Murine Prostate Micro-dissection et Castration chirurgicale

L’objectif global de ces procédures est de permettre l’étude de la prostate, ainsi que des différentes conditions hormonales chez la souris. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine du cancer de la prostate, telles que quels sont les effets sur la privation hormonale sur la cancérogenèse de la prostate. Le principal avantage de cette technique est que les effets de divers processus pathologiques et changements hormonaux peuvent être étudiés dans les glandes prostatiques individuelles.

Commencez par épingler une souris sur une planche de dissection en position couchée à travers le coussinet plantaire de chaque patte et vaporisez l’abdomen avec de l’éthanol à 70 %. Ensuite, en tenant la peau du bas-ventre avec une pince, utilisez des ciseaux pour couper la peau et le péritoine à environ un centimètre en avant de l’ouverture du pénis. Continuez à couper la peau et le péritoine du bas-ventre vers les deux côtés de l’abdomen jusqu’à la cage thoracique, exposant la cavité péritonéale.

Après avoir identifié l’emplacement de la vessie et du tractus urogénital, ou UGT, déplacez doucement la graisse et les autres organes sur le côté pour exposer les tissus urinaires. Puis, à l’aide d’une pince, saisissez un canal déférent à sa base, près de l’urètre, et arrachez le vaisseau. Après avoir retiré l’autre conduit, utilisez une pince pour tenir et tirer soigneusement la vessie vers le haut, tout en utilisant simultanément des ciseaux pour couper l’urètre sous la prostate ventrale et à environ un centimètre sous la base de la vessie.

Transférez l’UGT récolté dans une boîte de Pétri de 60 à 100 millimètres contenant environ cinq à 10 millilitres de PBS, et placez la boîte sous un microscope de dissection. Ensuite, prenez une paire de pinces fines dans chaque main, en tenant les instruments comme des crayons, et posez les avant-bras sur le dessus de la paillasse, de chaque côté du microscope, pour les maintenir stables. Positionnez l’UGT avec la pince, de sorte que la vessie soit tournée vers le haut, que l’urètre soit pointé vers le bas et que les vésicules séminales soient positionnées de chaque côté de la vessie.

En saisissant l’urètre avec une pince, utilisez l’autre pince pour retirer soigneusement la graisse sans retirer de tissu prostatique. Lorsque toute la graisse a été enlevée, déchirez le tissu conjonctif entre les deux lobes ventraux de la prostate pour les séparer. Ensuite, en tenant l’un des lobes ventraux près de l’extrémité avec une paire de pinces, saisissez la base du lobe aussi près que possible de l’urètre.

Maintenant, déplacez l’autre paire de pinces pour retenir l’urètre tout en éloignant le lobe du vaisseau avec un mouvement ferme et fluide. Confirmez qu’il ne reste plus de tissu prostatique attaché à l’urètre. Ensuite, placez le lobe dans le milieu approprié, en fonction de l’étape expérimentale suivante.

Après avoir isolé l’autre lobe ventral de la même manière, à l’aide d’une pince, tirez doucement l’un des lobes antérieurs loin de la vésicule séminale, en prenant soin de ne pas perforer la vésicule séminale. Ensuite, une fois que le lobe est indépendant de la vésicule séminale, retirez-le de la même manière que ce qui vient d’être démontré pour le lobe ventral. Après avoir isolé le deuxième lobe antérieur, retournez l’UGT restant, de sorte que la prostate dorsale soit visible, et utilisez des pinces pour déchirer le tissu conjonctif entre les deux lobes latéraux dorsaux et entre les lobes et la région postérieure des vésicules séminales.

Ensuite, retirez les lobes latéraux dorsaux individuels, comme nous venons de le démontrer. Pour effectuer la castration, commencez par placer une souris anesthésiée sur une surface propre et stérile en position couchée et confirmez le niveau approprié de sédation par pincement des orteils. Si la souris ne réagit pas, utilisez un rasoir électrique pour raser la zone chirurgicale et stériliser l’abdomen.

Ensuite, utilisez des ciseaux chirurgicaux stériles pour faire une incision verticale d’un centimètre à travers la peau médiane du bas-ventre, à environ un point cinq centimètres en avant du pénis, suivie d’une incision plus petite à travers le péritoine, en prenant soin de ne couper aucun organe. À l’aide d’une pince stérile, soulevez doucement le bord coupé du péritoine pour visualiser la cavité péritonéale et utilisez une autre pince stérile pour retirer l’un des coussinets adipeux testiculaires jusqu’à ce que les testicules apparaissent. Ensuite, utilisez un stylo à cautérisation pour couper lentement le coussinet adipeux, en tenant les testicules jusqu’à ce que l’artère testiculaire ait été sectionnée.

Si l’artère est coupée trop rapidement, le vaisseau peut saigner trop, ce qui nécessite l’euthanasie de la souris. Je recommande de chauffer l’enclos de cautérisation par à-coups, de ne pas le laisser devenir trop chaud, puis de déplacer lentement l’instrument dans l’artère afin que l’animal ne saigne pas. Une fois que le coussinet adipeux et l’artère ont été coupés, jetez les testicules et le coussinet adipeux et répétez la castration pour les autres testicules.

Une fois les deuxièmes testicules retirés, fermez le péritoine avec des sutures en soie stériles et agrafez la peau avec des clips chirurgicaux. Ensuite, administrez un analgésique pour gérer la douleur et placez la souris dans une cage propre, sur un chauffe-cage, pendant 5 à 10 minutes avec surveillance, jusqu’à ce qu’elle soit complètement rétablie. L’ensemble du tractus urogénital est composé des six lobes de la prostate, de la vessie, des vésicules séminales et de l’urètre.

Le canal déférent se fixe à l’urètre, mais n’est pas nécessaire pour la curation manuelle de la prostate et peut donc être détaché avant l’ablation de l’UGT. Le tractus urogénital restera intact une fois qu’il aura été retiré de l’abdomen ; recouvert de tissu adipeux qui doit être enlevé pour accéder aux lobes de la prostate. Dans cette expérience représentative, la castration a été suivie de deux cycles de régénération hormonale, et les niveaux de testostérone dans le sérum ont été surveillés par ELISA.

Comme prévu, dans des conditions de castration, les niveaux de testostérone ont pratiquement disparu. En présence de tamoxifène, un modulateur sélectif des récepteurs d’œstrogènes, aucune différence significative par rapport à l’état hormonal normal n’a été observée. Après la castration, cependant, la réintroduction de la testostérone a provoqué une augmentation spectaculaire des niveaux de testostérone sérique.

Après la micro-dissection, les lobes de la prostate des souris castrées sont considérablement diminués, tandis que les lobes des animaux traités à la testostérone retrouvent leur taille d’origine. De plus, la coloration à l’hématoxyline et à l’éosine du tissu antérieur de la prostate dans des conditions normales, castrées et régénérées révèle une réduction spectaculaire de la croissance tissulaire robuste dans les sections des animaux castrés. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en cinq minutes par souris, si elle est correctement exécutée.

Lors de la castration, il est important de se rappeler de tout garder stérile et de s’assurer de contrôler la douleur ressentie par la souris. Après la castration, d’autres méthodes, comme la réintroduction d’androgènes, peuvent être effectuées pour répondre à des questions supplémentaires sur les effets de la testostérone sur les tumeurs de la prostate. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine du cancer de la prostate pour explorer la cancérogenèse, le développement et la résistance à la castration chez la souris.