Enregistrement simultané de Électrorétinographie et potentiels évoqués visuels chez des rats anesthésiés

L’objectif global de cette procédure est de mesurer simultanément l’électrorétinogame et le potentiel évoqué visuel chez un rat. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la neuroscience des fissures. Par exemple, si l’effet du vieillissement ou des maladies affecte certains composants de la voie visuelle.

Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet une évaluation complète de la fonction rétinienne et de son effet en amont sur la fonction corticale visuelle évoquée. Pour commencer cette procédure, pré-façonnez les électrodes inactives ERG sur mesure en coupant une longueur de fil d’argent de 70 millimètres et en formant une boucle de huit millimètres de diamètre pour encercler l’œil de rat. Préparez un cercle uniforme et ajustez la taille de la boucle en la façonnant sur une pointe de tête de tuyau d’un millimètre.

Ceci est important car un anneau trop petit peut augmenter par inadvertance la pression inarticulaire, alors qu’un anneau surdimensionné peut augmenter la variabilité des signaux. Ensuite, pré-façonnez l’électrode inactive VEP sur mesure en découpant une longueur d’argent de 70 millimètres. Et formant une ellipse de huit millimètres de diamètre à accrocher aux incisives du rat.

Ensuite, pré-façonnez les électrodes actives ERG sur mesure en coupant une longueur de 30 millimètres de fil d’argent et formez une petite boucle d’environ un à deux millimètres de diamètre qui est utilisée pour entrer en contact doucement avec la cornée du rat avec un minimum d’abrasions cornéennes. Ensuite, fixez solidement les électrodes aux fils d’électrode en entrelaçant l’argent avec le fil intérieur exposé. Isolez l’excès de métal exposé avec du ruban adhésif pour réduire les artefacts photovoltaïques.

Pour les électrodes actives ERG, il est possible d’appliquer davantage de couches de ruban de masquage afin d’obtenir un emballage plus épais et plus rigide afin que l’électrode soit plus facile à tenir avec un micro-manipulateur. Sur chaque électrode inactive ERG, collez un petit morceau de fermeture auto-agrippante au ruban de masquage pour permettre une fixation stable à la sangle du cou du rongeur. Ensuite, pour chaque électrode active VEP, fixez une pince crocodile au fil intérieur du fil de l’électrode.

Immédiatement avant les enregistrements, électroplastifiez les surfaces exposées des fils d’argent avec du chlorure pour améliorer la conduction du signal. Pour ce faire, connectez la cathode à la borne négative de la batterie et plongez l’autre extrémité dans la solution saline. Par la suite, plongez la pointe argentée du fil d’anode dans une solution saline normale et connectez l’autre extrémité de ce fil d’électrode à la borne positive d’une pile de neuf volts.

Débranchez-les après 20 secondes et la pointe argentée du fil de l’électrode doit être recouverte uniformément de blanc. Répétez la procédure de chlorure pour toutes les électrodes d’argent ERG et VEP. Dans cette procédure, désinfectez trois fois la zone rasée d’un animal anesthésié avec 10 % de povidone iode.

Faites une incision sagittale le long de la ligne médiane de la tête à l’aide d’un scalpel et excisez un cercle de tissu dermique de 20 millimètres de diamètre pour exposer l’os crânien. Ensuite, retirez le périoste sous-jacent en grattant et en séchant avec de la gaze, pour exposer les sutures crâniennes coronales et sagittales. Percez deux trous à travers le crâne sur les deux hémisphères.

Vissez des vis en acier inoxydable dans les deux trous préfabriqués jusqu’à une profondeur d’un millimètre pour permettre un ancrage solide. Ensuite, préparez la zone chirurgicale pour l’amalgame dentaire en séchant l’os crânien avec de la gaze et en rétractant la peau avec deux sutures. Par la suite, étalez l’amalgame dentaire sur le crâne exposé pour fixer les électrodes à vis en place et assurez-vous qu’environ 1,5 millimètre des vis sont exposées pour l’enregistrement.

Après cela, retirez les sutures de rétraction. Pour les enregistrements scotopiques, toutes les procédures sont effectuées dans une pièce sombre. À titre d’illustration, le positionnement des électrodes est effectué ici sous un éclairage normal de la pièce.

