Name: Cultures Génération fibroblastes primaires de souris oreilles et la queue tissus (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 35 s
Description: Apprenez à établir des cultures primaires de fibroblastes à partir d'oreilles et de queues de souris. Cette méthode permet d'utiliser des tissus conservés à température ambiante jusqu'à 10 jours pour la recherche en biologie cellulaire.

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Ce travail a été soutenu par la subvention NRF HUJ-CREATE - Mécanismes cellulaires et moléculaires de l’inflammation.

Les souris ont été hébergés dans des conditions exemptes d&#39;agents pathogènes en conformité avec les directives institutionnelles jusqu&#39;à l&#39;euthanasie (Le institutionnel de protection des animaux et l&#39;utilisation Comité (IACUC) des lignes directrices à l&#39;Université nationale de Singapour et le Comité consultatif national de laboratoire de recherche animale (NACLAR) Lignes directrices). 1. Souris <ol><li> Commandez un clic de l&#39;arrière-plan génétique approprié. Ce protocole est basé sur un tissu dérivé d&#39;une souris C57BL / 6. </li></ol> 2. Préparation de milieu complet <ol><li> Préparer un milieu complet en ajoutant les composants suivants à Roswell Park Institute Memorial (RPMI) 1640: 10% de sérum de veau foetal (FCS), 50 uM de 2-mercaptoéthanol, 100 uM de l&#39;asparagine, de la glutamine 2 mM, une solution de pénicilline-streptomycine 1%. </li></ol> 3. Préparation des solutions enzymatiques <ol><li> Préparer la solution de collagénase D dans un tube à fond conique de 15 ml. <ol><li> Peser 10 mg de collagénase D. Dissolve collagénase D dans 4 ml de milieu complet. </li></ol></li><li> Préparer la solution pronase dans un tube de 1,7 ml à centrifuger. <ol><li> Peser 10 mg de pronase. </li><li> Ajouter 5 ul de tampon Tris 1 M (pH 8,0). Ajouter 1 pi d&#39;EDTA 0,5 M (pH 8,0). </li><li> Compléter avec 494 pi d&#39;eau stérile. </li><li> Incuber la solution de pronase à 37 ° C dans un bain-marie pendant 30 min. </li></ol></li></ol> 4. Préparation de la collagénase D-Mix pronase (≤2 Tails) Remarque: Effectuez les étapes suivantes dans une hotte de culture cellulaire stérile. <ol><li> Ajouter 250 ul de solution de pronase à 4 ml de solution de collagénase D. </li><li> Faire passer le mélange de collagénase D-pronase à travers un filtre à seringue de 0,2 um dans un tube de 15 ml fond conique stérile. </li></ol> 5. Extraction des fibroblastes de l&#39;oreille et la queue tissus <ol><li> Euthanasier les souris selon les directives institutionnelles appropriées.</li><li> Placez autoclave instruments chirurgicaux (ciseaux et des pinces) dans la hotte de culture cellulaire. </li><li> Ajouter 10 ml du milieu complet en deux boîtes de culture cellulaire de 10 cm chacune. </li><li> Couper les oreilles (~ 1 cm de rayon) et de 5 cm de queue (à partir de la pointe de la queue) d&#39;une souris avec des ciseaux et incuber pendant 5 min dans 40 ml 70% d&#39;éthanol dans un tube de 50 ml à fond conique stérile. </li><li> Oreilles séchées à l&#39;air et la queue en les plaçant dans une boîte de 10 cm de culture de cellules ouvertes dans la hotte pendant 5 min. Une fois séchées, le transfert oreille et la queue des morceaux à deux boîtes de culture étiquetés &quot;oreilles&quot; et &quot;queue&quot; contenant 10 ml de milieu complet tel que décrit dans l&#39;étape 5.3. </li><li> Enlever les poils des oreilles et la queue avec des ciseaux. </li><li> Couper oreilles et la queue en morceaux plus petits de 3 mm de diamètre à l&#39;aide de ciseaux. </li><li> Transférer les tissus coupés dans 1,8 ml des flacons de CryoTube étiquetés &quot;oreilles&quot; et &quot;queue&quot; et ajouter la solution D-pronase collagénase suffisante pour le volume pour atteindre la marque de 1,8 ml sur le flacon. </li><li> Placer les flacons CryoTube horizontalement sur un agitateur et agiter les échantillons à 200 