Name: Audace, Agression, et Essais de shoaling pour Zebrafish Behavioral Syndromes (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: Découvrez une méthodologie standardisée pour observer et analyser l'audace, l'agression et le shoaling chez Danio rerio. Cette approche facilite les comparaisons inter-études en écologie comportementale et en neurosciences.

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Ce travail a été soutenu par une bourse d’éducation de l’Institut médical Howard Hughes et une subvention interne de la section de Sigma Xi de l’Université Saint-Joseph. Nous tenons également à remercier les trois examinateurs anonymes qui ont contribué à renforcer le protocole et les interprétations.

Les méthodes suivantes pour le logement, les soins, et l&#39;étude de zebrafish ont été approuvés par l&#39;Université IACUC Saint-Joseph. 1. Zebrafish Logement et soins <ol><li> Obtenir le sujet zebrafish auprès d&#39;un fournisseur local, ou à partir de populations sauvages capturés. S&#39;il vous plaît noter que le logement du poisson zèbre est soumis à des directives IACUC et des permis supplémentaires sont nécessaires pour les populations sauvages capturés logement. </li><li> Identifier et zebrafish séparés selon le sexe. Sinon, ignorez cette étape ou la remplacer par une autre méthode de séparation basée sur l&#39;hypothèse de l&#39;étude. REMARQUE: Les caractéristiques du sexe sont difficiles à déterminer chez le poisson zèbre, en particulier chez les femmes. Reportez - vous à ces lignes directrices 10 ou manuels en ligne utiles pour distinguer le sexe. </li><li> Aléatoirement séparer les populations plus loin dans le rapport approprié du poisson focal au stimulus poisson. Note: les poissons Focal sont les sujets de test ont suivi à travers la série de behaviodosages ral, et les poissons de relance sont les personnes qui occuperont les chambres de relance à l&#39;agression et shoaling essais. NOTE: Traditionnellement, entre 1 et 5 poissons de stimulation par poisson focal dans les essais de shoaling et 1: 1 stimulus: rapport de poissons focal dans des essais d&#39;agression 14,17 sont utilisés. Cependant, le chercheur doit concevoir spécifiquement l&#39;étude avec l&#39;hypothèse à l&#39; esprit (c. -à- devraient stimulus poissons être maintenue constante pour maintenir la cohérence dans le comportement des poissons focal, ou devrait stimulus poissons tourner entre chaque essai pour assurer la randomisation appropriée). </li><li> Conservez tous les poissons dans des racks de logement de poisson zèbre (27,5 à 28,5 ° C) sous un cycle strict 12h12 lumière / obscurité. Nourrir tous les aliments focal et stimulus poissons flocons quotidienne et les crevettes de saumure hebdomadaire, les jours non-recherche. </li><li> Assurez - vous que tous les tests sont effectués entre ZT1 et ZT5 (temps de zeitgeber) pour éviter les effets du rythme circadien 26. </li></ol> 2. randomisation et réservoir Setup <ol><li> Randomize tous les individus a priori une séquence spécifique de tests comportementaux. Mettre en place un système de randomisation en utilisant un générateur de séquence aléatoire en ligne 27 ou un générateur de séquence aléatoire à partir d&#39; un logiciel statistique (R). <ol><li> Etiqueter chaque essai 1-3 et de garder cette affectation cohérente. Attribuer un ordre aléatoire à chaque individu et cartographier la séquence selon l&#39;étiquette d&#39;analyse comportementale. Par exemple, pour trois essais au total (1 mappés à shoaling, 2 mappé à Audace, et 3 mappés à l&#39;agression), un individu donné peut avoir une séquence aléatoire de &#39;2,3,1&#39;, ce qui les obligera à effectuer le spécifique tests comportementaux dans la séquence spécifiée. </li></ol></li><li> Mettre en place les réservoirs d&#39;essai (l&#39;audace, l&#39;agressivité et shoaling) dans le laboratoire dans des endroits qui minimisent la possibilité pour les stimuli externes défavorables et être sûr d&#39;avoir assez de place pour un caméscope pour capturer l&#39;ensemble du réservoir. Assurez-vous que le caméscope a enough de clarté pour afficher les étiquettes de réservoir ainsi que être capable de distinguer les comportements subtiles du poisson focal et la configuration du caméscope dans cette position. </li><li> Enregistrez tous les tests de comportement avec l&#39;appareil photo maintenu dans la même position avec une vue complète du réservoir spécifiée pour minimiser les différences inattendues dans la notation du comportement à la suite d&#39;enregistrements différentiels. REMARQUE: Évitez de placer les réservoirs dans les zones de circulation lourde et par des portes que le mouvement et le son aura une incidence sur le comportement du poisson zèbre. </li><li> Mettre en place des protocoles de jWatcher uniques 24 pour marquer chaque essai de comportement. Reportez-vous au manuel jWatcher pour apprendre comment créer des fichiers maîtres focaux pour affecter des comportements à des frappes et des fichiers d&#39;analyse focaux pour résumer les données recueillies. NOTE: jWatcher est un logiciel de notation comportementale qui permet de marquer comportemental fiable et reproductible sur mesure 24. </li><li> Définir un système d&#39;étiquetage pour suivre la date, le nombre de poissons, et le numéro de test pour tous les tests de comportement (par exemple,&#39;F5-B-123115 »impliquant poisson 5, analyse Audace, sur Décembre 31, 2015) et étiqueter l&#39;extérieur du réservoir avec du ruban adhésif en vue et la mise au point de la caméra. Conserver et enregistrer ces informations dans un cahier de laboratoire pour une référence rapide et futur contrôle de la qualité. </li><li> Mettre en place un réservoir d&#39;acclimatation qui sera utilisé entre tous les essais, ainsi que directement après que les individus sont retirés de la crémaillère du boîtier. NOTE: Les réservoirs d&#39;acclimatation et de réservoirs terminaux sont de petits aquariums (40 cm x 20 cm x 25 cm) avec du gravier et un filtre qui ressemblent étroitement à la crémaillère du boîtier. </li><li> Après les essais sont tous terminés, transférer l&#39;individu dans un réservoir terminal