Name: The Treadmill Fatigue Test: Un test simple, à haut débit de fatigue comme comportement pour la souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-31T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 25 s
Description: Apprenez à mesurer le comportement de fatigue chez la souris avec un tapis roulant incliné à 10 degrés. Cette méthode simple permet d'évaluer rapidement les interventions anti-fatigue en neuroscience comportementale.

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Cette recherche a été soutenue par le programme de recherche intra-muros du NIH, l’Institut national du diabète et des maladies digestives et rénales (NIDDK), subvention 1Z01 DK011006. Nous tenons à remercier Michele Allen pour son assistance technique, Eleni Solomos pour son aide éditoriale, et le personnel vétérinaire et de soins aux animaux du NIH pour avoir fourni des soins aux souris utilisées dans le développement de cette méthode.

Cette procédure a été approuvée par l&#39;Institut national du diabète et digestive et maladies rénales de protection des animaux et l&#39;utilisation du Comité. 1. Préparation <ol><li> Pour permettre une identification rapide de chaque souris avant l&#39;essai, tatouer les queues de toutes les souris d&#39;être formés et testés avec des marques d&#39;identification. REMARQUE: Cette étape est facultative. Marqueur permanent ou d&#39;autres méthodes d&#39;identification peuvent être utilisés comme une alternative au tatouage. </li><li> Avant la formation et les souris de test, assurez-vous que le tapis roulant est sur une surface plane et réglée sur le tapis roulant à l&#39;angle d&#39;inclinaison souhaité (angle recommandé d&#39;inclinaison: 10 °, pour être maintenue uniforme dans la formation et les tests) et régler la fréquence de choc électrique et l&#39;intensité appropriée (recommandé: 2 Hz, 1,22 mA). NOTE: Le choc électrique utilisé ne doit pas produire plus d&#39;une légère sensation de picotement quand touché par un doigt gantée et devrait être livré dans un fash pulsatileion (avec chaque choc durable 200 msec). </li><li> Placez une feuille de papier de boucher ou un tampon absorbant sous le tapis roulant pour recueillir des boli fécales et de l&#39;urine pendant la formation et les tests. </li><li> Placez une feuille de papier ou un tampon absorbant sur ​​le troisième du boîtier de tapis roulant (ie, le couvercle en plastique transparent qui recouvre les voies de tapis roulant) la plus éloignée de la grille de choc. REMARQUE: Cette étape est facultative, mais de créer un espace plus sombre et peut fournir un encouragement supplémentaire pour éviter la partie inférieure du tapis de course. </li><li> Si vous prévoyez d&#39;utiliser une brosse métallique pour fournir une motivation supplémentaire au cours de la formation, veiller à ce que celui-ci est facilement disponible avant le début des séances de formation. </li><li> Veiller à ce que tout médicament ou une méthode pour induire et / ou de soulager la fatigue est disponible et peuvent être préparés ou exécutés lors de l&#39;étape 2.14. </li></ol> 2. Les souris de formation pour utiliser le tapis roulant NOTE: La formation est nécessaire pour assurer que les sourissont familiers avec le tapis roulant et de la tâche et peut effectuer de façon appropriée lors de l&#39;essai. Si la majorité des souris en cours de formation reçoivent des chocs fréquents ou autrement peu performants au cours d&#39;une session de formation, des séances de formation supplémentaires devraient être effectués. Le premier jour, la plupart des souris seront choqués plusieurs fois. Le deuxième jour de la formation, les souris doivent être rarement en contact avec la grille. Si une souris affiche des performances de formation toujours pauvres, il doit être retiré de l&#39;étude. Pour les souris C57BL / 6NCr femelles, ceci est un événement rare (moins de 1% ont été retirés des études en raison de la performance de formation médiocre), mais il convient de noter que d&#39;autres souches peuvent fonctionner différemment pendant la formation. <ol><li> Avec le tapis de course au large (et vitesse réglée à 0 m / min), soulever individuellement les souris par la queue et de placer des souris dans des voies séparées d&#39;un tapis roulant de la souris. tourner rapidement sur la grille correspondante après avoir placé chaque souris sur le tapis roulant. Assurez-vous que les souris sont placées directement on la ceinture de tapis roulant. REMARQUE: La quantité de temps et la distance de chaque souris est maintenu par sa queue doit être minimisé en plaçant la cage à proximité du tapis roulant avant de transférer les souris sur le tapis roulant et / ou de permettre à des souris pour se tenir debout sur ​​une plate - forme solide (par exemple, un couvercle métallique de la cage ) jusqu&#39;à ce qu&#39;ils soient à proximité du tapis roulant et l&#39;expérimentateur est prêt à les placer dans le tapis roulant. </li><li> Permettre aux souris d&#39;explorer librement le tapis roulant pendant 1-3 min ou jusqu&#39;à ce que chaque souris a exploré sa voie et / ou reçu au moins un choc de la grille. </li><li> Tourner sur le tapis