tours par minute pendant 90 min à 37 ° C. </li><li> Après 90 minutes d&#39;incubation, retirer les flacons de CryoTube du shaker et placer les flacons dans la hotte. </li><li> Ajouter 10 ml de milieu complet en deux boîtes de 10 cm de culture cellulaire, étiquetés &quot;oreilles&quot; et &quot;queue&quot; chacun, et de mettre une passoire 70 um cellulaire dans chaque plat. </li><li> Placer les tissus de l&#39;oreille et de la queue digérés dans le tamis 70 um de la cellule dans les plats préparés en conséquence marqués à l&#39;étape 5.11 et broyer les tissus de force au moyen d&#39;un piston de seringue 10 ml de&gt; 5 min. Agiter le tamis cellulaire occasionnellement dans le moyen de se laver les cellules de la crépine de la cellule. </li><li> Introduire à la pipette la suspension de cellules de chaque plat dans des tubes de 15 ml de fond deux coniques étiquetés &quot;oreilles&quot; et &quot;queue&quot;. Laver la capsule et la crépine avec supplémentaire de 10 ml de milieu complet et ajouter le support pour les tubes de 15 ml appropriées fond conique. </li><li> Isoler la cellulesuspension pendant 7 minutes à 580 xg et ~ 4 ° C en utilisant une centrifugeuse réfrigérée cellulaire. </li><li> Retirer le surnageant, ajouter 10 ml de milieu complet pour le culot cellulaire dans les 15 ml du tube de fond conique et remettre en suspension les cellules. </li><li> Répétez l&#39;étape 5.14 et 5.15. </li></ol> 6. La culture de la cellule Mélange <ol><li> Retirer le surnageant. Assurez-vous que le culot cellulaire reste intacte. </li><li> Re-suspendre les cellules dans 10 ml de milieu complet et ajouter le mélange respectif pour deux boîtes de culture cellulaire de 10 cm étiquetés &quot;oreilles&quot; et &quot;queue&quot;. </li><li> Ajouter 10 ul solution d&#39;amphotéricine B (solution stock: 250 pg / ml) à la culture. </li><li> Incuber les cellules à 37 ° C dans une humidifié à 5% de CO 2 incubateur. </li><li> Le troisième jour, remplacer le milieu par un milieu complet frais contenant 10 ml 10 pi de l&#39;amphotéricine B pour enlever les débris (figures 1 et 2). </li></ol> 7. Sous-culture de fibroblastes <ol><li> When culture atteint environ 70% de confluence (3-4 jours de la culture) éliminer le milieu et laver les cellules avec du phosphate de 1x solution saline tamponnée 5 ml stérile (PBS). </li><li> Retirer le PBS et ajouter 2 ml de solution stérile 1x trypsine-EDTA pour les cellules. </li><li> Incuber les cellules pendant 5 min à 37 ° C dans une humidifié à 5% de CO 2 incubateur. </li><li> Après 5 min, tapotez doucement la boîte de culture et ajoutez 6 ml de milieu complet pour les cellules. </li><li> Transférer la suspension cellulaire dans un tube à fond conique de 15 ml et centrifuger le tube pendant 5 min à 450 x g et ~ 4 ° C en utilisant une centrifugeuse réfrigérée cellulaire. </li><li> Retirer le surnageant et remettre en suspension doucement le culot de cellules dans 5 ml de milieu complet. </li><li> Germe 2 x 10 5 cellules dans une boîte de culture cellulaire de 10 cm et incuber les cellules à 37 ° C dans un incubateur humidifié CO 2 à 5% pendant 3-4 jours avant de répéter les étapes 7.1 à 7.6. </li></ol> 8. Préparation des oreilles pour l&#39;expédition Remarque: Effectuez til étapes ultérieures dans une hotte de culture cellulaire stérile. <ol><li> Euthanasier les souris selon les directives institutionnelles appropriées. </li><li> Placez ciseaux et des pinces autoclave dans la hotte de culture cellulaire. </li><li> Ajouter 50 ml de milieu complet dans un tube à fond conique de 50 ml. </li><li> Couper les oreilles (~ 1 cm de rayon) d&#39;une souris avec des ciseaux. </li><li> Transférer les oreilles dans le tube à fond conique de 50 ml (tel que préparé à l&#39;étape 3) en utilisant une pince. </li><li> Scellez le tube inférieur conique de 50 ml avec du parafilm avant d&#39;expédier à température ambiante dans une case appropriée. </li></ol>