séparé qui servira de réservoir de destination finale pour toutes les personnes focales utilisées. Utiliser un réservoir qui est assez grand pour loger un groupe d&#39;individus pour le reste de leur vie (par exemple 25 gallons). NOTE: Il est très important de maintenir la température et les conditions d&#39;eau cohérentes et similaires across tous les réservoirs. Cela comprend le logement, l&#39;acclimatation, et tous les réservoirs d&#39;essai. </li></ol> 3. Conduite de l&#39;Assay Agression <ol><li> Effectuer le test de l&#39;agression dans un réservoir rectangulaire 19 L mesurant 30 cm x 15 cm x 10 cm. Équiper le réservoir dans les cloisons opaques externes entourant les trois côtés du réservoir d&#39;agression, en laissant la face exposée pour la visualisation, afin de réduire les stimuli extérieurs indésirables. Divisez le réservoir avec des marques externes en quatre quadrants rectangulaires égaux et fixer un miroir en permanence (avec joint de silicone) dans le quadrant inférieur gauche, incliné à 22,5 ° formant un triangle rectangle sur le côté gauche de la cuve. </li><li> Faire en sorte que la température de l&#39;eau dans la cuve d&#39;acclimatation et d&#39;agression réservoir est à 2 ° C de la crémaillère du boîtier. Pour ce faire, ont, l&#39;eau douce d&#39;âge pré-chauffé à 27,5 à 28,5 ° C prêt à ajouter au réservoir d&#39;agression. S&#39;il vous plaît noter qu&#39;il est important de changer l&#39;eau entre chaque essai pour éliminer injustifiéeles signaux olfactifs. </li><li> Le transfert, par les ventouses, un poisson focal de la crémaillère du boîtier dans une cuve d&#39;acclimatation où il sera séparé acclimater pendant 10 min. NOTE: Il est important de réduire les stimulus introduits dans le poisson par une mauvaise manipulation. Individus de transfert tels que décrits précédemment 27. <ol><li> Plus précisément, manuellement et soigneusement placer une petite tasse en plastique transparent dans le réservoir d&#39;intérêt. Sans perturber le poisson autant que le transfert à l&#39;aide d&#39;un filet, ramasser lentement le poisson dans la tasse. </li></ol></li><li> Assurez-vous que le caméscope est prêt à enregistrer en confirmant que le réservoir d&#39;essai de l&#39;agression (voir étape 3.1) est mise au point et immédiatement avant le transfert de l&#39;individu dans le réservoir d&#39;agression, appuyez sur disque sur le périphérique. Transfert poissons focal via les ventouses du réservoir d&#39;acclimatation au réservoir d&#39;agression. NOTE: Il est important d&#39;enregistrer avant que le poisson entrant dans le réservoir d&#39;agression pour suivre l&#39;heure exacte d&#39;entrée. </li><li> Notez le agrréservoir de ession pendant 10 min et 30 sec, puis coupe le poisson focal du réservoir de l&#39;agression dans le réservoir d&#39;acclimatation. </li><li> Lorsque vous regardez l&#39;enregistrement, attendez 30 secondes après que le poisson a été introduit dans le réservoir comme une période d&#39;acclimatation supplémentaire avant les comportements de notation. </li><li> En utilisant le système de notation jWatcher défini pour les comportements agressifs, de quantifier les comportements suivants pour 10 min: Le temps passé près du miroir, nombre d&#39;approches de miroir, nombre de fléchettes, nombre de tentatives de morsures (ouverture bouche en direction du miroir), et nombre d&#39;écrans latéraux (dorsale, pectorale, anal, et l&#39; érection de la nageoire caudale) 9. </li><li> Score un test d&#39;agression unique au moins deux fois, jusqu&#39;à ce que le test est marqué avec une grande entente entre les itérations. </li></ol> 4. Conduite de l&#39;Audace Assay <ol><li> Effectuer le test d&#39;audace dans un petit 1,5 L réservoir de forme trapézoïdale, mesurant 15 cm de hauteur x 26,5 cm haut x 22,5 cm de largeur inférieure x 6 cm. Enveloppez papier opaque autour de tous les côtés of le réservoir, mais laisser l&#39;avant exposée pour la visualisation. Placez une seule, mince morceau de ruban adhésif extérieur à la citerne pour délimiter la partie supérieure de la partie inférieure du réservoir. </li><li> Assurez-vous que la température de l&#39;eau dans le réservoir d&#39;audace est à moins de 2 ° C de la crémaillère du boîtier (voir l&#39;étape 3.2) </li><li> Transférer le poisson focal du rack du logement au réservoir d&#39;acclimatation (voir étape 3.3) et laisser acclimater pendant 10 min. </li><li> Assurez-vous que le caméscope est prêt à enregistrer le test d&#39;audace et, une fois prêt à transférer le poisson focal, appuyez sur disque sur le périphérique. Transférez le poisson focal du réservoir d&#39;acclimatation dans le réservoir d&#39;audace et d&#39;enregistrer pendant 8 min et 30 sec. </li><li> Lorsque vous regardez l&#39;enregistrement, prévoir une période supplémentaire d&#39;acclimatation de 30 secondes après que le poisson est introduit dans le réservoir avant de marquer. </li><li> En utilisant le logiciel jWatcher, quantifier les comportements d&#39;audace pendant 8 min. Plus précisément, quantifier les comportements suivants: Temps près de la surface, la latence pour entrer dans la partie supérieure, le nombre de transitions dans la partie supérieure, et le nombre de mouvements erratiques (fléchettes) 29. </li><li> Score un essai d&#39;audace unique au moins deux fois, jusqu&#39;à ce que le test est marqué avec une grande entente entre les itérations. </li></ol> 5. La réalisation du test shoaling <ol><li> Procéder à l&#39;essai shoaling dans un réservoir de 76 L qui comporte trois compartiments séparés par deux cloisons de verre scellé avec joint de silicone (les trois compartiments résultants sont constitués de deux zones de stimulation et un compartiment central). Extérieurement, marquer deux zones privilégiées désignées 6,35 cm de chaque verre de diviseur des zones de relance, indicative de deux corps longueurs 30. Appliquer des cloisons opaques à l&#39;extérieur autour de trois côtés de la cuve de shoaling, mais laisser l&#39;avant exposée pour la visualisation. NOTE: Cette zone de préférence peut être personnalisé pour tester des hypothèses spécifiques pour les espèces de