roulant et augmentez lentement la vitesse jusqu&#39;à ce qu&#39;il commence à se déplacer (environ 1,5 à 3,0 m / min). Surveiller toutes les souris pour veiller à ce qu&#39;ils commencent la marche. Si une souris ne commence pas la marche ou marche vers la grille de choc, être prêt à intervenir en tapant sur la souris avec une brosse métallique ou de la queue chatouillement. </li><li> Lentement augmenter la vitesse du tapis roulant à 8 m / min. Démarrer une minuterie et continuer le comportement de surveillance. </li><li> Augmenter la vitesse de tapis roulant9 m / min à 5 min, 10 m / min à 7 min, et arrêter le tapis roulant à 10 min. </li><li> Laissez la souris pour explorer brièvement le tapis roulant, puis retirer et retourner chacun dans sa cage. </li><li> Nettoyer le tapis roulant et la grille avec de l&#39;alcool et de remplacer le papier ou un tampon absorbant sous le tapis roulant. </li><li> Pour former des souris supplémentaires, répétez les étapes 2.1 à 2.7. NOTE: Laisser l&#39;alcool sécher avant de placer de nouvelles souris sur le tapis roulant. </li><li> Le deuxième jour de la formation, répétez l&#39;étape 2.1. Tourner sur le tapis roulant et d&#39;augmenter la vitesse de 10 m / min. Démarrer une minuterie. REMARQUE: vitesse du tapis roulant peut être augmenté plus rapidement que le premier jour de la formation. </li><li> Augmenter la vitesse du tapis roulant à 11 m / min à 5 min, 12 m / min à 10 min, et arrêter le tapis roulant à 15 min. </li><li> Retirer les souris et les retourner dans leurs cages. </li><li> Nettoyer le tapis roulant et la grille avec de l&#39;alcool et de remplacer le papier ou un tampon absorbant sous le tapis roulant. Pour former des souris supplémentaires, répétez les étapes 2.9 à 2.12. </li><li>Effectuer des jours supplémentaires (3 jours) de formation de la même manière que le deuxième jour. REMARQUE: Cette étape est facultative, mais elle est fortement recommandée si la plupart ou toutes les souris (du même sexe et de la souche) étant formés de la difficulté d&#39;affichage à la tâche. Les souris peuvent généralement bien performer à l&#39; étape 3 quand ils ont été formés pendant 3 jours (c. -à , un jour supplémentaire de formation), bien que des jours supplémentaires ou moins de formation peuvent être appropriées en fonction de leur performance au cours de la deuxième journée de formation et la durée de Etape 2.14. </li><li> Attendre au moins une journée entière à passer dans laquelle les souris ont aucune exposition sur le tapis roulant avant de passer à l&#39;étape 3. NOTE: Tout médicament (s) utilisé pour induire et / ou à soulager la fatigue doit être administré au cours de cette étape. Remarque: Cette période de temps peut varier en longueur et utilisés pour induire des interventions de fatigue et / ou de test pour réduire ou éliminer la fatigue. Si le test des souris plus de 7 jours après la fin de la formation, une étude pilote est recommandé devérifier que les souris utilisées se produiront au cours des essais. </li></ol> 3. Treadmill Essai de fatigue NOTE: Dans ce test, le comportement à la fatigue comme est définie comme les dépenses de 5 secondes consécutives dans la «zone de fatigue&quot;. La zone de fatigue est définie comme étant la région englobant la partie de la courroie de tapis roulant à l&#39;intérieur d&#39;environ une longueur de corps de la grille de choc ainsi que la grille elle-même. Avant l&#39;essai, veiller à ce que le point délimitant cette zone est clair pour l&#39;expérimentateur, par exemple par l&#39;application d&#39;une marque vers le haut ou le côté des voies de tapis roulant. <ol><li> Réglez la vitesse du tapis roulant à 12 m / min. Ne pas démarrer le tapis roulant. Veiller à ce que le choc des grilles sont désactivées. </li><li> placer individuellement des souris dans des voies séparées du tapis roulant. Tournez sur la grille correspondante immédiatement après avoir placé chaque souris sur le tapis roulant. </li><li> démarrer simultanément le tapis roulant et un chronomètre. REMARQUE: Ne pas intervenir pendant le test, sauf pour éliminer les sourisqui répondent au critère de retrait (voir l&#39;étape 3.5). </li><li> Augmenter la vitesse tapis roulant comme indiqué dans le tableau 1. Observez attentivement toutes les souris tout au long du test. NOTE: Le tapis roulant vitesses énumérés dans le tableau 1 ont été sélectionnés sur la base des observations de femelles adultes souris C57BL / 6NCr. Des vitesses plus élevées de tapis de course peuvent être appropriées pour agrandir (par exemple, consanguine souris CD-1) ou plusieurs souris athlétiques. </li><li> Si une souris reste dans la zone de fatigue pendant 5 secondes en continu, retirez rapidement la souris du tapis roulant et d&#39;enregistrer la durée et la distance qu&#39;il a couru. </li><li> En l&#39;absence de souris restent sur le tapis roulant, arrêtez le tapis roulant. Nettoyer le tapis roulant et la grille avec de l&#39;alcool et de remplacer le papier ou un tampon absorbant sous le tapis roulant. </li><li> Pour tester les souris supplémentaires, répétez les étapes 3.1 à 3.6. REMARQUE: Cette étape est facultative. </li></ol>

