Un modèle de souris pour induite par laser néovascularisation choroïdienne

L’objectif global de cette procédure est de recréer les caractéristiques de la dégénérescence maculaire liée à l’âge néovasculaire ou d’une DM dans un modèle animal facile à étudier. Cette méthode peut être utilisée pour étudier différentes facettes de la recherche néovasculaire A, y compris comment les altérations génétiques ou les traitements pharmaceutiques peuvent affecter la maladie ou comment la maladie peut se manifester sous différentes modalités d’imagerie. Le principal avantage de cette technique est qu’une fois maîtrisée, elle est facile à reproduire, ce qui permet de réaliser des expériences rapidement et efficacement.

En général, les personnes qui débutent dans cette méthode auront du mal parce qu’elles n’ont pas la dextérité et la coordination nécessaires pour réussir, deux méthodes qui s’améliorent avec la pratique. Pour préparer la position de la station laser, le laser et la lampe à fente à un endroit facilement accessible, allumez le laser et réglez-le sur les paramètres prédéterminés. Ici, le réglage est de 75 micromètres, la taille du spot, la puissance de 100 milliwatts et la durée de 100 millisecondes.

Ensuite, placez l’anesthésie, les chiffons chauffants pour animaux et les gouttes oculaires à portée de main facile de l’opérateur laser. Après avoir anesthésié la première souris, placez-la sur le réchauffeur pour animaux pendant environ trois à cinq minutes. Effectuez un pincement des orteils pour assurer une anesthésie complète.

Ensuite, à l’aide d’une lingette en tissu roulée pour éviter l’aspiration nasale du liquide qui roule. Placez une goutte de 30 microlitres de chlorhydrate de tétracaïne dans chaque œil. Attendez deux minutes pour que la solution fasse effet.

Ensuite, appliquez une goutte de tropic aide topique sur chaque œil afin de dilater les pupilles. Et attendez deux minutes que la solution fasse effet. Placez maintenant rapidement la souris sur la platine de la souris, puis placez la platine sur le repose-menton de la lampe à fente.

Allumez la lampe à fente et réglez-la sur la luminosité la plus faible. Évaluez la dilatation de la pupille de la souris. Si la pupille n’a pas atteint une dilatation de 2,5 à trois millimètres.

Remettez la souris dans le réchauffeur d’animaux ou administrez une goutte supplémentaire de tropic aide après la dilatation de la pupille. Orientez la souris sur la plate-forme de manière à ce qu’elle se trouve horizontalement perpendiculairement au faisceau fendu. Tournez légèrement la souris pour qu’elle ne soit pas à un angle d’environ 170 degrés.

Avec la tête orientée plus près de l’opérateur laser, positionnez la souris aussi près que possible de la lampe à fente tout en maintenant la stabilité de la plate-forme et en laissant suffisamment d’espace à l’opérateur pour effectuer des manipulations fines du moteur. Une fois la souris correctement positionnée, appliquez une goutte de solution de larme artificielle sur une lamelle en verre de 25 millimètres sur 25 millimètres. Placez également une goutte de cette solution sur l’œil non ciblé de la souris pour éviter la déshydratation.

Saisissez un coin du couvercle entre le pouce et l’index, et enroulez les trois doigts restants autour de la souris pour soutenir et stabiliser l’animal et la main de l’opérateur. Appuyez ensuite délicatement sur le couvercle. Glissez-le sur l’œil de la souris pour aplatir la cornée.

Positionnez la lamelle perpendiculaire à la trajectoire du faisceau laser pour éviter la diffusion ou la réflexion du faisceau. En regardant à travers la lampe à fente, utilisez la main libre pour régler la mise au point jusqu’à ce que la rétine apparaisse. La rétine doit apparaître jaune clair à rouge Avec des vaisseaux sanguins rouges distincts présents, déplacez lentement et soigneusement la tête de la souris ou le couvercle jusqu’à ce que le nerf optique soit observé.

Le nerf optique sera jaune avec plusieurs vaisseaux sanguins qui en rayonnent. Ensuite, allumez le faisceau de focalisation laser et manœuvrez-le pour faire la mise au point sur l’épithélium pigmentaire rétinien ou EPR du fond de l’œil. Si le faisceau de focalisation semble être ovale ou flou, ajustez la mise au point de la lampe à fente ou la lamelle.

Lorsque le faisceau de focalisation est correctement réglé, utilisez la gâchette au pied pour lancer l’administration du laser. Une bulle doit se former immédiatement après l’administration du laser Les lésions avec des bords flous ou les yeux avec des lésions hémorragiques doivent être exclues de l’analyse. Assurez-vous d’observer la formation de bulles et une zone circulaire claire et nettement définie indiquant une combustion laser focalisée.

Les lésions qui ne produisent pas de bulle peuvent ne pas induire correctement la CNV. Créez des lésions supplémentaires à toutes les positions souhaitées de néovascularisation choroïdienne ou de CNV. Basculez le laser en mode veille lorsqu’il n’est pas utilisé, enregistrez dans un cahier de laboratoire l’emplacement et le résultat de chaque administration laser.

Répétez l’administration du laser pour le deuxième œil de la souris à l’aide d’une nouvelle lamelle et de la main opposée pour stabiliser la souris. Après avoir terminé toutes les administrations, éteignez le laser et la lampe à fente, jetez la lamelle et placez la souris sur l’animal. Plus chaud macroscopiquement.

Inspectez l’œil à la recherche d’une surface cornéenne ou d’une blessure à la cataracte. Après la récupération, remettez la souris dans sa cage. CNV quantifiés par l’analyse de choroïdes montées à plat après coloration immunofluorescente ici.

L’étiquetage du Fit c dextran a été effectué par perfusion immédiatement avant le sacrifice de l’animal. Cela a été suivi d’une quantification de l’aire par seuillage dans l’image J.Ici, immuno-marquage post-mortem avec le marqueur de cellule endothéliale. Une sélectivité ISO GS IB quatre a été effectuée, suivie d’une imagerie par microscopie confocale.

Des reconstructions 3D de la lésion CNV sur FOSS et vue latérale ont été générées. L’imagerie par tomographie par cohérence optique a également été utilisée pour visualiser les lésions CNV in vivo. Ici, une image en coupe transversale de la rétine est montrée avec une lésion CNV entourée de jaune.

Une image en FOSS de la lésion est également montrée, entourée de jaune. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en 10 minutes si elle est exécutée correctement. Lors de cette procédure, il est important de s’assurer que l’animal est correctement anesthésié et de positionner vos mains de manière à ce qu’il soit soutenu et stable.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de vous concentrer. Le laser brûle pour induire une CNV, qui peut ensuite être étudiée de diverses manières.