différentes tailles. </li><li> Selon la nature de l&#39;étude, sélectionnez les hauts-fonds de relance pour acclimater pendant au moins 12 heures before essai et restent dans le réservoir shoaling tout au long de l&#39;expérience. NOTE: les hauts-fonds de stimulation sont des collections de poissons individuels qui sont utilisés pour évaluer la façon dont le poisson focal se comporte en présence ou en l&#39;absence de ces hauts-fonds. Différentes combinaisons de relance des hauts-fonds peuvent être sélectionnés pour tester un certain nombre d&#39;hypothèses de shoaling diverses. Assurez-vous que les hauts-fonds de relance sont mis en rotation entre chaque zone de relance pour éviter les biais côté et sont également autorisés à acclimater pendant au moins 12 heures avant le test. </li><li> Transférez le poisson focal dans le réservoir d&#39;acclimatation comme décrit précédemment (voir étape 3.3) </li><li> Transfert, par emboutissage, le poisson focal du réservoir d&#39;acclimatation intermédiaire au compartiment central dans le réservoir de shoaling. </li><li> Prévoir une période d&#39;acclimatation de 10 minutes avant un live-scoring période d&#39;observation de 10 min. Vous pouvez également enregistrer les tests de shoaling et marquer plus tard en utilisant jWatcher. Les poissons sont déterminés à être shoaling quand ils sont dans la zone de préférence dans la chambrelogeant le banc cible. </li><li> Quantifier le temps passé dans chaque zone et le temps passé préférence dans le volume central. </li><li> En tant que mesure descriptive supplémentaire, calculer «force de shoaling &#39;(SoS). Attribuer une valeur comprise entre -1 et +1 où l&#39;ampleur décrit comment souvent un bancs de poissons individuels. </li><li> Calculer le rapport du temps passé shoaling divisée par la superficie des zones de shoaling et soustraire le rapport du temps passé pas shoaling et la région des zones non-shoaling. Placez cette quantité sur la somme du temps passé dans chaque zone divisée par le volume de chaque zone individuellement. Plus d&#39; informations sur ce calcul peut être trouvée dans une étude précédente 14. </li></ol> 6. Contrôle de la qualité des données <ol><li> Analyser les données en utilisant les données traditionnelles outils d&#39;analyse 31-32. </li><li> Test de l&#39;homogénéité de la variance utilisant le test de nonparametric Levene pour tous les comportements. Si un comportement est non-homogène effectuer une transformation logarithmique33. </li><li> Vérifiez qu&#39;il n&#39;y a pas d&#39; effets de séquence (ie, que l&#39;ordre de randomisation n&#39;a pas d&#39; incidence sur le comportement des individus) en utilisant un Kruskal-Wallis ANOVA sur les données homogènes 34. </li><li> Vérifiez qu&#39;il n&#39;y a pas de biais secondaires pour le dosage de shoaling en créant univariée modèles linéaires généraux sur SoS indices avec le côté comme un facteur fixe 35. NOTE: S&#39;il y a peu ou pas de problèmes avec les données, les analyses en aval peuvent être menées. S&#39;il y a des problèmes, se réconcilier avec les transformations supplémentaires, rationaliser avec des explications plausibles biologiquement, et / ou d&#39;augmenter la taille des échantillons. </li></ol> 7. Analyser les données <ol><li> Rang Spearman Calculer deux queues corrélations 36 pour tous les comportements séparément au sein de l&#39;audace et l&#39; agressivité des essais. </li><li> Calculer les coefficients de corrélation intraclasse (ICC) comme les deux sens modèle mixte avec cohérence pour les tests comportementaux qui ont été menées plus d&#39;un time pour un individu donné 36. Dans ce cadre, la CPI est une mesure de la façon dont toujours un poisson comporté dans un essai donné mesuré plus d&#39;une fois. </li><li> L&#39; audace et l&#39; agressivité des comportements Preprocess par centrage et Norming tous les comportements pour se préparer à l&#39; entrée à une analyse en composantes principales (ACP) 25. NOTE: Prétraitement les mesures en centrant et Norming est une étape essentielle. Sans ces prétraitements comportements étape qui se produisent avec plus de fréquence et plus variable sera trop influencer les interprétations des composants extraits. Le processus de centrage et Norming va supprimer ce biais. </li><li> Effectuer une APC avec une matrice de corrélation pour déterminer si l&#39;audace et l&#39;agressivité sont liées ensemble comme un syndrome comportemental. Interpréter les charges de comportement de chaque composant significatif à&gt; 0,6. Voir Budaev 2010 24 pour un guide complet pour les rapports PCA pour les études comportementales. Une parcelle de pierrier sera informative sur laquelle eigenvecteurs doivent être conservés à l&#39;interprétation. </li><li> Utilisation de logiciel de statistiques telles que R ou SPSS 31,32, extraire les scores pour chaque composant pour chaque individu. Les scores représentent combien le comportement de l&#39;individu donné peut être expliqué par le composant particulier. </li><li> Calculer Spearman corrélations de rang entre les scores de régression des facteurs et la force de shoaling 36. NOTE: Un syndrome comportemental est considéré comme présent si les comportements de l&#39;audace et l&#39;agressivité se chargent sur le même composant ou, si un composant avec des charges importantes interprétables est en corrélation avec la force de shoaling. Notez également que la force de shoaling ne sont pas inclus dans l&#39;APC pour permettre de meilleures interprétations des quantifications de comportement plus complexes (l&#39;audace et l&#39;agression). L&#39;APC orthogonale effondrement d&#39;audace et d&#39;agression caractéristiques en vecteurs propres à maximiser la quantité de variation expliquée et est bien adapté pour ces mesures complexes. Interprétationvecteurs propres résultant et régressant notre force des mesures de shoaling sur chacun d&#39;eux donne une interprétation beaucoup plus intuitive de la façon dont chacun des comportements complexes (audace et agression) se rapportent à une mesure de shoaling binaire plus bien définie (ie, le poisson est shoaling ou pas shoaling). </li></ol>

