13 millimètre de diamètre interne et de 15 centimètres de longueur. Connecter un des tubes du raccord en T à la vanne d'injection de l'échantillonneur automatique.Enfin, régler la pompe à un débit de un millilitre par minute. Tarer deux récipients de collecte vides et les étiqueter comme étant central et périphérique. Pendant 60 secondes, utiliser le récipient étiqueté central pour recueillir la phase mobile sortante provenant de la ligne en provenance de l'injecteur.Repeser le récipient central et déterminer la masse de la phase mobile recueillie. Répéter ce processus en collectant l'écoulement du port périphérique dans le récipient marqué « périphérique ». Déterminer le pourcentage d'écoulement, ou les millilitres par minute, provenant de chaque ligne à l'aide des équations indiquées.Le port central doit représenter environ 40 pour cent, et le port périphérique environ 60 pour cent. Si les valeurs diffèrent de plus de deux pour cent, modifiez la longueur ou le diamètre du tube pour ajuster le rapport de débit. Répétez ensuite les étapes de collecte et de calcul.Ensuite, arrêtez le débit de la pompe et reliez la ligne de l'injecteur au port central de l'entrée de la colonne. Connectez également la ligne du raccord en T au port périphérique de l'entrée de la colonne. Augmentez lentement le débit jusqu'à un millilitre par minute de phase mobile B à 100 %. Pour terminer le réglage du système, faites circuler 100 % de méthanol à un millilitre par minute pendant 10 minutes afin d'équilibrer la colonne.Pour commencer, utilisez un tube pour relier le port de sortie central au détecteur UV-Vis. Connectez un tube du même type et de la même longueur au port de sortie périphérique de la colonne CF. Ensuite, réglez la pompe à un débit de un millilitre par minute.Placer deux récipients de collecte vides sur la balance et étiqueter à nouveau l'un pour la collecte centrale et l'autre pour la collecte périphérique. Pendant 60 secondes, utiliser le récipient étiqueté central pour recueillir la phase mobile sortant du détecteur UV-Vis. Peser à nouveau le récipient de collecte afin de déterminer la masse de la solution élutionnée.Répétez ce processus avec le port de sortie périphérique et le récipient de collecte étiqueté. Déterminez maintenant le pourcentage d'écoulement provenant de chaque ligne, comme effectué précédemment avec le débit d'entrée. Le débit de la ligne UV-Vis doit être de 21 pour cent, et le débit de sortie périphérique doit être de 79 pour cent.Si le rapport de débit s'écarte significativement, ajuster la taille du tube raccordé à la sortie du détecteur UV-Vis afin de modifier le pourcentage de débit central. Il est important que les rapports de débit entre le débit central et le débit périphérique à l'entrée et à la sortie de la colonne suivent ce protocole afin d'assurer un fonctionnement optimal de la colonne à écoulement de rideau. Les colonnes à technologie d'écoulement actif ont été développées à l'aide d'un dispositif de fritte spécialisé dans les raccords terminaux à multiples orifices afin de surmonter l'hétérogénéité du lit de la colonne et d'améliorer les performances de séparation.Un mélange témoin contenant du phénéthole, du butylbenzène et du pentylbenzène a été analysé sur des colonnes classiques de 4,6 et 2,1 millimètres de diamètre interne, ainsi que sur une colonne à flux de rideau de 4,6 millimètres de diamètre interne. La séparation du mélange illustre la performance améliorée, en termes d'efficacité et de sensibilité, d'une colonne à flux de rideau par rapport aux colonnes standards. L'utilisation d'une colonne à flux de rideau a accru le signal du butylbenzène malgré le volume de pic réduit.Une fois maîtrisée, cette technique peut être mise en place en moins de trente minutes si elle est correctement réalisée. Le montage de la colonne à écoulement en rideau peut être réutilisé plusieurs fois, mais les rapports d'écoulement doivent être vérifiés régulièrement. Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de s'efforcer de respecter au plus près les rapports d'écoulement prescrits.La colonne à écoulement en rideau a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de la CPGHP afin qu'ils puissent repousser les limites des colonnes et des instruments UPLC pour obtenir une analyse des échantillons plus rapide sans compromettre la performance de séparation. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez comprendre l'importance des colonnes à écoulement en rideau, car elles peuvent offrir une meilleure séparation que les colonnes CPGHP conventionnelles.

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