<ol><li>Fitzpatrick, L. E., McDevitt, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-derived+matrices+for+tissue+engineering+and+regenerative+medicine+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Sci%22%5BJournal%5D)">Cell-derived matrices for tissue engineering and regenerative medicine applications.</a> Biomater Sci. 3 (1), 12-24 (2015).</li>
<li>Elenbaas, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+breast+cancer+cells+generated+by+oncogenic+transformation+of+primary+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Human breast cancer cells generated by oncogenic transformation of primary epithelial cells.</a> Genes Dev. 15 (1), 50-65 (2001).</li>
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<li>Moore, C. B., Allen, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+ear+fibroblast+derivation+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Primary ear fibroblast derivation from mice.</a> Methods Mol Biol. (1031), 65-70 (2013).</li>
<li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+stable+pluripotent+stem+cells+from+NOD+mouse+tail-tip+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Generation of stable pluripotent stem cells from NOD mouse tail-tip fibroblasts.</a> Diabetes. 60 (5), 1393-1398 (2011).</li>
</ol>

Les auteurs ne déclarent aucun conflit d’intérêts financiers.

Ici nous fournissons une procédure expérimentale simple, peu coûteux et rapide à mettre en place des cultures de fibroblastes primaires de oreilles et la queue de souris. L&#39;extraction doit se traduire par des fibroblastes de division adhérentes et rapidement dans les 3 jours après l&#39;isolement du tissu. Une limitation importante de cellules primaires est la sénescence, un arrêt de la croissance permanente 15. En utilisant le protocole, les cultures de fibroblastes peuvent être passées de 5 à 6 fois ava...

Les cellules primaires sont obtenues à partir de tissu cultivé et vivant dans des conditions in vitro. Il est généralement admis que les cellules primaires ressemblent davantage à l&#39;état physiologique et le fond génétique du tissu dont ils sont issus de lignées cellulaires tumorales immortalisées ou 1. Pour cette raison, les cellules primaires représentent un modèle utile pour étudier les questions biologique 2,3. Cependant, à la différence des lignées cellulaires établies qui poussent indéfiniment, cellules primaires éventuellement subir la sénescence dans la culture et doivent être fréquemment rétabli. Les cellules primaires couramment utilisés comprennent les fibroblastes, les cellules epitheliales, les cellules endotheliales, les cellules T, les cellules B, les macrophages dérivés de la moelle osseuse (BMDM) et des cellules dendritiques dérivées de moelle osseuse (BMDC). Les fibroblastes sont souvent utilisés comme modèle de culture cellulaire primaire. Ils offrent des avantages clés par rapport aux autres cellules primaires. Les cultures de cellules sont faciles à établir, facilement maintenu et ne nécessitent aucune purification des cellules avant la culture. Ils ont la prolifération initiale rapide et aucune exigence pour les protocoles de moyennes ou d&#39;activation spécialisées. Les fibroblastes peuvent être efficacement transfectées en utilisant des protocoles physiques 4,5 biologiques, chimiques, et. Il est possible de stocker les oreilles pour un maximum de 10 jours à la température ambiante avant d&#39;établir des cultures de cellules. Cultures de fibroblastes sont propices à la visualisation des processus cytoplasmiques et adapté à la reprogrammation en cellules souches pluripotentes induites (iPS) 6. Les fibroblastes sont des cellules importantes du tissu conjonctif qui sécrètent des protéines de la matrice extracellulaire de collagène et 7. Ils fournissent le cadre structurel dans de nombreux tissus 8 et jouent un rôle essentiel dans la cicatrisation et la réparation tissulaire 9,10. Ici, nous décrivons un (&lt;4 h) protocole simple et rapide à mettre en place des cultures de fibroblastes de les oreilles et la queue de souris 11. Le protocole nécessite un minimum de sourisl&#39;expérience de récolter les tissus (contrairement à d&#39;autres protocoles 12,13) ​​et peut être utilisé pour établir des cultures de oreilles stockées dans un milieu à température ambiante pendant jusqu&#39;à 10 jours.