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</ol>

Les auteurs (GW et SPM) n’ont pas d’intérêts financiers concurrents ou de conflits d’intérêts.

Le protocole déterminera s&#39;il existe des associations cohérentes dans l&#39;audace, l&#39;agressivité et les comportements de shoaling chez le poisson zèbre. S&#39;il existe des associations cohérentes dans une population donnée entre l&#39;un de ces comportements, un syndrome comportemental est présent. En étudiant le syndrome comportemental naturel de la population, les chercheurs peuvent avoir une compréhension plus complète de sa dynamique comportementale, la structure de la population, et peut - être l&#39; his...

Il y a un nombre croissant d&#39;études enquêter sur les associations entre les comportements distincts au sein de chaque animal à partir d&#39;une population donnée. Ces associations sont appelés syndromes de comportement, et les mesures comprennent généralement l&#39; audace, l&#39; agressivité, comportement exploratoire, et la sociabilité 1-5. syndromes comportementaux sont précieux pour les raisons directes et indirectes. Directement, la connaissance des syndromes de comportement peut fournir une vue plus complète de la théorie évolutionniste, la structure de la population et la dynamique des populations 3. Indirectement, les connaissances en ce qui concerne les associations de comportement peut informer les champs qui permettent de quantifier des comportements tels que la pharmacologie 6, toxicologie 7, la génétique du comportement 8,9, et en endocrinologie 10. En raison de ces avantages directs et indirects, une connaissance accrue des syndromes de comportement est particulièrement utile dans des organismes modèles couramment utilisés tels que le poisson zèbre. Les études utilisant zebrafish se trouvent ina variété de disciplines, y compris l&#39;analyse des syndromes comportementaux 11-13. Pour faire progresser les connaissances dans la recherche sur le syndrome de comportement, et parce que d&#39;autres disciplines utilisent également des mesures comportementales pour les tests d&#39;hypothèses, descriptions fiables et succinctes de comportement sont requis pour des analyses et des interprétations valables et des protocoles normalisés facilitera les comparaisons inter-études au sein des espèces. Notre protocole a été développé pour mesurer un syndrome comportemental audace-agression-shoaling dans une population de laboratoire élevés zebrafish 14. Cependant, la base du protocole (suivi individuel des poissons, assurant la randomisation appropriée, et des analyses appropriées) peut être facilement modifié pour une variété de mesures comportementales alternatives. En outre, des tests d&#39;audace, d&#39;agression, ou shoaling peuvent être exécutés individuellement pour les tests d&#39;hypothèses distinctes. Par conséquent, alors que notre objectif est de décrire la façon de mener une étude de syndrome comportemental et le protocole pour la réussite de l individuEvel mesure comportementale, chaque facette de cette procédure peut se tenir seul. La littérature sur les syndromes de comportement couvre plusieurs groupes taxonomiques, de arthropodes aux humains 4 et, afin de mesurer un syndrome comportemental, au moins deux contextes comportementaux doivent être quantifiés. Malheureusement, il y a souvent peu de cohérence dans les tests qui sont utilisés pour quantifier la mesure du comportement à travers les axes de comportement. Par exemple, chez les poissons, l&#39; audace peut être mesurée en utilisant des essais T-labyrinthe, des essais en plein champ, ou l&#39; introduction d&#39;un roman ou un stimulus étranger 15. Les études de l&#39; agressivité chez les poissons pourraient impliquer des interactions dyade, des analyses vidéo de relance, ou des essais de modèles d&#39;argile 12,16,17. De même, l&#39; analyse du comportement grégaire, qui implique généralement la mesure de préférence shoalmate, peut être réalisée dans différents types de réservoirs, avec des méthodes différentes pour déterminer le temps d&#39;association 21-23. Dans ce protocole, un sous-ensemble spécifique de la overall répertoire de test de comportement est présenté. Plus précisément, ce protocole présente une méthodologie pour suivre les individus à travers l&#39;audace, l&#39;agressivité et des essais de shoaling d&#39;une manière qui facilite les comparaisons entre les individus afin de déterminer si les comparaisons sont uniformes dans tous les individus au sein d&#39;une population. Nous avons effectué ce protocole avec zebrafish et cichlidés bagnes (amatitlania de nigrofasciata) dans des études antérieures 14,18, et il fonctionne avec tous les poissons d&#39;eau douce de taille similaire. essais de AUDACE sont conduites dans un réservoir de forme trapézoïdale de 1,5 L qui a une ligne horizontale la délimitation des zones de taille égale dans les parties supérieure et inférieure de la cuve. comportements quantifiées comprennent le nombre de transitions par les poissons d&#39;essai