Retroductal Submandibulaire Gland instillation et Localized Fractionnée Irradiation dans un modèle de rat de salivaire Hyposécrétion

Hypofonction des glandes salivaires, un effet indésirable majeur de la radiothérapie de la tête et du cou, diminue la qualité de vie d’un patient. La démonstration de l’efficacité de nouvelles thérapies dans des modèles animaux est une condition préalable à la transition clinique. Ce protocole décrit l’administration rétroductale et l’irradiation locale des glandes sous-mandibulaires du rat.

L’objectif global de cette procédure est d’administrer rétroductivement des traitements aux glandes sous-mandibulaires afin d’évaluer leur efficacité dans la lutte contre le dysfonctionnement salivaire. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine des troubles des glandes salivaires, telles que les thérapies qui peuvent protéger contre les radiations ou restaurer la fonction des glandes salivaires. Le principal avantage de cette technique est que les glandes salivaires peuvent être traitées localement, réduisant ainsi le risque d’effets secondaires sur les tissus non cibles.

Généralement, les personnes novices dans cette méthode auront du mal parce que les ouvertures du conduit ne sont pas visibles et que la canule doit être manipulée à l’aveugle dans le conduit. Avant de commencer la procédure, coupez une longueur de dix centimètres de tube en polyéthylène PE 10 avec un scalpal, puis saisissez les deux extrémités du tube entre l’index et le pouce de chaque main et chauffez la section centrale du tube au-dessus d’une flamme douce en tirant soigneusement les deux côtés pour étirer le tube ramolli à doubler sa longueur. Ensuite, utilisez un scalpal pour couper le tube au milieu à un angle de 45 degrés pour obtenir deux canules avec chacune une extrémité effilée.

Étirez l’extrémité non effilée de l’une des canules sur l’aiguille de calibre 29 d’une seringue à insuline de 0,5 cc. Retirez ensuite la canule et aspirez 220 microlitres de solution saline dans la seringue. Tapotez la tige de la seringue pour déloger les bulles d’air et remettez la canule en place sur l’aiguille.

Appuyez sur le piston pour expulser l’air de la canule et assurer un écoulement libre de la solution à travers le tube et ajustez le volume de solution saline dans la seringue à 200 microlitres. Confirmez maintenant le niveau approprié de sédation du rat par pincement des orteils et réflexe palpable et appliquez un lubrifiant pour les yeux sur les cornées exposées. Placez l’amimal sur une plate-forme de contention spécialement conçue et engagez les incisives supérieures sur la barre transversale.

Enroulez un élastique autour des incisives inférieures pour abaisser la mâchoire. L’ancrer à la plate-forme. Ensuite, passez une suture stérile dans la langue et soulevez-la pour soulever le plancher de la bouche.

Ensuite, utilisez un hémostat pour clamper les sutures et passez l’hémostat sur la barre transversale. Ensuite, utilisez un écarteur de joue sur mesure pour élargir les joues et un microscope dissecteur pour localiser les papilles sublinguales sur le plancher de la bouche. À l’aide de forces délicates, saisissez l’extrémité effilée du tube PE 10 préformé et manipulez doucement l’extrémité de la canule dans l’orifice canalaire de la papille sublinguale.

Enfilez ensuite la canule de trois à cinq millimètres dans le conduit en vous assurant que la canule passe à travers le conduit sans obstruction. Avant d’instiller la solution saline, injectez de l’atrophine par voie sous-cutanée dans la peau du cou de l’animal. Dix minutes après l’injection, fixez la canule à l’orifice du canal avec une goutte de cyanoacrylate.

Une fois que la colle a séché, enfoncez lentement le piston de la seringue à 50 microlitres par minute jusqu’à ce que 200 microlitres de solution saline aient été instillés dans la glande. Si vous rencontrez une pression arrière pendant l’instillation, arrêtez puis retirez le tube, puis recanulez avec une nouvelle canule. Clampez ensuite la tubulure à l’aide d’un hémostatique et retirez délicatement la seringue.

Laissez le tube dans le conduit pendant 30 à 60 minutes jusqu’à ce que l’animal retrouve sa conscience. Retirez ensuite la suture qui maintient la langue et transférez l’animal dans une cage séparée sous une lampe chauffante jusqu’à ce qu’il soit complètement rétabli. Appliquer localement une irradiation fractionnée à la glande sous-mandibulaire.

Colonne, une fente de trois centimètres de champ de rayonnement qui englobe la zone allant du bord inférieur du manible au haut du sternum du rat anesthésié en position couchée. Après avoir placé un bolus tissulaire équivalent d’un centimètre sur la région. Ajustez la distance entre la source de rayonnement et le haut du bolus à 100 centimètres à l’aide d’un faisceau de photons de six mégavolts sur l’accélérateur linéaire.

Irradiez l’animal avec 2,5 gris pour la durée d’exposition appropriée. À la fin de la période d’exposition aux radiations, l’animal se réchauffe pendant sa convalescence, comme nous venons de le démontrer. Au cours des expériences initiales, le bon placement de la canule a été confirmé en perfusant la glande avec de l’hématoxyline ou une solution de tryplan blue et en évaluant la coloration de la glande chez les animaux euthanasiés.

Les glandes sous-maxillaires ont été étudiées parce qu’elles peuvent être irradiées sélectivement avec un rayonnement en colonne vers le cou, évitant ainsi de graves effets buccaux hors cible qui peuvent affecter la santé des animaux et les résultats expérimentaux. L’analyse des effets de ce schéma de rayonnement fractionné sur le flux salivaire huit semaines après la radiothérapie démontre que l’exposition quotidienne à des augmentations de 2,5 niveaux de gris réduit précipitamment le flux salivaire. Dans votre réduction de 10 fois de la production de salive chez les animaux irradiés par rapport aux animaux non irradiés.

Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en quelques minutes si elle est correctement exécutée. Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler d’assurer le passage sans restriction de la canule dans le canal excratoire de la glande salivaire. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine des troubles des glandes salivaires pour explorer des traitements contre les radiations et les affections auto-immunes des glandes salivaires.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’effectuer une installation rétroductale dans la glande sous-mandibulaire du rat et d’irradier localement les glandes pour évaluer l’efficacité thérapeutique de l’amélioration de la toxicité des rayonnements. N’oubliez pas que travailler avec des thérapies géniques et protéiques peut être extrêmement dangereux et que des précautions telles que d’éviter les piqûres d’aiguilles et de minimiser l’exposition de la peau aux agents biologiques doivent également être prises lors de l’exécution de cette procédure.