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</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Le protocole actuel décrit comment utiliser un tapis roulant de la souris pour mesurer le comportement en fatigue-like. Cette méthode présente plusieurs avantages par rapport VWRA, un essai préclinique commun de comportement en fatigue-like. VWRA exige que les souris choisissent d&#39;interagir avec l&#39;appareil d&#39;essai. En conséquence, certaines souches consanguines de souris interagissent rarement avec la roue 16 et courir si peu qu&#39;il peut être difficile ou impossible d&#39;identifier une diminut...

La fatigue affecte un large éventail de personnes, peuvent sensiblement réduire la qualité de vie, et souvent a une pathogénie incertaine ou inconnue. La fatigue liée au cancer (CRF), par exemple, est vécue par la majorité des patients atteints de cancer en cours de traitement et peut persister longtemps après le traitement du cancer a été achevé et en l&#39;absence de cancer détectable 1. Par ailleurs, la fatigue est également un symptôme majeur dans de nombreuses autres maladies et troubles, y compris le syndrome de fatigue chronique, la dépression, le diabète et la fibromyalgie. Heureusement, il existe des interventions non-pharmacologiques qui sont capables d&#39;aider certaines personnes en situation de fatigue (par exemple, l&#39; exercice peut réduire CRF pour certains patients atteints de cancer du sein 2,3), mais de nombreuses personnes manquent encore de traitement efficace. En outre, les traitements médicamenteux existants pour le CRF n&#39;a pas été jugée largement, voire pas du tout, efficace 4-7. Malgré la nécessité thérapeutique et le manque de drug options de traitement, les essais précliniques de fatigue pour aider à la découverte et au développement de nouveaux traitements de fatigue font défaut, en particulier dans les modèles animaux. L&#39; un des seuls essais précliniques de la fatigue pour les études sur les rongeurs est l&#39; activité de roue volontaire de roulement (VWRA) 9-15, dans laquelle des souris ou autres rongeurs ont accès gratuitement à une roue en cours d&#39;exécution et leur activité quotidienne en cours d&#39;exécution est enregistrée. Dans de nombreuses études, VWRA est la seule mesure du comportement en fatigue-like, avec le comportement de fatigue comme défini (soit VWRA ou le protocole actuel) comme une diminution de l&#39;activité physique mesurée dans le groupe expérimental. Bien que VWRA peut fournir une mesure longitudinale utile de la fatigue comme comportement, il est un test relativement faible débit, en cours d&#39; exécution varie considérablement entre les souches de souris consanguines 16, et il faut des sujets à être logés individuellement, ce qui peut entraîner des changements de comportement et performance test 17-19. D&#39;autres essais, tels que cage de surveillance comportementale etanalyse, peut également fournir la collecte continue de données et certains systèmes peut permettre des sujets à être logés dans des paires 20. Ces essais ont une utilité, mais peuvent être moins sensibles comme un moyen de détection de comportement en fatigue-like et, comme la roue en cours d&#39;exécution, sont également à faible débit. Contrairement à VWRA, les tests sur tapis roulant de la souris ne reposent pas sur l&#39;activité volontaire et peut être complété dans un court laps de temps, ce qui permet un débit plus élevé. En comparaison avec VWRA, ces tests emploient des motivateurs externes. Plus précisément, il y a habituellement une grille métallique électrifiée situé à l&#39;arrière de la courroie mobile de fournir des souris avec un choc électrique devraient-ils cesser de fonctionner. En plus de cette grille de choc, les souris peuvent être motivés à courir sur le tapis roulant par plusieurs autres méthodes, y compris aiguillonner, piquer, ou de les toucher avec une main, au pinceau, ou un autre outil et de diriger petites bouffées d&#39;air à eux. Au lieu de la fatigue, des