L’animal a été adapté à l’obscurité pendant 12 heures et anesthésié avec de la kétamine et de la xylazine. Après la dilatation de la pupille et l’anesthésie topique, accrochez l’électrode VEP inactive autour des incisives inférieures. Ensuite, placez l’animal sur la plate-forme ERG devant le bol Ganzfeld situé dans la cage de Faraday.

Fixez l’animal à la plate-forme à l’aide d’une bande d’attache auto-agrippante placée fermement mais pas étroitement autour de la nuque. Ensuite, positionnez les électrodes inactives ERG en encerclant l’anneau sclaral de manière non invasive autour de l’équateur oculaire. Environ trois mètres derrière le limbe.

Stabilisez-le en fixant l’électrode à la bande de fixation auto-agrippante autour de la nuque. Répétez la procédure pour l’œil controlatéral. Maintenant, fixez les électrodes actives VEP en fixant des pinces crocodiles aux vis en acier inoxydable, pré-implantées sur le crâne.

Avant de placer l’électrode active ERG, placez une petite goutte de 1 % de carboxyméthylcellulose sodique sur l’électrode pour améliorer la qualité du signal. Positionnez les électrodes actives ERG de manière à ce qu’elles touchent légèrement la surface cornéenne centrale à l’aide d’un micromanipulateur fixé au bras stéréotaxique construit sur mesure. Assurez-vous que le carboxyméthylcellulose sodique n’entre en contact qu’avec la cornée et non avec la sclara, en essuyant l’excès de liquide.

Insérez ensuite deux à cinq millimètres de l’électrode de l’aiguille de terre en acier inoxydable, par voie sous-cutanée dans la queue. Faites glisser la plate-forme plus près du bol Ganzfeld et assurez-vous que les yeux de l’animal s’alignent avec l’ouverture du bol pour permettre un éclairage uniforme des deux rétines. Par la suite, fermez la cage de Faraday pour réduire les bruits parasites.

En utilisant le protocole ci-dessus, une pile de formes d’ondes ERG peut être enregistrée en réponse à une gamme de stimuli avec le flash le plus faible affiché en bas et le plus brillant en haut. À des niveaux de lumière très faibles, les réponses de seuil scotopique peuvent être enregistrées. Avec l’augmentation de la luminosité du stimulus, les formes d’onde deviennent dominées par l’onde B, puis l’onde A négative émerge aux stimuli les plus brillants.

La fonction du photorécepteur du bâtonnet peut être vérifiée en utilisant un P3 pour modéliser l’onde A. Cette figure montre que l’amplitude de P2 augmente avec l’énergie du stimulus. La fonction des cellules bipolaires en bâtonnets peut être vérifiée en modélisant les théories de réponse à l’intensité du bâtonnet P2 avec une fonction naka rushtin.

La fonction des cellules ganglionnaires rétiniennes est mesurée à de faibles énergies lumineuses et quantifiée par l’amplitude et le moment du pic pSTR. La fonction de la cellule bipolaire du cône est déclenchée par un paradime flash apparié et quantifiée par l’amplitude et le timing du pic du cône P2. L’analyse d’amplitude du VEP est prise comme le pic du troph et les amplitudes troph à pic qui donnent le timing de ces réponses.

L’amplitude des formes d’onde VEP augmente avec l’augmentation de l’énergie du stimulus. Lorsqu’elle est maîtrisée, cette technique peut être réalisée en 30 à 45 minutes environ, sans compter le temps de préparation de l’électrode, de mise en place de l’électrode et d’adaptation de l’adak. Lors de cette procédure, il est particulièrement important de faire attention à la précision avec laquelle vous placez les électrodes et de prévoir suffisamment de temps pour l’adaptation à l’adak.

Suite à cette procédure, d’autres procédures telles que la modification de la maladie ou des thérapies peuvent être effectuées pour répondre à des questions spécifiques. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la préparation et du placement des électrodes ainsi que de l’enregistrement et de l’analyse des formes d’onde ERG et VEP.