<table><tbody><tr><td>RPMI-1640</td><td>HyClone</td><td>SH30027.01</td><td></td></tr><tr><td>Sérum de veau fœtal</td><td>HyClone</td><td>SV30160.03</td><td></td></tr><tr><td>2-mercaptoéthanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3148</td><td></td></tr><tr><td>Asparagine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4159</td><td></td></tr><tr><td>Glutamine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8540</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline/Streptomycine</td><td>HyClone</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>Éthanol</td><td>Merck Millipore</td><td>107017</td><td>Absolu pour l’analyse</td></tr><tr><td>Collagénase D</td><td>Roche Diagnostics</td><td>11088866001</td><td>De Clostridium histolyticum, lyophilisé, non stérile</td></tr><tr><td>Pronase protéase</td><td>Merck Millipore</td><td>53702</td><td>De Streptomyces griseus&nbsp ; </td></tr><tr><td>Tris tampon (pH 8)</td><td>1ère BASE</td><td>1415</td><td>Ultra pure grade</td></tr><tr><td>0.5M EDTA (pH 8)</td><td>1ère BASE</td><td>BUF-1053</td><td>Grade biotechnologique</td></tr><tr><td>10X Phosphate Buffered Saline (PBS)</td><td>1ère BASE</td><td>BUF-2040-10X4L</td> Solution de <td></td></tr><tr><td>trypsine-EDTA ultra pure 10X</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>59418C-100ML</td><td>0,5 % de trypsine, 0,2 % d’EDTA, trypsine gamma irradiée par le procédé SER-TAIN, sans rouge de phénol, dans une solution saline</td></tr><tr><td>Amphotéricine B</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2492-20ml</td><td>250 &mu ; g/ml dans de l’eau déminéralisée, stérile-filtré</td></tr><tr><td>Ciseaux</td><td>Aesculap</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Forcep</td><td>Aesculap</td><td>AE-BD312R</td><td></td></tr><tr><td>0.2 &mu ; Filtre seringue M</td><td>Sartorius Stedim</td><td>16534</td><td></td></tr><tr><td>70 &mu ; M strainer</td><td>SPL</td><td>93070</td><td></td></tr><tr><td>Piston de seringue</td><td>Terumo</td><td>SS+10L</td><td></td></tr><tr><td>Tube cryovial</td><td>NUNC</td><td>368362</td><td></td></tr><tr><td>Tube de microcentrifugation de 1,7 ml</td><td>Axygen</td><td>MCT-175-C</td><td></td></tr><tr><td>10 cm Plat de culture cellulaire</td><td>Greiner</td><td>664160</td><td>Plat traité pour culture cellulaire.</td></tr><tr><td>Tube à fond conique de 15 ml</td><td>Greiner</td><td>188271</td><td></td></tr><tr><td>Tube à fond conique de 50 ml</td><td>Greiner</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>Bain-marie</td><td>GFL</td><td>1002</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeuse</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td>Agitateur d’incubation</td><td>Sartorius Stedim</td><td></td><td>Certomat-BS1</td></tr><tr><td>Zeiss Axiovert 25 microscope optique</td><td>Carl Zeiss AG</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