entre la partie supérieure et inférieure de la cuve, le temps passé dans chaque partie, le nombre de fléchettes, et le temps de latence pour entrer dans la partie supérieure. Le dosage de l&#39;agression est réalisée dans un réservoir rectangulaire qui comprend 19Lun miroir de 3 pouces x 5 pouces incliné à environ 22 ° situé dans le coin inférieur gauche de la cuve 19. Comportements quantifiées comprennent le montant total du temps passé par le poisson cible en interaction avec le miroir 20, ainsi que des indicateurs spécifiques agressifs - nombre de piqûres, affiche latérales, fléchettes entre les poissons d&#39;essai et de sa réflexion. Pour ces indicateurs spécifiques, les piqûres sont définis comme des mouvements brusques rapides vers le miroir avec une bouche ouverte, les écrans latéraux sont définis comme le torchage du latéral, pectoraux, nageoires dorsale et anale dans la direction du miroir, et les fléchettes sont des mouvements erratiques qui sont pas dirigé vers le miroir. Enfin, le dosage de shoaling quantifie le comportement d&#39;un poisson d&#39;essai dans la chambre centre d&#39;un réservoir de tri-chambré. Les chambres latérales de la cuve sont soit vide, soit contiennent un &quot;banc cible&quot; de poissons, et le temps du poisson d&#39;essai passe près de chaque chambre latérale est mesurée 21-23. Un score composite unique, dénommé StrenGTH de shoaling (SoS), est calculée pour chaque poisson d&#39;essai individuel, spécifique aux stimuli, et peut être utilisé en aval des analyses 14. Tous les comportements sont marqués par un seul spectateur, ou plusieurs téléspectateurs en utilisant un logiciel de quantification comportementale libre connu sous le nom jWatcher 24. Test de la présence d&#39;un syndrome comportemental est principalement une entreprise statistique, et il est conseillé de suivre les lignes directrices tel que présenté par Budeav 2010 25. Plus précisément, il est recommandé d&#39;effectuer une analyse en composantes principales (ACP) sur les données centrées et normées dans lequel le les entrées sont les vecteurs des comportements d&#39;un individu dans des essais avec des mesures comportementales multiples (c. -à , l&#39; audace et l&#39; agression). La CPA, réalisée sur une matrice de corrélation, réduit la dimension des mesures comportementales et extrait donc la connaissance la plus importante qui explique la majorité de la variation. Les composants extraits peuvent ensuite être interprétées based sur les charges de facteurs élevés pour le comportement individuel des intérêts et de régression des scores peut être extrait pour chaque individu sur la base des éléments explicatifs. Ces scores de régression peuvent ensuite être comparées à la mesure SoS et diverses autres mesures non-comportementales telles que la taille du poisson ou le sexe. Ce flux de travail a été mis en œuvre dans une étude des syndromes de comportement de poisson zèbre dans lequel un syndrome comportemental spécifique du sexe qui existe entre l&#39; audace et shoaling 14 a été découvert. Dans cette situation, les hommes plus audacieux de poisson zèbre sont plus susceptibles d&#39;associer à une espèce plus grande, plus agressifs (D. albolineatus), mais cette association est perdue chez les femelles. Ce flux de travail a également été mis en œuvre dans une étude des mineurs condamnés kin cichlidés (amatitlania de nigrofasciata) 18 dans laquelle un syndrome comportemental n&#39;a pas été découvert, ce qui pourrait indiquer la plasticité comportementale de l&#39;espèce. Par conséquent, le protocole suivant est présenté wvec un but de délimiter la nature des trois dosages spécifiques (l&#39;audace, l&#39;agressivité et shoaling) dans le cadre de l&#39;étude d&#39;un syndrome comportemental au niveau individuel.

<table><tbody><tr><td>Système de support pour poisson zèbre</td><td>Aquaneering Inc</td><td>Cat. # ZS550</td><td></td></tr><tr><td>Nourriture pour poissons tropicaux Pet Valu, 224.0 g</td><td>Pet Valu</td><td>Cat. # 31700</td><td></td></tr><tr><td>Œufs d’artémias de qualité supérieure, 16 oz</td><td>Crevettes de saumure Réservoir trapézoïdal direct</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.5 L</td><td>Écosystèmes aquatiques Pentair Cat</td><td>. # itsts-a</td><td></td></tr><tr><td>Réservoir rectangulaire de 19 L</td><td>que les poissons placent</td><td></td><td></td>211932</tr><tr><td>réservoir rectangulaire de 76 L</td><td>That Fish Place</td><td>212180</td><td></td></tr><tr><td>Hitachi KP-D20A CCD Camera</td><td>Prescott’s, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon AF Nikkor 35-105 mm f/305~4.5s Objectif MACRO</td><td>Nikon Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ArtMinds Square Mirror, Value Pack 3 » x 3"</td><td>Michaels</td><td>Cat. # 10334162</td><td></td></tr><tr><td>Jwatcher</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>SPSS Statistics Base</td><td>IBM</td><td></td><td></td></tr><tr><td>R</td><td>The R Foundation</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

