Audace, Agression, et Essais de shoaling pour Zebrafish Behavioral Syndromes

L’objectif global de ce protocole est de normaliser la méthodologie utilisée pour observer, analyser et interpréter les syndromes comportementaux d’audace, d’agressivité et de bancs chez le poisson zèbre. Directement, cette méthode peut répondre à des questions de théorie de l’évolution, de structure et de dynamique de population. Lorsqu’il est combiné à des techniques interdisciplinaires, il peut être appliqué à des domaines tels que la pharmacologie, la toxicologie, la génétique comportementale et l’endocrinologie.

Le principal avantage de cette technique est que la combinaison audace, agressivité, bancs englobe de nombreux comportements bien étudiés et facilement quantifiables chez le poisson zèbre. Et chaque test peut être modifié pour répondre à d’autres questions expérimentales. Commencez par séparer au hasard le poisson-zèbre dans le rapport approprié entre le poisson focal et le poisson stimulus.

Rangez tous les poissons dans les étagères du poisson-zèbre sous un cycle strict, de 12 à 12 heures, de lumière et d’obscurité. Donnez de la nourriture en flocons à tous les poissons focaux et stimulus tous les jours. Et ne nourrissez les artémias qu’une fois par semaine les jours où il n’y a pas de recherche.

Ensuite, installez trois réservoirs d’analyse dans le laboratoire. L’un pour l’agressivité, l’audace et les bancs dans des endroits qui minimisent la possibilité de stimuli externes défavorables. Et prévoyez suffisamment d’espace pour qu’une caméra vidéo puisse capturer l’ensemble du réservoir.

Installez la caméra vidéo de manière à ce qu’elle soit suffisamment claire pour voir les étiquettes de l’aquarium, ainsi que pour distinguer les comportements subtils du poisson focal. Gardez la caméra maintenue dans la même position avec une vue complète du réservoir pendant tous les enregistrements de test comportemental, afin de minimiser les différences involontaires de notation comportementale à la suite d’enregistrements différentiels. Ensuite, définissez un schéma d’étiquetage pour suivre la date, le nombre de poissons et le numéro d’essai pour tous les tests comportementaux.

Étiquetez l’extérieur du réservoir avec du ruban adhésif à la vue de la caméra. Enregistrez ces informations dans un cahier de laboratoire pour une référence rapide et un contrôle qualité futur. Enfin, installez un réservoir d’acclimatation qui sera utilisé entre tous les essais, ainsi que directement après que les individus auront été retirés du support du logement.

Commencez par obtenir un réservoir rectangulaire de 19 litres, mesurant 30 x 15 x 10 centimètres. Équipez le réservoir d’une cloison externe opaque entourant trois côtés du réservoir d’agression, en laissant l’avant exposé à la visualisation pour réduire les stimuli extérieurs indésirables. Divisez le réservoir avec les marquages externes en quatre quadrants rectangulaires égaux.

Utilisez du mastic silicone pour fixer un miroir dans le quadrant inférieur gauche, incliné à 22,5 degrés, formant un triangle droit contre le côté gauche du réservoir. Ayez de l’eau fraîche et vieillie, préchauffée à 27,5 à 28,5 degrés Celsius, prête à être ajoutée au réservoir d’agression afin de garantir que la température de l’eau dans le réservoir d’acclimatation et le réservoir d’agression se situe à moins de deux degrés Celsius du support du logement. Sortez un poisson central de la grille du boîtier et transférez-le dans un réservoir d’acclimatation séparé où il s’acclimatera pendant 10 minutes.

Vérifiez que la caméra vidéo est braquée sur le réservoir d’essai d’agression et appuyez sur enregistrer. Ensuite, transférez immédiatement le poisson focal par ventouses du réservoir d’acclimatation au réservoir d’agression. Enregistrez le char d’assaut pendant 10 minutes et 30 secondes.

Ensuite, remettez le poisson central du réservoir d’agression dans le réservoir d’acclimatation. Lorsque vous regardez l’enregistrement une fois le test terminé, attendez 30 secondes après que le poisson ait été introduit dans l’aquarium comme période d’acclimatation supplémentaire avant de noter les comportements. Enfin, notez un seul test d’agression au moins deux fois jusqu’à ce que le test soit noté avec une concordance élevée entre les itérations.