cultures génération fibroblastes primaires de souris oreilles et la queue tissus

Generating Primary Fibroblast Cultures from Mouse Ear and Tail Tissues

Les cellules primaires sont directement dérivées de tissus et sont pensés pour être plus représentatif de l&#39;état physiologique des cellules in vivo que des lignées cellulaires établies. Cependant, des cultures de cellules primaires ont habituellement une durée de vie limitée et doivent être fréquemment rétablie. Les fibroblastes sont une source facilement accessible de cellules primaires. Ici, nous discutons d&#39;une procédure expérimentale simple et rapide à mettre en place des cultures de fibroblastes primaires de oreilles et la queue de souris. Le protocole peut être utilisé pour établir des cultures de fibroblastes primaires de l&#39;oreille stockées à température ambiante pendant jusqu&#39;à 10 jours. Lorsque le protocole est soigneusement suivie, les contaminations sont peu susceptibles de se produire malgré l&#39;utilisation de tissus non stérile stocké pendant le temps prolongé dans certains cas. Fibroblastes prolifèrent rapidement dans la culture et peut être étendu à un nombre important avant de subir sénescence réplicative.

Extraction à partir des résultats des fibroblastes de tissu dans une quantité importante de débris de tissu (Figure 1). Contrairement aux débris tissulaires, les fibroblastes adhèrent à des surfaces en plastique de culture de tissus entre 1 et 3 jours de culture. Le milieu de cultures de fibroblastes peut être modifié en toute sécurité le jour 3 de la culture, ce qui devrait réduire de manière significative les niveaux de débris présents dans la culture (Figure 2). Les fibroblastes prés...

Nous décrivons une procédure expérimentale simple et rapide pour générer des fibroblastes primaires des oreilles et de la queue de souris. Le procédé ne nécessite pas de formation spécifique des animaux et peut être utilisé pour la production de cultures de fibroblastes des oreilles stockées à température ambiante pendant jusqu&#39;à 10 jours.

Cultures Génération fibroblastes primaires de souris oreilles et la queue tissus

Primary cells are derived directly from tissue and are thought to be more representative of the physiological state of cells in vivo than established cell ...