tests sur tapis roulant de la souris sont souvent utilisés pour mesurer aérobie et / ou anaerOBIC capacité d&#39;exercice 21-25. Les souris sont motivés à courir jusqu&#39;à ce qu&#39;ils sont incapables ou peu disposés à continuer à fonctionner sur le tapis roulant comme un moyen d&#39;échapper à d&#39;autres chocs électriques. Test se termine ensuite lorsque les souris répondent au critère de l&#39;épuisement. Dans ces protocoles, afin d&#39;assurer que les souris atteignent vrai épuisement physiologique, le critère de l&#39;épuisement est souvent définie comme les dépenses de cinq secondes continues de pose sur le dessus de la grille de choc et de ne pas continuer à fonctionner face à des stimuli aversifs répétées. Ainsi, le comportement de la fatigue comme peut être masquée dans les tests sur tapis roulant typiques en raison de la forte Agressivité de la motivation externe et critère pour mettre fin au test. Fait intéressant, et contrairement à beaucoup d&#39; autres études utilisant des tapis roulants de rongeurs, une publication récente décrit une autre version d&#39;un essai de fatigue sur tapis roulant, qui a été utilisé dans le cadre d&#39;un examen des effets du stress social chez les souris 26. Bien que la méthode utilisée par ce groupe nettement différent de la cuprotocole rrent (ils employés un tapis roulant à voie unique et nécessaire 10 sec de choc électrique comme critère pour mettre fin à leur test), leur étude met en évidence l&#39;utilité et l&#39; intérêt pour le développement d&#39; un test de fatigue rapide, simple en utilisant le tapis roulant de la souris. La fatigue est susceptible d&#39;être détectable par des moyens autres que la roue en cours d&#39;exécution et les modifications dans les comportements de routine. CRF rend les patients se sentent épuisés par une moindre quantité de fatigue musculaire, tel que déterminé par l&#39; analyse électromyographique, que les personnes sans CRF 27. En outre, la motivation réduite a été notée et est mesurée par plusieurs échelles de mesure de la fatigue humaine 28,29. Ainsi, un essai préclinique utile du comportement en fatigue comme devrait établir une distinction entre les souris saines et fatigués sur la base d&#39;une mesure autre que la capacité physiologique et ne doit pas baisses obscures dans la motivation. Pour parvenir à cette fin, tout en évitant les limitations de VWRA et d&#39;autres tests, la méthode wa actuelless développé en adaptant le test sur tapis roulant de la souris. Cette méthode utilise une grille de choc comme le seul facteur de motivation externe pour faire fonctionner la souris sur le tapis roulant. Les souris apprennent rapidement que la grille fournit un stimulus aversif et rapidement se déplacer loin de lui lorsqu&#39;il est placé sur le tapis roulant et de maintenir une certaine distance de celui-ci lors de l&#39;exécution. Lorsque les souris fatiguent, ils passent progressivement plus de temps vers l&#39;arrière du tapis de course au lieu de maintenir la vitesse vers l&#39;extrémité avant. Par conséquent, le critère de fin d&#39;essai dans ce protocole est de passer cinq secondes en continu dans la zone de fatigue désigné (c. -à l&#39;arrière du tapis de course, allant d&#39;environ une longueur de corps de la grille de choc, et y compris, la grille de choc). Cela profite de la nature aversif de la grille sans nécessiter des souris pour recevoir de nombreux ou des chocs réels après la formation. En permettant à des souris pour terminer le test en utilisant le critère actuel plutôt que de l&#39;épuisement (tel que défini ci-dessus),cette méthode fournit un moyen d&#39;utiliser le tapis de course pour mesurer le comportement de fatigue comme plutôt que son maximale (ou quasi-maximale) la capacité physiologique. Ainsi, cette méthode peut fournir un haut débit test simple, du comportement en fatigue comme chez la souris et peut servir soit comme une mesure indépendante ou complémentaire à d&#39;autres essais de comportement en fatigue-like.