Pour mettre en place le test d’audace, procurez-vous d’abord un petit réservoir trapézoïdal de 1,5 litre, mesurant 15 centimètres de haut avec un haut de 26,5 centimètres et un bas de 22,5 centimètres, et une largeur de 6 centimètres. Enroulez du papier opaque sur trois côtés du réservoir et laissez l’avant exposé pour la visualisation. Placez un seul morceau mince de ruban adhésif à l’extérieur du réservoir pour délimiter la partie supérieure de la partie inférieure du réservoir.

Ensuite, assurez-vous que la température de l’eau dans le réservoir de gras est inférieure à deux degrés Celsius du support du boîtier. Transférez le poisson focal du support du logement dans le réservoir d’acclimatation et laissez-le s’acclimater pendant 10 minutes. Assurez-vous que la caméra vidéo est concentrée sur le test d’audace et appuyez sur enregistrer sur l’appareil.

Transférez immédiatement le poisson focal du réservoir d’acclimatation au réservoir d’audace et enregistrez pendant huit minutes et 30 secondes. Lorsque vous regardez l’enregistrement une fois l’essai terminé, prévoyez une période d’acclimatation supplémentaire de 30 secondes après l’introduction du poisson dans l’aquarium avant de marquer des points. Enfin, notez un seul test d’audace au moins deux fois, jusqu’à ce que le test soit noté avec une concordance élevée entre les itérations.

Pour mettre en place l’essai de haut-fond, procurez-vous une cuve de 76 litres comportant trois compartiments divisés par deux séparateurs en verre scellés avec un calfeutrage en silicone. À l’extérieur, utilisez du ruban adhésif pour marquer deux zones de préférence qui sont à six virgule trois cinq centimètres de chacun des séparateurs en verre qui désignent chaque zone de stimulus. Appliquez des cloisons opaques externes autour des trois côtés du bassin de haut-fond et laissez l’avant exposé pour la visualisation.

Ensuite, sélectionnez des bancs de stimulus pour qu’ils s’acclimatent pendant au moins 12 heures avant le test et laissez-les rester dans le bassin de haut-fond tout au long de l’expérience. Transférez le poisson focal du support du logement dans un réservoir d’acclimatation séparé par ventouse où il s’acclimatera pendant 10 minutes. Transférez ensuite, par ventouses, le poisson focal du bassin d’acclimatation vers le compartiment central du bassin de banc.

Prévoyez une période d’acclimatation de 10 minutes avant une période d’observation en direct de 10 minutes, au cours de laquelle les poissons en bancs sont définis comme étant à l’intérieur de la zone de préférence dans la chambre abritant le banc cible. Ensuite, quantifiez le temps passé dans chaque zone de préférence, ainsi que le temps passé dans le volume central. Enfin, une fois les essais terminés, transférez les poissons dans un réservoir terminal séparé qui servira de réservoir de destination finale pour tous les individus focaux utilisés.

Ce protocole a examiné les associations cohérentes dans l’agressivité, l’audace et les comportements de bancs de poissons-zèbres pour déterminer si un syndrome comportemental était présent. Ici, la première composante représente les comportements d’agressivité, tandis que la deuxième composante est associée aux comportements d’audace. Étant donné que les comportements d’agression et d’audace ne sont pas représentés par la même composante, on peut conclure qu’il y a une absence de syndrome comportemental d’agression d’audace chez le poisson zèbre.

Une fois maîtrisé, l’ensemble du protocole d’un poisson focal peut être réalisé en 70 minutes. Lorsque vous tentez cette procédure, il est important de ne pas oublier de vous familiariser, vous et votre équipe, avec chaque comportement cible afin de minimiser le biais de l’observateur. Le fait de noter plusieurs fois le même enregistrement vidéo augmentera également la confiance dans vos résultats.

À la suite de cette procédure, d’autres méthodes dans les domaines pharmacologiques, génétiques ou physiologiques peuvent être effectuées afin de répondre à des questions supplémentaires sur les facteurs internes et externes qui affectent les syndromes comportementaux. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’observer, d’analyser et d’interpréter l’audace, l’agressivité, les syndromes comportementaux de bancs chez le poisson zèbre. Merci d’avoir regardé et bonne chance pour vos expériences !