L'objectif général de ce protocole est d'établir des cultures primaires de fibroblastes à partir des oreilles et de la queue de souris. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la biologie cellulaire, comme la différence entre les cellules saines et les cellules cancéreuses. Le principal avantage de cette étude est que nous pouvons générer des fibroblastes à partir d'oreilles conservées dans un milieu à température ambiante pendant jusqu'à 10 jours avant l'isolement des cellules.Bien que cette méthode puisse fournir des informations sur la biologie de la souris, elle peut également être appliquée à d'autres organismes animaux mammifères tels que les rats et les lapins. Avant de prélever les tissus, remplissez des boîtes de culture de 10 centimètres avec 10 millilitres de milieu complet. Ensuite, après l'euthanasie de la souris, procédez au prélèvement des échantillons de tissus à l'aide d'instruments stérilisés.Prélever les tissus auriculaires avec un rayon d'environ un centimètre, et prélever environ cinq centimètres de tissu caudal. Transférer les tissus dans un tube conique contenant 40 millilitres d'éthanol à 70 %. Laisser tremper pendant cinq minutes, puis les faire sécher à l'air libre pendant cinq minutes dans une boîte de culture de 10 centimètres ouverte, sous hotte de culture.Une fois les tissus secs, transférez-les sur la plaque contenant le milieu. Coupez ensuite les poils sur tous les tissus à l’aide de ciseaux, puis divisez les tissus en morceaux de moins de trois millimètres. Transférez les tissus découpés dans des tubes cryogéniques, puis remplissez les tubes avec la solution de collagénase D et de pronase jusqu’au trait de 1,8 millilitre.Incubez maintenant les tissus à 37 degrés Celsius, sous agitation à 200 tr/min pendant 90 minutes. Dans la hotte, préparez un plat contenant 10 millilitres de milieu complet. Placez au-dessus du plat un tamis cellulaire de 70 microns, puis, après l'incubation, déposez la digestion tissulaire sur le tamis.Maintenant, broyez les tissus dans le tamis à l’aide d’un piston. Effectuez cette opération pendant au moins cinq minutes. Secouez occasionnellement le tamis dans le milieu afin d’éliminer les cellules dissociées.Il est important que les tissus digestifs d'oreille et de queue soient bien broyés afin d'obtenir un bon nombre de cellules. Veillez également à agiter le tamis cellulaire après le broyage des tissus. Cela permettra d'extraire des cellules supplémentaires du tamis.Ensuite, recueillez la suspension cellulaire dans un tube conique de 15 millilitres. Puis, rincez le filtre avec 10 millilitres de milieu, et ajoutez la solution de rinçage au prélèvement. Maintenant, lavez les cellules.Étape 1 : centrifuger les cellules dans une centrifugeuse réfrigérée. Étape 2 : éliminer le surnageant. Étape 3 : resuspendre les cellules dans 10 millilitres de milieu complet.Répétez une fois encore le lavage, puis terminez la procédure en laissant les cellules dans le milieu complet, prêtes pour la culture. Pour cultiver les cellules, transférez d'abord les suspensions cellulaires dans des boîtes de culture de 10 millilitres. Ensuite, ajoutez 10 microlitres de solution d'amphotéricine B à chaque culture.Incubez maintenant les cellules pendant trois jours. Le troisième jour, remplacez le milieu par du milieu complet frais contenant de l'amphotéricine B. Peu de temps après, les cultures atteindront une confluence de 70 %. À ce stade, retirez le milieu et rincez la culture avec cinq millilitres de PBS 1X.Ensuite, remplacez le PBS par deux millilitres de solution de trypsine-EDTA 1X et incubez les cellules pendant cinq minutes. Après cette courte incubation, tapez doucement sur les boîtes et ajoutez six millilitres de milieu complet frais dans chaque boîte. Prélèvez alors les cellules libérées à l’aide d’une pipette et transférez-les dans deux tubes coniques de 15 millilitres.Ensuite, centrifuger les tubes pendant cinq minutes à 450 G dans une centrifugeuse réfrigérée. Resuspendre les culots dans cinq millilitres de milieu complet et mesurer la densité cellulaire des suspensions. Puis, alimenter les cellules dans des boîtes de 10 centimètres à raison de 200 000 par boîte.Incuber ces cellules pendant trois à quatre jours jusqu'à ce qu'elles atteignent une confluence de 70 %, puis répéter le processus de collecte et de repiquage des cellules à une densité spécifique. Elles peuvent être cultivées de cette manière pendant jusqu'à 25 jours. Trois jours après l'extraction des cellules, il y avait des débris importants dans la culture avant le changement du milieu.Les débris cellulaires sont indiqués par des flèches blanches. L'échelle représente 100 microns. Un nouveau milieu a réduit de manière significative les débris cellulaires.Des cultures âgées de trois jours, obtenues à partir de tissus conservés à température ambiante pendant 10 jours, ont démontré que les fibroblastes sont assez résistants. À partir de tels tissus, une confluence de 70 à 80 % de fibroblastes a été atteinte après cinq à six jours. Les cellules ont été marquées avec un marqueur spécifique des fibroblastes, la vimentine, visible en rouge.La DAPI a été utilisée pour marquer les noyaux, visibles en bleu. L'échelle représente 10 micromètres. La coloration uniforme indique que la culture de fibroblastes est pure.Le protocole décrit donne habituellement ce résultat. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez maintenant savoir comment établir rapidement et de façon fiable des cultures primaires de fibroblastes. Lors de la réalisation de cette procédure, une attention particulière doit être portée à l'extraction des fibroblastes à partir des tissus, car un broyage insuffisant du tissu entraînera un nombre cellulaire plus faible.

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JoVE Journal

Developmental Biology

Biologie du développement

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Établir des cultures primaires de fibroblastes adultes à partir de rongeurs

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Génération améliorée de cardiomyocytes induite en utilisant une construction polycistroniques Exprimant rapport optimal de Gata4, MEF2C et Tbx5

Le comportement des fibroblastes sous-tend un spectre d’entités cliniques, mais ils restent mal caractérisés, en grande partie en raison de leur hétérogénéité inhérente. La recherche traditionnelle sur les fibroblastes repose sur la manipulation in vitro, masquant le comportement des fibroblastes in vivo. Nous décrivons un protocole basé sur FACS pour l’isolement des fibroblastes de peau de souris qui ne nécessite pas de culture cellulaire.

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Génération rapide de cultures de murine primaire et de fibroblaste

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Cultures Génération fibroblastes primaires de souris oreilles et la queue tissus

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