Quantitative Fundus autofluorescence pour l'évaluation des maladies rétiniennes

L’objectif global de l’autofluorescence quantitative, ou qAF, est d’évaluer le niveau global de lipofuscine dans les cellules de soutien de la rétine, l’épithélium pigmentaire rétinien, ou EPR, dans les yeux sains et malades. Cette technique peut aider à répondre à des questions clés en biologie cellulaire rétinienne, telles que la façon dont la santé de l’épithélium pigmentaire rétinien interagit avec le développement de la dégénérescence maculaire liée à l’âge, ou DMLA. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet de déterminer les niveaux absolus d’autofluorescence de la lipofuscine dans le fond d’œil, et donc un suivi quantitatif et reproductif entre les patients, entre les séances d’imagerie des patients, et dans de grandes populations d’étude.

Avant l’imagerie, configurez correctement l’ophtalmoscopie laser à balayage confocal, ou CSLO, pour l’acquisition de données conformément aux instructions du fabricant. Pour monter une référence fluorescente interne, achetée auprès du fabricant, tournez la lentille pour la retirer, dévissez l’anneau métallique de la machine et remplacez-le par le nouvel anneau métallique contenant la référence. Il est essentiel que les pupilles soient dilatées à au moins 6 mm pour un passage ininterrompu de la lumière.

Avec 0,5 % de tropicamide et 2,5 % de phényléphrine, dilatez les pupilles du patient d’au moins 6 mm, ce qui est essentiel pour un passage ininterrompu de la lumière pour voir et mesurer le fond d’œil. Positionnez correctement le patient sur le CSLO avec le menton reposant sur la mentonnière, le front placé contre l’appui-front et les canthi latéraux correctement alignés avec les indicateurs. Pour acquérir des images de base, imaginez d’abord le fond d’œil avec une réflectance proche infrarouge, ou lumière IR, afin de centraliser la caméra sur la macula et d’obtenir une mise au point approximative.

Une fois le patient correctement positionné, basculez le réglage du matériel sur le panneau de commande en mode d’imagerie IR, positionnez manuellement la caméra jusqu’à ce que le fond d’œil soit pleinement mis au point et prenez une image. Ajustez le réglage sur le panneau de commande sur IROCT, qui utilise la tomographie par cohérence optique dans le domaine spectral, ou SDOCT, en conjonction avec l’imagerie IR, pour évaluer la macula à la recherche d’une maladie sous-jacente. Utilisez les guides présents dans la fenêtre d’imagerie pour orienter correctement l’OCT par rapport à l’image IR du fond d’œil.

Pour obtenir une qualité SDOCT optimale, positionnez la caméra de manière à ce que l’image OCT se trouve dans le tiers supérieur de sa fenêtre d’imagerie. Effectuez au moins un balayage linéaire horizontal à travers la fovéa et couvrant l’ensemble du champ d’imagerie. Pour configurer l’imagerie qAF, utilisez l’acquisition d’images à haute vitesse, qui réduit le risque de perte de signal due aux mouvements du patient et de blocage de la lumière par l’iris ou les paupières.

Utilisez la moyenne de 9 images, qui capture rapidement et séquentiellement neuf images dont la moyenne est ensuite calculée pour réduire le bruit et les artefacts. Choisissez un champ de 30 x 30 degrés, qui fait référence aux degrés de la zone rétinienne capturés lors de l’acquisition de l’image. Après avoir averti le patient de la présence de la lumière bleue, activez le mode AF et alignez l’axe de l’appareil photo de sorte que l’écran soit rempli au maximum de AF de fond d’œil, avec un assombrissement minimal des côtés et des coins de l’image.

Si les patients ont des difficultés à tolérer la lumière bleue brillante, éloignez la caméra de l’œil pour commencer l’imagerie et amenez lentement la caméra vers le patient jusqu’à ce que le fond d’œil soit bien visible. Manuellement ou à l’aide du joystick de l’ophtalmoscope, ajustez l’alignement de l’appareil photo en déplaçant le CSLO pour repositionner l’appareil photo de sorte que le signal AF soit à son niveau le plus élevé sur tout le terrain, plutôt que d’obtenir l’image la plus nette. Lors de l’acquisition de l’image, les pixels colorés visibles soit dans la référence interne, soit dans le fond d’œil, indiquent une sursaturation, et donc une perte de signal.

Exposez complètement la rétine à la lumière AF pendant au moins 20 secondes pour minimiser l’absorption de la lumière par la rhodopsine dans la rétine sensorielle pendant l’imagerie. Utilisez cette période pour optimiser l’alignement, la mise au point et la sensibilité de l’appareil photo. Faites cligner des yeux les sujets avant chaque acquisition d’image, car un film lacrymal frais améliore la qualité du signal.

Évitez les paupières dans le plan d’acquisition et prenez l’image. Il est important de générer au moins deux images de haute qualité par session d’imagerie pour l’analyse des données. Effectuez un traitement post-image en utilisant le logiciel CSLO pour calculer la moyenne de la pile de neuf images, afin d’augmenter le rapport signal/bruit.

Effectuer l’analyse d’images selon le protocole texte. Comme le montre ici, chez les yeux sains, la FA émise par l’EPR est répartie relativement uniformément dans tout le fond d’œil. Une intensité réduite est observée dans la région maculaire centrale en raison du blocage de la lumière par le pigment maculaire, et sur les côtés et les coins en raison de l’optique de l’œil et de la caméra.

Les récipients doivent être sombres et bien nets. Cette figure représente une présentation cartographique thermique correspondante des niveaux de qAF à partir de cette figure. Les couleurs plus froides correspondent aux zones où l’intensité de l’AF est plus faible, tandis que les couleurs plus chaudes correspondent aux zones où l’intensité de l’AF est plus élevée.

L’intensité maximale est généralement observée dans le deuxième anneau concentrique à huit segments, et les intensités moyennes dans cette zone sont utilisées pour la plupart des analyses de données. Voici une analyse représentative de l’œil atteint de DMLA, démontrant l’atrophie géopgraphique, une forme avancée de DMLA. Cette forme de DMLA entraîne des zones localisées de perte d’EPR, mise en évidence par une FA nettement réduite ou absente, et entraîne une perte progressive de la vision centrale.

Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler de sélectionner soigneusement les patients candidats et d’obtenir des images de haute qualité reproductibles pour maximiser la qualité des données. L’utilisation de cette procédure peut permettre un suivi longitudinal de la santé rétinienne afin de déterminer la progression des dégénérescences rétiniennes. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de l’ophtalmologie pour suivre et analyser les dégénérescences rétiniennes.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’utiliser l’autofluorescence quantitative pour évaluer vos patients atteints de dégénérescences rétiniennes. Merci d’avoir regardé, et bonne chance dans vos expériences.