<table><tbody><tr><td>Exer 3/6 Animal Treadmill</td><td>Columbus Instruments</td><td>1050-RM Exer-3/6</td><td></td></tr><tr><td>Chronomètre</td><td>Daigger</td><td>EF24490M&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Brosse métallique</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-572-5</td><td></td></tr><tr><td>Air comprimé</td><td>Dépoussiérage</td><td>FALDSXLPW</td><td></td></tr><tr><td>Tampons absorbants</td><td>Daigger</td><td>EF2175CX&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Papier de boucherie</td><td>Newell Paper Company</td><td>4620510</td><td></td></tr><tr><td>Alcool (70 %)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP82011</td><td></td></tr></tbody></table>

the treadmill fatigue test: un test simple, à haut débit de fatigue comme comportement pour la souris

The Treadmill Fatigue Test: A Simple, High-throughput Assay of Fatigue-like Behavior for the Mouse

La fatigue est un symptôme important dans de nombreuses maladies et troubles et réduit la qualité de vie pour beaucoup de gens. L&#39;absence de la pathogenèse claire et l&#39;échec des interventions actuelles pour traiter adéquatement la fatigue chez tous les patients laisse un besoin pour de nouvelles options de traitement. Malgré la nécessité thérapeutique et l&#39;importance de la recherche préclinique en aidant à identifier les traitements nouveaux prometteurs, quelques essais précliniques de fatigue sont disponibles. De plus, l&#39;essai préclinique le plus couramment utilisé pour évaluer le comportement de la fatigue comme volontaire roue en cours d&#39;exécution, ne convient pas pour une utilisation avec certaines souches de souris, peuvent ne pas être sensibles aux médicaments qui réduisent la fatigue, et a relativement faible débit. Le protocole actuel décrit un roman, un essai préclinique non volontaire du comportement en fatigue-like, le test de fatigue de tapis roulant, et fournit la preuve de son efficacité dans la détection de comportement de la fatigue chez les souris traitées avec un médicament de chimiothérapie connu pour causer de la fatigue chez les humains et la fatigue comportement -comme in animals. Cet essai peut être une alternative bénéfique à la roue en cours d&#39;exécution, que le comportement en fatigue-like et les interventions possibles peuvent être évaluées dans un plus grand nombre de souris sur un laps de temps plus court, ce qui permet la découverte plus rapide de nouvelles options thérapeutiques.

Ce protocole permet le comportement en fatigue comme à mesurer chez la souris à l&#39;aide d&#39;un tapis roulant. Les données présentées dans cette section ont été obtenues par la formation et de test 3 groupes distincts de souris en utilisant le protocole actuel (hors Figure 1A et 1C). Pour induire la fatigue, le 5-fluorouracile (5-FU), un médicament de chimiothérapie cytotoxique connu pour provoquer la fatigue chez l&#39; homme 30 et le com...