audace, agression, et essais de shoaling pour zebrafish behavioral syndromes

Boldness, Aggression, and Shoaling Assays for Zebrafish Behavioral Syndromes

Un syndrome comportemental existe lorsque des comportements spécifiques interagissent dans des contextes différents. Zebrafish ont été sujets d&#39;essai dans des études récentes et il est important de normaliser les protocoles pour assurer des analyses et des interprétations appropriées. Dans nos études précédentes, nous avons mesuré l&#39;audace en surveillant une série de comportements (temps près de la surface, la latence dans les transitions, le nombre de transitions, et fléchettes) dans un réservoir de 1,5 L trapézoïdale. De même, nous avons quantifié l&#39;agression par les piqûres d&#39;observation, des écrans latéraux, des fléchettes, et de temps à proximité d&#39;un miroir incliné dans une forme rectangulaire 19 L réservoir. En divisant un réservoir de 76 L en tiers, nous avons également examiné les préférences de shoaling. Le dosage de shoaling est un test hautement personnalisable et peut être adapté pour des hypothèses spécifiques. Cependant, les protocoles pour ce test doivent également être standardisé, mais suffisamment souple pour la personnalisation. Dans des études précédentes, chambres d&#39;extrémité étaient soit vide, contenait 5 ou 10 zebrafish, ou 5 danios perlières (D. albolineatus). Dans le folLowing manuscrit, nous présentons un protocole détaillé et des données représentatives qui accompagnent les applications réussies du protocole, ce qui permettra à la réplication des expériences de syndrome de comportement.

En fonction de la nature de l&#39;étude, et d&#39;un protocole spécifique utilisé, plusieurs résultats distincts sont possibles dans une expérience de syndromes comportementaux. Les tableaux et les figures, lorsque cela est indiqué ci - après, sont adaptés de notre précédente étude publiée dans la revue Behavioural Processes 14 et la revue Zebrafish 17. Lorsque la proposition (comme décrit ci - dessus) est réalisée dans son intégralité, deux séries de résultats, «da...

Ce manuscrit décrit la configuration, la mise en œuvre et l’analyse de l’audace, de l’agressivité et des bancs chez le poisson-zèbre et le test de la présence d’un syndrome comportemental. Une approche standardisée de la quantification comportementale permettra une comparaison plus facile entre les études. Des modifications de ce protocole sont possibles car chaque test peut être effectué individuellement.

Audace, Agression, et Essais de shoaling pour Zebrafish Behavioral Syndromes

A behavioral syndrome exists when specific behaviors interact under different contexts. Zebrafish have been test subjects in recent studies and it is ...

