La collecte du lait dans le rat en utilisant tubes capillaires et estimation de la teneur du lait en matières grasses en Creamatocrit

L’objectif général de cette procédure est de décrire comment recueillir manuellement le lait d’un rat allaitant pour l’analyse en laboratoire de la composition du lait. Cette méthode peut être utilisée pour aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la santé maternelle et infantile, telles que la façon dont l’alimentation maternelle peut influencer la composition du lait. Le principal avantage de cette technique est qu’elle peut être réalisée par un seul enquêteur sans aucun équipement spécialisé d’aspiration ou d’aspiration.

No.To commencer, séparez la mère de sa progéniture pendant au moins cinq minutes avant la traite. Ensuite, rassemblez tous les matériaux nécessaires à la procédure de traite, comme indiqué ici. Placez ensuite un coussin de paillasse absorbant sur une table d’opération chauffée ou utilisez un coussin chauffant séparé pour éviter les pertes de chaleur du barrage pendant la procédure de traite.

Ensuite, vérifiez le système d’anesthésie afin de vous assurer que le système dispose de suffisamment d’oxygène et d’isofluor avant la procédure. Fixez ensuite le masque qui sera utilisé pour l’induction initiale de l’anesthésie à l’appareil et placez le masque d’entretien à proximité. Ouvrez le réservoir d’oxygène et réglez le débit sur un litre par minute.

Ensuite, allumez le débit de fluor et réglez son débit à 5 %Une fois anesthésié, basculez le barrage sur le masque d’entretien. Confirmez un niveau d’anesthésie suffisant en vérifiant l’absence de réflexe de pédale. Placez ensuite le barrage en position couchée sur le coussin de banc absorbant.

Réduire le débit de fluor à deux à 3 %Surveillez continuellement le barrage tout au long de la procédure et ajustez le débit de fluor si nécessaire pour éviter la douleur et la dépression respiratoire. Ensuite, utilisez une lingette imbibée d’alcool stérile ou un tampon nettoyant pour désinfecter une fiole d’ocytocine à l’aide d’une seringue d’un millilitre équipée d’une aiguille de calibre 25, prélevez 0,1 millilitre d’ocytocine. Insérez ensuite l’aiguille dans le quadrant inférieur droit de l’abdomen de la digre, l’aiguille pointant vers la tête à un angle de 15 à 30 degrés, à environ 0,5 centimètre de profondeur.

Tirez sur le piston pour assurer une pression négative avant l’injection. Si aucun liquide n’est aspiré, injectez l’ocytocine et jetez immédiatement l’aiguille et la seringue dans un récipient à risque biologique. Attendez environ cinq à 15 minutes pour que l’ocytocine stimule le lait.

Lâchez-vous pendant ce temps, choisissez les tets à partir desquels le lait sera recueilli. Utilisez des tondeuses pour enlever délicatement la fourrure autour des tets sélectionnés, car la fourrure peut causer des difficultés dans le prélèvement des échantillons. Nettoyez ensuite les tets à l’eau tiède.

Préparez au moins deux sites, car plus d’un site peut être nécessaire pour la collecte du lait. Une fois que le lait est descendu, pressez doucement la base du Tet pour expulser manuellement le lait. Pour la collecte, recueillez les gouttelettes de lait dans un tube capillaire de 50 microlitres.

Une fois plein, versez le lait du tube capillaire dans un microtube à centrifuger stérile en touchant l’extrémité du tube qui a servi à aspirer le lait du trayon vers le côté du tube à micro-centrifuger. Ensuite, utilisez une aiguille de calibre 18 attachée à une seringue d’un millilitre pour souffler tout lait qui n’a pas été aspiré dans le tube. Répétez la collecte du lait et transférez-la dans le tube de micro-centrifugation jusqu’à ce qu’une quantité suffisante de lait ait été recueillie.

Pour l’analyse choisie, essayez de limiter la durée totale de l’anesthésie du barrage à moins d’une heure. Lorsque la traite est terminée, coupez le flux de fluor et d’oxygène et retirez le masque de la digue. Continuez à surveiller le barrage jusqu’à ce qu’il ait repris une conscience suffisante pour maintenir le sternal couché.

Si aucune autre analyse n’est nécessaire, soufflez le lait à moins 80 degrés. Pour vous préparer à la mesure CCR, chargez 15 à 20 microlitres de lait dans un tube de micro-hématocrite directement à partir du Tet. Scellez ensuite l’extrémité du tube avec un mastic à l’argile.

Placez le tube capillaire dans la toupie d’hématocrite avec la bosse d’étanchéité pointant vers l’extérieur et assurez-vous que la centrifugeuse est équilibrée. Ensuite, faites tourner l’échantillon à 13 700 fois G pendant deux minutes. Une fois que l’échantillon a fini de tourner, retirez le tube de la centrifugeuse.

Observez la séparation de l’échantillon en une couche de crème et une couche transparente. Mesurez et notez la longueur totale du liquide dans le tube et la longueur de la couche de graisse ou de crème à l’aide d’une règle ou d’un pied à coulisse. Utilisez ces informations pour calculer le CCR comme décrit dans le protocole textuel ci-joint afin de déterminer comment l’alimentation pendant la grossesse et l’allaitement affecte la composition du lait.

Des échantillons de lait ont été prélevés au sevrage chez des mères de Worcester qui sont nourries soit avec une teneur élevée en protéines, soit avec une teneur élevée en fibres prébiotiques, soit avec un régime contrôlé. Le lait prélevé sur les mères suivant un régime riche en fibres prébiotiques avait l’hématocrite C numériquement le plus élevé, une mauvaise concentration et une valeur énergétique. Cependant, ces différences n’étaient pas statistiquement significatives en ce qui concerne les protéines.

Cependant, le lait prélevé sur les mères avec le régime riche en protéines avait la concentration en protéines la plus élevée. Encore une fois, cette différence n’était pas statistiquement significative. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en moins d’une heure à partir du point initial d’anesthésie du barrage si elle est effectuée correctement.

Lorsque vous tentez cette procédure, il est important de se rappeler de surveiller continuellement le barrage pour s’assurer qu’il n’y a pas de dépression respiratoire pendant l’anesthésie après cette procédure. D’autres méthodes comme la spectrométrie de masse peuvent être utilisées pour répondre à des questions supplémentaires telles que la détermination de la composition en oligosaccharides du lait. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’effectuer la collecte manuelle du lait d’un rat en lactation.