La fatigue est un symptôme courant, sous-traité et souvent mal compris dans de nombreuses maladies et troubles. De nouveaux tests précliniques de la fatigue pourraient aider à améliorer la compréhension actuelle et le traitement futur de la fatigue. À cette fin, le protocole actuel fournit un nouveau moyen de mesurer le comportement semblable à celui de la fatigue chez la souris.

The Treadmill Fatigue Test: Un test simple, à haut débit de fatigue comme comportement pour la souris

Fatigue is a prominent symptom in many diseases and disorders and reduces quality of life for many people. The lack of clear pathogenesis and failure of ...

L'objectif général de cette procédure est de mesurer un comportement similaire à la fatigue chez les souris afin d'établir un modèle de fatigue, et de tester si une intervention peut inverser cette fatigue. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés relatives à la fatigue, telles que quelles interventions peuvent contribuer à réduire la fatigue ou à inverser les modèles de fatigue. Le principal avantage de cette technique est qu'elle permet d'évaluer rapidement un comportement similaire à la fatigue ou des interventions anti-fatigue à l'aide d'un seul équipement.La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle. Il est important d'observer et de comprendre le comportement des souris afin de réaliser correctement cette tâche. Avant l'entraînement et les tests sur les souris, s'assurer que le tapis roulant est placé sur une surface plane et réglé à l'angle d'inclinaison souhaité, généralement de 10 degrés.Ensuite, assurez-vous que la fréquence et l'intensité du choc électrique sont correctement réglées, généralement à deux hertz et 1,22 milliampère. Sous le tapis roulant, placez une feuille de papier ou un tampon absorbant pour recueillir les selles et l'urine. Puis, placez un coussin sur le tiers du boîtier du tapis roulant le plus éloigné de la grille de choc afin de créer un espace ombragé et inciter les souris à rester dans cette zone.Maintenant, procédez à l'entraînement des souris. Avec le tapis roulant éteint et la vitesse réglée à zéro, chargez rapidement les souris en les tenant par la queue et placez-les directement sur le tapis du tapis roulant. Après avoir placé chaque souris, activez sans délai la grille de choc correspondante.Commencez par laisser les souris explorer librement. Arrêtez le temps d'exploration dès que chaque souris a reçu au moins un choc, ou après environ trois minutes. Ensuite, allumez le tapis roulant et augmentez lentement la vitesse jusqu'à ce qu'il commence à se déplacer à environ 1,5 à 3,0 mètres par minute.Veillez à ce que toutes les souris commencent à marcher. Si une souris ne commence pas à marcher ou marche vers la grille de choc, tapez doucement sur la souris avec la brosse métallique ou utilisez une stimulation de la queue pour l'encourager à marcher sur le tapis roulant. Maintenant que toutes les souris marchent, augmentez lentement la vitesse du tapis roulant jusqu'à huit mètres par minute.Essayez de vous assurer que les souris marchent vers l'avant sur le tapis roulant tout en augmentant la vitesse pendant cette première séance d'entraînement. Si les souris explorent ou se retournent pour faire face à la grille de choc, cessez d'augmenter la vitesse du tapis roulant jusqu'à ce qu'elles reprennent la marche. Démarrez alors un chronomètre et continuez à surveiller le comportement.Après cinq minutes, augmentez la vitesse à neuf mètres par minute. Après sept minutes, augmentez la vitesse à 10 mètres par minute. Après 10 minutes, terminez la séance d'entraînement en arrêtant le tapis roulant.Laisser les souris explorer brièvement le tapis roulant un peu plus longtemps, puis les ramener dans leur cage d’origine. Il n’est pas nécessaire que toutes les souris d’une même cage courent en même temps, mais essayer de minimiser le nombre de fois où les souris sont retirées d’une cage donnée. Entre les séances, nettoyer le tapis roulant et les grilles électriques avec des lingettes alcoolisées.Remplacez également le papier ou le tampon absorbant placé sous le tapis roulant. Le deuxième jour de l'entraînement, répétez le processus utilisé le premier jour, mais augmentez la vitesse du tapis roulant à 10 mètres par minute avant de démarrer le chronomètre. Après cinq minutes, augmentez la vitesse du tapis roulant à 11 mètres par minute.Après 10 minutes, augmentez la vitesse à 12 mètres par minute et laissez le tapis roulant fonctionner jusqu'à ce que 15 minutes se soient écoulées. Ensuite, mettez