L'objectif général de ce protocole est de normaliser la méthodologie utilisée pour observer, analyser et interpréter les syndromes comportementaux de témérité, d'agressivité et de regroupement chez le poisson zèbre. Directement, cette méthode permet de répondre à des questions relatives à la théorie de l'évolution, à la structure des populations et à la dynamique des populations. Lorsqu'elle est combinée à des techniques interdisciplinaires, elle peut être appliquée à des domaines tels que la pharmacologie, la toxicologie, la génétique comportementale et l'endocrinologie.Le principal avantage de cette technique est que la combinaison de l'audace, de l'agressivité et du comportement grégaire englobe de nombreux comportements bien étudiés et facilement quantifiables chez le poisson-zèbre. Et chaque test peut être modifié pour répondre à d'autres questions expérimentales. Commencez par répartir aléatoirement les poissons-zèbres selon le ratio approprié entre poissons cibles et poissons stimulus.Conserver tous les poissons dans des bacs d'élevage pour zèbres sous un cycle lumineux strict de 12 heures de lumière pour 12 heures d'obscurité. Nourrir tous les poissons cibles et stimulus quotidiennement avec de la nourriture en flocons. Ne donner des artémies que une fois par semaine, uniquement les jours sans recherche.Ensuite, préparez trois aquariums d'essai en laboratoire : un pour l'agressivité, l'audace et le regroupement en banc, dans des emplacements qui minimisent les risques de stimuli externes indésirables, et prévoyez suffisamment d'espace pour qu'une caméra vidéo puisse filmer l'ensemble de l'aquarium.Installez la caméra vidéo de manière à ce qu'elle dispose d'une netteté suffisante pour lire les étiquettes des aquariums, ainsi que pour distinguer les comportements subtils du poisson ciblé. Maintenez la caméra en position fixe avec une vue complète de l'aquarium pendant tous les enregistrements des tests comportementaux, afin de minimiser les différences non intentionnelles dans l'évaluation comportementale dues à des enregistrements variables. Ensuite, définissez un système d'étiquetage permettant de suivre la date, le numéro du poisson et le numéro du test pour tous les essais comportementaux.Étiquetez l'extérieur du réservoir avec du ruban adhésif bien en vue de la caméra. Enregistrez ces informations dans un cahier de laboratoire pour une consultation rapide et un contrôle qualité futur. Enfin, mettez en place un réservoir d'acclimatation qui sera utilisé entre tous les tests, ainsi qu'immédiatement après le retrait des individus du support de maintien.Commencez par vous procurer un réservoir rectangulaire de 19 litres, mesurant 30 sur 15 sur 10 centimètres. Équipez le réservoir de cloisons opaques externes entourant trois côtés du réservoir d'agression, en laissant l'avant découvert pour l'observation afin de réduire les stimuli extérieurs indésirables. Divisez le réservoir à l’aide de marquages externes en quatre quadrants rectangulaires égaux.Utilisez un mastic en silicone pour fixer un miroir dans le quadrant inférieur gauche, incliné à 22,5 degrés, formant un triangle rectangle contre le côté le plus à gauche du réservoir. Ayez de l'eau fraîche et vieillie, préalablement réchauffée à 27,5 à 28,5 degrés Celsius, prête à être ajoutée au réservoir d'agression afin de garantir que la température de l'eau dans le réservoir d'acclimatation et celui d'agression se situe à moins de deux degrés Celsius de celle du rack d'élevage. Prélevez un poisson cible à partir du rack d'élevage et transférez-le dans un réservoir d'acclimatation séparé, où il s'acclimatera pendant 10 minutes.Vérifiez que la caméra vidéo est bien focalisée sur le réservoir de test d'agression et appuyez sur l'enregistrement. Ensuite, transférez immédiatement le poisson cible par écopage depuis le réservoir d'acclimatation vers le réservoir d'agression. Enregistrez le réservoir d'agression pendant 10 minutes et 30 secondes.Ensuite, transférez délicatement le poisson cible du réservoir d'agression vers le réservoir d'acclimatation. Lors de l'observation de l'enregistrement après la fin du test, attendez 30 secondes après l'introduction du poisson dans le réservoir, comme période d'acclimatation supplémentaire, avant de noter les comportements. Enfin, évaluez un seul test d'agression au moins deux fois, jusqu'à ce qu'il soit noté avec un accord élevé entre les itérations.Pour mettre en place le test de hardiesse, procurez-vous d'abord un petit réservoir trapézoïdal de 1,5 litre, mesurant 15 centimètres de hauteur, avec un côté supérieur de 26,5 centimètres et un côté inférieur de 22,5 centimètres, ainsi qu'une largeur de 6 centimètres. Enveloppez trois côtés du réservoir avec du papier opaque et laissez la face avant découverte pour l'observation. Placez un seul morceau de ruban adhésif à l'extérieur du réservoir afin de délimiter la partie supérieure de la partie inférieure du réservoir.Ensuite, vérifiez que la température de l'eau dans le réservoir d'essai de hardiesse se situe à deux degrés Celsius près de celle du rack d'hébergement. Transférez le poisson cible du rack d'hébergement vers le réservoir d'acclimatation et laissez-le s'acclimater pendant 10 minutes. Assurez-vous que la caméra vidéo est bien focalisée sur l'essai de hardiesse, puis appuyez sur « enregistrer » sur l'appareil.Transférez immédiatement le poisson cible du réservoir d'acclimatation au réservoir d'évaluation de l'audace et enregistrez pendant huit minutes et 30 secondes. Lors de l'analyse de l'enregistrement après la fin du test, prévoyez une période d'acclimatation supplémentaire de 30 secondes après l'introduction du poisson dans le réservoir avant de commencer l'évaluation. Enfin, évaluez chaque test d'audace individuel au moins deux fois, jusqu'à ce qu'une forte concordance soit obtenue entre les itérations.Pour mettre en place le test d'agrégation, procurez-vous un réservoir de 76 litres comportant trois compartiments divisés par deux cloisons en verre scellées avec du mastic au silicone. Extérieurement, utilisez du ruban adhésif pour marquer deux zones de préférence situées à 6,35 cm de chacune des cloisons en verre, délimitant ainsi chaque zone de stimulus. Placez des cloisons opaques à l'extérieur sur trois côtés du réservoir d'agrégation, en laissant l'avant découvert pour l'observation.Ensuite, sélectionnez des bancs de stimulus à acclimater pendant au moins 12 heures avant le test et laissez-les dans le réservoir de banc pendant toute la durée de l'expérience. Transférez le poisson cible depuis le rack d'élevage vers un réservoir d'acclimatation séparé par la méthode du coupelage, où il s'acclimatera pendant 10 minutes. Puis, transférez par coupelage le poisson cible du réservoir d'acclimatation vers le compartiment central du réservoir de banc.Prévoir une période d'acclimatation de 10 minutes avant une période d'observation directe de 10 minutes, au cours de laquelle les poissons en banc sont définis comme étant situés dans la zone de préférence de la chambre contenant le banc cible. Ensuite, quantifier le temps passé dans chaque zone de préférence, ainsi que le temps passé dans le volume central. Enfin, après la fin des tests, transférer les poissons dans un aquarium terminal distinct qui servira de réservoir final pour tous les individus focaux utilisés.Ce protocole a examiné les associations constantes entre l'agressivité, l'audace et les comportements de regroupement chez le poisson zèbre afin de déterminer la présence d'un syndrome comportemental. Ici, la composante un représente les comportements d'agressivité, tandis que la composante deux est associée aux comportements d'audace. Puisque les comportements d'agressivité et d'audace ne sont pas représentés par la même composante, on peut conclure à l'absence d'un syndrome comportemental d'agressivité-audace chez le poisson zèbre.Une fois maîtrisé, l'ensemble du protocole pour un poisson focal peut être réalisé en 70 minutes. Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de se familiariser, ainsi que son équipe, avec chaque comportement cible afin de minimiser les biais d'observation. Analyser plusieurs fois le même enregistrement vidéo augmentera également la confiance dans vos résultats.Après avoir suivi cette procédure, d'autres méthodes dans les domaines pharmacologique, génétique ou physiologique peuvent être réalisées afin de répondre à des questions supplémentaires sur les facteurs internes et externes qui influencent les syndromes comportementaux. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la manière d'observer, d'analyser et d'interpréter les syndromes comportementaux liés à l'audace, à l'agressivité et au regroupement chez le poisson zèbre. Merci d'avoir regardé et bonne chance dans vos expériences !

