Orthotopique Hind Limb transplantation chez la souris

L’objectif général de cette vidéo pédagogique est de présenter un modèle murin de transplantation orthotopique des membres postérieurs à l’aide d’une technique de brassard sans suture pour l’anastomose super-microvasculaire. Les modèles animaux sont primordiaux pour la compréhension et le traitement des maladies humaines et ont ouvert la voie à la transplantation reconstructive pour devenir une réalité clinique au cours des deux dernières décennies. Ce modèle particulier peut aider à répondre à des questions clés liées au parcours physiologique d’une réponse allo-immune spécifique aux allogreffes composites vascularisées.

Le principal avantage de la technique est que la technique du brassard sans suture réduit considérablement la complexité et augmente le taux de réussite de cette procédure super-microvasulaire. Après avoir confirmé le niveau de sédation approprié par pincement des orteils, rasez le membre postérieur et l’aine de l’animal donneur. Ensuite, désinfectez la peau avec de la povidone iodée à 10 % et placez la souris sous un microscope dissecteur.

À l’aide de ciseaux, commencez le prélèvement du membre donneur par une incision de la peau de l’aine à proximité de la mi-cuisse. Relier de manière circonstancielle l’incision pour délimiter le membre postérieur du reste du corps. Identifiez et disséquez l’artère fémorale, la veine et le nerf.

Ensuite, utilisez des pinces et des microciseaux pour séparer les trois structures. La prévention des microtraumatismes à la paroi du vaisseau en utilisant une technique sans contact est essentielle pour assurer le succès de la procédure. Une fois que le pédicule vasculaire a été disséqué, utilisez les microciseaux pour diviser les vaisseaux au niveau du ligament inguinal.

Continuez la division des différents groupes musculaires ventral et dorsal à peu près au milieu de la cuisse pour séparer le greffon de l’animal donneur. Ensuite, transectez la coupe du fémur au milieu de la diaphyse fémorale. À l’aide d’une seringue munie d’une aiguille de calibre 33, rincer le membre prélevé avec deux ml de sérum physiologique hépariné à quatre degrés Celsius.

Ensuite, placez des brassards individuels en polyimide sur la veine fémorale et l’artère. Et conservez le greffon dans de la gaze de coton humide dans une boîte de Pétri à quatre degrés Celsius jusqu’à ce qu’il soit inséré. Le montage du pesis sur les brassards en polyimide est l’étape la plus critique de la procédure.

Comme une mauvaise notation peut altérer la circulation sanguine et une pression inappropriée peut exposer certains tissus antibiotiques, augmentant la probabilité de formation de thrombose. Pour enlever le membre postérieur receveur, injectez 0,3 ML de solution saline chaude par voie intrapéritonéale. Faites une incision circonférentielle autour du membre postérieur et identifiez et disséquez l’artère fémorale, la veine et le nerf comme nous venons de le démontrer.

Une fois le pédicule vasculaire disséqué, clampez les vaisseaux fémoraux au niveau du ligament inguinal. Et coupez les vaisseaux distalement au niveau de l’artère épigastrique superficielle. Continuez à diviser les différents groupes musculaires ventral et dorsal à peu près à mi-cuisse pour séparer le membre postérieur natif de l’animal receveur.

Ensuite, transectez le fémur au milieu de la diaphyse fémorale. Ensuite, à l’aide d’une aiguille spinale de calibre 20 comme tige intramédullaire, alignez les os du fémur du receveur et le greffon dans la position native du membre postérieur. Connectez les os du fémur du donneur et du receveur.

Utilisez un matériau de suture résorbable pour épouser les groupes musculaires ventral et dorsal. En effectuant cet alignement avec précision et rapidité, on évite une perte de sang prolongée de la cavité osseuse. Pour relier les vaisseaux fémoraux, tirez le côté receveur du récipient sur les brassards en polyimide.

Et utilisez une suture en nylon 10-0 pour fixer le vaisseau receveur sur le brassard avec une attache circonférentielle. Lorsque le récipient a été stabilisé, relâchez les pinces. Et vérifiez visuellement que les poignets ne sont pas mal tournés.

Vérifiez visuellement l’homéostasie et utilisez l’électrocautérisation pour arrêter toute source de saignement. Fermez ensuite la peau avec des sutures en nylon non résorbables. Et surveillez l’animal jusqu’à ce qu’il soit complètement rétabli.

La réalisation d’une allotransplantation composite vascularisée dans un modèle murin à l’aide de cette technique de ballonnet sans suture facilite l’obtention d’une excellente survie à long terme du greffon et de l’animal. De plus, cette technique représente une méthode fiable pour obtenir des résultats reproductibles de rejet progressif de l’allogreffe et un modèle d’allotransplantation composite vascularisé tel que documenté par les images. En effet, l’analyse histologique de tissus obtenus à partir d’animaux soumis à un rejet souligne davantage la dynamique reproductible du rejet de l’allogreffe dans ce modèle murin.

Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en 90 à 120 minutes, si elle est correctement exécutée. Lors de cette procédure, il est important de se rappeler de porter la plus grande attention à la manipulation des tissus et d’éviter toute sorte de saignement. Après son développement, cette technique peut ouvrir la voie aux chercheurs dans le domaine de la transplantation reconstructive.

Explorer des questions mécanistes fondamentales liées à l’allo-immunité des allogreffes composites vascularisées. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’effectuer toutes les étapes critiques d’une transplantation orthotopique de membre postérieur chez la souris.