Dissection et Flat-montage de l'épinoche à trois épines branchiale Squelette

L’objectif global de cette procédure est de disséquer et de monter à plat le squelette branchial de l’épinoche. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans les domaines du développement, de la génétique et de l’évolution. Comme la façon dont les animaux s’adaptent à de nouveaux environnements et comment la variation de la morphologie des adultes survient au cours du développement.

Le principal avantage de cette technique est qu’en disséquant et en fixant à plat le squelette branchial, on peut visualiser une variété de traits trophiques qui ne peuvent pas être étudiés en monture entière. En préparation, passez en revue la morphologie squelettique de la tête de l’épinoche à trois épines. Après avoir préparé le poisson pour la dissection, commencez par insérer une pince pointue numéro cinq sur le côté de l’œil, à un angle de 45 degrés pour percer la membrane recouvrant l’œil.

Ensuite, retirez la membrane de l’œil, comme le couvercle d’un contenant de yogourt. Ensuite, insérez une pince ouverte derrière l’œil, saisissez le nerf optique et retirez l’œil. Veillez à ne pas percer l’œil, sinon il y aura une fuite de mélanine.

Répétez ce processus avec l’œil du côté opposé. Ensuite, placez la lame d’un petit ciseau sous la face postérieure du rabat de l’opercule et coupez les tissus mous dorsalement au-dessus de l’opercule, vers l’orbite. Ensuite, coupez à travers l’os frontal, qui est dorsal à l’orbite.

Ensuite, coupez à travers la ligne médiane de l’os parasphénoïde, autour du centre de l’orbite. Répétez la coupe de l’opercule du côté opposé. Pour les prochaines étapes, les épines pelviennes peuvent être utilisées comme poignées.

Ils se déplient, en les tirant doucement directement loin du corps. Maintenant, insérez la pince sous l’opercule et décollez lentement le visage du corps. Couper tous les tissus mous qui sont encore attachés dans le processus.

Soyez prudent autour des branchicténies et veillez à ne pas les déranger. Il est facile de saisir accidentellement le premier os cératobranchial, ainsi que le coll, lors du retrait du squelette facial. Regardez sous leur coll pendant que vous le décollez vers l’avant pour être sûr de ne rien avoir en plus.

Maintenant, à l’aide d’une pince, détachez les cératohyales des deux côtés de la ligne médiane basihyale, tout en décollant et en enlevant le squelette facial crânien antérieur. Répétez l’opération du côté opposé. Le squelette facial crânien antérieur comprend l’ensemble de la mâchoire, l’ensemble du squelette hyoïde, les éléments dorsaux et endochondriaux sous-jacents et la partie antérieure du crâne.

Ensuite, insérez des pinces fermées juste en dessous du tube intestinal et faites-les glisser vers l’avant. Séparer les muscles et les ligaments restants attachés au squelette branchial dans le processus. Ensuite, utilisez la pointe de la pince fermée pour gratter les muscles qui attachent le squelette branchial dorsal à la boîte crânienne ventrale.

Grattez avec un mouvement postérieur à antérieur. Répétez le processus d’ablation musculaire du côté opposé de l’épinoche. Ensuite, retirez le squelette branchial en saisissant la base du tube intestinal et en tirant vers l’avant.

Séparez le tube intestinal à l’aide d’une incision perpendiculaire, postérieure au cinquième cératobranchial. Une erreur courante consiste à saisir le tube intestinal trop en avant, ce qui laisse le tube frontal ventral bien en arrière. Assurez-vous de saisir profondément la cavité thoracique et vous pouvez toujours retirer l’excès de tube intestinal plus tard.

Après avoir retiré tous les fragments osseux restants de la boîte crânienne sur la face dorsale du squelette branchial. Insérez des ciseaux dans le panier branchial et faites une coupe dorsale entre les ensembles bilatéraux de plaques dentaires dorsales. Gardez cette coupe centrée pour éviter d’endommager les plaques dentaires dorsales.

Ensuite, faites deux coupes latérales peu profondes dans la lumière caoutchouteuse de l’intestin à l’extrémité postérieure du squelette branchial. À l’extrémité anti-éreuse du tube intestinal. Pour aider à l’ouverture du squelette branchial.

Maintenant, transférez le squelette dans un tube microsentrifuge chargé de 50 pour cent de glycérol, de zéro virgule deux cinq pour cent d’hydroxyde de potassium pour un nettoyage en douceur. Ou au lieu de cela, transférez-le dans du glycérol pur si aucune clarification supplémentaire n’est nécessaire. Si une nouvelle coloration est nécessaire, des détails sont donnés dans le protocole texte.

Pour préparer le montage, changez la solution en glycérol pur et secouez le tube pendant au moins cinq minutes. Ensuite, retirez le squelette branchial et placez-le près du bas d’une lamelle en verre de 22 x 60 millimètres avec le côté dorsal vers le haut. Maintenant, transférez quelques gouttes de glycérol sur le squelette.

Ensuite, déroulez deux petites boules de pâte à modeler et jouez-en une à chaque extrémité du bordereau de couverture, elles fonctionnent comme des entretoises. Ensuite, placez sans serrer une deuxième lamelle sur la préparation, avec suffisamment de pression pour aplatir le squelette branchial antérieur. Maintenant, ouvrez le rabat dorsal gauche, y compris les plaques dentaires dorsales, et glissez le rabat entre les lamelles de couverture.

Faites ensuite de même avec le rabat dorsal droit. Et poussez tout le squelette branchial loin du bord de la lamelle. Pour terminer la procédure, appuyez légèrement sur la lamelle supérieure pour aplatir les billes d’argile.

Juste assez pour qu’ils maintiennent le squelette branchial monté à plat. Mais pas au point d’être écrasé. Si, au cours du processus, une rangée de râteaux est masquée, faites glisser la pince entre les lamelles et réorientez le cératobranchial ou toute la préparation.

Lorsqu’elle est montée à plat dans du glycérol pur, la préparation peut être conservée à plat à température ambiante pendant au moins une décennie. Ce protocole se traduit par un squelette branchial disséqué et monté à plat. Où une variété de traits trophiques importants peuvent être chronifiés.

D’un point de vue dorsal, toutes les rangées de branchicténies, toutes les plaques dentaires pharyngiennes et presque tous les os branchiaux peuvent être facilement visualisés et chronifiés. Rouge d’alizarine S, également fluorées sur un filtre à rhodamine ou rouge similaire, permettant un double marquage avec d’autres marqueurs et des méthodes alternatives de visualisation. Sur cette image, les branchicténies sont marquées de carats.

Les dents sont marquées de pointes de flèches et les os sont marqués d’astérisques. Une fois maîtrisée, la dissection peut être réalisée en quelques minutes et être réalisée sur des centaines d’animaux relativement rapidement. Et bien que nous ayons démontré une dissection du squelette branchial de l’épinoche, nous espérons que cette procédure pourra être utilisée comme guide pour une variété d’espèces de poissons.

En disséquant le squelette branchial, nous pouvons rapidement et facilement visualiser une variété de traits trophiques importants, non visibles dans des montures entières. Permettant de mieux comprendre le développement et l’évolution du squelette facial crânien.