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Nous avons développé la réponse visuelle et de motricité pour quantifier la puissance du moteur du poisson zèbre larvaire dans la réponse aux augmentations de lumière et décrémente. Nous avons également examiné la vision mutants poisson zèbre, y compris le pas de la réponse optocinétique (CNRC) mutants, qui étaient censées être complètement aveugle lorsqu'il est testé par un autre test de vision, le réflexe optocinétique.

Un test pour mesurer la réactivité comportementale du poisson-zèbre à l&#39;évolution des intensités de lumière

La vidéo décrit l’évitement et le dosage de la thigmotaxie des larves de poisson-zèbre. La vidéo examine le comportement des larves de poisson-zèbre en réponse à un stimulus visuel aversif.

Essai d’évitement et de thigmotaxie chez le poisson-zèbre : une méthode à haut débit pour examiner le comportement larvaire en réponse à un stimulus visuel aversif

L’article décrit un test pour étudier l’agression du poisson-zèbre. La méthode utilise un simple miroir et observe la réponse comportementale du poisson-zèbre face à son propre reflet dans le miroir.

Essai d’agressivité : une méthode pour étudier le comportement agressif du poisson-zèbre en réponse à un miroir

Notre laboratoire a développé un système d'imagerie automatisé à haut débit roman qui est utile pour la détection de plusieurs comportements différents dans 7-day-old larves de poisson zèbre. Le système peut être utilisé pour détecter des changements subtils dans le comportement après que les larves ont été exposés à des substances toxiques de l'environnement ou des produits pharmaceutiques.

Analyses comportementales automatisés à haut débit dans les embryons de poisson zèbre

L’utilisation d’un système vidéo automatique 3D capable de suivre des individus et des groupes de poissons-zèbres est décrite. À titre d’exemple d’application, nous explorons les effets de l’antagoniste du récepteur NMDA MK-801 sur des bancs de poissons-zèbres.

Utilisation d’un système de suivi 3D automatisé pour enregistrer les individus et les bancs de poissons-zèbres adultes

Ce manuscrit décrit une méthode simple pour mesurer le stress comportemental chez le zébrafish adulte. L’approche profite de la tendance innée que le zébrafish préfèrent la moitié inférieure d’un réservoir quand dans un État stressant. Nous décrivons également les méthodes de couplage du dosage avec la pharmacologie.

Approches comportementales pour étudier le stress inné dans le Zébrafish

Nous présentons une chambre comportementale conçue pour évaluer les performances cognitives. Nous fournissons des données montrant qu’une fois acquis, le poisson-zèbre se souvient de la tâche 8 semaines plus tard. Nous montrons également que les poissons-zèbres hyperglycémiques ont modifié les performances cognitives, ce qui indique que ce paradigme est applicable aux études évaluant la cognition et la mémoire.

La tâche comportementale de choix à trois chambres utilisant le poisson-zèbre comme système modèle

L’objectif du protocole actuel est de décrire les étapes nécessaires à l’établissement et à l’utilisation d’un test de préférence sociale pour le poisson-zèbre adulte et de démontrer qu’il peut être utilisé pour caractériser les défauts sociaux induits par l’éthanol.

Modélisation des troubles du spectre de l’alcoolisation fœtale chez le poisson-zèbre pour caractériser l’impact d’un environnement embryonnaire défavorable sur le comportement social adulte

Ici, nous présentons une batterie complète de tests comportementaux, y compris le nouveau réservoir, les bancs et les tests de préférence sociale, pour déterminer efficacement les effets neurotoxiques potentiels des produits chimiques (par exemple, la méthamphétamine et le glyphosate) sur les poissons-zèbres adultes en utilisant un seul réservoir. Cette méthode est pertinente pour la recherche sur la neurotoxicité et l’environnement.

Évaluation de la neurotoxicité chez Danio rerio adulte à l’aide d’une batterie de tests comportementaux dans un seul réservoir

Ce protocole établit un paradigme de phénotypage comportemental chez les larves de poisson-zèbre traitées par MPTP afin d’évaluer les déficits moteurs et non moteurs similaires à la maladie de Parkinson.

Profilage phénotypique des phénotypes comportementaux de type parkinsonien induits par le MPTP chez les larves de poisson-zèbre basé sur une expérience comportementale

Les tâches de préférence sociale multi-chambres ont été adaptées des rongeurs au poisson-zèbre, facilitant l’étude du comportement social chez les organismes modèles. Ce protocole valide une tâche à faible coût en aquarium ouvert à 3 chambres utilisant des webcams et des logiciels open source pour mesurer la préférence sociale des poissons-zèbres, la rendant accessible à la recherche et à l’enseignement de premier cycle.

Alternative à faible coût pour examiner la préférence sociale chez le poisson-zèbre (Danio rerio) en utilisant la tâche de nage libre en aquarium ouvert à 3 chambres

Découvrez une méthodologie standardisée pour observer et analyser l'audace, l'agression et le shoaling chez Danio rerio. Cette approche facilite les comparaisons inter-études en écologie comportementale et en neurosciences.

Audace, Agression, et Essais de shoaling pour Zebrafish Behavioral Syndromes

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