fin à la séance d'entraînement. Des journées supplémentaires d'entraînement peuvent être effectuées si les souris éprouvent des difficultés avec la tâche.Une fois l'entraînement terminé, prévoir au moins un jour complet de repos avant le test de fatigue. Un intervalle allant jusqu'à sept jours est possible sans avoir à réentraîner. Dans ce test, un comportement semblable à la fatigue est défini par le fait de passer cinq secondes consécutives dans la zone de fatigue.La technique appropriée pour retirer les souris consiste à les saisir près de la base de la queue et à les soulever rapidement hors du tapis roulant. La zone de fatigue correspond à la région du tapis située à moins d'une longueur corporelle de la grille de choc, ainsi qu'à la grille elle-même. Avant le test, appliquez des marques sur le dessus ou le côté des voies du tapis roulant afin de délimiter la zone de fatigue.Ensuite, réglez la vitesse du tapis roulant à 12 mètres par minute, mais n'activez pas le tapis roulant. Assurez-vous également que les grilles de choc sont désactivées. Placez maintenant les souris individuellement dans leurs voies respectives et activez immédiatement la grille de choc correspondante après le chargement de chaque souris.Pour commencer le test, démarrez simultanément le tapis roulant et un chronomètre. Augmentez la vitesse du tapis roulant comme indiqué. Ce protocole est basé sur des tests effectués sur des souris femelles C57 Black 6 et pourrait nécessiter des ajustements pour s'adapter à des souris ayant des capacités différentes.Observer attentivement tous les souris pendant toute la durée du test, mais ne pas intervenir pour aider ou motiver les souris qui entrent dans la zone de fatigue. Ne pas utiliser la brosse métallique ni les techniques de chatouillement de la queue. N'intervenir uniquement lorsqu'une souris reste dans la zone de fatigue pendant cinq secondes consécutives.Lorsque cela se produit, retirer immédiatement la souris du tapis roulant et enregistrer la durée et la distance parcourue. Il est essentiel que l'expérimentateur observe attentivement toutes les souris sur le tapis roulant et retire rapidement celles qui sont restées cinq secondes consécutives dans la zone de fatigue. Une fois qu'aucune souris ne reste sur le tapis roulant, se préparer pour le prochain essai.Les souris ont été entraînées pendant cinq jours, puis, afin d'induire une fatigue, du 5-fluorouracile a été administré pendant cinq jours. Ce médicament est connu pour provoquer de la fatigue chez l'humain et un comportement similaire à la fatigue chez la souris. Lors du test de capacité à l'exercice, qui utilise des chatouillements de la queue et des souffles d'air pour motiver les souris pendant le test, aucune différence n'a été observée entre les groupes.Cependant, le jour suivant, les souris ont été testées à l’aide du test de fatigue sur tapis roulant. Ce test a révélé une différence significative de la distance parcourue pendant le test entre les souris traitées par chimiothérapie et les souris témoins. Afin de valider que le test de fatigue sur tapis roulant mesurait un comportement similaire à la fatigue, la course volontaire des souris sur roue a été mesurée dans une expérience distincte au cours des cinq jours de traitement par la 5-fluorouracile, ainsi que durant la nuit suivant le dernier jour de traitement.Des résultats similaires ont été obtenus. Dans une autre expérience, le test de fatigue sur tapis roulant a également permis de détecter un comportement de type fatigue chez des souris traitées avec une dose différente de 5-fluorouracile, administrée une fois par semaine pendant deux semaines. Lorsque des souris non traitées ont été testées régulièrement, elles ont montré une moindre volonté de courir au fil des tests répétés.Ces données suggèrent que le test selon ce protocole devrait être limité à une seule épreuve afin d'éviter un taux élevé de souris non conformes. Lors de la réalisation de cette procédure, il est important d'observer attentivement vos souris pendant l'entraînement et les tests. N'intervenez pas avant que le critère de fatigue soit atteint.Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez bien comprendre comment mesurer un comportement similaire à la fatigue chez les souris à l’aide de ce protocole, comment les souris se comportent sur le tapis roulant, et comment retirer rapidement les souris du tapis roulant.

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JoVE Journal

Behavior

Comportement

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